檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)包-微生物clsi m11-a7厭氧菌

臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)提高醫(yī)療保健檢測質(zhì)!"$#$$$標(biāo)準(zhǔn)"自愿應(yīng)用準(zhǔn)$過"有效"應(yīng)具"$%除了制訂和促進(jìn)使用統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)和指南之外"$還提供了一個(gè)公開的$無偏見的論壇以討論那些影響臨床試驗(yàn)和醫(yī)療保健質(zhì)量的關(guān)鍵問題%出文件是以標(biāo)準(zhǔn)$指南或委員會報(bào)告形式出版的%標(biāo)明確規(guī)定了材料$方法或?qū)嵤┑木唧w"并"不用的另外標(biāo)準(zhǔn)可能包含有自由選擇的要素"均有明確標(biāo)識%指敘述了用于一般操作實(shí)踐$步驟或材"并共識$自愿使用的文件%使用者可以按指南的規(guī)定要求使用"也可按需要變更使用%報(bào)告由董事會發(fā)布的尚未經(jīng)一致評議的文件%達(dá)成共識的過$式標(biāo)準(zhǔn)的過程&標(biāo)準(zhǔn)草案的認(rèn)文件的形成與公開評針對實(shí)驗(yàn)室使用者的評論意見進(jìn)行修文件被接受為臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)或指南大多數(shù)文件經(jīng)歷兩個(gè)水平的一致評議建議性的和批準(zhǔn)的)"根據(jù)需要"文件也可

在中間水平接受一致評議作為建議的標(biāo)準(zhǔn)或指$%文件要接受臨床試驗(yàn)的第一階段評議%文件要接受廣泛的$徹底的技術(shù)評估"包括對范圍$方法$實(shí)用性的整體評估及對技術(shù)和編輯內(nèi)容的詳細(xì)評估%批準(zhǔn)的已批準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)或指南在醫(yī)療保健界已獲得共識%進(jìn)行評議的目的是確定最終文件用性"保證已達(dá)成的共識!即充分考慮對早期版本的評論意見#"并且確定是否需要其他達(dá)成共識的文件%$標(biāo)準(zhǔn)和指南代表了優(yōu)秀實(shí)驗(yàn)室實(shí)踐的一致意見"也反映了在使用既定的$步驟時(shí)"其影響的$有法定資格且對此感興趣的參與者之間取得了廣泛一致%$的標(biāo)準(zhǔn)和定可能比實(shí)用規(guī)則更嚴(yán)格或更寬%因此"遵循這些自愿標(biāo)準(zhǔn)或指南的使用者仍然有義務(wù)遵循實(shí)用規(guī)則%評""的委"以考慮有些評論使得文件在下一次一致評論水平出"生附我們懇切希望讀者在任何時(shí)間以任何形式對$的任何文件提出評論意見%評論可發(fā)往臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會&4"$57())"8":7');<"美國自愿參我們希望醫(yī)療保健界所有學(xué)科的專家自愿參與到$的計(jì)劃中來%關(guān)于參加委員會的詳細(xì)信息請聯(lián)系我們"5A或E7)E;;)7))%贈贈<$&7IEJKEJE $$&)J<KK)''厭氧菌藥物敏感性試驗(yàn)方法*批準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)第七=44'M8 84T8448V"MR88F!$# O 88 88MOM8 摘在不明確某種抗生素是否可以用于治療某種導(dǎo)致感染病原菌的情況下"可以通過藥物敏感試驗(yàn)來預(yù)測%近些年來許多厭氧菌的耐藥情況發(fā)生變化"導(dǎo)致對許多厭氧菌的敏感性缺乏預(yù)見性%厭氧菌的抗生素藥物敏感試驗(yàn)可用于防治厭氧菌感染以及耐藥監(jiān)測%在本版指南中"我們描述了有關(guān)厭氧菌的二種終點(diǎn)確定決定法藥敏試驗(yàn)%瓊脂稀釋法保留參考標(biāo)準(zhǔn)"很適合用于耐藥監(jiān)測以及科研"并且可以通過該標(biāo)準(zhǔn)與其他方法進(jìn)行方法學(xué)比較%微量肉湯稀釋法同樣很適合臨床實(shí)驗(yàn)室"但是同時(shí)這種方法受限于檢測脆弱擬桿菌群"并且該方法的適用抗生素有限%另外本文件描述了質(zhì)量控制方法%列$結(jié)使分些標(biāo)準(zhǔn)時(shí)"我們將在未來版本中做出更新并發(fā)布%實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會$#厭氧菌藥物敏感性試驗(yàn)方法*執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)第七版%$文<$&7IEJKEJEK4"$57())"8"88< $"J))<B$$""水平到標(biāo)$"$目前$"""此時(shí)想成為會員并且需要一本目錄時(shí)請與我們聯(lián)系%電話&DE7E)7))*傳真&)網(wǎng)址<J))<年版權(quán)歸臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會所有&在未經(jīng)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會$#%書面許可之前"任何單位和個(gè)人不得改編$拷貝或以其他方式復(fù)制電子$手工$影印$錄音或其他本出版物的任何部分$特此準(zhǔn)許個(gè)人會員或購買者制作一份本出版物的復(fù)制品"用在單一場所實(shí)驗(yàn)室的程序手冊中"請與執(zhí)行副會長聯(lián)系"884L8 4"$5()"8"8887'<7';"$引用建!4L844848L$58=*4$844M48$4F77<+$&7IEJK;EJEK,84GL8448'()4"$5"*8"8887');<7;';$J))<#提出標(biāo)7''年77批準(zhǔn)標(biāo)7K年7J第三批準(zhǔn)標(biāo)7'J年7批準(zhǔn)標(biāo)7<年7J第四批準(zhǔn)標(biāo)7'(年E批準(zhǔn)標(biāo)J))7年K第五暫行標(biāo)7''年第二批準(zhǔn)標(biāo)J))(年7第六批準(zhǔn)標(biāo)'')年第二批準(zhǔn)標(biāo)J)年7第七$&7IEJKEJE$$&)J<KK)''委員會全體會微生物學(xué)專業(yè)委員"$""448V"MR主888$88"$=%"8副主$8"&))">".48MR>,088""84顧888:484$ ]048Y],抗菌藥物敏感試驗(yàn)分委B4858$80884主8!>$8$8854885M"MR>88$ 808480M4"544M"$888848440: 8488M4$8M88"$5顧V:$#M84:484:8M8$88"$=408V""MR4"88V8488"M"!#8848ML48R工作人8M""MR884L$844FR5"""F:V8+48:84 副會:"$"!$# 884聯(lián)絡(luò)8MR8編M"M助理編"M"!#VO8$ML"M"!FF#8$858志厭氧菌藥物敏感性試驗(yàn)作4M""MM4?88F!$#$ 84T8448V"MO888L"FR88M"R 委員會全體會員 范圍引言標(biāo)準(zhǔn)預(yù)防措施 定義 厭氧菌抗菌藥物敏感性試驗(yàn)的適用指征I 常規(guī)試 I 監(jiān)測試 厭氧菌藥 E 解釋標(biāo)準(zhǔn)!折點(diǎn)#和臨床相關(guān) E 病原體< 原 ! 58# < 測試濃度 常規(guī)試驗(yàn)及報(bào)告的抗菌藥物選擇$7777J(((E<<; 常規(guī)報(bào) <; 非專有名 稀釋試驗(yàn)中接種物的準(zhǔn)備7 接種物制定的濁度標(biāo)準(zhǔn)7 生長法7K 菌落直接混懸法 %內(nèi)酰胺酶試驗(yàn) 參考瓊脂稀釋法操作步驟4M法#7J 試劑和材料<;;;;'''<抗菌物I<來源I<抗菌藥物粉劑的稱 I'試驗(yàn)菌株的保存與復(fù)蘇<' 用于后續(xù)試驗(yàn)菌株的冷凍保 <' 冷凍保存菌株的復(fù) ;7J制備瓊脂稀釋法平板 '7JK接種瓊脂稀釋平板7J瓊脂稀釋法平板孵育7J讀取瓊脂稀釋法平板 微量肉湯稀釋法操作步 7K 試劑和材 7K 制備微量肉湯稀釋板的步 7KK 微量肉湯稀釋盤的接7K 微量肉湯稀釋盤的孵

7K 微量肉湯稀釋法的終點(diǎn)讀 質(zhì)控指7(目 7(質(zhì)控菌株和質(zhì)控頻 7(K校正措 參考文 B HB$$$!!!!!!!!!!表7B厭氧菌藥敏試驗(yàn)抗菌藥物分組建 JB#相關(guān)性!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!KJ表KB制!!!!!!!!!!!!!!!!!KK表(B瓊脂稀釋法或者微量肉湯稀釋法藥敏試驗(yàn)中抗菌藥物的稀釋制備方案!!!!!!!!!%"#C>0\ 表EB質(zhì)控菌株應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)微量肉湯稀釋法測定%"的允許范圍!#C0>\ 詞匯表(!第一部分 內(nèi)酰胺類&種類$亞類和普通名稱 詞匯表(!第二部分 非內(nèi)酰胺類&種類$亞類和通用名 詞匯表 $文件F7))中抗菌藥物縮寫給藥途徑藥物種類 代表評論和分委會答復(fù)簡介!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!質(zhì)量管理體系方法!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!$相關(guān)出版 近些年來厭氧菌的耐藥率明顯增

+7"耐藥率在不同"

$不同醫(yī)院之間水平參差不

甚至同種的抗生素的值也大不相同+JI,""If((f$K的菌對多種抗菌素更具耐藥性感性的改變具有%也有報(bào)道"包括普雷菌+E)*<*7*E"鏈!E#!7Jf(#!;#+7J<,包括!''),-和' )'在內(nèi)的一些其他厭氧菌具有已知的天然耐藥性%在這些非擬桿菌屬的厭氧菌中"青霉素耐藥可能是常見的"但卻不可預(yù)測%目前厭氧菌的抗"+K"菌譜已經(jīng)比較清 其日益增強(qiáng)的耐藥性與多樣化并可轉(zhuǎn)移的耐藥基因有

而不同的耐藥基因型定不同的耐藥表型%另外"抗生素的過度使用也是導(dǎo)致這些耐藥基因發(fā)生改變和轉(zhuǎn)移的重要因素+細(xì)菌耐藥與臨床療效不佳是否相關(guān)是個(gè)很值得探討的話題%到目前為止"這方面的研究很少或者只是顧性的+'%因?yàn)檫@方面研究受很多因素的干擾"比如感染的本質(zhì)!需氧菌與厭氧菌混合感染#"厭氧菌的鑒定或臨床數(shù)據(jù)的不完善"藥敏試驗(yàn)所選方法不正確或是否該應(yīng)用修正方法"外科引流以及清創(chuàng)縫合的效果等等%然而"最近通過對擬桿菌屬菌血癥患者的相關(guān)研究清楚地表明"是否接受了有效治療與+7)死亡率增加及該菌的存留有密切關(guān) 由于厭氧菌耐藥性的形式嚴(yán)峻"耐藥基因的傳播"在給予無效的抗生素治療時(shí)有導(dǎo)致臨床治療效果不佳的潛在風(fēng)險(xiǎn)"這就要求進(jìn)行更多的藥敏試驗(yàn)%厭氧菌工作組認(rèn)真慎重地考慮了以上因素"并竭力制定$重復(fù)性好的藥敏試驗(yàn)方法%77:<包含一份詳細(xì)的藥物敏感試驗(yàn)指南附錄H#"氧菌的數(shù)量及種類"何時(shí)檢測及次數(shù)"以及如何選取合適的抗生素表7描述瓊脂稀釋肉湯稀釋法終點(diǎn)測定的彩色平板圖也編入該版本中圖J"K%本指南所述方法可作為其他方法的比較標(biāo)準(zhǔn)%經(jīng)過嚴(yán)格的評估和比較之后"工作組堅(jiān)信藥敏試驗(yàn)方法可應(yīng)用于臨床實(shí)驗(yàn)室或者用這些或其他可比方法在參考實(shí)驗(yàn)室中使用%厭氧菌工作小組推薦在具備一定的臨床條件下進(jìn)行厭氧菌臨床分離株的藥敏試驗(yàn)%至少"在具備專業(yè)知識和技能的前提下"應(yīng)充分考慮使用這些藥敏試驗(yàn)方法或耐藥性監(jiān)測%否則分離菌株應(yīng)送至參考實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測%"試驗(yàn)法+(I盡管微量肉湯稀釋法應(yīng)用很廣泛"但它還是存在許多厭氧菌不生長或生長不好的局限性+E""果不"湯稀釋盤"并且在某些非脆弱擬桿菌群屬可獲得滿意的結(jié)果"但$擬桿菌群的藥敏試驗(yàn)%,(K)I"控,對JKI菌藥%我們期待該版推薦的藥敏試驗(yàn)方法能夠在實(shí)踐中得到高度一致的準(zhǔn)確性"并且可以作為將來試驗(yàn)或臨床研究的金標(biāo)準(zhǔn)%臨床實(shí)驗(yàn)室可以得到商品化的微量肉湯稀釋產(chǎn)品或者瓊脂梯度方法"便捷地應(yīng)用于病人臨床分離株的常規(guī)檢

+7<%在應(yīng)用儀器設(shè)備的時(shí)候要嚴(yán)格遵守廠家操作說

%一些臨床實(shí)驗(yàn)也可以選擇其他簡單的檢測方法"比如濃度梯度瓊脂擴(kuò)散法%無論實(shí)驗(yàn)室選擇哪種方法"都必須確保質(zhì)量控制結(jié)果在可接受范圍之內(nèi)%'),')"-:"-!-:-關(guān)鍵瓊脂稀釋法*厭氧菌*抗生素敏感性*微量肉湯稀釋法*最低抑菌濃度%#使用使用!FAH文件者應(yīng)知道該指南并未涉及商業(yè)化的藥敏試驗(yàn)設(shè)備%此文件描述的方法是通用的參考方法"此方法可用于臨床常規(guī)藥敏試驗(yàn)"也可以用于臨床實(shí)驗(yàn)室評估儀器設(shè)備能否用于常規(guī)試驗(yàn)%美國食品與藥品管理局#$應(yīng)用指南操作得到的結(jié)果對相關(guān)儀器設(shè)備性能進(jìn)行評估來決定該儀器是否可以投放市場%確保廠方包裝說明書推薦的微生物和抗生素與@E推薦參考方法基本一致的情況下"應(yīng)用商品化設(shè)備得到的藥敏結(jié)果與按照@E指南操作得到的結(jié)果也基本一致%一些實(shí)驗(yàn)室也可以根據(jù)具體情況"尋找適合自己的實(shí)驗(yàn)方法"比如商品化的稀釋法&抗生素濃度梯度法&比色法&比濁法&熒光法或者其他方法進(jìn)行選擇或常規(guī)使用%$"$府機(jī)關(guān)$衛(wèi)生保健機(jī)構(gòu)和教育工作者$制藥廠家和微生物診斷相關(guān)廠家等本著自愿達(dá)成一致的原抗菌物敏感試驗(yàn)分委會的使命是&建立藥敏試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)參考方法*為標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)方法提供質(zhì)量控制參數(shù)建立藥敏試驗(yàn)結(jié)果解釋標(biāo)準(zhǔn)*為臨床提供相關(guān)的和實(shí)用的測試與報(bào)告策略建議通過建立新的或修訂原有方法$解釋標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)量控制參數(shù)"不斷改進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)和優(yōu)化不斷出現(xiàn)的藥機(jī)制的檢測方法*通過多種途徑對使用者進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)與指南的教育促進(jìn)指南的修訂者與使用者對話交流"擇合$$準(zhǔn)$$及時(shí)$$共識%厭氧菌敏感性試驗(yàn)方法!標(biāo)準(zhǔn)第七 范!氧微!""試*2的更新中發(fā)布! 引本文描述了01參考瓊脂稀釋法"用于脆弱擬桿菌群檢測的微量肉湯稀釋法"以及厭氧菌"內(nèi)酰胺酶的檢測方法!瓊脂稀釋法已在聯(lián)合多中心的試驗(yàn)中得到廣泛研究"被推薦為適用于所有厭氧菌的參考方微量肉湯稀釋法是更人性化$的方法"其可在一個(gè)微量稀釋板上同時(shí)進(jìn)行多種抗菌藥物的測試!然而"最近的多家實(shí)驗(yàn)室的聯(lián)合研究比較了微量肉湯稀釋法和采用本版推薦的培養(yǎng)基的瓊脂稀釋法"研究肉湯稀釋法目前僅限于脆弱擬桿菌群見前言&的一些抗生素藥敏試驗(yàn)!對于某些藥物的敏感性試驗(yàn)見表'"兩種方法是等效的!具體試驗(yàn)步驟是將含倍比稀釋的抗菌藥物的瓊脂加入佩特&釋平板的孔位內(nèi)"然后將測試菌的標(biāo)準(zhǔn)1&實(shí)驗(yàn)室間和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)&可重復(fù)性藥敏試驗(yàn)結(jié)果至關(guān)重要 標(biāo)準(zhǔn)預(yù)防措由于不能預(yù)知菌株或標(biāo)本是否存在感染性"所有來自患者和實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)本均應(yīng)視為感染性標(biāo)本并依據(jù)#預(yù)防措施$進(jìn)行處理!標(biāo)準(zhǔn)預(yù)防措施是綜合了通用預(yù)防和個(gè)體物質(zhì)隔離$主要特點(diǎn)的指南!標(biāo)準(zhǔn)預(yù)防措施涵蓋了所有感染性病原體的傳播"因此這樣較僅針對血液骨髓源性病原體傳播的通用預(yù)防措施更加全面!該標(biāo)準(zhǔn)和通用預(yù)防指南可從美國疾病控制中心獲得>0"B>>AEE>>$>>;B>>BEJ'(%*&(KL:2&感)' 定抗菌藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果解釋分類 一種基于微生物對不同濃度某種抗菌藥物的體外反應(yīng)的分類方法"上述藥物濃度與該藥物常規(guī)劑量給藥后血液或組織可達(dá)到的濃度相對應(yīng)!抑制

敏 該分類是指菌株能被使用推薦劑量抗菌藥物在感染部位通?？蛇_(dá)到的抗菌藥物濃度中介 療的反應(yīng)率可能低于敏感株!#中介$分類表示藥物在生理濃集的部位%如尿液中的喹諾酮類和"內(nèi)酰胺類&具有臨床效力或者可用高于正常劑量的藥物進(jìn)行治療%如"內(nèi)酰胺類&!此分類還包括一個(gè)緩沖區(qū)"它可以避免微小的*不受控制的和技術(shù)的因素造成重大的結(jié)果解釋錯(cuò)誤"特別是對那些藥物毒性范圍窄的藥物!"&如"&"株有確切的臨床療效!&$物濃度-%見*K節(jié)脂稀釋板的判讀和*LK節(jié)的微量肉湯稀釋法終點(diǎn)的判讀 厭氧菌抗菌藥物敏感性試驗(yàn)的適用指理想情況下"接收厭氧菌培養(yǎng)標(biāo)本的臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)能夠通過純培養(yǎng)分離出所有可能存在的致病厭氧菌"這些細(xì)菌均應(yīng)進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)"目的在于(以協(xié)助重癥或危及生命的厭氧菌感染患者的治療定期監(jiān)控本地區(qū)或區(qū)域性的耐藥譜變化"以利用這些信息指導(dǎo)經(jīng)驗(yàn)性選擇抗菌藥物確定被批準(zhǔn)用于厭氧菌感染治療的新型抗菌藥物的厭氧菌敏感譜對臨床菌株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)的主要指征是選擇有效的抗菌藥物"這在下述情況時(shí)尤為重要已知具有耐藥性的特定細(xì)菌種屬采取適當(dāng)?shù)闹委煼桨赋浞种委熀蟾腥救猿掷m(xù)存在依照以往的先例難以作出經(jīng)驗(yàn)判斷或?yàn)橹匕Y感染或需要長期治療病例確定適當(dāng)?shù)闹委煼桨? 常規(guī)試!菌應(yīng)"*****!"正常無菌部位分離的細(xì)菌除非能確定是污染菌"否則應(yīng)進(jìn)行藥敏試驗(yàn)!與內(nèi)科醫(yī)生的溝通對于決定是否進(jìn) !版權(quán)歸臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會所有行藥敏試驗(yàn)非常重要!內(nèi)科醫(yī)生一旦提出合理要求時(shí)"就應(yīng)進(jìn)行藥敏試驗(yàn)&""否則!當(dāng)同時(shí)分離出幾種潛在的厭氧病原菌"至少要對脆弱擬桿菌群其耐藥率最高&!"兩者"!(部分?jǐn)M桿菌屬*普雷沃菌屬*梭桿菌屬*梭菌屬*菌屬及薩特氏菌屬!對于每種待測菌"應(yīng)從非選擇培養(yǎng)基上挑取若干個(gè)形態(tài)相近生長良好的菌落制備菌懸液!細(xì)菌鑒定試驗(yàn)可從相同的純培養(yǎng)物上進(jìn)行!臨床標(biāo)本決不能直接用于藥敏試驗(yàn)!例如J:8'*等&!也可使用其他稀釋方法"同時(shí)應(yīng)報(bào)告所得結(jié)果!當(dāng)細(xì)菌在最低測試濃度時(shí)生長仍受抑制"結(jié)果應(yīng)報(bào)告為低于或等于此最低測試濃度與此類似"如果細(xì)菌在最高測試濃度仍然生長"結(jié)果應(yīng)報(bào)告為高于此最高測試濃度!更&"測試范圍!)#"藥譜"!*監(jiān)測"!每的&+I!"**"果試驗(yàn)菌株的種類構(gòu)成應(yīng)能夠反映該時(shí)期內(nèi)不同厭氧菌的分離頻率應(yīng)至少測試'2株擬桿屬細(xì)菌和抗菌藥物的選擇應(yīng)基于醫(yī)院的處方藥物手冊!然而"實(shí)驗(yàn)室也應(yīng)在每類適當(dāng)?shù)目咕幬镏兄辽龠x擇一種"見表*&最新的藥敏試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)每年發(fā)布"將當(dāng)前結(jié)果"!"整理厭氧菌藥敏結(jié)果"使之成為醫(yī)院細(xì)菌耐藥譜的一部分!厭氧菌藥物敏感性試驗(yàn)的局限發(fā)檢測報(bào)告的實(shí)驗(yàn)室和臨床醫(yī)生都應(yīng)注意"體外藥敏結(jié)果并不一定能預(yù)測個(gè)體患者對厭氧菌感染治療的反應(yīng)!以下幾點(diǎn)非常重要(只有細(xì)菌得到充分生長"作出的敏感性$判斷才可靠對培養(yǎng)方法和培養(yǎng)基組分的改進(jìn)質(zhì)控值應(yīng)在允許范圍之內(nèi)!如有質(zhì)控菌對每種抗菌藥物報(bào)告出即使在最好的質(zhì)控條件下"每次

可能會促進(jìn)苛養(yǎng)厭氧菌生長"但必須采取適當(dāng)?shù)馁|(zhì)控試驗(yàn)"且改進(jìn)"報(bào)告結(jié)果時(shí)應(yīng)注明相對于標(biāo)準(zhǔn)方法所作出的變動!.釋試驗(yàn)得出的終點(diǎn)也不可能完全相同!為避免出現(xiàn)較大的異"稀釋試驗(yàn)必須標(biāo)準(zhǔn)化并進(jìn)行嚴(yán)格質(zhì)控由于許多厭氧菌造成的感染是混合感染"因此"有效治療常需采用包括外科的干預(yù)和經(jīng)驗(yàn)性廣譜抗菌藥物治療在內(nèi)的綜合治療措施!僅通過單一細(xì)菌的藥敏結(jié)果難以預(yù)測臨床預(yù)后!耐藥率最高的細(xì)菌通常是脆弱擬桿菌群&應(yīng)首先試驗(yàn)和報(bào)告!*!$感染&*見00文件'L體外藥敏試驗(yàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)控參數(shù)&設(shè)立$難"并且一些藥物的值接近折點(diǎn)當(dāng)使用最大劑量并采用適當(dāng)"對治"""感染顯然是非常重要的!*#病原體!"敏試!&"平板對于腐敗梭菌"每個(gè)平板只能測試*株分離菌株!+抗菌藥+!來源"$B'*J2*>TT"T">E'2:K'':22''(:(('&"或其他特定的商業(yè)來源獲得非口服制!"**或&'2W中最好真空保存&!當(dāng)干燥器從冰箱或冷藏柜中取出時(shí)"在打開前應(yīng)恢復(fù)至室溫下以避免水汽凝聚!+#所有抗菌藥均要檢測標(biāo)準(zhǔn)活性單位!活性單位可能會與粉末的實(shí)際重量差距很大"在不同藥品批號之間也會存在差異!因此實(shí)驗(yàn)室必須對在用的各批次抗菌藥物粉末進(jìn)行分析"根據(jù)分析結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)化抗菌藥物溶液!通常采用高效液相色譜分析&,*含水量例如"通過;失重檢測&和鹽反離子餾分如果化合物由鹽而非自由酸或自由基構(gòu)成&!效價(jià)可以用百分?jǐn)?shù)或%ZZ&等單位表示!"'"效價(jià)"**""磺酸&!然而"""建議(分析數(shù)據(jù)的驗(yàn)證((II通過分析&**%ZZ&活性分?jǐn)?shù)22[以游離酸而非鹽類形式提供通過上述數(shù)據(jù)計(jì)算效%%%*%I:&%%**&:((下列兩個(gè)公式均可以用于計(jì)算配制標(biāo)準(zhǔn)溶液所需粉劑劑量或所需稀釋液%&%&% %

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U***或0)HJ*I(分析"*22%P!"所需稀釋液的體積"以獲得上述公式'所描述的終濃度溶液!22P*J"(*:J(K2容量&

%實(shí)際重量 %效價(jià)*':2

*2(%期望濃度 *:'JP*22%#$原液$的制備*222%*'2&*2"""!"溶液溶解度時(shí)"應(yīng)參考藥物廠商提供的說明!某些藥物需溶于溶劑而非水中"在這種情況下應(yīng)使用最低量溶劑用來溶解抗菌藥物粉末原液的最終濃度可以用水或表L中適當(dāng)?shù)南♂寗┱{(diào)配對于潛在的有毒溶劑"應(yīng)查閱生產(chǎn)商提供的材料安全數(shù)據(jù)表見表&"!如果需要"溶液可經(jīng)膜濾法消毒!由于濾**"!"析程序證明沒有發(fā)生藥物吸附非常重要!**""3J2W"不能高于'2W"不能放在冷藏冰箱中&需要時(shí)可以解凍儲存管并在當(dāng)天使用!用完藥物都應(yīng)在當(dāng)天日末丟棄大多數(shù)抗菌藥物的原液可在3J2W下儲存J個(gè)月或更長時(shí)間"活性不會明顯喪失除這些常規(guī)建議外"任何情況下必須遵循藥物制造商提供的說明抗菌藥物任何明顯的變質(zhì)均應(yīng)通過質(zhì)控菌株的藥敏試驗(yàn)結(jié)果反映出來!+%測試濃度具體抗菌藥物的測試濃度應(yīng)包括表'內(nèi)的解釋折點(diǎn)"但是實(shí)際測試濃度數(shù)由實(shí)驗(yàn)室決定!報(bào)告1."K個(gè)不"建在控值!常規(guī)試驗(yàn)及報(bào)告的抗菌藥物選常規(guī)試驗(yàn)和報(bào)告的最適宜抗菌藥物的選擇"最好由每個(gè)臨床微生物實(shí)驗(yàn)室在咨詢感染科醫(yī)師及醫(yī)院藥后確定表*推薦的藥物可用于治療敏感厭氧菌所致的某些感染"其體外試驗(yàn)結(jié)果表明可以接受!所選的藥物試驗(yàn)可用于流行病或監(jiān)測目的"或有助于細(xì)菌鑒定!!常規(guī)報(bào)表*列出了目前建議適用于試驗(yàn)及報(bào)告的藥物!此表根據(jù)微生物學(xué)和藥理學(xué)因素以及臨床適應(yīng)證和!""*!測試">&"告中!然而"這些結(jié)果從實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)可以得到"以便于感染防制人員和或&醫(yī)院流行病學(xué)家使用!6#"&多可用藥物之間的聯(lián)系"可按藥物種類進(jìn)行組合!試驗(yàn)菌株的保存與復(fù)7!3J2W""從8"勻成均一混懸液"冷凍保存!湯8Q2中3J2W#冷凍保存菌株的復(fù)冷凍菌株必須經(jīng)過至少兩次強(qiáng)化血瓊脂培養(yǎng)基轉(zhuǎn)種的次代培養(yǎng)"在用于藥物敏感試驗(yàn)前應(yīng)確定培養(yǎng)純度!!8稀釋試驗(yàn)中接種物的制菌株應(yīng)從生長898的含血培養(yǎng)基上如布氏血瓊脂平板&選取!通常菌落直徑至少應(yīng)達(dá)*8菌8:對"則見*2"&見*2L"直接菌懸液法&!!接種物制備的濁度標(biāo)2'&!%9&*2:希'K'K'I(8**2(辨$(!"+2,!8#*選取強(qiáng)化布氏血瓊脂平板上孵育'8或經(jīng)過充裕時(shí)間形成的大小適當(dāng)?shù)木渚渲睆街?*2節(jié)"&"K*L%%接種環(huán)量的生長物&接種于不基!如果在該程序中使用厭氧培養(yǎng)箱"硫乙醇酸鹽肉湯則可用強(qiáng)化布氏培養(yǎng)基*強(qiáng)化腦心浸液培養(yǎng)基*斯氏肉湯等增菌培養(yǎng)基代替!'接種肉湯于LK9L(W孵育J'8;"或達(dá)到足夠的菌液濁度單位!!$*8中暴露不應(yīng)超過L2>!%'K*""過還"2K!可用產(chǎn)色頭孢菌素法檢測厭氧菌"內(nèi)酰胺酶活性!由于絕大多數(shù)脆弱擬桿菌群分離株產(chǎn)"內(nèi)酰胺酶"故認(rèn)為它們對青霉素*阿莫西林*氨芐西林耐藥'因此"脆弱擬桿菌群細(xì)菌既不必做"內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)"也不必報(bào)告其結(jié)果我們認(rèn)為并報(bào)告任一產(chǎn)"內(nèi)酰胺酶的厭氧菌對青霉素和氨芐西林耐藥"不必再做體外敏感性試驗(yàn)!應(yīng)當(dāng)注意"某些厭氧菌因產(chǎn)"內(nèi)酰胺酶之外的機(jī)制而對"內(nèi)酰胺類抗菌藥物耐藥"因此"內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)陰性并不能確定對這類抗菌藥物敏感!與臨床醫(yī)生商議"如果臨床考慮使用青霉素或氨芐西林治療"應(yīng)進(jìn)行"內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)!根據(jù)"內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)結(jié)果選擇藥敏試驗(yàn)所用抗菌藥物*!提示(某些厭氧菌可能需要延長至L2>7才出現(xiàn)陽性反應(yīng)!#9"8:K2W&"混勻""+*!濃度!"L2>!&!#!瓊脂稀釋法所需試劑和材料"詳見附錄!#!!適合厭氧菌藥敏試驗(yàn)的氣體環(huán)境可由一次性氫碳二氧化物發(fā)生裝置*抽氣換氣法或厭氧箱提供!89([(2["些1!#!#布氏瓊K**X**K[&!*'*"化"就會很方便!制備好抗菌藥物合適的稀釋液后"將其與脫纖維羊血一起加入熔化的瓊脂中!!#制備瓊脂稀釋板的步該試驗(yàn)步驟匯總于附錄_"并附有試驗(yàn)日程表!開始前"確定待測抗菌藥物及其試驗(yàn)濃度"所選抗菌藥物的試驗(yàn)濃度應(yīng)包含表所列的解釋折點(diǎn)和質(zhì)控菌株的1.值"但實(shí)際上做幾個(gè)試驗(yàn)濃度由實(shí)驗(yàn)室*K*22的圓形2"L2*份*2"*2&I"2和L*2]!!## 制備瓊&試"制X*的"適"每對應(yīng)一個(gè)待測抗菌藥物濃度"備用! 如果試管當(dāng)日使用"分裝后"放入:K2W水浴中!如果試管是事先制備好的"將培養(yǎng)基熔沸水浴"微波爐或短時(shí)高壓&"然后將試管放到8K2W水浴中冷卻!## 制備抗菌藥物稀釋 解凍事先配制的抗菌藥物貯存液見(-節(jié)"貯存液的制備&或試驗(yàn)當(dāng)日新鮮配制 試管分裝定量滅菌蒸餾水或緩沖液見表8&"作為稀釋液的空白液%L&8"*`**8和*:抗菌%2&!!## 傾倒瓊脂稀釋法平 在每個(gè)平板上標(biāo)記抗菌藥物濃度"將平板分放在一個(gè)水平面上%'"*%KK&"加入*%*K&%L%&*2帽"""!%L&"8"%'&"但每"相平板!%8&""L2%>!""將瓊!!## 瓊脂稀釋法平板的貯 若用于常規(guī)試驗(yàn)"使用前將平板放在密封塑料袋中9:W保存"不能超過 若用于研究和評估"推薦貯存時(shí)間不能超過 含有亞胺培南*克拉維酸的內(nèi)酰胺酶內(nèi)酰胺酶抑制劑復(fù)合制劑*或其他任何已知不穩(wěn)定的抗菌藥物的平板"均應(yīng)試驗(yàn)當(dāng)日配制!! 接種瓊脂稀釋平+!*9'""*2K點(diǎn)!"艱難$(222K"!進(jìn)行"!""需在! 制備標(biāo)準(zhǔn)接種物"可以培養(yǎng)細(xì)菌生長至相當(dāng)于2-麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)"或直接用菌落混懸成相同濁度"見第*2節(jié) 稀釋法接種物制備! "見圖*&"將少量約2K%&懸液移至接"!*22%%圓形平板排列方 *22%%方形平板排列方*'*'L8KJ(:I*'L8KJ(:I圖 瓊脂稀釋法藥敏試驗(yàn)時(shí)推薦的接種器內(nèi)菌株排列方 仔細(xì)操作"避免噴濺"將接種物接種至每個(gè)平板表面接種開始時(shí)"先接種兩個(gè)不含抗菌藥物的質(zhì)控板!其中一個(gè)平板上標(biāo)記需氧前$以檢測有無&"$氧生&!按照從低濃度到高濃度接種含抗菌藥物系列稀釋濃度的平板在每個(gè)系列平板之間"接種一個(gè)不含抗菌藥物的對照平板用于生長質(zhì)控和檢測平板接種過程中可能發(fā)生的污染!接種完最后一個(gè)系列時(shí)"再次接種兩個(gè)平板"一個(gè)標(biāo)記需氧后$"另一個(gè)標(biāo)記厭氧后$"以驗(yàn)證最后接種細(xì)菌的活力和純度! 建議對接種物懸液進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)"確保脆弱擬桿菌$KK和多形擬桿菌$*的接種物終濃度為*K*2:!由于瓊脂稀釋法是典型的批量操作"因此應(yīng)在每批試驗(yàn)期間確定所有質(zhì)控菌株菌落數(shù)量!如果全年都做瓊脂稀釋法試驗(yàn)"建議每個(gè)月做一次菌落計(jì)數(shù)艱難梭菌$(222K的菌落計(jì)數(shù)為%8&*2(該項(xiàng)操作比較容易完成"先從2-K麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)懸液中移出22*等分"用*22I[生理鹽水中稀釋**222稀釋&"得到*2K的懸液再從該試管中移出2*%#等分"用*22I[生理鹽水中稀釋"得到*2L"將2*%#"計(jì)*K2*K*2:或*2K!! 瓊脂稀釋法平板孵 %>' 需氧孵育的平板應(yīng)放在孵箱中LK9L(W孵育88;以驗(yàn)證在有氧環(huán)境中細(xì)菌不能生長&! 8&8&8&*&! $!!H道"8&''&'<1'&%:&!# 首先觀察對照平板上有無需氧菌污染!確認(rèn)需氧對照平板上沒有污染菌生長'&例"如"可若確定污染發(fā)生"必須重新檢測菌株!%L&1."1.*9L個(gè)正常大小菌落!圖例應(yīng)該作為指南使用"在終點(diǎn)讀取不明確的情況下作用尤為明顯!$微量肉湯稀釋法操作步$"*量稀2*%#!$!$!!附錄_中對瓊脂稀釋法步驟的介紹也適用于微量肉湯稀釋法$!#紅素%K&*維生素X*%*&和溶解的馬血%K&的'$#*&%2&"見(L"&8*2]"預(yù)將肉剩去不用!'*2配器!2*2'&IJ!要"22K2*!照孔!&證明其無菌+L!%L&""'2W"3J2W&!盡""&""3J2W!除霜冰箱內(nèi)"反復(fù)凍融會加速某些藥物"尤其是內(nèi)酰胺類藥物的降解!$$標(biāo)準(zhǔn)濁度的接種物可通過增菌達(dá)到2-麥?zhǔn)蠞岫然蛘卟捎镁渲苯踊鞈抑料嗤瑵岫葋碇苽?具體見第I節(jié)"試驗(yàn)用菌株的儲存和復(fù)蘇!%**K>內(nèi)"""濃度**2J""計(jì)算!"!"孔內(nèi)2*"22*""2K9*K*2:&**K**2(!如將22*菌懸液接種到肉湯中"細(xì)菌最終試驗(yàn)濃度大約是**2J%或者**2K孔&'*K>內(nèi)""體積2%2*22*&!"22K2&S$$*2J完"22*"*22I[""2*"*22左*2*2的按照步驟%*所述制備的接種物初始濃度為2K麥?zhǔn)蠞峤K濃度則為*2J%8&"孵育進(jìn)行次代培養(yǎng)"以檢測接種物純度!$% 為保證所有培養(yǎng)物的溫度相同"微量稀釋盤疊層不應(yīng)超過8層 8:用設(shè)備! 圖 終 微量肉湯稀釋法!應(yīng)用推薦的強(qiáng)化培養(yǎng)基的微量肉湯稀釋法終點(diǎn)判讀舉例!"'&'"8:&).\'&在**'8未生長8&! $#$&H"*'生88&'Y"$8L2KK:&'<').\8&8未生長:&%L&!"了干燥劑"可以把稀釋盤置于自封塑料袋中"袋口輕微開啟以便氣體流通!$ 使用觀測工具如鏡臺&"從微量肉湯稀釋盤底部進(jìn)行觀察"以確定每種抗菌藥物的1.值 如果對照孔生長不良或者未生長"則該試驗(yàn)結(jié)果無效以!L!"訓(xùn)過程當(dāng)中應(yīng)用圖片并展示可能存在的多種狀況"有助于提高結(jié)果的一致性!%質(zhì)控指%!有效的質(zhì)控方案可用來監(jiān)測藥敏試驗(yàn)過程的精確性*試劑和設(shè)備的性能以及實(shí)驗(yàn)人員的能力!要最大限度地達(dá)成這些目標(biāo)"應(yīng)該根據(jù)基因穩(wěn)定性和某種特定檢測方法的有效性需求選擇標(biāo)準(zhǔn)參考菌株!必須進(jìn)行質(zhì)控以達(dá)到以下目的表明實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基能夠充分支持各種受試菌株的生長證實(shí)抗生素沒有在儲存過程中降解確認(rèn)實(shí)驗(yàn)人員有足夠能力正確進(jìn)行實(shí)驗(yàn)K*J范圍!""!用添"!%"8控值的質(zhì)控菌株中的兩種"以監(jiān)測藥敏試驗(yàn)過程當(dāng)檢測革蘭陽性厭氧菌時(shí)"難辨梭菌$(222K($8L2KK&湯稀釋法和臨床分離株常規(guī)測試""以對實(shí)驗(yàn)盤質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)控!整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程可用表K*J中列出的范圍值加以監(jiān)測!'K'K脆弱類桿菌$$8L2KK遲緩真桿 $(222K(艱難梭 $!% 校正措"""者不&"!"進(jìn)一步校正!如果上述失控抗菌藥物微生物的后續(xù)試驗(yàn)仍然超出允許的范圍"則有必要使用一個(gè)新的質(zhì)量控制菌處或者其他可靠來源獲得&和新批次的試驗(yàn)材料包括新的濁度標(biāo)準(zhǔn)&"有時(shí)可能需要更換實(shí)驗(yàn)材料制造商與其他使用相同方法的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行質(zhì)控菌株和材料交換也是有幫助的!到"!若是質(zhì)控菌株僅對一個(gè)藥物超出范圍"可以考慮不報(bào)告這個(gè)藥物的結(jié)果!!$ 終點(diǎn)解釋質(zhì)!實(shí)驗(yàn)!行比c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添加?!!2%''"*'*W高壓"*K%L&89W保存"避光"不超過*個(gè)月?!#8*溶解82氫氧化鈉于*蒸餾%'室溫"密閉容器"儲存J個(gè)月?!$維生素D?!$!貯存液2IK'?!$#工作液'89W""*?!% 碳酸氫鈉貯存液##8@A%*'L試劑級&于*22蒸餾水&&%L&使用當(dāng)天配?!)*'2W下冰凍去纖維蛋白羊&血液!允許方法有在LK9LW水浴箱快速融化或9W過夜慢慢融化%L&顛倒容器若干次"徹底混勻"備%8&血液放在:K2W水浴箱中快速升溫后"加到溶化布氏瓊脂培養(yǎng)?!* ')%*無菌混合同等容量的去纖維蛋白馬血和滅菌蒸餾水&'%'2&2K9%L&'2220"離心2%8&上清液并檢查澄清度減少影響1.值讀取的沉淀物&在微量肉湯稀釋法中@_和肉湯必須澄清必要時(shí)再次離心!注釋%用于微量肉湯稀釋法的溶解馬血已商品化 培養(yǎng)#!%*每升含布氏瓊脂干粉和其他成酪蛋白胰酶消化*2易消化的動物組*2葡萄糖*酵母浸出物'氯化鈉K亞硫酸氫鈉2*瓊脂*K%'蒸餾水*222布氏瓊脂 8L氯化血紅素貯存 *維生素X*工作溶 *%L&溶解瓊脂*'*W"*K>高壓滅菌K注釋%未加血的培養(yǎng)基可冷藏在試管*瓶或燒瓶中!在試驗(yàn)前"立即將其融解"并冷卻到8K92!每*22K%#%'2*%&## 強(qiáng)化布氏肉%*每升含布氏肉湯和其他成酪蛋白胰酶消化*2易消化的動物組*2葡萄*酵母浸出'氯化K亞硫酸氫2*&蒸餾水I22布氏瓊脂':氯化血紅素貯存*素X*工作溶*%L&溶解瓊脂*'*W"*K>高壓滅菌%8&冷卻肉湯到8:K2W并加入*22無菌的溶解馬血2&%K&89W#$ 濃縮的硫膠質(zhì)肉%*蒸餾水*222不含指示劑的巰基乙酸培養(yǎng) L2氯化血紅素貯存 *維生素X*工作溶 *%'煮沸"溶解瓊脂硫膠質(zhì)肉湯含少量瓊脂&!K定量分裝試管%L&*'*W"*K>高壓滅菌%8&室溫存儲"避光"不超過J個(gè)月>"2'K%J&作為碳酸氫鈉的替代品"在高壓蒸汽滅菌法之前每管可加入云母片#% 麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)#8)''''&2'08& !版權(quán)歸臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會所有%'把硫酸鋇混懸液89J等分加入相同型號的螺旋帽管"用于細(xì)菌接種物生長或稀釋%L&密封"室溫"避光儲存%8&每次使用前用攪拌器混勻"檢查濁度!如果出現(xiàn)大的顆粒"應(yīng)該重新定標(biāo)%K&用前確認(rèn)濁度"每月再次確認(rèn)或更換用*D光程的分光光度計(jì)和比色杯的吸光度來驗(yàn)證濁度2K麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)的吸光度在K處為22:2L注釋%乳狀顆粒制作的麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)管已商品化!在使用前"應(yīng)立即輕輕顛倒混勻不要在攪拌器上混勻&!培養(yǎng)基和試劑要強(qiáng)化布氏血瓊脂用于細(xì)菌培養(yǎng)強(qiáng)化布氏瓊脂用于瓊脂稀釋試驗(yàn)無菌脫纖維化羊富硫膠質(zhì)"他"如強(qiáng)0E布氏肉維生素X*"儲備液和工作血紅素儲備試驗(yàn)用抗菌藥物儲備餾無菌氏濁度標(biāo)準(zhǔn)2K耗材和設(shè)備要用于稀釋抗菌藥物的無菌螺旋帽小血清吸移液器裝無菌平皿方形或圓形水浴箱"溫度范圍:K2多點(diǎn)接種設(shè)備如0多點(diǎn)接種器振蕩厭氧罐和厭氧實(shí)驗(yàn)前$%仔細(xì)閱讀操作步驟檢查耗材"為以下物品做訂購或準(zhǔn)備(3抗菌藥物3準(zhǔn)備瓊脂和肉湯培養(yǎng)基的必要成實(shí)驗(yàn)前訂購或準(zhǔn)備瓊脂和肉湯培養(yǎng)基訂購羊血訂購并凍存抗菌藥物貯存高壓蒸汽復(fù)制器實(shí)驗(yàn)+對貯存于3J2W的試驗(yàn)用細(xì)菌和指控細(xì)菌在強(qiáng)化布氏血瓊脂平板上進(jìn)行次代培養(yǎng)檢查菌落純度!對試驗(yàn)細(xì)菌和指控細(xì)菌抽樣在試驗(yàn)瓊脂上次代培養(yǎng)檢查生長是否合適!實(shí)驗(yàn)$再次在強(qiáng)化布氏血瓊脂平板上對實(shí)驗(yàn)和質(zhì)控菌株進(jìn)行次代培養(yǎng)列出實(shí)驗(yàn)菌株"逐一對其相對應(yīng)的復(fù)制器套管進(jìn)行編碼準(zhǔn)備布氏瓊脂基礎(chǔ)管 !版權(quán)歸臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會所有試驗(yàn)前一標(biāo)記稀釋管"添加適量水參見表8&扣緊管帽標(biāo)記培養(yǎng)皿"正面朝上將已溶血液轉(zhuǎn)移到冰箱過夜緩慢解凍&為第二天的試驗(yàn)"確保水浴箱達(dá)到所需溫度"可正常使用如果使用增菌方法來準(zhǔn)備接種物"接種試驗(yàn)和質(zhì)控菌至硫基乙酸肉湯中"LK9L(W孵育J'8;!試驗(yàn)當(dāng)將抗生素儲備液從冰箱移出"室溫解凍將已溶血液從冰箱移出室溫解凍8:K23如果是制備新鮮培養(yǎng)基"準(zhǔn)備布氏瓊脂培養(yǎng)基所需試管3如果使用預(yù)先制備的"直接熔化瓊脂用抗菌藥物儲備液制備中間液%&參見表&對傾倒培養(yǎng)基的操作區(qū)進(jìn)行消毒將血和藥物溶液加入瓊脂!混勻后傾倒等待瓊脂凝固保持培養(yǎng)及表面干燥!將培養(yǎng)皿在層流罩或生物安全柜中半開蓋干%K9L2>&反之"過干燥的培養(yǎng)皿應(yīng)放入低濕度的恒溫箱中化硫基乙酸肉湯中調(diào)整菌液至2K麥?zhǔn)蠞岫?或直接挑取菌落在布氏肉湯中制成菌懸液!用移液器將菌懸液加入到接種器中按下列步驟接種平板%*接種兩個(gè)生長質(zhì)控平板標(biāo)記需氧前*厭氧前&'含藥平板從最低濃度到最高濃度逐一接種%L&每種抗菌藥物平板均應(yīng)接種一個(gè)生長控制平板"并進(jìn)行適當(dāng)標(biāo)記%8&接種完畢后再接種兩個(gè)生長控制平板分別標(biāo)記需氧后*厭氧后&!如果菌落干燥"將平板倒置按抗菌藥物排列平板(['將所有含藥平板和厭氧質(zhì)控平板放入?yún)捬豕藁騾捬跸?LK9L(W下孵育8;!'將所有厭氧平板從厭氧環(huán)境取出"將需氧質(zhì)控平板從d'環(huán)境中取出讀取和記錄結(jié)果****(!版贈權(quán)歸臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會所有表 厭氧菌藥敏試驗(yàn)抗菌藥物分組建##$!!&厭氧內(nèi)酰胺酶陰性的革蘭陰'厭氧除外產(chǎn)氣莢膜梭菌的梭菌產(chǎn)氣莢膜梭菌"革蘭陽性球菌和無芽孢形成的!蘭陽性桿酸氨芐西林舒巴坦哌坦替卡西林克拉維青霉素青霉素青霉素氨芐西林舒巴坦替卡西林克拉維克林霉克林霉克林霉甲硝"甲硝頭孢替坦頭孢西厄他培南亞胺培南美羅培克林霉厄他培南亞胺培南美羅培甲硝甲硝頭孢唑肟頭孢曲頭孢替坦頭孢西丁頭孢唑肟頭孢曲頭孢唑肟頭孢曲頭孢替坦頭孢西丁頭孢唑肟頭孢曲氯霉哌拉西林替卡西哌拉西林替卡西頭孢替坦頭孢西哌拉西林替卡西#四環(huán)氨芐西林舒巴坦替卡西林克拉維氨芐西林舒巴替卡西林克拉維莫西沙#四環(huán)莫西沙哌拉西莫西沙莫莫西沙****(!版贈權(quán)歸臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會所有注釋!!黑體字內(nèi)容表示試用年注釋"!大多數(shù)厭氧菌感染是由于多種細(xì)菌感染引起的"包括"!內(nèi)酰胺酶陽性和!"內(nèi)酰胺酶陰性的菌株!大多數(shù)耐藥菌株的敏感性必須首先考慮并且報(bào)告!在單純內(nèi)酰胺酶陰性的菌株引起的感染情況下"窄譜的抗菌素可能適合于藥敏試驗(yàn)和報(bào)告注釋#!在每個(gè)方格中藥物列表是指明一類藥物"他們的解釋結(jié)果敏感"中介"或者耐藥$和臨床療效是相似的%因此"每個(gè)方格中通常只需要選擇一種藥物進(jìn)行藥敏試驗(yàn)%#$包括擬桿菌屬#普雷沃菌屬#卟啉單胞菌屬#梭桿菌屬#韋榮球菌屬#薩頓菌屬和嗜膽菌屬的其他種!&$+$如果!"內(nèi)酰胺酶陽性"應(yīng)該報(bào)告對青霉素和氨芐西林耐藥!要注意!"內(nèi)酰胺酶陰性的分離株由于其他耐藥機(jī)理可能會對!"內(nèi)酰胺類藥物耐藥$%處理艱難梭菌相關(guān)性腹瀉中對甲硝唑的常規(guī)試驗(yàn)這次并不推薦"因?yàn)榕c臨床治療失敗的相關(guān)性還未確定$大多數(shù)厭氧菌感染是由于多種細(xì)菌引起的"包括內(nèi)酰胺酶陽性和內(nèi)酰胺酶陰性的菌株在由單純內(nèi)酰胺酶陰性的菌株引起的感染情況下"不加內(nèi)酰胺酶抑制劑的內(nèi)酰胺類藥物"應(yīng)該進(jìn)行藥敏試驗(yàn)!-$不是所有的相關(guān)信息$亦即折點(diǎn)值&表.'和質(zhì)量控制值&表和'對這里指出的抗菌素都可用(一旦信息確立"就應(yīng)該加入表格中!藥敏試驗(yàn)可適用于監(jiān)測數(shù)據(jù)的積累或者科研目的!&%許多無芽孢的革蘭陽性厭氧桿菌對甲硝唑耐藥抗菌藥阿莫西林克拉維酸敏8最小抑中:濃度#$#耐#*JD氨芐西氨芐西林舒巴坦"":**J頭孢美J頭孢哌J頭孢噻JN頭孢替頭孢西JJN頭孢唑頭孢曲J氯霉克林霉%E厄他培:N亞胺培:N美羅培甲硝

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!%8%)H烷基磺酸硝唑尼特#硝噻醋柳胺$'替唑尼 二甲基亞砜' 二甲基亞砜'甲硝唑"替硝唑'頭孢替 二甲基亞砜 厄他培南和亞胺培 磷酸鹽緩沖液B@('"2* 磷酸鹽緩沖液B@('"2*注釋%所有儲備液應(yīng)該保存 J2W或者更低溫度下!融解后"儲備液不應(yīng)該再次冷凍!儲存在無霜冰箱里不合適""*N$"(**孢噻***********青霉******"備液""*菌"它"因不"通吸附作用的缺失是重要的!N類除非廠商表明其他方式&應(yīng)該用B@J2*2*磷酸鹽緩沖液溶解"進(jìn)一步用無菌蒸餾水稀釋!00)AA$!#$6#入到每個(gè)瓊脂深層&體稀釋中間濃體稀釋中間濃*2步濃來%或者肉湯中的終濃度Q&K*2%儲存KI K儲存 ''': K儲存 L*( K儲存 (J8步驟''KK步驟*L8J步驟*(:L(步驟''8':步驟*L'*I步驟*(*2步驟''K2*步驟*L'2'步驟*(*K2L抗菌藥脆弱擬桿$多形擬桿S$艱難梭遲緩真桿S$*2K2K9*2K2'*8)8!#)!8*氨芐西*J*J!%D氨芐西林舒巴坦%*K2'*K2'*8)8#%K2K頭孢美:L''*':8頭孢哌'*':'*':'*':頭孢噻:L'*JJ8'KJ頭孢替8'*':'*':頭孢西8:L'8頭孢唑N8*J頭孢曲'*':J8'KJN氯霉'8D克林沙2K22K克林霉2K'#62K多利培DD8)%D厄他培2KK2K法羅培2K'!%加雷沙2K8)#*亞胺培88$!K2K2利奈唑''!%2K美羅培2KK28)%K甲硝K2K8!#))D美羅西*J:L':L'莫西沙K2*!%K2硝唑尼DD88*)D青霉L'J8&L'J8&!%D哌拉西':L'%!*:L'哌拉西林他唑巴K82889*J%!*889*J雷冒拉DD8!#))D利福昔DD88D四環(huán)K2:L'D替卡西*J*J!**%*J替卡西林克拉維NK'''#*%QQ替加環(huán)8!#!8)#8#)!88*)替硝DD8!#))D替唑尼DD88*)D萬古霉DD8)%D注釋!黑體字內(nèi)容表示試用年注釋#%除青霉素外"數(shù)值是以微克每毫升為單位=-$-MU"寬的范圍阿莫西林克拉維酸與遲緩真桿菌"頭孢曲松與遲緩真桿菌"頭孢唑肟與脆弱擬桿菌"以及替卡西林克拉維酸與脆弱擬桿菌&相應(yīng)地"對于質(zhì)量控制沒有合適數(shù)據(jù)!-$"'!E括號內(nèi)青霉素?cái)?shù)值是以$>為單位!表格 質(zhì)控菌株應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)微量肉湯稀釋法測定1.的允許范圍%抗菌藥脆弱擬桿$多形擬桿S$遲緩真桿S$*2K2K9*22K2K9*2N氨芐西林舒巴坦'*K2'*K2'*K2'*頭孢替**J*':*J頭孢西':'頭孢唑:L'氯霉8:L'8克林霉2K'2K多利培8!#)8!#!多西環(huán)N''厄他培22K2K法羅培8!)88!#!8)#加雷沙2KK2K亞胺培2KKK利奈唑''2K美羅培2K2K甲硝K2KK2莫西沙'2*2'2青霉:L':L'N哌拉西8::L'哌拉西林他唑巴L8K888L'替卡西林克拉維J'K'K''''L'注釋!黑體字內(nèi)容表示試用注釋#%對于有8個(gè)稀釋度范圍的"結(jié)果正好處于可接受范圍的臨界值"應(yīng)表示懷疑!需要用其他質(zhì)控菌株來檢驗(yàn)數(shù)據(jù)有效性$NMU量"質(zhì)控范未功確抗菌藥物種抗菌藥物亞包括藥物%通名稱青霉素類青霉素青霉素氨基青霉素西西脲基青霉西西西羧基青霉素西西耐青霉素酶青霉西西西西西脒基青霉美西林抑制劑復(fù)合