第 二 章 色譜分離技術(shù)的理論基礎(chǔ) 現(xiàn)代分離技術(shù)課件

ModernSeparationTechnique現(xiàn)代分離技術(shù)鄭州大學(xué)化學(xué)系張書勝2006年2月19日ModernSeparationTechnique現(xiàn)代分1重點(diǎn)講解色譜分離和毛細(xì)管電泳技術(shù)的基礎(chǔ)理論；全面介紹現(xiàn)代分離技術(shù)在科學(xué)研究中的作用；強(qiáng)調(diào)實(shí)際實(shí)驗(yàn)技術(shù)，使學(xué)生能夠比較熟練地運(yùn)用所學(xué)的基礎(chǔ)理論知識解決自己科研和工作中的實(shí)際問題。授課對象：碩士研究生學(xué)時(shí)：40學(xué)時(shí)

內(nèi)容與目的內(nèi)容與目的2現(xiàn)代分離技術(shù)概論色譜理論氣相色譜液相色譜毛細(xì)管電泳制備色譜現(xiàn)代色譜儀器新技術(shù)主要講授內(nèi)容現(xiàn)代分離技術(shù)概論主要講授內(nèi)容3

第一節(jié)色譜法簡介

2．1．1色譜法的歷史2．1．2分類2．1．3色譜學(xué)文獻(xiàn)第二節(jié)色譜法的重要參數(shù)

2．2．1重要名詞2．2．2色譜過程基本方程式2．2．3分辨率第三節(jié)平衡塔板理論

2．3．1色譜分離的塔板理論2．3．2塔板理論的基本假設(shè)與方程

第四節(jié)速率理論

2．4．1渦流擴(kuò)散2．4．2縱向分子擴(kuò)散2．4．3傳質(zhì)阻力2．4．4速率理論方程

第五節(jié)色譜過程的熱力學(xué)基礎(chǔ)

2．5．1氣相色譜分配平衡2．5．2液相色譜中的熱力學(xué)基礎(chǔ)

第六節(jié)分子間的作用力

第七節(jié)分辨率方程

第二章色譜分離技術(shù)的理論基礎(chǔ)第一節(jié)色譜法簡介41901年，俄國植物學(xué)家茨維特（Tswett）將植物色素提取液加到裝有碳酸鈣微粒的玻璃柱子上部，繼而以石油醚淋洗柱子，結(jié)果使不同的色素在柱中得到分離而形成不同顏色的譜帶?；旌仙赝ㄟ^碳酸鈣微粒被分離成不同色帶的現(xiàn)象，象一束光線通過棱鏡時(shí)被分成不同色帶的光譜現(xiàn)象一樣。1906年在一篇論文中正式將這種方法命名為色譜法（Chromatography），色譜法由此得名。色譜法（chromatography）又稱層析法或色層法，是一類重要的物理化學(xué)分離分析方法。這種方法與適當(dāng)?shù)臋z測手段相結(jié)合，已應(yīng)用于分析化學(xué)各個(gè)領(lǐng)域。

第一節(jié)色譜法簡介1．1．1色譜法的歷史1901年，俄國植物學(xué)家茨維特（Tswett）將植物色素提取5色譜法是一種以分配平衡為基礎(chǔ)的分離方法。色譜分離體系包括兩個(gè)相，一個(gè)是固定的，一個(gè)是流動的，當(dāng)兩相作相對運(yùn)動時(shí)，反復(fù)多次地利用混合物中所有組分分配平衡性質(zhì)的差異使彼此得到分離。(1)按流動相的物理狀態(tài)分類：氣相色譜(GC)、液相色譜(LC)和超臨界流體色譜(SFC)。(2)按固定相的形狀分類：柱色譜、紙色譜和薄層色譜。(3)按分離過程的物理化學(xué)現(xiàn)象分類：吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜和排阻色譜。(4)按固定相和流動相的極性分類：正相色譜、反相色譜2．1．2分類色譜法是一種以分配平衡為基礎(chǔ)的分離方法。色譜分離體系包括兩個(gè)6期刊雜志

J.ChromatographyA,新理論、方法J.ChromatographyB,生物醫(yī)學(xué)ChromatographicScience理論HighResolutionChromatography理論LiquidChromatography綜合BiomedicalChromatography生物醫(yī)學(xué)JCapillaryElectophoresis綜合Electrophoresis綜合《色譜》，大連化物所，中國化學(xué)會；其他分析化學(xué)、藥學(xué)、生物醫(yī)學(xué)雜志均有報(bào)道。

2．1．3色譜學(xué)文獻(xiàn)期刊雜志2．1．3色譜學(xué)文獻(xiàn)7國際上有:Internationalsymposiumonpreparativechromatography

InternationalIonChromatographySymposiumInternationalSymposiumonChromatographyInternationalSymposiumonCapillaryElectroseparationTechniquesInternationalSymposiumonHighPerformanceLiquidPhaseSeparationsandRelatedTechniques.SymposiumonHandlingofEnvironmentalandBiologicalSamplesinChromatographyInternationalSymposiumonHyphenatedTechniquesinChromatographyandHyphenatedChromatographicAnalyzers,

SymposiumontheSeparationandAnalysisofProteins,PeptidesandPolynucleotides

返回學(xué)術(shù)會議國際上有:返回學(xué)術(shù)會議8學(xué)術(shù)會議國內(nèi)有：北京國際分析測試及儀器展覽會全國色譜學(xué)術(shù)報(bào)告會全國毛細(xì)管電泳及相關(guān)微分離學(xué)術(shù)報(bào)告會地區(qū)色譜會議全國分析化學(xué)會議有機(jī)及微量分析學(xué)術(shù)會議等學(xué)術(shù)會議國內(nèi)有：9固定相—柱內(nèi)的填充物。流動相—沿柱流動的液體。保留值—表示試樣中各組分在色譜柱中停留的時(shí)間或?qū)⒔M分帶出色譜柱所需流動相體積的數(shù)值稱為保留值，保留值可用作定性分析的參數(shù)。保留時(shí)間tR—指某一組分自進(jìn)入色譜柱開始至色譜峰最高點(diǎn)時(shí)所用的時(shí)間保留體積VR—指從色譜柱上洗脫某組分所需的流動相的體積，如果流動相的流速為F，則VR=F×tR第二節(jié)色譜法的重要參數(shù)1．2．1重要名詞第二節(jié)色譜法的重要參數(shù)1．2．1重要名詞10死時(shí)間to—非保留組分的出峰時(shí)間。死體積Vo—非保留組分的保留體積，即Fto。分配系數(shù)K—亦稱平衡常數(shù)，是組分在固定相和流動相中平衡濃度之比，即K=CS/CM容量因子k’—在平衡時(shí)，組分在固定相和流動相中的質(zhì)量比。根據(jù)K和k’的定義k’=KVS/VM

其中，VS和VM色譜柱中固定相和流動相的體積。死時(shí)間to—非保留組分的出峰時(shí)間。11色譜法通常利用各組分在兩相間分配系數(shù)的差異來進(jìn)行分離。分配系數(shù)（K）是指在一定溫度和壓力下，組分在固定相和流動相之間分配達(dá)到平衡時(shí)的濃度比，即CsK＝──Cm分配系數(shù)K決定于組分及固定液的熱力學(xué)性質(zhì)，并隨柱溫、柱壓的變化而變化，與柱中氣相、液相體積無關(guān)。它是分配色譜中的重要參數(shù)。分配系數(shù)色譜法通常利用各組分在兩相間分配系數(shù)的差異來進(jìn)行分離。分配系12容量因子（k）是指在一定溫度和壓力下，組分在兩相之間分配達(dá)到平衡時(shí)，分配在固定相和流動相中的質(zhì)量比，也稱為分配比。ms

k’=───mm

k’值決定于組分及固定相熱力學(xué)性質(zhì)，它不僅隨柱溫、柱壓的變化而變化，而且還與流動相及固定相的體積有關(guān)。容量因子容量因子（k）是指在一定溫度和壓力下，組分在兩相之間分配達(dá)到13從統(tǒng)計(jì)的結(jié)果來看，溶質(zhì)分子在固定相和流動相中停留的時(shí)間分?jǐn)?shù)可用溶質(zhì)在每一相中的量與總量的比值表示，即，溶質(zhì)分子在固定相中停留的時(shí)間分?jǐn)?shù)=qs/（qm+qs）=k’/（1+k’）；溶質(zhì)分子在流動相中停留的時(shí)間分?jǐn)?shù)=qm/（qm+qs）=1/（1+k’）。我們知道，在色譜分離柱內(nèi)，溶質(zhì)只有被轉(zhuǎn)移到流動相（溶劑）中，溶質(zhì)才會沿著流動相流動的方向在柱內(nèi)向前移動，所以溶質(zhì)的譜帶運(yùn)動速度U譜帶總是小于流動相的速度U，U譜帶實(shí)際上等于流動相的速度U與溶質(zhì)在流動相中停留的時(shí)間分?jǐn)?shù)之乘積，U譜帶=U/（1+k’）對于長度為L的分離柱，溶質(zhì)的保留時(shí)間tR為，

tR=L/U譜帶=（1+k’）L/UL/U表示流動相的流經(jīng)分離柱的時(shí)間，也表示不被保留溶質(zhì)的保留值即死時(shí)間to，所以，tR=t0（1+k’）2．2．2色譜過程基本方程式從統(tǒng)計(jì)的結(jié)果來看，溶質(zhì)分子在固定相和流動相中停留的時(shí)間14

保留時(shí)間方程

tR=t0（1+k’）保留體積方程

VR=V0（1+k’）

顯然，k’反映了色譜柱對組分的保留能力，k’值越大，表示固定相對溶質(zhì)分子的滯留能力越強(qiáng)，在柱內(nèi)停留的時(shí)間越長，保留保留時(shí)間越大。

15

在色譜操作條件一定時(shí)，K或k’值越大，則組分的保留值也越大。如果兩個(gè)組分的K或k’值相等，則兩個(gè)組分的色譜峰必將重合。反之，兩組分的K或k’是值差別越大，則相應(yīng)的兩色譜峰相距就越遠(yuǎn)，因此兩組分的K或k’值不等是色譜分離的先決條件。-------定性依據(jù)tR與K、k’的關(guān)系在色譜操作條件一定時(shí)，K或k’值越大，則組分16

tR2－tR1R=2×(━━━━━━)ω1+ω分離度作為色譜柱的總分離效能指標(biāo)，以判斷難分離物質(zhì)對在色譜柱中的分離情況。分離度（R）定義為：相鄰兩峰的保留時(shí)間之差與兩組分峰寬平均值之比值，R≥1時(shí)，兩峰有98％以上的分離；R=1.5時(shí)，分離程度可達(dá)99．7％。一般用R=1.5為相鄰兩峰完全分離的標(biāo)志。返回2．2．3分辨率分離度作為色譜柱的總分離效能指標(biāo)，以判斷難分離物質(zhì)對在色譜172．3．1色譜分離的塔板理論

2．3．2塔板理論的基本假設(shè)與方程當(dāng)柱長為L時(shí)，理論塔板數(shù)為n，n=L/H色譜的理論塔板數(shù)n的經(jīng)驗(yàn)式為

n=5.54(tR/W0.5)2=16(tR/W)2

色譜柱有效塔板數(shù)俞大（有效塔板高度俞?。?，對組分分離俞有利。但不能預(yù)言并確定各組分有無分離的可能，因?yàn)榉蛛x的可能性不取決于分配次數(shù)的多少，而取決于組分在兩相間的分配系數(shù)的差異。返回第三節(jié)平衡塔板理論2．3．1色譜分離的塔板理論第三節(jié)平衡塔板理論18

范氏方程

H=A+B/u+Cu

2．4．1渦流擴(kuò)散A=2dp

2．4．2縱向分子擴(kuò)散B=2DM

2．4．3傳質(zhì)阻力C=qk’(1+k’)-2df2DS-1+dp2DM-1第四節(jié)

速率理論第四節(jié)速率理論19高效液相色譜法

高效液相色譜法（HPLC）是在20世紀(jì)60年代末，以經(jīng)典液相色譜為基礎(chǔ)，引入了氣相色譜的理論與實(shí)驗(yàn)方法，流動相改為高壓輸送，采用高效固定相及高靈敏度檢測器，發(fā)展而成的分離分析方法。H=2dp+2DM/u+[qk’(1+k’)-2df2DS-1+dp2DM-1]u

u一定時(shí)，A，B，C越小，H越小，柱效越高，色譜峰越窄；顆粒越小，H越小，柱效越高。

塔板高度H是表示質(zhì)點(diǎn)在柱內(nèi)一個(gè)小單元的離散程度。H越大，即單位柱長離散程度越大，色譜峰就越寬，柱效率就越差。因此，根據(jù)色譜柱內(nèi)組分的運(yùn)動速率，可以說明塔板高度、色譜峰擴(kuò)張的各種因素。返回2．4．4速率理論方程高效液相色譜法高效液相色譜法（HPLC）是在202．5．1氣相色譜分配平衡第五節(jié)色譜過程的熱力學(xué)基礎(chǔ)返回2．5．1氣相色譜分配平衡第五節(jié)色譜過程的熱力學(xué)基礎(chǔ)返21第二章色譜分離技術(shù)的理論基礎(chǔ)現(xiàn)代分離技術(shù)課件222．5．2液相色譜中的熱力學(xué)基礎(chǔ)分配過程2．5．2液相色譜中的熱力學(xué)基礎(chǔ)分配過程23

吸附過程吸附24

離子交換離子25（1）定向力（2）誘導(dǎo)力（3）色散力（4）氫鍵力（5）超分子作用第六節(jié)分子間的作用力返回（1）定向力第六節(jié)分子間的作用力返回26定向力定向力27誘導(dǎo)力誘導(dǎo)力28色散力氫鍵力色散力氫鍵力29超分子作用超分子作用30

要判斷兩相鄰組分的分離情況，常用分辨率RS作為總分離效能指標(biāo)。

RS=(n-0.5/4)[(-1)/][k’/(1+k’)]式中是分離因子，其表達(dá)式為，

=t’R2/t’R1=K2/K1

分辨率不僅與n有關(guān)，而且與k’有關(guān)，即與動力學(xué)過程和平衡熱力學(xué)過程都有密切的關(guān)系，這正是我們要研究動力學(xué)和熱力學(xué)過程的原因。要獲得一次理想的分離，不僅要使各組分相互分離，而且色譜峰要盡可能的窄，分析時(shí)間要短。第七節(jié)分辨率方程返回要判斷兩相鄰組分的分離情況，常用分辨率RS作為總分離效31ModernSeparationTechnique現(xiàn)代分離技術(shù)鄭州大學(xué)化學(xué)系張書勝2006年2月19日ModernSeparationTechnique現(xiàn)代分32重點(diǎn)講解色譜分離和毛細(xì)管電泳技術(shù)的基礎(chǔ)理論；全面介紹現(xiàn)代分離技術(shù)在科學(xué)研究中的作用；強(qiáng)調(diào)實(shí)際實(shí)驗(yàn)技術(shù)，使學(xué)生能夠比較熟練地運(yùn)用所學(xué)的基礎(chǔ)理論知識解決自己科研和工作中的實(shí)際問題。授課對象：碩士研究生學(xué)時(shí)：40學(xué)時(shí)

內(nèi)容與目的內(nèi)容與目的33現(xiàn)代分離技術(shù)概論色譜理論氣相色譜液相色譜毛細(xì)管電泳制備色譜現(xiàn)代色譜儀器新技術(shù)主要講授內(nèi)容現(xiàn)代分離技術(shù)概論主要講授內(nèi)容34

第一節(jié)色譜法簡介

2．1．1色譜法的歷史2．1．2分類2．1．3色譜學(xué)文獻(xiàn)第二節(jié)色譜法的重要參數(shù)

2．2．1重要名詞2．2．2色譜過程基本方程式2．2．3分辨率第三節(jié)平衡塔板理論

2．3．1色譜分離的塔板理論2．3．2塔板理論的基本假設(shè)與方程

第四節(jié)速率理論

2．4．1渦流擴(kuò)散2．4．2縱向分子擴(kuò)散2．4．3傳質(zhì)阻力2．4．4速率理論方程

第五節(jié)色譜過程的熱力學(xué)基礎(chǔ)

2．5．1氣相色譜分配平衡2．5．2液相色譜中的熱力學(xué)基礎(chǔ)

第六節(jié)分子間的作用力

第七節(jié)分辨率方程

第二章色譜分離技術(shù)的理論基礎(chǔ)第一節(jié)色譜法簡介351901年，俄國植物學(xué)家茨維特（Tswett）將植物色素提取液加到裝有碳酸鈣微粒的玻璃柱子上部，繼而以石油醚淋洗柱子，結(jié)果使不同的色素在柱中得到分離而形成不同顏色的譜帶。混合色素通過碳酸鈣微粒被分離成不同色帶的現(xiàn)象，象一束光線通過棱鏡時(shí)被分成不同色帶的光譜現(xiàn)象一樣。1906年在一篇論文中正式將這種方法命名為色譜法（Chromatography），色譜法由此得名。色譜法（chromatography）又稱層析法或色層法，是一類重要的物理化學(xué)分離分析方法。這種方法與適當(dāng)?shù)臋z測手段相結(jié)合，已應(yīng)用于分析化學(xué)各個(gè)領(lǐng)域。

第一節(jié)色譜法簡介1．1．1色譜法的歷史1901年，俄國植物學(xué)家茨維特（Tswett）將植物色素提取36色譜法是一種以分配平衡為基礎(chǔ)的分離方法。色譜分離體系包括兩個(gè)相，一個(gè)是固定的，一個(gè)是流動的，當(dāng)兩相作相對運(yùn)動時(shí)，反復(fù)多次地利用混合物中所有組分分配平衡性質(zhì)的差異使彼此得到分離。(1)按流動相的物理狀態(tài)分類：氣相色譜(GC)、液相色譜(LC)和超臨界流體色譜(SFC)。(2)按固定相的形狀分類：柱色譜、紙色譜和薄層色譜。(3)按分離過程的物理化學(xué)現(xiàn)象分類：吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜和排阻色譜。(4)按固定相和流動相的極性分類：正相色譜、反相色譜2．1．2分類色譜法是一種以分配平衡為基礎(chǔ)的分離方法。色譜分離體系包括兩個(gè)37期刊雜志

J.ChromatographyA,新理論、方法J.ChromatographyB,生物醫(yī)學(xué)ChromatographicScience理論HighResolutionChromatography理論LiquidChromatography綜合BiomedicalChromatography生物醫(yī)學(xué)JCapillaryElectophoresis綜合Electrophoresis綜合《色譜》，大連化物所，中國化學(xué)會；其他分析化學(xué)、藥學(xué)、生物醫(yī)學(xué)雜志均有報(bào)道。

2．1．3色譜學(xué)文獻(xiàn)期刊雜志2．1．3色譜學(xué)文獻(xiàn)38國際上有:Internationalsymposiumonpreparativechromatography

InternationalIonChromatographySymposiumInternationalSymposiumonChromatographyInternationalSymposiumonCapillaryElectroseparationTechniquesInternationalSymposiumonHighPerformanceLiquidPhaseSeparationsandRelatedTechniques.SymposiumonHandlingofEnvironmentalandBiologicalSamplesinChromatographyInternationalSymposiumonHyphenatedTechniquesinChromatographyandHyphenatedChromatographicAnalyzers,

SymposiumontheSeparationandAnalysisofProteins,PeptidesandPolynucleotides

返回學(xué)術(shù)會議國際上有:返回學(xué)術(shù)會議39學(xué)術(shù)會議國內(nèi)有：北京國際分析測試及儀器展覽會全國色譜學(xué)術(shù)報(bào)告會全國毛細(xì)管電泳及相關(guān)微分離學(xué)術(shù)報(bào)告會地區(qū)色譜會議全國分析化學(xué)會議有機(jī)及微量分析學(xué)術(shù)會議等學(xué)術(shù)會議國內(nèi)有：40固定相—柱內(nèi)的填充物。流動相—沿柱流動的液體。保留值—表示試樣中各組分在色譜柱中停留的時(shí)間或?qū)⒔M分帶出色譜柱所需流動相體積的數(shù)值稱為保留值，保留值可用作定性分析的參數(shù)。保留時(shí)間tR—指某一組分自進(jìn)入色譜柱開始至色譜峰最高點(diǎn)時(shí)所用的時(shí)間保留體積VR—指從色譜柱上洗脫某組分所需的流動相的體積，如果流動相的流速為F，則VR=F×tR第二節(jié)色譜法的重要參數(shù)1．2．1重要名詞第二節(jié)色譜法的重要參數(shù)1．2．1重要名詞41死時(shí)間to—非保留組分的出峰時(shí)間。死體積Vo—非保留組分的保留體積，即Fto。分配系數(shù)K—亦稱平衡常數(shù)，是組分在固定相和流動相中平衡濃度之比，即K=CS/CM容量因子k’—在平衡時(shí)，組分在固定相和流動相中的質(zhì)量比。根據(jù)K和k’的定義k’=KVS/VM

其中，VS和VM色譜柱中固定相和流動相的體積。死時(shí)間to—非保留組分的出峰時(shí)間。42色譜法通常利用各組分在兩相間分配系數(shù)的差異來進(jìn)行分離。分配系數(shù)（K）是指在一定溫度和壓力下，組分在固定相和流動相之間分配達(dá)到平衡時(shí)的濃度比，即CsK＝──Cm分配系數(shù)K決定于組分及固定液的熱力學(xué)性質(zhì)，并隨柱溫、柱壓的變化而變化，與柱中氣相、液相體積無關(guān)。它是分配色譜中的重要參數(shù)。分配系數(shù)色譜法通常利用各組分在兩相間分配系數(shù)的差異來進(jìn)行分離。分配系43容量因子（k）是指在一定溫度和壓力下，組分在兩相之間分配達(dá)到平衡時(shí)，分配在固定相和流動相中的質(zhì)量比，也稱為分配比。ms

k’=───mm

k’值決定于組分及固定相熱力學(xué)性質(zhì)，它不僅隨柱溫、柱壓的變化而變化，而且還與流動相及固定相的體積有關(guān)。容量因子容量因子（k）是指在一定溫度和壓力下，組分在兩相之間分配達(dá)到44從統(tǒng)計(jì)的結(jié)果來看，溶質(zhì)分子在固定相和流動相中停留的時(shí)間分?jǐn)?shù)可用溶質(zhì)在每一相中的量與總量的比值表示，即，溶質(zhì)分子在固定相中停留的時(shí)間分?jǐn)?shù)=qs/（qm+qs）=k’/（1+k’）；溶質(zhì)分子在流動相中停留的時(shí)間分?jǐn)?shù)=qm/（qm+qs）=1/（1+k’）。我們知道，在色譜分離柱內(nèi)，溶質(zhì)只有被轉(zhuǎn)移到流動相（溶劑）中，溶質(zhì)才會沿著流動相流動的方向在柱內(nèi)向前移動，所以溶質(zhì)的譜帶運(yùn)動速度U譜帶總是小于流動相的速度U，U譜帶實(shí)際上等于流動相的速度U與溶質(zhì)在流動相中停留的時(shí)間分?jǐn)?shù)之乘積，U譜帶=U/（1+k’）對于長度為L的分離柱，溶質(zhì)的保留時(shí)間tR為，

tR=L/U譜帶=（1+k’）L/UL/U表示流動相的流經(jīng)分離柱的時(shí)間，也表示不被保留溶質(zhì)的保留值即死時(shí)間to，所以，tR=t0（1+k’）2．2．2色譜過程基本方程式從統(tǒng)計(jì)的結(jié)果來看，溶質(zhì)分子在固定相和流動相中停留的時(shí)間45

保留時(shí)間方程

tR=t0（1+k’）保留體積方程

VR=V0（1+k’）

顯然，k’反映了色譜柱對組分的保留能力，k’值越大，表示固定相對溶質(zhì)分子的滯留能力越強(qiáng)，在柱內(nèi)停留的時(shí)間越長，保留保留時(shí)間越大。

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在色譜操作條件一定時(shí)，K或k’值越大，則組分的保留值也越大。如果兩個(gè)組分的K或k’值相等，則兩個(gè)組分的色譜峰必將重合。反之，兩組分的K或k’是值差別越大，則相應(yīng)的兩色譜峰相距就越遠(yuǎn)，因此兩組分的K或k’值不等是色譜分離的先決條件。-------定性依據(jù)tR與K、k’的關(guān)系在色譜操作條件一定時(shí)，K或k’值越大，則組分47

tR2－tR1R=2×(━━━━━━)ω1+ω分離度作為色譜柱的總分離效能指標(biāo)，以判斷難分離物質(zhì)對在色譜柱中的分離情況。分離度（R）定義為：相鄰兩峰的保留時(shí)間之差與兩組分峰寬平均值之比值，R≥1時(shí)，兩峰有98％以上的分離；R=1.5時(shí)，分離程度可達(dá)99．7％。一般用R=1.5為相鄰兩峰完全分離的標(biāo)志。返回2．2．3分辨率分離度作為色譜柱的總分離效能指標(biāo)，以判斷難分離物質(zhì)對在色譜482．3．1色譜分離的塔板理論

2．3．2塔板理論的基本假設(shè)與方程當(dāng)柱長為L時(shí)，理論塔板數(shù)為n，n=L/H色譜的理論塔板數(shù)n的經(jīng)驗(yàn)式為

n=5.54(tR/W0.5)2=16(tR/W)2

色譜柱有效塔板數(shù)俞大（有效塔板高度俞?。瑢M分分離俞有利。但不能預(yù)言并確定各組分有無分離的可能，因?yàn)榉蛛x的可能性不取決于分配次數(shù)的多少，而取決