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文檔簡介
第1頁/共18頁基因文庫基因組文庫第2頁/共18頁為什么要建立基因文庫?直接從含目的基因的生物中提取不行嗎?第3頁/共18頁第4頁/共18頁第5頁/共18頁利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因條件:已知目的基因的核苷酸序列先加熱至90-95度后降溫至55-56度結(jié)果:指數(shù)式增加第6頁/共18頁2基因表達(dá)載體的構(gòu)建--基因工程的核心基因表達(dá)載體啟動子:終止子:目的基因標(biāo)記基因目的:使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并遺傳給下一代,同時能夠表達(dá)和發(fā)揮作用第7頁/共18頁一段特殊結(jié)構(gòu)的DNA片斷,RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點(diǎn);使轉(zhuǎn)錄開始啟動子:終止子:一段特殊結(jié)構(gòu)的DNA片斷,使轉(zhuǎn)錄停止?將生物所有DNA直接導(dǎo)入受體細(xì)胞不是更簡單嗎?如果這么做,結(jié)果會怎樣?第8頁/共18頁3、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞轉(zhuǎn)化?目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi),并在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程,受體細(xì)胞?植物細(xì)胞動物細(xì)胞微生物細(xì)胞第9頁/共18頁將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞-雙子葉植物農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法第10頁/共18頁將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞-單子葉植物基因槍法第11頁/共18頁將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞-花粉管通道法轉(zhuǎn)基因抗蟲棉第12頁/共18頁將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞顯微注射將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞常用的為大腸桿菌,用CaCl2處理感受態(tài)細(xì)胞重組載體與之混合
受精卵第13頁/共18頁將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞常用的為大腸桿菌,用CaCl2處理感受態(tài)細(xì)胞重組載體與之混合
第14頁/共18頁4、目的基因的檢測和鑒定--檢查基因工程是否成功的一步A、轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA上是否插入了目的基因-DNA分子雜交法B、目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA-分子雜交法C、目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)-抗原抗體雜交個體生物學(xué)水平鑒定第15頁/共18頁第16頁/共18頁如何從基因文庫中找到所需要的基因根據(jù)目的基因的有關(guān)信息基因的核苷酸序列基因的功能基因在染色體上位置基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA基因翻譯產(chǎn)物蛋白質(zhì)第17頁/共18頁作為基因工程表達(dá)載體,只需目的基因就可以完成任務(wù)嗎?根據(jù)農(nóng)桿菌可將目的基因?qū)腚p子葉植物的機(jī)理,你能分析出不能導(dǎo)入單子葉植物的原因嗎?大腸桿菌可以
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