抗酸染色法實(shí)驗(yàn)報(bào)告

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篇一：抗酸染色法

抗酸染色法

目錄1簡(jiǎn)介2

抗酸染色的原理

3抗酸染色一般步驟

?1）初染

?2）脫色

?3）復(fù)染

4抗酸染色的染液配制簡(jiǎn)介編輯

抗酸染色法acid－faststainingmethod1882年由埃利希（F．ehrlich）首創(chuàng)并經(jīng)F．齊爾（Ziehl）改進(jìn)而創(chuàng)造出的細(xì)菌染色法。其中最具代表性的為對(duì)結(jié)核菌的齊爾-尼爾森（Ziehl－neelsen）染色法和齊爾-加貝特（Ziehl－gabbet）染色法。用石炭酸復(fù)紅染色后，用鹽酸乙醇分色，再用美藍(lán)進(jìn)行對(duì)比染色，即不再脫色而呈現(xiàn)石炭酸復(fù)紅的紅色。

抗酸染色的原理編輯

分枝桿菌的細(xì)胞壁內(nèi)含有大量的脂質(zhì)，包圍在肽聚糖的外面，所以分枝桿菌一般不易著色，要經(jīng)過加熱和延長(zhǎng)染色時(shí)間來促使其著色。但分枝桿菌中的分枝菌酸與染料結(jié)合后，就很難被酸性脫色劑脫色，故名抗酸染色。

齊-尼氏抗酸染色法是在加熱條件下使分枝菌酸與石炭酸復(fù)紅牢固結(jié)合成復(fù)合

物，用鹽酸酒精處理也不脫色。當(dāng)再加堿性美蘭復(fù)染后，分枝桿菌仍然為紅色，而其他細(xì)菌及背景中的物質(zhì)為藍(lán)色。

抗酸染色一般步驟編輯

1）初染

用玻片夾夾持涂片標(biāo)本，滴加石炭酸復(fù)紅2-3滴，在火焰高處徐徐加熱，切勿沸騰，出現(xiàn)蒸汽即暫時(shí)離開，若染液蒸發(fā)減少，應(yīng)再加染液，以免干涸，加熱3-5分鐘，待標(biāo)本冷卻后用水沖洗。

2）脫色

3%鹽酸酒精脫色30秒~1分鐘；用水沖洗。

3）復(fù)染

用堿性美蘭溶液復(fù)染1分鐘，水洗，用吸水紙吸干后用油鏡觀察。

抗酸染色的染液配制編輯

1、石炭酸復(fù)紅

堿性復(fù)紅酒精飽和溶液10mL

5%石炭酸90mL

2、3%鹽酸酒精

濃鹽酸3mL

95%酒精97mL

3、呂氏美蘭液

美蘭酒精飽和液30mL

氫氧化鉀（1:10000）100mL

篇二：實(shí)驗(yàn)二十四抗酸染色-jpkchnadlcn

課程名稱：微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)

授課專業(yè)：醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)

學(xué)時(shí)：2學(xué)時(shí)

實(shí)驗(yàn)十七結(jié)核桿菌檢驗(yàn)

(m.TuberculosisTest)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

⒈掌握結(jié)核桿菌的菌落特征，鏡下形態(tài)、染色特性

⒉掌握抗酸染色的原理、操作步驟，結(jié)果報(bào)告

二、實(shí)驗(yàn)器材與試劑

⒈菌種：bcg

⒉試劑：抗酸染液

⒊其他：三腳架、鐵片、木夾子等

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

㈠微生物學(xué)診斷

⒈標(biāo)本采取

根據(jù)病灶器官取材,包括痰,尿,腦脊液,糞便等。

⒉直接涂片抗酸染色鏡檢

濃縮集菌:無其他雜菌污染的腦脊液、胸腹水等標(biāo)本,可直接離心沉淀集菌。有雜菌的標(biāo)本如痰、尿、糞等標(biāo)本,先經(jīng)4%naoh或3%hcl或6%h2so4處理30分鐘,殺死雜菌并使粘稠性有機(jī)物溶解之后,再離心沉淀集菌。

⒊抗酸染色

⒋培養(yǎng)鑒定

⒌動(dòng)物試驗(yàn)(豚鼠):將集菌后的材料注于豚鼠腹股溝皮下,3-4周后若局部淋巴結(jié)腫大,結(jié)核菌素試驗(yàn)陽轉(zhuǎn),即可進(jìn)行解剖。觀察肺、肝、淋巴結(jié)等器官有無結(jié)核病變,并作形態(tài)、培養(yǎng)等檢查。若6-8周仍不見發(fā)病,亦應(yīng)進(jìn)行解剖檢查。

⒍結(jié)核菌素試驗(yàn)

⑴用途:

測(cè)定機(jī)體對(duì)結(jié)核桿菌有無變態(tài)反應(yīng)性─免疫性。

⑵方法:

用舊結(jié)核菌素(oT)或純蛋白衍生物(ppD)注射前臂皮內(nèi),48小時(shí)-72小時(shí)觀察有無紅腫硬結(jié)。

⑶結(jié)果:

出現(xiàn)紅腫硬結(jié)直徑大于5mm者為陽性,說明機(jī)體對(duì)結(jié)核桿菌有免疫性;反之,紅腫硬結(jié)直徑小于5mm者為陰性,說明機(jī)體對(duì)結(jié)核桿菌無免疫性。大于15mm者為強(qiáng)陽性反應(yīng),表明可能有活動(dòng)性結(jié)核感染,應(yīng)進(jìn)一步追查病灶。

⑷實(shí)際應(yīng)用:

①選擇卡介苗接種對(duì)象和測(cè)定卡介苗接種后的免疫效果。結(jié)核菌素試驗(yàn)陰性者應(yīng)接種或補(bǔ)種卡介苗。

②在未接種卡介苗的人群中作結(jié)核桿菌感染的流行病學(xué)調(diào)查,了解人群自然感染率。

③作為嬰幼兒(尚未接種過卡介苗者)結(jié)核病的輔助診斷。

④測(cè)定腫瘤患者的細(xì)胞免疫功能。

㈡培養(yǎng)特性（示教）

1.營(yíng)養(yǎng)要求高常用的有Lowenstein-Jensen培養(yǎng)基,內(nèi)含蛋黃、甘油、馬鈴薯、無機(jī)鹽和孔雀綠等。孔雀綠可抑制雜菌生長(zhǎng),便于;分離和長(zhǎng)期培養(yǎng)。蛋黃含脂質(zhì)生長(zhǎng)因子,能刺激生長(zhǎng)。

2.需氧,加6-8%co2可促進(jìn)生長(zhǎng)。

3.生長(zhǎng)緩慢:繁殖一代需18小時(shí)左右,形成菜花樣菌落需時(shí)兩周以上。㈢形態(tài)染色（示教）

1.形態(tài)細(xì)長(zhǎng),著色不勻,排列成分枝或索狀。

2.著色抗酸性─抗酸性染色。

㈣抗酸染色法(acid-faststain)：

⒈原理:

結(jié)核分枝桿菌含脂質(zhì)多,不易著色,先用石炭酸復(fù)紅初染,染色時(shí)間要稍長(zhǎng),且需要加溫。一旦細(xì)菌染上顏色，由于脂質(zhì)的存在，即使強(qiáng)脫色劑也不能使之脫色,其它細(xì)菌均脫色,經(jīng)堿性美蘭復(fù)染,所以結(jié)核分枝桿菌呈紅色,其它呈藍(lán)色.

⒉方法：

取痰液→涂片（略厚）→干燥→固定→5％石炭酸復(fù)紅染色30分鐘（冷染）后→用3%的鹽酸酒精脫色約1~2分鐘，脫色時(shí)輕搖玻片，直到涂片顏色脫去為止→水洗后，用堿性美藍(lán)復(fù)染1分鐘→水洗，待干→鏡檢

⒊結(jié)果：

抗酸桿菌呈紅色(+)，其他細(xì)菌和背景物質(zhì)為藍(lán)色(-)，如下圖

⒋萋尼氏染色鏡檢結(jié)果分級(jí)報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)

抗酸桿菌陰性(－)：連續(xù)觀察300個(gè)不同視野未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌。報(bào)告抗酸桿菌菌數(shù)：1～8條/300視野。

抗酸桿菌陽性（1＋）：3～9條/100視野。

抗酸桿菌陽性（2＋）：1～9條抗酸桿菌/10視野。

抗酸桿菌陽性（3＋）：1～9條抗酸桿菌/每視野。

抗酸桿菌陽性（4＋）：≥10條抗酸桿菌/每視野

⒌注意事項(xiàng)

痰涂片抗酸染色檢查要注意預(yù)防假陽性和假陰性結(jié)果的產(chǎn)生。假陽性是指將陰性涂片錯(cuò)誤判讀為陽性，假陰性是指將陽性涂片錯(cuò)誤判讀為陰性。屬于技術(shù)因素的影響要通過一系列實(shí)驗(yàn)室內(nèi)和實(shí)驗(yàn)室間的質(zhì)量控制不斷改善。

Ⅰ假陽性結(jié)果的預(yù)防措施

⑴必須使用新的載玻片進(jìn)行痰涂片檢查。

⑵每個(gè)標(biāo)本均使用一個(gè)新竹簽完成制片涂抹。

⑶所有染液均經(jīng)過過濾。

⑷染色時(shí)玻片彼此之間保持一定距離，相互徹底分隔開。

⑸嚴(yán)禁使用染色缸將玻片放置一起染色。

⑹染色時(shí)勿使玻片上的染液干燥。

⑺滴加鏡油時(shí)，嚴(yán)禁容器滴口直接接觸玻片痰膜。

⑻嚴(yán)禁物鏡鏡頭直接接觸玻片痰膜。

⑼完整、準(zhǔn)確的標(biāo)注痰盒、玻片和實(shí)驗(yàn)室登記本的各項(xiàng)內(nèi)容。⑽登記前、后對(duì)檢驗(yàn)單和標(biāo)本盒上的標(biāo)注進(jìn)行仔細(xì)核對(duì)。⑾認(rèn)真按照要求讀片

，準(zhǔn)確記錄和報(bào)告結(jié)果。

Ⅱ假陰性結(jié)果的預(yù)防措施

⑴確認(rèn)標(biāo)本是痰而非唾液。

⑵確認(rèn)每份標(biāo)本至少有3ml。

⑶選擇膿樣、干酪樣、粘液分泌物涂抹制備玻片。

⑷制備玻片時(shí)標(biāo)本涂抹均勻，不要太厚或太薄。

⑸使用高質(zhì)量染料、嚴(yán)格按照配方配制染液。

⑹嚴(yán)格按照操作程序完成染色過程。

⑺判斷結(jié)果為“陰性”前，必須閱讀規(guī)定要求的視野數(shù)。

⑻作為對(duì)照，可采用已知結(jié)果為陽性的玻片，完成染色鏡檢過程。⑼完整、準(zhǔn)確地標(biāo)注痰盒、玻片和實(shí)驗(yàn)室登記本。

⑽登記前對(duì)檢驗(yàn)單和標(biāo)本盒上的標(biāo)注進(jìn)行仔細(xì)核對(duì)。

四、實(shí)驗(yàn)安排

每人取痰標(biāo)本做抗酸染色，記錄結(jié)果。

五、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

抗酸染液2套／教室

三腳架、鐵片、木夾子、玻片若干

篇三：實(shí)驗(yàn)二十四抗酸染色-湖南省高等學(xué)校精品課程網(wǎng)

課程名稱：微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)

授課專業(yè)：醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)

學(xué)時(shí)：2學(xué)時(shí)

實(shí)驗(yàn)十七結(jié)核桿菌檢驗(yàn)

(m.TuberculosisTest)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

⒈掌握結(jié)核桿菌的菌落特征，鏡下形態(tài)、染色特性

⒉掌握抗酸染色的原理、操作步驟，結(jié)果報(bào)告

二、實(shí)驗(yàn)器材與試劑

⒈菌種：bcg

⒉試劑：抗酸染液

⒊其他：三腳架、鐵片、木夾子等

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

㈠微生物學(xué)診斷

⒈標(biāo)本采取

根據(jù)病灶器官取材,包括痰,尿,腦脊液,糞便等。

⒉直接涂片抗酸染色鏡檢

濃縮集菌:無其他雜菌污染的腦脊液、胸腹水等標(biāo)本,可直接離心沉淀集菌。有雜菌的標(biāo)本如痰、尿、糞等標(biāo)本,先經(jīng)4%naoh或3%hcl或6%h2so4處理30分鐘,殺死雜菌并使粘稠性有機(jī)物溶解之后,再離心沉淀集菌。

⒊抗酸染色

⒋培養(yǎng)鑒定

⒌動(dòng)物試驗(yàn)(豚鼠):將集菌后的材料注于豚鼠腹股溝皮下,3-4周后若局部淋巴結(jié)腫大,結(jié)核菌素試驗(yàn)陽轉(zhuǎn),即可進(jìn)行解剖。觀察肺、肝、淋巴結(jié)等器官有無結(jié)核病變,并作形態(tài)、培養(yǎng)等檢查。若6-8周仍不見發(fā)病,亦應(yīng)進(jìn)行解剖檢查。

⒍結(jié)核菌素試驗(yàn)

⑴用途:

測(cè)定機(jī)體對(duì)結(jié)核桿菌有無變態(tài)反應(yīng)性─免疫性。

⑵方法:

用舊結(jié)核菌素(oT)或純蛋白衍生物(ppD)注射前臂皮內(nèi),48小時(shí)-72小時(shí)觀察有無紅腫硬結(jié)。

⑶結(jié)果:

出現(xiàn)紅腫硬結(jié)直徑大于5mm者為陽性,說明機(jī)體對(duì)結(jié)核桿菌有免疫性;反之,紅腫硬結(jié)直徑小于5mm者為陰性,說明機(jī)體對(duì)結(jié)核桿菌無免疫性。大于15mm者為強(qiáng)陽性反應(yīng),表明可能有活動(dòng)性結(jié)核感染,應(yīng)進(jìn)一步追查病灶。

⑷實(shí)際應(yīng)用:

①選擇卡介苗接種對(duì)象和測(cè)定卡介苗接種后的免疫效果。結(jié)核菌素試驗(yàn)陰性者應(yīng)接種或補(bǔ)種卡介苗。

②在未接種卡介苗的人群中作結(jié)核桿菌感染的流行病學(xué)調(diào)查,了解人群自然感染率。

③作為嬰幼兒(尚未接種過卡介苗者)結(jié)核病的輔助診斷。

④測(cè)定腫瘤患者的細(xì)胞免疫功能。

㈡培養(yǎng)特性（示教）

1.營(yíng)養(yǎng)要求高常用的有Lowenstein-Jensen培養(yǎng)基,內(nèi)含蛋黃、甘油、馬鈴薯、無機(jī)鹽和孔雀綠等?？兹妇G可抑制雜菌生長(zhǎng),便于;分離和長(zhǎng)期培養(yǎng)。蛋黃含脂質(zhì)生長(zhǎng)因子,能刺激生長(zhǎng)。

2.需氧,加6-8%co2可促進(jìn)生長(zhǎng)。

3.生長(zhǎng)緩慢:繁殖一代需18小時(shí)左右,形成菜花樣菌落需時(shí)兩周以上。㈢形態(tài)染色（示教）

1.形態(tài)細(xì)長(zhǎng),著色不勻,排列成分枝或索狀。

2.著色抗酸性─抗酸性染色。

㈣抗酸染色法(acid-faststain)：

⒈原理:

結(jié)核分枝桿菌含脂質(zhì)多,不易著色,先用石炭酸復(fù)紅初染,染色時(shí)間要稍長(zhǎng),且需要加溫。一旦細(xì)菌染上顏色，由于脂質(zhì)的存在，即使強(qiáng)脫色劑也不能使之脫色,其它細(xì)菌均脫色,經(jīng)堿性美蘭復(fù)染,所以結(jié)核分枝桿菌呈紅色,其它呈藍(lán)色.

⒉方法：

取痰液→涂片（略厚）→干燥→固定→5％石炭酸復(fù)紅染色30分鐘（冷染）后→用3%的鹽酸酒精脫色約1～2分鐘，脫色時(shí)輕搖玻片，直到涂片顏色脫去為止→水洗后，用堿性美藍(lán)復(fù)染1分鐘→水洗，待干→鏡檢

⒊結(jié)果：

抗酸桿菌呈紅色(+)，其他細(xì)菌和背景物質(zhì)為藍(lán)色(-)，如下圖

⒋萋尼氏染色鏡檢結(jié)果分級(jí)報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)

抗酸桿菌陰性(－)：連續(xù)觀察300個(gè)不同視野未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌。報(bào)告抗酸桿菌菌數(shù)：1～8條/300視野。

抗酸桿菌陽性（1＋）：3～9條/100視野。

抗酸桿菌陽性（2＋）：1～9條抗酸桿菌/10視野。

抗酸桿菌陽性（3＋）：1～9條抗酸桿菌/每視野。

抗酸桿菌陽性（4＋）：≥10條抗酸桿菌/每視野

⒌注意事項(xiàng)

痰涂片抗酸染色檢查要注意預(yù)防假陽性和假陰性結(jié)果的產(chǎn)生。假陽性是指將陰性涂片錯(cuò)誤判讀為陽性，假陰性是指將陽性涂片錯(cuò)誤判讀為陰性。屬于技術(shù)因素的影響要通過一系列實(shí)驗(yàn)室內(nèi)和實(shí)驗(yàn)室間的質(zhì)量控制不斷改善。

Ⅰ假陽性結(jié)果的預(yù)防措施

⑴必須使用新的載玻片進(jìn)行痰涂片檢查。

⑵每個(gè)標(biāo)本均使用一個(gè)新竹簽完成制片涂抹。

⑶所有染液均經(jīng)過過濾。

⑷染色時(shí)玻片彼此之間保持一定距離，相互徹底分隔開。

⑸嚴(yán)禁使用染色缸將玻片放置一起染色。

⑹染色時(shí)勿使玻片上的染液干燥。

⑺滴加鏡油時(shí)，嚴(yán)禁容器滴口直接接觸玻片痰膜。

⑻嚴(yán)禁物鏡鏡頭直接接觸玻片痰膜。

⑼完整、準(zhǔn)確的標(biāo)注痰盒、玻片和實(shí)驗(yàn)室登記本的各項(xiàng)內(nèi)容。⑽登記前、后對(duì)檢驗(yàn)單和標(biāo)本盒上的標(biāo)注進(jìn)行仔細(xì)核對(duì)。⑾認(rèn)真按照要求讀片，準(zhǔn)確記錄和報(bào)告結(jié)果。

Ⅱ假陰性結(jié)果的預(yù)防措施

⑴確認(rèn)標(biāo)本是痰而非唾液。

⑵確認(rèn)每份標(biāo)本至少有3ml。

⑶選擇膿