GB/T 18652-2002致病性嗜水氣單胞菌檢驗(yàn)方法

IcS.11.220B41中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T18652—2002致病性暗水氣單胞菌檢驗(yàn)方法Methodsfordetectionofpathogenicaeromonashydrophila2002-02-19發(fā)布2002-05-01實(shí)施中華：人民共；和國發(fā)布國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局

GB/T18652-2002暗水氣單胞菌在自然界中廣泛分布，有致病性菌林和非致病性菌株之分。致病性菌林可感染魚類、兩棲類、爬行類、烏類和哺乳類等動(dòng)物.包括鯽、團(tuán)頭魴、、、鯉、、草魚、香魚、狼鱸、虹鱗、尼羅羅非魚、斑點(diǎn)叉尾、黃鰭、日本鰻、歐洲鰻、翹嘴、牛蛙、美洲鱷、中華整、貂、駱、免、豬、牛等。臨床上以急性出血性敗血癥為主要特征。慢性感染則主要表現(xiàn)為皮膚潰瘍或腸炎。人亦可因致病性暗水氣單胞菌感染而發(fā)生腹瀉及食物中毒本標(biāo)準(zhǔn)在暗水氣單胞菌的鑒定中，參考了《伯杰氏鑒定細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》第九版.1994)中有關(guān)暗水氣單胞菌的內(nèi)容。在曙水氣單胞菌的分離鑒定中.除采用選擇培養(yǎng)基RS培養(yǎng)基及鑒別培養(yǎng)基暗水氣單胞菌（AHM）培養(yǎng)基外.還應(yīng)借助一些生化反應(yīng)將其與假單胞菌、鄰單胞菌、腸桿菌、弧菌及其他氣單胞菌進(jìn)行區(qū)分。蛋白酶是暗水氣單胞菌重要的毒力決定因子,與該菌的致病性密切相關(guān).凡蛋白酶陽性的暗水氣單胞菌均具致病性。蛋白酶的檢測(cè)除采用脫脂奶平板法外.還可采用斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫試驗(yàn)。本標(biāo)準(zhǔn)可用于暗水氣單胞菌的分離鑒定，而且可區(qū)分致病性菌株和非致病性菌株，有助于致病性曙水氣單胞菌感染的確切診斷。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、附錄B是標(biāo)準(zhǔn)的附錄,附錄C是提示的附錄本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國動(dòng)物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：陸承平、陳懷青。

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T118652—2002致病性暗水氣單胞菌檢驗(yàn)方法Methodsfordetectionofpathogenicaeromonashydrophila1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了致病性曙水氣單胞菌的檢驗(yàn)方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于患病魚類等易感動(dòng)物及水樣中致病性暗水氣單胞菌的分離、鑒定.也可用于送檢菌株的鑒定2致病性暗水氣單胞菌檢驗(yàn)程序檢驗(yàn)程序的流程示意圖見附錄C(提示的附錄)。2.1暗水氣單胞菌的分離2.1.1準(zhǔn)備2.1.1.1各種培養(yǎng)的制備方法見附錄A(標(biāo)準(zhǔn)的附錄)2.1.1.2各種試劑的制備方法見附錄B(標(biāo)準(zhǔn)的附錄)。2.1.2待檢樣本待檢樣本可包括病料、水樣及送檢菌株.病料既可是無菌采取的易感動(dòng)物的腎、肝、牌等未污染病料,也可是糞便或病變皮膚等污染病料,如樣本為菌株,應(yīng)先接種于普通肉湯(見附錄A中A1).28℃培養(yǎng)24h.再劃線接種于普通瓊脂平板(見附錄A中A2)，使之形成單個(gè)菌落,以供鑒定用2.1.3分離2.1.3.1未污染病料的分離2.1.3.1.1接種環(huán)(鉑金耳)火焰滅菌.冷卻。2.1.3.1.2用接種環(huán)取病料。2.1.3.1.3劃線接種于普通瓊脂平板2.1.3.1.428C培養(yǎng)24h.2.1.3.2污染病料的分離2.1.3.2.1接種環(huán)(鉑金耳)火焰滅菌.冷卻2.1.3.2.2用接種環(huán)取病料。2.1.3.2.3接種于RS瓊脂平板(見附錄A中A3）2.1.3.2.428C培養(yǎng)24h。2.1.3.3水樣的分離：2.1.3.3.1用孔徑為0.2m的硝酸纖維素微孔濾膜過濾水樣2.1.3.3.2取出濾膜,置含有滅菌堿性蛋白陳水(見附錄A中A4)的試管中.2.1.3.3.328C培養(yǎng)24h.2.1.3