水中總大腸菌群計(jì)數(shù)

水中總大腸菌群的測(cè)定主講人：王福紅動(dòng)物性食品微生物檢驗(yàn)

能力目標(biāo)：

掌握生活飲用水總大腸菌群的測(cè)定方法掌握水源水總大腸菌群的測(cè)定方法判定水被大腸菌群污染的程度和水的衛(wèi)生質(zhì)量水中總大腸菌群的測(cè)定檢驗(yàn)依據(jù)：GB/T5750.12-2006方法：多管發(fā)酵法實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1乳糖發(fā)酵試驗(yàn)4證實(shí)試驗(yàn)5結(jié)果分析與報(bào)告1培養(yǎng)基制備2乳糖發(fā)酵試驗(yàn)3分離培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)器材水樣生活飲用水、水源水培養(yǎng)基乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、伊紅美蘭培養(yǎng)基試劑革蘭氏染色液、稀釋劑等實(shí)驗(yàn)器材其他無菌工作臺(tái)、酒精燈、稀釋液、滅菌吸管、滅菌試管、小倒管、試管架、接種環(huán)、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌器、載玻片、香柏油、平皿、天平、電爐等培養(yǎng)基制備乳糖發(fā)酵管雙料管單料管伊紅美蘭平板放置小倒管并排氣一、乳糖發(fā)酵（初發(fā)酵）試驗(yàn)自來水直接接種10mL水樣于雙料培養(yǎng)基，每個(gè)水樣共接種5管水源水加大稀釋度，每個(gè)稀釋度接種5管，每個(gè)水樣共接種15管

各10ml1ml各1ml水樣1:10稀釋水各1ml乳糖發(fā)酵試驗(yàn)一、乳糖發(fā)酵（初發(fā)酵）試驗(yàn)培養(yǎng)36℃士l℃24h士2h觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況不產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)酸產(chǎn)氣第二天二、分離培養(yǎng)產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種EMB平板（分區(qū)劃線）36℃士l℃24h士2h第三天三、證實(shí)試驗(yàn)（復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)）觀察EMB平板菌落形態(tài)深紫黑色、具有金屬光澤的菌落紫黑色、不帶或略帶金屬光澤的菌落淡紫紅色、中心較深的菌落一半進(jìn)行涂片、染色、鏡檢另一半進(jìn)行接種（證實(shí)試驗(yàn)用）三、證實(shí)試驗(yàn)（復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)）只有染色鏡檢為革蘭氏陰性無芽孢桿菌才接種乳糖蛋白胨管36℃士l℃24h士2h第四天四、結(jié)果報(bào)告觀察乳糖發(fā)酵管產(chǎn)氣情況產(chǎn)酸產(chǎn)氣者，即證實(shí)有總大腸菌群存在查MPN檢索表根據(jù)證實(shí)為總大腸菌群陽性的管數(shù)報(bào)告每100ml水樣中的總大腸菌群最可能數(shù)（MPN）四、結(jié)果報(bào)告5管法結(jié)果見表1，15管法結(jié)果見表2表1用5份10mL水樣時(shí)各種陽性和陰性結(jié)果組合時(shí)的最可能數(shù)（MPN)5個(gè)10mL管中陽性管數(shù)最可能數(shù)（MPN）

0<2.212.225.139.2416.05>16.0表2總大腸菌群MPN檢索表(部分）（總接種量55.5mL，其中5份10mL水樣，5份1mL水樣，5份0.1mL水樣）接種量/mL總大腸菌群/(MPN/100mL)接種量/mL總大腸菌群/(MPN/100mL)10ml管1ml管0.1ml管10ml管1ml管0.1ml管000<21002001210140024102600351038四、結(jié)果報(bào)告稀釋樣品查表后所得結(jié)果應(yīng)乘稀釋倍數(shù)表2采用3個(gè)稀釋度（10mL、1mL和0.1mL),每個(gè)稀釋度5管表2內(nèi)所列接種量如改用100mL、10mL和1mL時(shí)，表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)降低10倍；如改為1mL、0.1mL和0.0