干細(xì)胞微生物學(xué)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

干細(xì)胞微生物學(xué)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP）北京賽托森生物科技發(fā)展有限公司質(zhì)量管理干細(xì)胞微生物學(xué)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件名：干細(xì)胞微生物學(xué)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號(hào)：制定人：日期：年月日文件類型：工作標(biāo)準(zhǔn)審核人：日期：年月日版次：第一版批準(zhǔn)人：日期：年月日印數(shù)：共5份生效日期：年月日頒發(fā)部門：質(zhì)量管理分發(fā)至：質(zhì)量副總經(jīng)理、質(zhì)量管理部、QC檢驗(yàn)室、綜合辦公室變更記載修訂號(hào)修訂人批準(zhǔn)日期生效日期原因及目的一、總則目的：建立針對(duì)實(shí)驗(yàn)室干細(xì)胞微生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)操作程序，用以規(guī)范員工的檢測(cè)操作范圍：適用于公司內(nèi)部生產(chǎn)干細(xì)胞的微生物學(xué)檢測(cè)工作3?責(zé)任：生產(chǎn)部、生產(chǎn)車間、質(zhì)量管理部、QC檢驗(yàn)室主任、檢驗(yàn)員對(duì)本規(guī)程的執(zhí)行負(fù)責(zé)。4?檢測(cè)依據(jù)：YY/—1995藥品檢驗(yàn)操作規(guī)程，第6部分，微生物測(cè)定法。二、細(xì)菌檢測(cè)所用檢測(cè)試劑耗材及儀器液體培養(yǎng)基：硫乙醇培養(yǎng)基、離心管、一次性巴斯德管瓊脂培養(yǎng)基：胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)電熱恒溫恒濕培養(yǎng)箱（溫度可25C-37°C）、超凈工作臺(tái)操作方法檢測(cè)過程全程需在超凈工作臺(tái)內(nèi)完成，注意無菌操作。培養(yǎng)基具體配制方法詳見OP/ZK/006液體培養(yǎng)基：取培養(yǎng)液待恢復(fù)室溫將待檢樣本及培養(yǎng)基過火后擰開蓋子利用一次性巴斯德管將樣本滴入培養(yǎng)液1中2ml將加入待檢樣本的培養(yǎng)液過火后擰緊蓋子坐上標(biāo)記方便記錄與查看結(jié)果37°C培養(yǎng)5-7天查看結(jié)果結(jié)果鑒定：培養(yǎng)液渾濁為細(xì)菌污染，清澈則為未污染。做好結(jié)果記錄并填寫質(zhì)量報(bào)告瓊脂培養(yǎng)基：取培養(yǎng)皿待恢復(fù)室溫將待檢樣本過火后擰開蓋子利用一次接種環(huán)將樣本接種于培養(yǎng)液皿中坐上標(biāo)記方便記錄與查看結(jié)果將培養(yǎng)皿倒扣置培養(yǎng)箱中37C培養(yǎng)3-5天查看結(jié)果結(jié)果鑒定:培養(yǎng)皿上有否出現(xiàn)可疑菌落如有則為細(xì)菌污染若培養(yǎng)至第5天未見可疑菌落，則未污染做好結(jié)果記錄并填寫質(zhì)量報(bào)告三、真菌檢測(cè)所用檢測(cè)試劑耗材及儀器液體培養(yǎng)基:改良馬丁培養(yǎng)基、離心管、一次性巴斯德管瓊脂培養(yǎng)基:馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)電熱恒溫恒濕培養(yǎng)箱（溫度可調(diào)C-37C）、超凈工作臺(tái)操作方法檢測(cè)過程全程需在超凈工作臺(tái)內(nèi)完成，注意無菌操作。培養(yǎng)基具體配制方法詳見OP/ZK/006液體培養(yǎng)基:取培養(yǎng)液待恢復(fù)室溫將待檢樣本及培養(yǎng)基過火后擰開蓋子利用一次性巴斯德管將樣本滴入培養(yǎng)液1中2ml將加入待檢樣本的培養(yǎng)液過火后擰緊蓋子坐上標(biāo)記方便記錄與查看結(jié)果26°C培養(yǎng)5-7天查看結(jié)果結(jié)果鑒定：培養(yǎng)液渾濁為真菌菌污染，清澈則為未污染。做好結(jié)果記錄并填寫質(zhì)量報(bào)告瓊脂培養(yǎng)基：取培養(yǎng)皿待恢復(fù)室溫將待檢樣本過火后擰開蓋子利用一次接種環(huán)將樣本接種于培養(yǎng)液皿中坐上標(biāo)記方便記錄與查看結(jié)果將培養(yǎng)皿倒扣置培養(yǎng)箱中26C培養(yǎng)3-5天查看結(jié)果結(jié)果鑒定:培養(yǎng)皿上有否出現(xiàn)可疑菌落如有則為細(xì)菌污染若培養(yǎng)至第5天未見可疑菌落，則未污染做好結(jié)果記錄并填寫質(zhì)量報(bào)告四、支原體檢測(cè)支原體快速法:所有操作均在室溫22-28C）下進(jìn)行打開檢測(cè)板，在孔中加入0口LReactionBuffeA第一個(gè)孔加入10?L陰性對(duì)照，其他孔加入0"L待測(cè)樣品或陽性對(duì)照輕輕混勻，室溫孵育分鐘所有孔中均加入0口LReactionBuffeB輕輕混勻，室溫孵育分鐘每孔加入5口LStopSolution輕輕混勻可在30分鐘內(nèi)觀察樣品顏色的變化或進(jìn)行拍照保存：結(jié)果分析如果待測(cè)樣品的顏色深于陰性對(duì)照，表明樣品被支原體污染如果待測(cè)樣品的顏色與陰性對(duì)照相同，表明樣品沒有支原體污染做好結(jié)果記錄并填寫質(zhì)量報(bào)告支原體ELISA法：編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照孔、陽性對(duì)照2孑L、空白對(duì)照1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）加樣：分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照1。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40U1,然后再加待測(cè)樣品10口。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底咅盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻溫育：用封板膜封板后置7°C溫育30分鐘配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜秒后棄去,如此重復(fù)5次，拍干加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑0口1，空白孔除外溫育：操作同3洗滌：操作同5顯色：每孔先加入顯色劑50口1，再加入顯色劑B50口1，輕輕