醫(yī)用細(xì)胞生物學(xué)第三章

第三章

細(xì)胞生物學(xué)的研究方法

ResearchMethodsforCellBiology第一節(jié)細(xì)胞的分離與培養(yǎng)（細(xì)胞分離）第二節(jié)細(xì)胞組分的分離與純化（細(xì)胞組分分離）第三節(jié)顯微鏡技術(shù)（細(xì)胞結(jié)構(gòu)）第四節(jié)細(xì)胞化學(xué)與分子示蹤（細(xì)胞分子）第五節(jié)細(xì)胞功能基因組學(xué)研究技術(shù)（分子功能）第一節(jié)細(xì)胞的分離與培養(yǎng)一、細(xì)胞分離（離心、流式、免疫磁珠、激光切割）二、細(xì)胞培養(yǎng)（原代、傳代、細(xì)胞系、細(xì)胞株）差速離心或密度梯度離心流式細(xì)胞技術(shù)（FACS）免疫磁珠法激光俘獲顯微切割技術(shù)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)第二節(jié)細(xì)胞組分的分離與純化一、分級離心（差速離心、速度沉降、平衡沉降）二、層析法分離蛋白質(zhì)（柱層析、高效液相層析）三、蛋白質(zhì)電泳（SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳、等電聚焦電泳、雙向電泳）分級離心技術(shù)分級離心技術(shù)（成分的大小和形狀）（成分的浮力密度）層析分離技術(shù)層析分離技術(shù)層析分離技術(shù)蛋白質(zhì)電泳技術(shù)蛋白質(zhì)電泳技術(shù)—WesternBlot蛋白質(zhì)電泳技術(shù)蛋白質(zhì)電泳技術(shù)第三節(jié)顯微鏡技術(shù)一、光學(xué)顯微鏡（普通、熒光、激光共聚焦）二、電子顯微鏡（透射、掃描、技術(shù)投影法）三、納米顯微鏡（掃描隧道、原子力）普通光學(xué)顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡熒光顯微鏡熒光顯微鏡熒光顯微鏡熒光顯微鏡共聚焦激光掃描顯微鏡三共聚焦激光掃描顯微鏡共聚焦激光掃描顯微鏡共聚焦激光掃描顯微鏡共聚焦激光掃描顯微鏡電子顯微鏡透射電子顯微鏡（TEM）與掃描電子顯微鏡（SEM）第四節(jié)細(xì)胞化學(xué)與分子示蹤一、酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)二、免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)三、放射自顯影技術(shù)四、活細(xì)胞分子示蹤技術(shù)酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)標(biāo)記破骨細(xì)胞免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)放射自顯影技術(shù)放射自顯影技術(shù)胰島B細(xì)胞3H-亮氨酸標(biāo)記完成之后，A10分鐘后；B.完成45分鐘后。細(xì)胞內(nèi)分子示蹤技術(shù)細(xì)胞內(nèi)分子示蹤技術(shù)細(xì)胞內(nèi)分子示蹤技術(shù)第五節(jié)細(xì)胞功能基因組學(xué)研究技術(shù)基因的基本研究技術(shù)限制性核酸內(nèi)切酶

核酸凝膠電泳

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)DNA文庫和基因克隆DNA測序

核酸分子雜交限制性核酸內(nèi)切酶技術(shù)核酸凝膠電泳技術(shù)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)（PCR）DNA文庫和基因克隆技術(shù)DNA測序技術(shù)核酸分子雜交技術(shù)原位雜交技術(shù)Southern、Northern

Blot技術(shù)一、細(xì)胞及其組分的分離和純化技術(shù)：多種方法可從組織中分離和純化特定類型的細(xì)胞或分離和純化細(xì)胞組分和活性分子。細(xì)胞培養(yǎng)需要無菌條件和營養(yǎng)供應(yīng)。二、顯微成像技術(shù)：光鏡技術(shù)是研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)最早和最基本的工具；電鏡技術(shù)用于研究細(xì)胞的亞顯微結(jié)構(gòu)。三、細(xì)胞化學(xué)和細(xì)胞內(nèi)分子示蹤技術(shù)：細(xì)胞化學(xué)技術(shù)可以顯示細(xì)胞和組織中的酶類；免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)是生物大分子定性和定位研究的有效工具；原位雜交技術(shù)用以檢測組織和細(xì)胞中的特異性核酸分子；放射自顯影術(shù)可以追蹤并分析體內(nèi)大分子代謝的動態(tài)過程；綠色熒光蛋白用于示蹤細(xì)胞內(nèi)的特定蛋白質(zhì)。四、細(xì)胞功能基因組學(xué)技術(shù)：PCR技術(shù)可以在體外快速擴(kuò)增特異性DNA