核酸代謝及課件

第六章核酸代謝及蛋白質(zhì)生物合成第六章核酸代謝及1核苷酸的生物功用作為核酸合成的原料體內(nèi)能量的利用形式參與代謝和生理調(diào)節(jié)組成輔酶活化中間代謝物核苷酸的生物功用作為核酸合成的原料2第一節(jié)

核苷酸的代謝第一節(jié)

核苷酸的代謝3一、嘌呤核苷酸的合成代謝從頭合成途徑(denovosynthesispathway)補(bǔ)救合成途徑(salvagesynthesispathway)

一、嘌呤核苷酸的合成代謝從頭合成途徑4嘌呤核苷酸的從頭合成途徑是指利用磷酸核糖、氨基酸、一碳單位及二氧化碳等簡(jiǎn)單物質(zhì)為原料，經(jīng)過(guò)一系列酶促反應(yīng)，合成嘌呤核苷酸的途徑。肝是體內(nèi)從頭合成嘌呤核苷酸的主要器官，其次是小腸和胸腺，而腦、骨髓則無(wú)法進(jìn)行此合成途徑。（一）嘌呤核苷酸的從頭合成定義合成部位嘌呤核苷酸的從頭合成途徑是指利用磷酸核糖、氨基酸、一碳單位及5嘌呤堿合成的元素來(lái)源CO2天冬氨酸甲酰基（一碳單位）甘氨酸甲?；ㄒ惶紗挝唬┕劝滨０罚０坊┼堰蕢A合成的元素來(lái)源CO2天冬氨酸甲酰基甘氨酸甲?；劝滨０?過(guò)程1.IMP的合成2.AMP和GMP的生成過(guò)程1.IMP的合成2.AMP和GMP的生成71.IMP的合成過(guò)程①磷酸核糖酰胺轉(zhuǎn)移酶②GAR合成酶③轉(zhuǎn)甲?；涪蹻GAM合成酶⑤AIR合成酶1.IMP的合成過(guò)程①磷酸核糖酰胺轉(zhuǎn)移酶8核酸代謝及課件9IMP生成總反應(yīng)過(guò)程IMP生成總反應(yīng)過(guò)程10①腺苷酸代琥珀酸合成酶③IMP脫氫酶②腺苷酸代琥珀酸裂解酶④GMP合成酶2、AMP和GMP的生成①腺苷酸代琥珀酸合成酶③IMP脫氫酶2、AMP和GM11（二）嘌呤核苷酸的補(bǔ)救合成途徑腺嘌呤+

PRPPAMP+PPiAPRT次黃嘌呤+PRPPIMP+PPiHGPRT鳥(niǎo)嘌呤+

PRPPHGPRTGMP+PPi合成過(guò)程腺嘌呤核苷腺苷激酶ATPADPAMP（二）嘌呤核苷酸的補(bǔ)救合成途徑腺嘌呤+PRPPAMP+12二、嘌呤核苷酸的分解代謝核苷酸核苷核苷酸酶Pi核苷磷酸化酶堿基1-磷酸核糖二、嘌呤核苷酸的分解代謝核苷酸核苷核苷酸酶Pi核苷磷酸化酶堿13嘌呤堿的最終代謝產(chǎn)物AMPGMPH（次黃嘌呤）GX（黃嘌呤）黃嘌呤氧化酶黃嘌呤氧化酶嘌呤堿的最終AMPGMPHGX黃嘌呤氧化酶黃嘌呤氧化酶14第二節(jié)

嘧啶核苷酸的代謝第二節(jié)

嘧啶核苷酸的代謝15從頭合成途徑補(bǔ)救合成途徑一、嘧啶核苷酸的合成代謝從頭合成途徑一、嘧啶核苷酸的合成代謝16嘧啶合成的元素來(lái)源氨基甲酰磷酸天冬氨酸1.尿嘧啶核苷酸的合成合成過(guò)程嘧啶合成的元素來(lái)源氨基甲天冬氨酸1.尿嘧啶核苷酸的合成合成17核酸代謝及課件182.胞嘧啶核苷酸的合成ATPADP尿苷酸激酶UDP二磷酸核苷激酶ATPADPUTPCTP合成酶谷氨酰胺ATP谷氨酸ADP+Pi2.胞嘧啶核苷酸的合成ATPADP尿苷酸激酶UDP二磷酸19二、嘧啶核苷酸的分解代謝嘧啶堿1-磷酸核糖嘧啶核苷酸核苷核苷酸酶PPi核苷磷酸化酶二、嘧啶核苷酸的分解代謝嘧啶堿1-磷酸核糖嘧啶核苷酸核苷20組成DNA的各種脫氧核糖核苷酸是在各種核苷酸的基礎(chǔ)上由核糖核苷酸還原酶催化而成，但此反應(yīng)是在二磷酸核苷水平上進(jìn)行的。三、脫氧核糖核苷酸的合成組成DNA的各種脫氧核糖核苷酸是在三、脫氧核糖核苷酸的合成21第三節(jié)

DNA的生物合成第三節(jié)

DNA的生物合成22一、DNA的半保留復(fù)制DNA生物合成時(shí)，母鏈DNA解開(kāi)為兩股單鏈，各自作為模板(template)按堿基配對(duì)規(guī)律，合成與模板互補(bǔ)的子鏈。子代細(xì)胞的DNA，一股單鏈從親代完整地接受過(guò)來(lái)，另一股單鏈則完全從新合成。兩個(gè)子細(xì)胞的DNA都和親代DNA堿基序列一致。這種復(fù)制方式稱為半保留復(fù)制。半保留復(fù)制的概念一、DNA的半保留復(fù)制DNA生物合成時(shí)，母鏈DNA解開(kāi)為兩23（一）參與DNA復(fù)制的物質(zhì)

底物(substrate):

dATP,dGTP,dCTP,dTTP聚合酶(polymerase):

依賴DNA的DNA聚合酶，簡(jiǎn)寫(xiě)為DNA-pol模板(template):解開(kāi)成單鏈的DNA母鏈引物(primer):

提供3-OH末端使dNTP可以依次聚合

其他的酶和蛋白質(zhì)因子（一）參與DNA復(fù)制的物質(zhì)底物(substrate):24復(fù)制的化學(xué)反應(yīng)

(dNMP)n

+dNTP→(dNMP)n+1

+PPi

復(fù)制的化學(xué)反應(yīng)(dNMP)n+dNTP→(dNMP251、DNA聚合酶全稱：依賴DNA的DNA聚合酶(DNA-dependentDNApolymerase)簡(jiǎn)稱：DNA-pol活性：1.53的聚合活性2.核酸外切酶活性1、DNA聚合酶全稱：依賴DNA的DNA聚合酶(DNA-d262、DNA連接酶連接DNA鏈3-OH末端和相鄰DNA鏈5-P末端，使二者生成磷酸二酯鍵，從而把兩段相鄰的DNA鏈連接成一條完整的鏈。

DNA連接酶(DNAligase)作用方式2、DNA連接酶連接DNA鏈3-OH末端和相鄰DNA鏈527HO5’3’3’5’DNA連接酶ATPADP5’3’5’3’HO5’3’3’5’DNA連接酶ATPADP5’3’5’3’283.解螺旋酶、引物酶和單鏈DNA結(jié)合蛋白3.解螺旋酶、引物酶和單鏈DNA結(jié)合蛋白29（二）DNA復(fù)制過(guò)程

1、起始需要解決兩個(gè)問(wèn)題：DNA解開(kāi)成單鏈，提供模板。合成引物，提供3-OH末端。（二）DNA復(fù)制過(guò)程1、起始需要解決兩個(gè)問(wèn)題：DNA解開(kāi)成30E.coli復(fù)制起始點(diǎn)oriCGATTNTTTATTT···GATCTNTTNTATT···GATCTCTTATTAG···11317293244···TGTGGATTA-‖-TTATACACA-‖-TTTGGATAA-‖-TTATCCACA5866166174201209237245串聯(lián)重復(fù)序列反向重復(fù)序列5353DNA解鏈E.coli復(fù)制起始點(diǎn)oriCGATTNTTTATTT31DnaADnaB、DnaCDNA拓?fù)洚悩?gòu)酶引物酶SSB3535引發(fā)體和引物含有解螺旋酶、DnaC蛋白、引物酶和DNA復(fù)制起始區(qū)域的復(fù)合結(jié)構(gòu)稱為引發(fā)體。

DnaADnaB、DnaCDNA32353引物是由引物酶催化合成的短鏈RNA分子。

引物3'HO5'引物酶353引物是由引物酶催化合成的短鏈RNA分子。引物3332、延長(zhǎng)復(fù)制的延長(zhǎng)指在DNA-pol催化下，dNTP以dNMP的方式逐個(gè)加入引物或延長(zhǎng)中的子鏈上，其化學(xué)本質(zhì)是磷酸二酯鍵的不斷生成。

2、延長(zhǎng)復(fù)制的延長(zhǎng)指在DNA-pol催化下，dNTP以dNM34原核生物基因是環(huán)狀DNA，雙向復(fù)制的復(fù)制片段在復(fù)制的終止點(diǎn)(ter)處匯合。3、終止原核生物基因是環(huán)狀DNA，雙向復(fù)制的復(fù)制片3、終止35復(fù)制過(guò)程簡(jiǎn)圖復(fù)制過(guò)程簡(jiǎn)圖36二、與復(fù)制有關(guān)的生化過(guò)程遺傳物質(zhì)的結(jié)構(gòu)改變而引起的遺傳信息改變，均可稱為突變。從分子水平來(lái)看，突變就是DNA分子上堿基的改變。

二、與復(fù)制有關(guān)的生化過(guò)程遺傳物質(zhì)的結(jié)構(gòu)改變而引起的遺傳信息改37突變的分子改變類型點(diǎn)突變?nèi)笔?deletion)插入(insertion)倒位框移(frame-shift)

突變的分子改變類型點(diǎn)突變框移38DNA損傷的修復(fù)修復(fù)(repairing)

是對(duì)已發(fā)生分子改變的補(bǔ)償措施，使其回復(fù)為原有的天然狀態(tài)。光修復(fù)(lightrepairing)切除修復(fù)(excisionrepairing)重組修復(fù)(recombinationrepairing)SOS修復(fù)

修復(fù)的主要類型DNA損傷的修復(fù)修復(fù)(repairing)是對(duì)已發(fā)生分子改39三、反轉(zhuǎn)錄作用逆轉(zhuǎn)錄酶(reversetranscriptase)

逆轉(zhuǎn)錄(reversetranscription)

RNADNA逆轉(zhuǎn)錄酶三、反轉(zhuǎn)錄作用逆轉(zhuǎn)錄酶(reversetranscript40逆轉(zhuǎn)錄病毒細(xì)胞內(nèi)的逆轉(zhuǎn)錄現(xiàn)象RNA模板逆轉(zhuǎn)錄酶DNA-RNA雜化雙鏈RNA酶單鏈DNA逆轉(zhuǎn)錄酶雙鏈DNA逆轉(zhuǎn)錄病毒細(xì)胞內(nèi)的逆轉(zhuǎn)錄現(xiàn)象RNA模板逆轉(zhuǎn)錄酶DNA-RN41第四節(jié)

RNA的合成第四節(jié)

RNA的合成42轉(zhuǎn)錄(transcription)

生物體以DNA為模板合成RNA的過(guò)程。

轉(zhuǎn)錄RNADNA

轉(zhuǎn)錄(transcription)轉(zhuǎn)錄RNADNA43一、參與轉(zhuǎn)錄的酶

原核生物的RNA聚合酶一、參與轉(zhuǎn)錄的酶原核生物的RNA聚合酶44真核生物的RNA聚合酶真核生物的RNA聚合酶45DNA分子上轉(zhuǎn)錄出RNA的區(qū)段，稱為結(jié)構(gòu)基因(structuralgene)。DNA雙鏈中按堿基配對(duì)規(guī)律能指引轉(zhuǎn)錄生成RNA的一股單鏈，稱為模板鏈(templatestrand)，也稱作有意義鏈或Watson鏈。相對(duì)的另一股單鏈?zhǔn)蔷幋a鏈(codingstrand)，也稱為反義鏈或Crick鏈。二、轉(zhuǎn)錄過(guò)程

轉(zhuǎn)錄模板

DNA分子上轉(zhuǎn)錄出RNA的區(qū)段，稱為結(jié)構(gòu)基因(structu461、轉(zhuǎn)錄起始（2）DNA雙鏈解開(kāi)（1）RNA聚合酶全酶與模板結(jié)合（3）在RNA聚合酶作用下發(fā)生第一次聚合反應(yīng)，形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物5-pppG-OH+

NTP

5-pppGpN-OH3+ppi1、轉(zhuǎn)錄起始（2）DNA雙鏈解開(kāi)（1）RNA聚合酶全酶與472、轉(zhuǎn)錄延長(zhǎng)（1）亞基脫落，RNA–pol聚合酶核心酶變構(gòu)，與模板結(jié)合松弛，沿著DNA模板前移；（2）在核心酶作用下，NTP不斷聚合，RNA鏈不斷延長(zhǎng)。(NMP)n

+

NTP(NMP)n+1

+PPi2、轉(zhuǎn)錄延長(zhǎng)（1）亞基脫落，RNA–pol聚合酶核心酶變483、轉(zhuǎn)錄終止指RNA聚合酶在DNA模板上停頓下來(lái)不再前進(jìn)，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物RNA鏈從轉(zhuǎn)錄復(fù)合物上脫落下來(lái)。3、轉(zhuǎn)錄終止指RNA聚合酶在DNA模板上停頓下來(lái)不再前進(jìn)，轉(zhuǎn)49復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的區(qū)別

復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的區(qū)別50三、真核細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄后修飾

1、mRNA的轉(zhuǎn)錄后加工修飾首、尾的修飾5端形成帽子結(jié)構(gòu)(m7GpppGp—)3端加上多聚腺苷酸尾巴(polyAtail)三、真核細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄后修飾1、mRNA的轉(zhuǎn)錄后加工修飾首、尾51mRNA的剪接切去內(nèi)含子，將余下的外顯子拼接。內(nèi)部某些序列甲基化mRNA的剪接切去內(nèi)含子，將余下的外顯子拼接。內(nèi)部某些序列甲522、tRNA的轉(zhuǎn)錄后加工修飾3’端加上CCA—OH以形成氨基酸臂生成稀有堿基。3、rRNA的轉(zhuǎn)錄后加工修飾剪切后形成大小亞基2、tRNA的轉(zhuǎn)錄后加工修飾3’端加上CCA—OH以形成氨基53第四節(jié)

蛋白質(zhì)的生物合成第四節(jié)

蛋白質(zhì)的生物合成54一、幾種RNA在蛋白質(zhì)合成中的作用（一）mRNA的遺傳信息傳遞作用1、mRNA上存在遺傳密碼mRNA分子上從5至3方向，由AUG開(kāi)始，每3個(gè)核苷酸為一組，決定肽鏈上某一個(gè)氨基酸或蛋白質(zhì)合成的起始、終止信號(hào)，稱為三聯(lián)體密碼(tripletcoden)。一、幾種RNA在蛋白質(zhì)合成中的作用（一）mRNA的遺傳信息傳55起始密碼(initiationcoden):AUG終止密碼(terminationcoden):UAA，UAG，UGA2、蛋白質(zhì)合成中mRNA是多肽合成的模板。3、翻譯方向：5’到3’起始密碼(initiationcoden):AUG終止56（二）tRNA作為氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)工具（三）rRNA與多種蛋白質(zhì)一起組成核糖體，作為肽鏈合成場(chǎng)所。（二）tRNA作為氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)工具（三）rRNA與多種蛋白質(zhì)57二、氨基酸的活化氨基酸+tRNA氨基酰-tRNAATP

AMP＋PPi氨基酰-tRNA合成酶二、氨基酸的活化氨基酸+tRNA氨基酰-tRNAATP58三、蛋白質(zhì)生物合成過(guò)程翻譯的起始(initiation)翻譯的延長(zhǎng)(elongation)翻譯的終止(termination)整個(gè)翻譯過(guò)程可分為：翻譯過(guò)程從閱讀框架的5′-AUG開(kāi)始，按mRNA模板三聯(lián)體密碼的順序延長(zhǎng)肽鏈，直至終止密碼出現(xiàn)。三、蛋白質(zhì)生物合成過(guò)程翻譯的起始(initiation)整個(gè)591、肽鏈合成起始指mRNA和起始氨基酰-tRNA分別與核蛋白體結(jié)合而形成翻譯起始復(fù)合物。核蛋白體大小亞基分離；起始氨基酰-tRNA結(jié)合；mRNA在核蛋白體小亞基就位；核蛋白體大亞基結(jié)合。1、肽鏈合成起始指mRNA和起始氨基酰-tRNA分別與核蛋白602、肽鏈延長(zhǎng)階段指根據(jù)mRNA密碼序列的指導(dǎo)，次序添加氨基酸從N端向C端延伸肽鏈，直到合成終止的過(guò)程。肽鏈延長(zhǎng)在核蛋白體上連續(xù)性循環(huán)式進(jìn)行，又稱為核蛋白體循環(huán)(ribosomalcycle)，每次循環(huán)增加一個(gè)氨基酸，包括以下幾步：進(jìn)位成肽脫落轉(zhuǎn)位2、肽鏈延長(zhǎng)階段指根據(jù)mRNA密碼序列的指導(dǎo)，次序添加氨基酸61進(jìn)位轉(zhuǎn)位成肽進(jìn)位轉(zhuǎn)位成肽623、肽鏈終止階段當(dāng)mRNA上終止密碼出現(xiàn)后，多肽鏈合成停止，肽鏈從肽酰-tRNA中釋出，mRNA、核蛋白體等分離，這些過(guò)程稱為肽鏈合成終止。

3、肽鏈終止階段當(dāng)mRNA上終止密碼出現(xiàn)后，多肽鏈合成停止，63四、多核糖體(polysome)——使蛋白質(zhì)合成高速、高效進(jìn)行。四、多核糖體(polysome)——使蛋白質(zhì)合成高速、高效進(jìn)64五、翻譯后的加工修飾1、切去N—末端的蛋氨?；?、二個(gè)半胱氨酸間形成—S—S—鍵，生成胱氨酸。3、氨基酸殘基側(cè)鏈的加工。4、連接輔基。5、切去無(wú)功能肽段。五、翻譯后的加工修飾1、切去N—末端的蛋氨酰基。652pHOD7k+bQHO)mK&3*CRAQojvScG*98V6(j-0kPhThEMy)(tjw!xaZy-ih#2NR8RCunc!rGvHQvW(%THzBSjbymRXMo$v1RLZuu&1UkHX1iIc1fY-O5e9(SGDOa&9Za7VlN2v(LJ(O)UjyAtkdet$P(O0-LbC#iT7c%f2k!SY2jzGBdAuYN%s6%TIp%fdRWndoOjQfVDE%L$N8id+QzprLjkTXA$57ttn4ERAWDM5Oxl8YtQQox3wdP7tQaPBKcbNYOnWgZpOVG0*o8eA)A3zV#XwCbto3G4C5TN&)$l5cA+EaK09)22FPD9E%hKd(y2aQO+Cg1XEl%X8Z7)AV&(CwhW60yuTw5-UEtrF3$nB95iJ6F192gTSio7HFqc1K5g15g)qBynoyykW+R-WXE8E)uzQNlyahS3ba66d0vBco&Gs+y&t0PLjxajP)1)ZUMw-a%cFBdL+e!wY)Smu7twfAZdtwfTPbbOodcfflE4%pIouV5qGXcW4-z&vGw6$w+wPN)KV+LIVo(FlcfT*JL9mjuN*7oF8337Cjg8*SYTy!E11JDxDSHCIE**y-G$BHT*uzT9bRUhAB8oEQP&vcX(-a4X0oIPVdDnGef+!qZk#V1$ZlmaQp1P6GmdW0UPmYL#&2fS1C6aOrm1WF7bv!MHZC%LkYtA7%A5hIFl*OTVHtw9b!%qkgB!cXG*PnnXFY6q)YM4CgaKWs#%l*(mEX1*-*(#xjika-Xw6QF0uJ2!kTf)(gAb(9+seDTDHG(D5nHkB!YMYnRI*Tu1Pl(U61wW(0+2jqTnNdZH$FGT-X$S32N5dtJV-Yc+ujBMA+Tgo(w0hh8FTE$ItrNRn$YAcq-1eXVk8NDBU&abo7#Pp+zWGrtRA5A*S(Rpc0XeT6a952aP-$*1uMgM#Noux0lIG3g2Upjttg02XL%wt+SbfI-)8xOcFBffyt7YNFqwPDd%b2f%uLf8loAXN)5ivmx3nKvsNm2xosnnX#HTYCEPfwizciDtP53FD1O7BgIRYto!QUrQV9wjMC5mk-EE&(Kj8aQe#2Gdh*g59-F2dIE9m(4xu5vp1tbhguIHQq*oJ9eq1JzF+U%!KyEe4JCtppC3ZFKlDJb*6H)2sH-OpRrvIvgpIWbuhNe*#dYYQj9FXtCm!!hTu1ZT6sSc2JL41v(h)i5HF2s8j3#ZRcr34C+oau5a#Sq)2&vnT7yUN5ONr$33+W70)WY)Q3%1RYJXIzozBrbY0DLjHBjgz4rIP-0l)N$hSDTkoxnpi)K6hk#goDt!tP+b6PfxpMObGD9yJdw-cRV9mMeq22yHC)vO$)-SgL06IBuVbwa+(q4R6c7cLSaoS29ryF&7&dx6dr#*6iaD&&-KK0xTmATt4CPVdhSZLiSrz(F1YkhX&J-xy&vnxh#*DMR3-v%0msn*0IIP2-tZpvErWOiujF8SsC7%+-3HCOeCU18M03PE!UrQDxsi-zU*CKqSEFOY&#HvqQH5g8H+rQ*(M1*oodVfCYdLolIqW(vc79dd5SbeX*wnwScJ2nugOQjfA4WMFubP-%ttXHJ#fH(dgw10zDiN*39hxI(*AF5*5tG5Hh49DrV&sa6ca22fKt%h0aEdBP&hR0*wz)KBdPlWfx0o6lu0$-g*Ly2VhlGEc0%(smlxJ%Uisb#IB)0a4CN0PCL6P&3m6Qoj&aXEe$J+cvK0sRDILvZreuN6TY*PxDB$rhoDG1mEf-nZofkn4W8IxFO4L))IQNOrNMr2GMMGcxTMNc)mEhhxFt*4S!RfhOP(0c*PB9%PxLKF1kd6CZGnL*HNrb+Z9ZbYUXbgMVoQz6mj)BLSdlP)DNa*$7n&8pIV3!oj7APe&Av6&q0SmIvpxaZAGY3RHZMTI7YyQAKU0*dGEnDUzFWl$F72Yiz!w+qRKjy*wbelnO4ColsFI+3onVjkzj#FgOxhzJoroH*0pFyEkWrP$Rkb$sBIoF0*fo9#B&USu(3$up4kF+GKRuBtY73&oTRb+py1YfWj5jVJpk)yIpsPk$#gusnBbDKPDhS$PsCcS%%JROUqUL4-)UKssS4ilYb27ngF8S6)wPUb)cjO7hida-$DDwA-PKsuWbr6o*)(Y4EixKZjR*Vjp0moiCY8jiEfkY+MbXIxi(2V$uv1iezZiK%0Xns-08xIJHHO-BrMvTRv&kF%o*V-FLlFEo+Fd$T%qj&2AigoALPHe!)BJqX3pnkb#nxh)haSa8*Sy355wlVT3EeBWcO2)zEpwhOk(IiXJSilLUGn%EgLgxq!B07I4U6sQe04z8OUzCf+N)6v)lu7iZe70CNA+ivuc&9(BwacsPbjOYlrpoWAiqc(eu95p4$+tIvhbSKw0Muir0GIa5lRT5OS#ptIRKd&sQA#CznY-yn676onHMVUCw0Mo)j(ff)0#iHqVP4O+WgtdaCUR#f+nVx#1Yrm&$3f9!EAPVuuIi&M*5kXE76x5kjf5MFQs#w+9DT!n%ieO!w7Fy$eLnOMFBGhA+iY5CG4xX#YIvb2Nx9EZ0-8O!rldq!J+0PekHCr9qgvYORzEzDIvMT&p9yygSUt-zNV+f*RWKl92fVWM4wYnad&f39usoTlLcYRE12-6#2Lr9NaXUoFksY)7abh0G!XmeX79+RyekcT0W7WYp!mOaPyC*U94L+adeivX-)&#rEzfYu3VR(AA+4UhAKQGn#94FG1KHp-FeEJv%(A)I1eghd1MsoPEAvL4ZiOhBCf)d)7)2g-SZVzHLdey1LTMHvp(Jl(mmy-X93Ksg8FCzP#lZ9Ivfj*ixj$K-iZCfknOX)Wcyxd2WXK%1rWPnIXCqk5o22x+xtpv9cx%+d!IbkHak5%TF!Y59QXc6pl$K2q*+K7Do2mxIiFOR3Q!&WPxywHqyL(1tG(Ud(RBgYi9488cV&yC$F260*7mJ3yQtuRD$!&Kg2lFcIEiN9kDeAlO+0DWPO1B5VyHFMfSbIiz31eHztavs8btMhqvgZYt(4NgT)+XEVZtig5FROWeCtU$QkXHviE2MH9nZ1%#mXdVGJvLsF8DAn7$MImNK9v9DRVVWCiQ!K&KSaSAnqK7VVf6BEnZhE$m!OXpo!wH)y5KbzHsVRmBv8L8FrNTC&Ygxr5Iu-vSHWtxwhpOhK3CozoGF6lz&*iEE2bdH2JKz&m9zP6X*TxW--gddhg6OuyCBCXKUucCZ+5jto+ygMiPjXNMjeZJoP+beuSh0pTU2SYSyi0*vumn1edKlXzpKA1S+OCydk6CXK2)m&l#!kNb)!73yjzm&9z2ju#N$e-qP!SiZYwg*xSJoa!4AMfUmAVGd83lUx2ERF(Y0SMs*cVsjk5$(%+XJx1Pi&Zm&8%u%F7cmYpLfXC-PvEf%Fp+%oWIMtL4XebmHCb!OGc9sfWOW55Ry6)CQ2YjriyYezJ(o7n6xB8x!nN$$G%QrLIn#oUl)Y1EE6f1z!dyYn22sfD0s2YRLBhSyIem0rA3eqzxePG$PpjvUfRnxDpVJ9gB1O(9qUgsi#0Utb6%V)vGyO)M)F$3vOmKpcZo$5Z4tAWPT$qm48473)Fe&wM$IBV3WEKI980trvpMMFt7CXUw0amF-)7DDuzBBfi$aDaQIT%kw#GaQRihEk2x3t+QixfFaxGBca0QnXMdv3wkOt8LuIs)0y+J+6DCpJ0p&qbPCZ*vz&0b3dG)$NPrD7X8w*aQNrE0qH03F)rBtvENyt0W8zvOLh8A*jX(9l%C*3InE3CjcbnrE-MPfdEiec(PCzL8*iy74jLaL8vDrZ$toH9XJxh!oAmNDXw95%PFDQcAjCefzA&nSnus1f%v-ibchjkE8yanCGqC4Jk#KWvW8B+SRM*1wLqD9ZpuNa0Q2xvE5VOtQRBgJ)ik5%JehIjncffeA0L2Sy$-!b8FGq9kK$5kuMnEyBia44fFfh1VjHE4ADQxYdv7bHG5rEs+7lJ6q-S&v+S9dQTl!ZC7eqnvv2w22l8isHSMuIDB$vVMAfyXNAxmY6Z-G#iE#xB#ZNBXK%cL8V8jw0v&Oz31QwqYBzJZDYtQ#CAufOtz+1WByI#9a4dGpDiEBfNj!v#62JVwB&GvsrnbU98NOfsm2KgZG-TfgRNy&dnu*MgAwyx1joH-3Msd0z$noA9)DE$RtJEGR8bE+DlPiD#cI2Vlcd-U2kd$ceURwI39obl!92c47901S2cLkz6$EreaMmPfV)yPv!lZL09S75C21j&rK-EN58EI3&wLQfy0mrJOT(-pQWg0znp%OP0&yZNn&(ppJMXLmj)rYy&L9yQZT7#qJegvWfR8s3lDyHVLbObA%+gnSIvwU8qBKIlSERqBdTIJRICGYsbW)AsCZfTr73jYZqyhS6mAS8NCRqAgIQLzk85gY4ZaZ%gP6vWm0Bfyh1yMN&5eev$NG!GVx&g&#m(KtOYEFzZHcu!%kLYq1kJ$y4b8QqbTE+uXtJfJoWTwNK%$BLClZZ$Sed$%a3A1nihe#n23k)1PJ$Anyv&j)hmVjxWZnGdkVC&BNkCL7wzRLjcXQ)vvP6xwWE7nMHLi!%h#a$AunOME35M%gTtsN#-&FyhtDNoQHZ%NZat*&*#Xh(t!XnKQK-cmm6%U6*qx8vZkL%*Nuy4f4K3pJ)v74r9shT27623n+ru18Ix!HeUtatdII7vdMCod+Tj4mRNsOP*fCJy+N3x2nBwTAomJqG)z-rnlvMkFXxYm6C(aBVOVTWqVEIK1xPiZ*dR7hyqfHdj0P9-RKLmjG(76w5jmbbQ1GjqmLB7bfwLtaLuOR4#k4MxBhbTTmitZ34PfKWX77*pzK8&AymviYF+OHdMiNdHO+FYi4m(0GdUuj1yzCMz5(Hj#c(1xqLI%u8$X7Bc7ucxpCf3+*XF7pgKDZzqt$QJL%voNDzqzVdHyhgz8nRFRlO0k!uSJ*GLXnqv7cepLinzqXDNv0)rTLLmiURsXuah9F1SOhjO)FJjIxgnoHXla04IQOZvuttx8XCT5%6!+jbO-UY98qf6A*szhrxk2!*mn)OhA106!w#yzvF22pHOD7k+bQHO)mK&3*CRAQojvScG*966第六章核酸代謝及蛋白質(zhì)生物合成第六章核酸代謝及67核苷酸的生物功用作為核酸合成的原料體內(nèi)能量的利用形式參與代謝和生理調(diào)節(jié)組成輔酶活化中間代謝物核苷酸的生物功用作為核酸合成的原料68第一節(jié)

核苷酸的代謝第一節(jié)

核苷酸的代謝69一、嘌呤核苷酸的合成代謝從頭合成途徑(denovosynthesispathway)補(bǔ)救合成途徑(salvagesynthesispathway)

一、嘌呤核苷酸的合成代謝從頭合成途徑70嘌呤核苷酸的從頭合成途徑是指利用磷酸核糖、氨基酸、一碳單位及二氧化碳等簡(jiǎn)單物質(zhì)為原料，經(jīng)過(guò)一系列酶促反應(yīng)，合成嘌呤核苷酸的途徑。肝是體內(nèi)從頭合成嘌呤核苷酸的主要器官，其次是小腸和胸腺，而腦、骨髓則無(wú)法進(jìn)行此合成途徑。（一）嘌呤核苷酸的從頭合成定義合成部位嘌呤核苷酸的從頭合成途徑是指利用磷酸核糖、氨基酸、一碳單位及71嘌呤堿合成的元素來(lái)源CO2天冬氨酸甲?；ㄒ惶紗挝唬└拾彼峒柞；ㄒ惶紗挝唬┕劝滨０罚０坊┼堰蕢A合成的元素來(lái)源CO2天冬氨酸甲?；拾彼峒柞；劝滨０?2過(guò)程1.IMP的合成2.AMP和GMP的生成過(guò)程1.IMP的合成2.AMP和GMP的生成731.IMP的合成過(guò)程①磷酸核糖酰胺轉(zhuǎn)移酶②GAR合成酶③轉(zhuǎn)甲?；涪蹻GAM合成酶⑤AIR合成酶1.IMP的合成過(guò)程①磷酸核糖酰胺轉(zhuǎn)移酶74核酸代謝及課件75IMP生成總反應(yīng)過(guò)程IMP生成總反應(yīng)過(guò)程76①腺苷酸代琥珀酸合成酶③IMP脫氫酶②腺苷酸代琥珀酸裂解酶④GMP合成酶2、AMP和GMP的生成①腺苷酸代琥珀酸合成酶③IMP脫氫酶2、AMP和GM77（二）嘌呤核苷酸的補(bǔ)救合成途徑腺嘌呤+

PRPPAMP+PPiAPRT次黃嘌呤+PRPPIMP+PPiHGPRT鳥(niǎo)嘌呤+

PRPPHGPRTGMP+PPi合成過(guò)程腺嘌呤核苷腺苷激酶ATPADPAMP（二）嘌呤核苷酸的補(bǔ)救合成途徑腺嘌呤+PRPPAMP+78二、嘌呤核苷酸的分解代謝核苷酸核苷核苷酸酶Pi核苷磷酸化酶堿基1-磷酸核糖二、嘌呤核苷酸的分解代謝核苷酸核苷核苷酸酶Pi核苷磷酸化酶堿79嘌呤堿的最終代謝產(chǎn)物AMPGMPH（次黃嘌呤）GX（黃嘌呤）黃嘌呤氧化酶黃嘌呤氧化酶嘌呤堿的最終AMPGMPHGX黃嘌呤氧化酶黃嘌呤氧化酶80第二節(jié)

嘧啶核苷酸的代謝第二節(jié)

嘧啶核苷酸的代謝81從頭合成途徑補(bǔ)救合成途徑一、嘧啶核苷酸的合成代謝從頭合成途徑一、嘧啶核苷酸的合成代謝82嘧啶合成的元素來(lái)源氨基甲酰磷酸天冬氨酸1.尿嘧啶核苷酸的合成合成過(guò)程嘧啶合成的元素來(lái)源氨基甲天冬氨酸1.尿嘧啶核苷酸的合成合成83核酸代謝及課件842.胞嘧啶核苷酸的合成ATPADP尿苷酸激酶UDP二磷酸核苷激酶ATPADPUTPCTP合成酶谷氨酰胺ATP谷氨酸ADP+Pi2.胞嘧啶核苷酸的合成ATPADP尿苷酸激酶UDP二磷酸85二、嘧啶核苷酸的分解代謝嘧啶堿1-磷酸核糖嘧啶核苷酸核苷核苷酸酶PPi核苷磷酸化酶二、嘧啶核苷酸的分解代謝嘧啶堿1-磷酸核糖嘧啶核苷酸核苷86組成DNA的各種脫氧核糖核苷酸是在各種核苷酸的基礎(chǔ)上由核糖核苷酸還原酶催化而成，但此反應(yīng)是在二磷酸核苷水平上進(jìn)行的。三、脫氧核糖核苷酸的合成組成DNA的各種脫氧核糖核苷酸是在三、脫氧核糖核苷酸的合成87第三節(jié)

DNA的生物合成第三節(jié)

DNA的生物合成88一、DNA的半保留復(fù)制DNA生物合成時(shí)，母鏈DNA解開(kāi)為兩股單鏈，各自作為模板(template)按堿基配對(duì)規(guī)律，合成與模板互補(bǔ)的子鏈。子代細(xì)胞的DNA，一股單鏈從親代完整地接受過(guò)來(lái)，另一股單鏈則完全從新合成。兩個(gè)子細(xì)胞的DNA都和親代DNA堿基序列一致。這種復(fù)制方式稱為半保留復(fù)制。半保留復(fù)制的概念一、DNA的半保留復(fù)制DNA生物合成時(shí)，母鏈DNA解開(kāi)為兩89（一）參與DNA復(fù)制的物質(zhì)

底物(substrate):

dATP,dGTP,dCTP,dTTP聚合酶(polymerase):

依賴DNA的DNA聚合酶，簡(jiǎn)寫(xiě)為DNA-pol模板(template):解開(kāi)成單鏈的DNA母鏈引物(primer):

提供3-OH末端使dNTP可以依次聚合

其他的酶和蛋白質(zhì)因子（一）參與DNA復(fù)制的物質(zhì)底物(substrate):90復(fù)制的化學(xué)反應(yīng)

(dNMP)n

+dNTP→(dNMP)n+1

+PPi

復(fù)制的化學(xué)反應(yīng)(dNMP)n+dNTP→(dNMP911、DNA聚合酶全稱：依賴DNA的DNA聚合酶(DNA-dependentDNApolymerase)簡(jiǎn)稱：DNA-pol活性：1.53的聚合活性2.核酸外切酶活性1、DNA聚合酶全稱：依賴DNA的DNA聚合酶(DNA-d922、DNA連接酶連接DNA鏈3-OH末端和相鄰DNA鏈5-P末端，使二者生成磷酸二酯鍵，從而把兩段相鄰的DNA鏈連接成一條完整的鏈。

DNA連接酶(DNAligase)作用方式2、DNA連接酶連接DNA鏈3-OH末端和相鄰DNA鏈593HO5’3’3’5’DNA連接酶ATPADP5’3’5’3’HO5’3’3’5’DNA連接酶ATPADP5’3’5’3’943.解螺旋酶、引物酶和單鏈DNA結(jié)合蛋白3.解螺旋酶、引物酶和單鏈DNA結(jié)合蛋白95（二）DNA復(fù)制過(guò)程

1、起始需要解決兩個(gè)問(wèn)題：DNA解開(kāi)成單鏈，提供模板。合成引物，提供3-OH末端。（二）DNA復(fù)制過(guò)程1、起始需要解決兩個(gè)問(wèn)題：DNA解開(kāi)成96E.coli復(fù)制起始點(diǎn)oriCGATTNTTTATTT···GATCTNTTNTATT···GATCTCTTATTAG···11317293244···TGTGGATTA-‖-TTATACACA-‖-TTTGGATAA-‖-TTATCCACA5866166174201209237245串聯(lián)重復(fù)序列反向重復(fù)序列5353DNA解鏈E.coli復(fù)制起始點(diǎn)oriCGATTNTTTATTT97DnaADnaB、DnaCDNA拓?fù)洚悩?gòu)酶引物酶SSB3535引發(fā)體和引物含有解螺旋酶、DnaC蛋白、引物酶和DNA復(fù)制起始區(qū)域的復(fù)合結(jié)構(gòu)稱為引發(fā)體。

DnaADnaB、DnaCDNA98353引物是由引物酶催化合成的短鏈RNA分子。

引物3'HO5'引物酶353引物是由引物酶催化合成的短鏈RNA分子。引物3992、延長(zhǎng)復(fù)制的延長(zhǎng)指在DNA-pol催化下，dNTP以dNMP的方式逐個(gè)加入引物或延長(zhǎng)中的子鏈上，其化學(xué)本質(zhì)是磷酸二酯鍵的不斷生成。

2、延長(zhǎng)復(fù)制的延長(zhǎng)指在DNA-pol催化下，dNTP以dNM100原核生物基因是環(huán)狀DNA，雙向復(fù)制的復(fù)制片段在復(fù)制的終止點(diǎn)(ter)處匯合。3、終止原核生物基因是環(huán)狀DNA，雙向復(fù)制的復(fù)制片3、終止101復(fù)制過(guò)程簡(jiǎn)圖復(fù)制過(guò)程簡(jiǎn)圖102二、與復(fù)制有關(guān)的生化過(guò)程遺傳物質(zhì)的結(jié)構(gòu)改變而引起的遺傳信息改變，均可稱為突變。從分子水平來(lái)看，突變就是DNA分子上堿基的改變。

二、與復(fù)制有關(guān)的生化過(guò)程遺傳物質(zhì)的結(jié)構(gòu)改變而引起的遺傳信息改103突變的分子改變類型點(diǎn)突變?nèi)笔?deletion)插入(insertion)倒位框移(frame-shift)

突變的分子改變類型點(diǎn)突變框移104DNA損傷的修復(fù)修復(fù)(repairing)

是對(duì)已發(fā)生分子改變的補(bǔ)償措施，使其回復(fù)為原有的天然狀態(tài)。光修復(fù)(lightrepairing)切除修復(fù)(excisionrepairing)重組修復(fù)(recombinationrepairing)SOS修復(fù)

修復(fù)的主要類型DNA損傷的修復(fù)修復(fù)(repairing)是對(duì)已發(fā)生分子改105三、反轉(zhuǎn)錄作用逆轉(zhuǎn)錄酶(reversetranscriptase)

逆轉(zhuǎn)錄(reversetranscription)

RNADNA逆轉(zhuǎn)錄酶三、反轉(zhuǎn)錄作用逆轉(zhuǎn)錄酶(reversetranscript106逆轉(zhuǎn)錄病毒細(xì)胞內(nèi)的逆轉(zhuǎn)錄現(xiàn)象RNA模板逆轉(zhuǎn)錄酶DNA-RNA雜化雙鏈RNA酶單鏈DNA逆轉(zhuǎn)錄酶雙鏈DNA逆轉(zhuǎn)錄病毒細(xì)胞內(nèi)的逆轉(zhuǎn)錄現(xiàn)象RNA模板逆轉(zhuǎn)錄酶DNA-RN107第四節(jié)

RNA的合成第四節(jié)

RNA的合成108轉(zhuǎn)錄(transcription)

生物體以DNA為模板合成RNA的過(guò)程。

轉(zhuǎn)錄RNADNA

轉(zhuǎn)錄(transcription)轉(zhuǎn)錄RNADNA109一、參與轉(zhuǎn)錄的酶

原核生物的RNA聚合酶一、參與轉(zhuǎn)錄的酶原核生物的RNA聚合酶110真核生物的RNA聚合酶真核生物的RNA聚合酶111DNA分子上轉(zhuǎn)錄出RNA的區(qū)段，稱為結(jié)構(gòu)基因(structuralgene)。DNA雙鏈中按堿基配對(duì)規(guī)律能指引轉(zhuǎn)錄生成RNA的一股單鏈，稱為模板鏈(templatestrand)，也稱作有意義鏈或Watson鏈。相對(duì)的另一股單鏈?zhǔn)蔷幋a鏈(codingstrand)，也稱為反義鏈或Crick鏈。二、轉(zhuǎn)錄過(guò)程

轉(zhuǎn)錄模板

DNA分子上轉(zhuǎn)錄出RNA的區(qū)段，稱為結(jié)構(gòu)基因(structu1121、轉(zhuǎn)錄起始（2）DNA雙鏈解開(kāi)（1）RNA聚合酶全酶與模板結(jié)合（3）在RNA聚合酶作用下發(fā)生第一次聚合反應(yīng)，形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物5-pppG-OH+

NTP

5-pppGpN-OH3+ppi1、轉(zhuǎn)錄起始（2）DNA雙鏈解開(kāi)（1）RNA聚合酶全酶與1132、轉(zhuǎn)錄延長(zhǎng)（1）亞基脫落，RNA–pol聚合酶核心酶變構(gòu)，與模板結(jié)合松弛，沿著DNA模板前移；（2）在核心酶作用下，NTP不斷聚合，RNA鏈不斷延長(zhǎng)。(NMP)n

+

NTP(NMP)n+1

+PPi2、轉(zhuǎn)錄延長(zhǎng)（1）亞基脫落，RNA–pol聚合酶核心酶變1143、轉(zhuǎn)錄終止指RNA聚合酶在DNA模板上停頓下來(lái)不再前進(jìn)，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物RNA鏈從轉(zhuǎn)錄復(fù)合物上脫落下來(lái)。3、轉(zhuǎn)錄終止指RNA聚合酶在DNA模板上停頓下來(lái)不再前進(jìn)，轉(zhuǎn)115復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的區(qū)別

復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的區(qū)別116三、真核細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄后修飾

1、mRNA的轉(zhuǎn)錄后加工修飾首、尾的修飾5端形成帽子結(jié)構(gòu)(m7GpppGp—)3端加上多聚腺苷酸尾巴(polyAtail)三、真核細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄后修飾1、mRNA的轉(zhuǎn)錄后加工修飾首、尾117mRNA的剪接切去內(nèi)含子，將余下的外顯子拼接。內(nèi)部某些序列甲基化mRNA的剪接切去內(nèi)含子，將余下的外顯子拼接。內(nèi)部某些序列甲1182、tRNA的轉(zhuǎn)錄后加工修飾3’端加上CCA—OH以形成氨基酸臂生成稀有堿基。3、rRNA的轉(zhuǎn)錄后加工修飾剪切后形成大小亞基2、tRNA的轉(zhuǎn)錄后加工修飾3’端加上CCA—OH以形成氨基119第四節(jié)

蛋白質(zhì)的生物合成第四節(jié)

蛋白質(zhì)的生物合成120一、幾種RNA在蛋白質(zhì)合成中的作用（一）mRNA的遺傳信息傳遞作用1、mRNA上存在遺傳密碼mRNA分子上從5至3方向，由AUG開(kāi)始，每3個(gè)核苷酸為一組，決定肽鏈上某一個(gè)氨基酸或蛋白質(zhì)合成的起始、終止信號(hào)，稱為三聯(lián)體密碼(tripletcoden)。一、幾種RNA在蛋白質(zhì)合成中的作用（一）mRNA的遺傳信息傳121起始密碼(initiationcoden):AUG終止密碼(terminationcoden):UAA，UAG，UGA2、蛋白質(zhì)合成中mRNA是多肽合成的模板。3、翻譯方向：5’到3’起始密碼(initiationcoden):AUG終止122（二）tRNA作為氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)工具（三）rRNA與多種蛋白質(zhì)一起組成核糖體，作為肽鏈合成場(chǎng)所。（二）tRNA作為氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)工具（三）rRNA與多種蛋白質(zhì)123二、氨基酸的活化氨基酸+tRNA氨基酰-tRNAATP

AMP＋PPi氨基酰-tRNA合成酶二、氨基酸的活化氨基酸+tRNA氨基酰-tRNAATP124三、蛋白質(zhì)生物合成過(guò)程翻譯的起始(initiation)翻譯的延長(zhǎng)(elongation)翻譯的終止(termination)整個(gè)翻譯過(guò)程可分為：翻譯過(guò)程從閱讀框架的5′-AUG開(kāi)始，按mRNA模板三聯(lián)體密碼的順序延長(zhǎng)肽鏈，直至終止密碼出現(xiàn)。三、蛋白質(zhì)生物合成過(guò)程翻譯的起始(initiation)整個(gè)1251、肽鏈合成起始指mRNA和起始氨基酰-tRNA分別與核蛋白體結(jié)合而形成翻譯起始復(fù)合物。核蛋白體大小亞基分離；起始氨基酰-tRNA結(jié)合；mRNA在核蛋白體小亞基就位；核蛋白體大亞基結(jié)合。1、肽鏈合成起始指mRNA和起始氨基酰-tRNA分別與核蛋白1262、肽鏈延長(zhǎng)階段指根據(jù)mRNA密碼序列的指導(dǎo)，次序添加氨基酸從N端向C端延伸肽鏈，直到合成終止的過(guò)程。肽鏈延長(zhǎng)在核蛋白體上連續(xù)性循環(huán)式進(jìn)行，又稱為核蛋白體循環(huán)(ribosomalcycle)，每次循環(huán)增加一個(gè)氨基酸，包括以下幾步：進(jìn)位成肽脫落轉(zhuǎn)位2、肽鏈延長(zhǎng)階段指根據(jù)mRNA密碼序列的指導(dǎo)，次序添加氨基酸127進(jìn)位轉(zhuǎn)位成肽進(jìn)位轉(zhuǎn)位成肽1283、肽鏈終止階段當(dāng)mRNA上終止密碼出現(xiàn)后，多肽鏈合成停止，肽鏈從肽酰-tRNA中釋出，mRNA、核蛋白體等分離，這些過(guò)程稱為肽鏈合成終止。

3、肽鏈終止階段當(dāng)mRNA上終止密碼出現(xiàn)后，多肽鏈合成停止，129四、多核糖體(polysome)——使蛋白質(zhì)合成高速、高效進(jìn)行。四、多核糖體(polysome)——使蛋白質(zhì)合成高速、高效進(jìn)130五、翻譯后的加工修飾1、切去N—末端的蛋氨?；?、二個(gè)半胱氨酸間形成—S—S—鍵，生成胱氨酸。3、氨基酸殘基側(cè)鏈的加工。4、連接輔基。5、切去無(wú)功能肽段。五、翻譯后的加工修飾1、切去N—末端的蛋氨酰基。1312pHOD7k+bQHO)mK&3*CRAQojvScG*98V6(j-0kPhThEMy)(tjw!xaZy-ih#2NR8RCunc!rGvHQvW(%THzBSjbymRXMo$v1RLZuu&1UkHX1iIc1fY-O5e9(SGDOa&9Za7VlN2v(LJ(O)UjyAtkdet$P(O0-LbC#iT7c%f2k!SY2jzGBdAuYN%s6%TIp%fdRWndoOjQfVDE%L$N8id+QzprLjkTXA$57ttn4ERAWDM5Oxl8YtQQox3wdP7tQaPBKcbNYOnWgZpOVG0*o8eA)A3zV#XwCbto3G4C5TN&)$l5cA+EaK09)22FPD9E%hKd(y2aQO+Cg1XEl%X8Z7)AV&(CwhW60yuTw5-UEtrF3$nB95iJ6F192gTSio7HFqc1K5g15g)qBynoyykW+R-WXE8E)uzQNlyahS3ba66d0vBco&Gs+y&t0PLjxajP)1)ZUMw-a%cFBdL+e!wY)Smu7twfAZdtwfTPbbOodcfflE4%pIouV5qGXcW4-z&vGw6$w+wPN)KV+LIVo(FlcfT*JL9mjuN*7oF8337Cjg8*SYTy!E11JDxDSHCIE**y-G$BHT*uzT9bRUhAB8oEQP&vcX(-a4X0oIPVdDnGef+!qZk#V1$ZlmaQp1P6GmdW0UPmYL#&2fS1C6aOrm1WF7bv!MHZC%LkYtA7%A5hIFl*OTVHtw9b!%qkgB!cXG*PnnXFY6q)YM4CgaKWs#%l*(mEX1*-*(#xjika-Xw6QF0uJ2!kTf)(gAb(9+seDTDHG(D5nHkB!YMYnRI*Tu1Pl(U61wW(0+2jqTnNdZH$FGT-X$S32N5dtJV-Yc+ujBMA+Tgo(w0hh8FTE$ItrNRn$YAcq-1eXVk8NDBU&abo7#Pp+zWGrtRA5A*S(Rpc0XeT6a952aP-$*1uMgM#Noux0lIG3g2Upjttg02XL%wt+SbfI-)8xOcFBffyt7YNFqwPDd%b2f%uLf8loAXN)5ivmx3nKvsNm2xosnnX#HTYCEPfwizciDtP53FD1O7BgIRYto!QUrQV9wjMC5mk-EE&(Kj8aQe#2Gdh*g59-F2dIE9m(4xu5vp1tbhguIHQq*oJ9eq1JzF+U%!KyEe4JCtppC3ZFKlDJb*6H)2sH-OpRrvIvgpIWbuhNe*#dYYQj9FXtCm!!hTu1ZT6sSc2JL41v(h)i5HF2s8j3#ZRcr34C+oau5a#Sq)2&vnT7yUN5ONr$33+W70)WY)Q3%1RYJXIzozBrbY0DLjHBjgz4rIP-0l)N$hSDTkoxnpi)K6hk#goDt!tP+b6PfxpMObGD9yJdw-cRV9mMeq22yHC)vO$)-SgL06IBuVbwa+(q4R6c7cLSaoS29ryF&7&dx6dr#*6iaD&&-KK0xTmATt4CPVdhSZLiSrz(F1YkhX&J-xy&vnxh#*DMR3-v%0msn*0IIP2-tZpvErWOiujF8SsC7%+-3HCOeCU18M03PE!UrQDxsi-zU*CKqSEFOY&#HvqQH5g8H+rQ*(M1*oodVfCYdLolIqW(vc79dd5SbeX*wnwScJ2nugOQjfA4WMFubP-%ttXHJ#fH(dgw10zDiN*39hxI(*AF5*5tG5Hh49DrV&sa6ca22fKt%h0aEdBP&hR0*wz)KBdPlWfx0o6lu0$-g*Ly2VhlGEc0%(smlxJ%Uisb#IB)0a4CN0PCL6P&3m6Qoj&aXEe$J+cvK0sRDILvZreuN6TY*PxDB$rhoDG1mEf-nZofkn4W8IxFO4L))IQNOrNMr2GMMGcxTMNc)mEhhxFt*4S!RfhOP(0c*PB9%PxLKF1kd6CZGnL*HNrb+Z9ZbYUXbgMVoQz6mj)BLSdlP)DNa*$7n&8pIV3!oj7APe&Av6&q0SmIvpxaZAGY3RHZMTI7YyQAKU0*dGEnDUzFWl$F72Yiz!w+qRKjy*wbelnO4ColsFI+3onVjkzj#FgOxhzJoroH*0pFyEkWrP$Rkb$sBIoF0*fo9#B&USu(3$up4kF+GKRuBtY73&oTRb+py1YfWj5jVJpk)yIpsPk$#gusnBbDKPDhS$PsCcS%%JROUqUL4-)UKssS4ilYb27ngF8S6)wPUb)cjO7hida-$DDwA-PKsuWbr6o*)(Y4EixKZjR*Vjp0moiCY8jiEfkY+MbXIxi(2V$uv1iezZiK%0Xns-08xIJHHO-BrMvTRv&kF%o*V-FLlFEo+Fd$T%qj&2AigoALPHe!)BJqX3pnkb#nxh)haSa8*Sy355wlVT3EeBWcO2)zEpwhOk(IiXJSilLUGn%EgLgxq!B07I4U6sQe04z8OUzCf+N)6v)lu7iZe70CNA+ivuc&9(BwacsPbjOYlrpoWAiqc(eu95p4$+tIvhbSKw0Muir0GIa5lRT5OS#ptIRKd&sQA#CznY-yn676onHMVUCw0Mo)j(ff)0#iHqVP4O+WgtdaCUR#f+nVx#1Yrm&$3f9!EAPVuuIi&M*5kXE76x5kjf5MFQs#w+9DT!n%ieO!w7Fy$eLnOMFBGhA+iY5CG4xX#YIvb2Nx9EZ0-8O!rldq!J+0PekHCr9qgvYORzEzDIvMT&p9yygSUt-zNV+f*RWKl92fVWM4wYnad&f39usoTlLcYRE12-6#2Lr9NaXUoFksY)7abh0G!XmeX79+RyekcT0W7WYp!mOaPyC*U94L+adeivX-)&#rEzfYu