植物制片技術(shù)研究生課件

植物解剖與制片技術(shù)PlantAnatomyandSectioningTechnology學(xué)時(shí)分配：理論課4學(xué)時(shí)；實(shí)驗(yàn)課24學(xué)時(shí)。教學(xué)目的：通過(guò)對(duì)植物制片技術(shù)的掌握，為研究植物胚胎學(xué)、植物解剖學(xué)、作物栽培、遺傳育種等教學(xué)、科研提供必備的技術(shù)。主要參考書(shū)目：1植物顯微技術(shù)，王灶安主編，農(nóng)業(yè)出版社；2植物制片技術(shù)，李正理編著，科學(xué)出版社；3《西北植物學(xué)報(bào)》，《植物研究》，《武漢植物學(xué)研究》，《植物分類(lèi)學(xué)報(bào)》等學(xué)術(shù)雜志。考核方式：撰寫(xiě)實(shí)驗(yàn)報(bào)告：對(duì)所觀(guān)察的器官結(jié)構(gòu)進(jìn)行詳細(xì)的描述并作進(jìn)一步的討論，附上植物器官顯微結(jié)構(gòu)圖。植物顯微制片技術(shù)

植物制片的類(lèi)型和方法切片法：徒手切片法

石蠟切片法滑走切片機(jī)切片法半薄切片法超薄切片法非切片法：離析法壓片法整體封存法石蠟法制片原理與方法

一、材料的選擇與分割

1.新鮮、健康、有代表性的材料；

2.生長(zhǎng)發(fā)育的不同階段;3.大小適當(dāng)，0.5cm左右.

二、殺生、固定與保存

殺生：固定：

1根據(jù)固定目的物本身的結(jié)構(gòu)性質(zhì)；

2分割大的材料；

3抽氣；

4標(biāo)記.(整染）

固定液的配置及使用：

FAA固定液：適用范圍：根、莖、葉、花藥、子房固定時(shí)間：24h低溫配方：福爾馬林5ml

冰醋酸5ml70%酒精90ml

卡諾固定液：適用范圍：根尖、花藥、子房固定時(shí)間：小于24h，15-30分鐘配方：ab

純酒精15ml30ml

氯仿5ml

冰醋酸5ml1ml

保存：

70%酒精三、脫水

作用：1

除去組織內(nèi)的水分；

2使石蠟順利進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)脫水劑：

1酒精：50%--70%--85%--95%--100%（梯度脫水）

2二氧雜環(huán)己烷

3正丁醇

4叔丁醇

5丙酮

四、透明作用：1

使材料透明、干凈；

2便于包埋劑及封固劑的進(jìn)入透明劑：

1二甲苯：1/2純酒精+1/2二甲苯——二甲苯

2甲苯或苯；

3氯仿

4丁香油、香柏油等五、浸蠟

1低溫浸蠟：40℃左右（1夜）

2高溫浸蠟：58℃左右（6小時(shí)以?xún)?nèi)）六、包埋

1選取合適熔點(diǎn)的石蠟；

2包埋用具的準(zhǔn)備要點(diǎn)：動(dòng)作迅速

七、切片

1修塊;2切片:厚度在8-14μma切片有裂紋

b蠟帶彎曲

c材料破碎

d切片卷成圓筒

e蠟帶皺縮八、粘片與展片

粘片劑:

明膠1g

石炭酸2g

甘油15ml

蒸餾水100ml

方法:a38℃左右

b涂抹粘片劑

c將蠟片置于玻片中央

d材料呈透明質(zhì)感

e38℃烘烤至干燥

f標(biāo)記

九、脫蠟

方法:二甲苯Ⅰ30分鐘(40℃溫箱中)

二甲苯Ⅱ10分鐘

十、染色

（一）染料的分類(lèi)

a來(lái)源：天然人工

b化學(xué)性質(zhì)：堿性：番紅酸性：固綠中性：

c性能：核染料：蘇木精、番紅細(xì)胞質(zhì)染料：固綠、苯胺藍(lán)細(xì)胞壁染料：番紅組織化學(xué)染料；蘇丹Ⅲ

熒光染料：

（二）幾種常用染料的性質(zhì)及配制

a蘇木精：溶于酒精、甘油和熱水中。

b番紅：溶于酒精、水中。

c固綠：易溶于酒精。

d堿性品紅：作為組化試劑，用于檢驗(yàn)DNA、多糖物質(zhì)等

（三）一般的染色方法

1材料是否完整:整體染色切片染色

2染料的種類(lèi):單染二重染色三重(多重)染色

（四）染色時(shí)注意的事項(xiàng)

1根據(jù)觀(guān)察目的、樣品的結(jié)構(gòu)性質(zhì)；

2溶液和染液的濃度相同；

3堿性染液先染，酸性染液后染；

4染色可深不可淺；

5染色的時(shí)間；

十一、封藏與封藏劑目的：1長(zhǎng)期保存

2使材料可以清楚的顯現(xiàn)出來(lái)封藏劑種類(lèi)：

1樹(shù)脂性封藏劑：香柏油、合成樹(shù)脂、加拿大樹(shù)膠：溶于二甲苯、氯仿等溶劑，熔點(diǎn)為61℃，不能加熱，折光率近似玻璃，1.547。

2水溶性封藏劑：阿拉伯樹(shù)膠、甘油、明膠、糖漿等。十二顯微觀(guān)察與照相石蠟法制片流程

步驟一：（整染）

取材——固定——脫水(70%酒精—85%酒精—95%酒精—100%酒精—100%酒精,每步2-4h)——透明（1/2二甲苯+1/2酒精，2h；純二甲苯，2h）——低溫浸蠟（加碎蠟至飽和，40℃，過(guò)夜）（一天）步驟二：繼續(xù)低溫浸蠟（40℃，過(guò)夜）——高溫浸蠟（58℃，換純蠟，每2h換蠟一次，不超過(guò)6h）——包埋（一個(gè)蠟船放3-4個(gè)材料）（一天）步驟三：修塊——切片——粘片——展片——烘片（一天）

步驟四：脫蠟與染色：二甲苯Ⅰ（30分鐘，40度溫箱）——二甲苯Ⅱ（10分鐘）——復(fù)水（1/2二甲苯+