技能訓練一單胞藻的形態(tài)觀察及濃度的測定

技能訓練一單胞藻的密度的測定微藻培養(yǎng)——微藻的計數(shù)及培養(yǎng)結果評價任務

教學目標：（一）能力目標1.掌握血球計數(shù)板的使用方法2.掌握小球藻、扁藻、硅藻的計數(shù)3.通過計數(shù)學會評價微藻培養(yǎng)的效果（二）知識目標1.掌握微藻的計數(shù)原理2.微藻生長特點一、計數(shù)方法選擇1.血球計數(shù)板2.分光光度計的使用1.1血球計數(shù)方法此法是利用血球計數(shù)板在顯微鏡下直接進行測定。它觀察在一定的容積中的微生物的個體數(shù)目，然后推算出含藻細胞數(shù)，包括死活細胞均被計算在內，這樣得出結果往往偏高。這種方法常用于形態(tài)個體較大的菌體、微藻、孢子。1.2血球計數(shù)構造顯微鏡下計數(shù)框1mm模式圖計數(shù)板是一塊特制的厚玻璃片，玻片上有四個槽構成三個平臺，中央平臺又由一短槽隔成兩半，其上各刻有一小方格網，每個方格網共分九個大格，中央的一大格作為計數(shù)用，稱為計數(shù)室。計數(shù)室刻度有2種：一種是25中格X16小格，而另一種為16中格X25小格，它們都是由400個小格組成。每個大方格邊長為1mm，則每個大方格面積為1X1=1mm2。蓋上蓋玻片后，載玻片與蓋玻片之間高度為0.1mm,所以每個計數(shù)室的體積為0.1X1X1=0.1mm3,每個大格有400個小格，所以每個小方格體積為0.1/400=1/4000mm3=1/4000,000ml。計數(shù)原則1.取出藻液的原液時一定要混勻!!2.不同的移液管吸取不同濃度的、不同品種的藻液,不要混用!!!!注意細節(jié)操作!!3.計數(shù)小格采取計上不計下，計左不計右的方式血球計數(shù)板的分區(qū)與分格例一例二1大格=16中格1大格=25中格

=16X25小格=25X16小格

=400小格=400小格****#####三、材料與儀器1、待測樣品：微藻懸液2、顯微鏡，血球計數(shù)板，蓋玻片等。四、方法與步驟:1、取潔凈的血球計數(shù)板，在計數(shù)室上面蓋上蓋玻片。2、取稀釋到一定程度（5~10個細胞/小格）藻液，從蓋片邊緣滴一小滴，使藻液自行滲入，計數(shù)室內不能有氣泡。先在低倍鏡下找到小方格網后，再轉換高倍鏡觀察并計數(shù)。3、如用16X25計數(shù)板，只計四個角上中方格的藻細胞數(shù)。若是25X16的計數(shù)板，除計數(shù)四個角上的中格藻細胞數(shù)外，還要計算中央中格的菌數(shù)。每個樣品重復計數(shù)2~3次。計數(shù)時應不時調節(jié)焦距，才能觀察到不同深度的細胞。4、位于格線上的細胞一般只計此格的上方線及左方線上的菌體。5、計數(shù)方法：樣品中細胞數(shù)/ml=每小格平均細胞數(shù)x4000,000x稀釋倍數(shù)，本實驗采用25x16規(guī)格，要求數(shù)這些方格中的全部小格即80個小格。設：每個中方格的細胞數(shù)為A，則每小格平均細胞數(shù)=（A1+A2+A3+A4+A5)/80

A1+A2+A3+A4+A5樣品中的細胞數(shù)/ml=X4000,000X稀釋倍數(shù)

80

結果記錄：微藻名稱總細胞數(shù)個/ml第一個中格第二個中格第三個中格第四個中格第五個中格第一次測定第二次測定平均六、測定注意事項:1、測定時，藻液要搖勻，防止藻細胞凝聚沉淀。2、位于格線上的藻細胞一般只計此格的上方線及左方線上的菌體。血球計數(shù)板的清潔血球汁數(shù)板使用后,用自來水沖洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹風機吹干,或用95%的乙醇,無水乙醇,丙酮等有機溶劑脫水使其干燥.通過鏡檢觀察每小格內是否殘留菌體或其他沉淀物.若不干凈,則必須重復清洗直到干凈