不同濃度的去污劑對青蛙的病理影響研究

不同濃度的去污劑對青蛙的病理性影響研究

化學與生命科學學院生物科學

0702班侯靜1論文題目2論文選題依據3研究目的與意義4試驗主要原理5試驗過程6實驗結果與分析1論文題目不同濃度的去污劑對青蛙的病理性研究2論文選題依據2.1兩棲動物的形態(tài)學發(fā)育與機理研究青蛙屬于動物界、脊索動物們、兩棲綱、無尾目、始蛙亞目、中蛙亞目、新蛙亞目，卵一般產于水中，孵化成蝌蚪，用腮呼吸，經過變態(tài)發(fā)育為成體。成體基本無尾，主要用肺呼吸，但多數皮膚也有部分呼吸功能。

因為青蛙是以昆蟲和其他無脊椎動物為主食，因此必須棲息於水邊，作為生活在水體中的代表類群，由于其皮膚的高滲透性，必然會受到水體污染物的不利影響，產生各種不良的生態(tài)效應。

喬志剛，李學軍曾做過青蛙的個體發(fā)育及食性觀察的研究，并在解剖鏡下和顯微鏡下觀察了青蛙從孵出至變成幼蛙期間的個體發(fā)育過程

青蛙由卵孵出成蝌蚪至發(fā)育變態(tài)為幼蛙大約需要70-90天，這期間是青蛙個體發(fā)育過程中各器官系統變化最激烈的時期。剛孵化出來的蝌蚪，身體呈紡錘形，無四肢、口和內鰓，生有側扁的長尾，頭部兩側生有分枝的外鰓，吸附在水草上，靠體內殘存的卵黃供給營養(yǎng)。經過幾天以后，長出了口，能夠攝食水中的微生物。再過些時候，外鰓消失，長出內鰓，身體外面逐漸出現側線，心臟發(fā)育成一心房一心室，從外部形態(tài)到內部構造都很像魚。大約再過40天，蝌蚪又發(fā)生了進一步變化，先開始長出后肢，然后又長出前肢；尾部逐漸縮短；內鰓消失，肺形成；心臟由一心房一心室變?yōu)槎姆慷氖?；外部形態(tài)和內部構造不再像魚，蝌蚪已變成了幼小的青蛙，幼蛙離水登陸，逐漸發(fā)育為成蛙

2.2動物早期的組織病理影響研

從最古老的脊椎動物魚到高等的哺乳類動物大鼠，仔豬，國內外做過很多有關肝臟，腎臟的組織病理學研究。Kumar和Pant通過實驗觀察比較了過量銅對文昌魚及脊椎動物玫瑰無須鈀急性毒性及組織病理學影響，結果表明用不同亞致死劑量處理魚的肝臟出現典型的包括肝細胞壞死、解體等組織學損傷，且損傷程度呈現劑量依賴性。

劉俊偉，張海棠，司紅英等進行過仔豬鐵中毒的組織病理學變化方面的研究。試驗采用冰凍切片、組織學和組織化學染色技術．對臨床送診病仔豬的淋巴結、脾臟、肝臟、肺臟和腎臟等器官進行了解剖病理學和組織病理學的觀察與研究。結果表明，肝臟器官的損傷有肝細胞個體變?。窝]變寬．但肝細胞并無變性和壞死。

肝小葉周圍結締組織內的巨噬細胞和肝血竇內的枯否氏細胞(Kupffercells)均含有藍色的含鐵血黃素顆粒。在肝血竇、中央靜脈的內皮細胞內亦含有不同數量的含鐵血黃素顆粒．但在肝細胞內卻看不到含鐵血黃素顆粒。腎臟損傷有腎小體血管球(Glomerulus)萎縮變小，腎小囊(Renalvesicle)變得寬大。3研究目的與意義

肝臟是動物消化系統中最大的消化腺，同時又是重要的解毒器官。腎臟是生成尿液清除體內代謝產物及某些廢物、毒物的重要器官，同時又具有重吸收功能。肝臟、腎臟發(fā)生病變將嚴重影響動物的新陳代謝。3研究目的與意義本研究以黑斑蛙為試驗對象，在單一急性毒性試驗的基礎上，研究洗衣粉（主要成分SDS）對青蛙生活狀況、肝臟及其腎臟器官的影響，探討SDS對青蛙的毒性效應和致毒機理，為洗滌劑對青蛙的影響評價提供毒理學依據，為人類保護青蛙提供參考價值。4試驗主要原理

石蠟切片是組織學常規(guī)制片技術中最為廣泛應用的方法，不僅用于觀察正常細胞組織的形態(tài)結構，也是病理學和法醫(yī)學等學科用以研究、觀察及判斷細胞組織的形態(tài)變化的主要方法?；畹募毎蚪M織多為無色透明，各種組織間和細胞內各種結構之間均缺乏反差，在一般光鏡下不易清楚區(qū)別出，組織離開機體后很快就會死亡和產生組織腐敗，失去原有正常結構，因此，組織要經固定、石蠟包埋、切片及染色等步驟以免細胞組織死亡，而能清晰辨認其形態(tài)結構。

石蠟切片法包括取材、固定、洗滌和脫水、透明、浸蠟、包埋、切片與粘片、脫蠟、染色、脫水、透明、封片等步驟。一般的組織從取材固定到封片制成玻片標本需要數日，但標本可以長期保存使用，為永久性顯微玻片標本。本試驗在對青蛙處理的基礎上，取其腎臟、肝臟并制作成石蠟切片后在光學顯微鏡下觀察組織細胞的形態(tài)變化。

5試驗過程青蛙的喂養(yǎng)肝臟、腎臟取材甲醛固定石蠟切片的制作石蠟塊的制作石蠟塊的整修石蠟裝片的制作沖洗脫水透明浸蠟包埋切片與展片貼片與拷片染色6試驗結果與分析6.1青蛙的臨床表現

青蛙經洗衣粉處理后48h后2,3、4、5號組其運動遲緩，平衡能力變差，72h后，2、3、4、5組幾乎不全浸在溶液中，活動能力顯著下降，1號組運動能力變差，其它各組較前運動也遲緩，平衡能力也變差。96h后除對照組及1號有一個青蛙活動較正常外，其余各青蛙均浸在溶液中活動能力嚴重變小。

，6.2青蛙的組織病理學檢查

正常6號對照組：青蛙肝臟肝細胞形態(tài)規(guī)則，細胞索排列整齊，肝細胞與肝血竇以中央靜脈為中心向周圍呈放射狀排列（見下圖）5號高劑量處理組青蛙肝細胞線粒體破裂，胞漿疏松、淡染，呈彌漫性（