人教版高中生物選修一專題二知識點匯總

人教版高中生物選修一專題二學問點匯總專題二微生物的培育與應用一、培育基：人們依據(jù)微生物對養(yǎng)分物質的不同需求，配制出供其生長生殖的養(yǎng)分基質。1、★種類：培育基依據(jù)物理性質可分為液體培育基和固體培育基。區(qū)分：液體培育基中參加凝固劑瓊脂制成瓊脂固體培育基，是試驗室最常用的培育基之一結果：微生物在固體培育基外表生長，可以形成肉眼可見的菌落。2、★化學成分：包括水、無機鹽、碳源、氮源?！锱嘤€要滿足微生物生長對PH、特別養(yǎng)分物質以及氧氣的要求。二、無菌技術例如，培育乳酸桿菌時需要在培育基中添加維生素，培育厭氧型微生物需要供給無氧條件，培育霉菌時須將培育基的pH調至酸性，培育細菌是需要將pH調至中性或微堿性，二、無菌技術1、爭辯和應用微生物的前提是防止雜菌入侵，獲得純潔的微生物?！铽@得純潔培育物的關鍵是防止外來雜菌的入侵。留意：①對試驗操作的空間、操作者的衣著和手，進展清潔和消毒。①將用于微生物培育的器皿、接種用具和培育基等器具進展滅菌。①為避開四周環(huán)境中微生物的污染，試驗操作應在酒精燈火焰四周進展。①試驗操作時應避開已經滅菌處理的材料用具與四周的物品相接觸?！餆o菌技術目的：防止試驗室的培育物被其他外來微生物污染，有效避開操作者自身被微生物感染?！?、消毒與滅菌的區(qū)分消毒指使用較為溫存的物理或化學方法殺死物體外表或內部一局部微生物〔不包括芽孢和孢子〕滅菌則是指使用猛烈的理化因素殺死物體內外全部的微生物，包括芽孢和孢子。方法方法適用條件所用器械①煮沸消毒①巴氏消毒日常生活中常用的方法不耐高溫的液體100度煮沸70-80度煮消毒①化學藥劑消毒如酒精擦拭雙手、氯氣消毒水源①紫外線消毒法接種室、接種箱或超凈工作臺的外表或空氣紫外燈①灼燒滅菌接種工具、試管口和瓶口酒精燈滅菌①干熱滅菌耐高溫，需保持枯燥物品，如吸管，培育皿干熱滅菌箱①高壓蒸汽滅菌，培育基、無菌水高壓蒸汽滅菌鍋三、制作牛肉膏蛋白胨固體培育基接種室、接種想或超凈工作臺使用前先用石炭酸或煤酚皂等消毒液消毒，再用紫外線照耀三、制作牛肉膏蛋白胨固體培育基★1、方法步驟：計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。 〔滅菌前調PH〕①稱量時，放在 稱量紙上稱量；①熔化時，參加瓊脂 ，補加蒸餾水至100ml；①滅菌前PH；①50①左右時，在酒精燈火焰四周倒平板?！?、倒平板操作的步驟：①將滅過菌的培育皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培育基的錐形瓶，左手拔出棉塞。①右手拿錐形瓶，將瓶口快速通過火焰。①用左手的拇指和食指將培育皿翻開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培育基〔約10～20mL〕倒入培育皿，左手馬上蓋上培育皿的皿蓋。①5～10min。然后，將平板倒過來放置。3、倒平板操作的爭辯①培育基滅菌后，需要冷卻到50①左右時，才能用來倒平板。你用什么方法來估量培育基的溫度？答：用手觸摸盛有培育基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可進展倒平板了。①為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培育基。①平板冷凝后，為什么要將平板倒置？答：可以防止培育基外表的水分更快地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培育基，造成污染。①為什么？四、純化大腸桿菌答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培育基上滋生，最好不要用這個平板培育微生物。四、純化大腸桿菌1、微生物接種的方法最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法?！铩?〕平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培育基外表連續(xù)劃線的操作。將聚攏的菌種逐步稀釋分散到一個細胞生殖而來的肉眼可見的子細胞群體，這就是菌落.作用:可用于分別細菌，不能計數(shù)?！铩?〕稀釋涂布平板法：將菌液進展一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培育基的外表，進展培育。分為系列稀釋操作和涂布平板操作兩步。目的：使聚攏在一起的微生物分散成單個細胞，從而能在培育基外表形成單個的菌落。作用:可用于分別細菌，能計數(shù)?！?、平板劃線法操作步驟：①將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅。①在火焰旁冷卻接種環(huán)，并翻開棉塞。①將試管口通過火焰。 ①將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液。①將試管通過火焰，并塞上棉塞。①左手將皿蓋翻開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)快速伸入平板內，劃三至五條留意不要劃破培育皿。①灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的末端開頭往其次區(qū)域內劃線。重復以上操作，在三、四、五區(qū)域內劃線。留意不要將最終一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。①將平板倒置放入培育箱中培育?！铩舅伎肌考僭O其次劃線區(qū)域所劃的第一條線上無菌落,誤有：①接種環(huán)灼燒后未冷卻①劃線未從第一區(qū)域末端開頭3、平板劃線操作的爭辯★①為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作完畢嗎？為什么？答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避開接種環(huán)上可能存在的微生物污染培育物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線完畢后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)以便得到菌落。劃線完畢后灼燒接種環(huán)，能準時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避開細菌污染環(huán)境和感染操作者。①答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。①在作其次次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開頭劃線？答：劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開頭，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步削減，最終能得到由單個細菌生殖而來的菌落?！铫贋榈竭_把聚攏的菌種逐步稀釋分散到培育基的外表的目的，操作上留意什么？答：其次次及以后每次劃線前接種環(huán)要灼燒，冷卻后從上一區(qū)劃線末端開頭劃，首尾不能重疊。4、涂布平板操作的步驟：①將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。①取少量菌液滴加到培育基外表。①將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，8～10s。①用涂布器將菌液均勻地涂布在培育基外表。留意：①系列稀釋操作時，用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸三次的目的是使菌液與水充分5、涂布平板操作的爭辯①2如何進展無菌操作？提示：應從操作的各個細節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培育皿的距離要適宜、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰四周等等?！铫偌兓嘤戤吅?，覺察培育基上菌落連成一片，可能的緣由是什么？五、確定培育基是否合格答：稀釋倍數(shù)不夠，菌落濃度太高；劃線時，劃完第一次后接著劃其次次。五、確定培育基是否合格六、菌種的保存★方法：將未接種的培育基在適宜溫度的恒溫箱中保溫1～2則需要重制備。六、菌種的保存〔1〕臨時保藏法適用：頻繁使用的菌種方法：承受固體斜面培育基，當菌落長成后，放入4★3～6個月，都要轉移到穎的培育基上。缺點：保存時間不長，菌種簡潔被污染或產生變異?！?〕甘油管藏 適用：長期保存的菌種。方法：放在－20★的冷凍箱中保存?！锬蛩夭荒苤苯颖晦r作物吸取，只有在脲酶的催化作用下分解成氨之后，才能被植物利用反響式：CO(NH2)2+H2O 細菌脲酶 CO2+2NH3一、篩選菌株1自然界篩選實例：查找耐高溫的TaqDNA聚合酶啟發(fā)：查找目的菌種時要依據(jù)它對生存環(huán)境的要求，到相應的環(huán)境中去查找。2、篩選菌株的培育基KH2PO4 1.4gNaHPO4 2.1gMgSO4H2O 0.2g葡萄糖 10.0g尿素 1.0g

思考：2、此配方能否篩選出產生脲酶的細菌？為什么？答：能。緣由：只有產生脲酶的細菌才能利用尿素作為氮源而生存。1該培育基的配方中，為微生物的生長供給碳源和氮源的分別是什么物質？2、此配方能否篩選出產生脲酶的細菌？為什么？答：能。緣由：只有產生脲酶的細菌才能利用尿素作為氮源而生存。瓊脂 15.0g 將上述物質溶解后，用蒸餾水定容到1000mL。3、選擇性培育基：在微生物學中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻擋其他種類微生物生長的培育基二、統(tǒng)計菌落數(shù)目★1、測定微生物數(shù)量的常用方法：稀釋涂布平板法〔包括活菌〕顯微鏡直接計數(shù)〔包括死菌和活菌。此外測定大腸桿菌菌數(shù)的方法：伊紅美藍培育基 計算培育基上黑色菌落數(shù)目★2、稀釋涂布平板法原理：樣品稀釋度足夠高時，培育基外表生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。留意事項：①為了保證結果準確，一般設置3個30～300的平板進展計數(shù)，并取平均值。①統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低。統(tǒng)計結果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)緣由：當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀看到的只是一個菌落。①每克樣品中的菌株數(shù)=〔C÷V〕×M 。C:某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)；V:所用稀釋液的體積；M:稀釋倍數(shù)。3、設置比照目的：排解試驗組中非測試因素對試驗結果的影響，提高試驗結果可信度。試驗：在做分別分解尿素的細菌試驗時，A106150個菌落，而其50個菌落。試驗：在做分別分解尿素的細菌試驗時，A106150個菌落，而其50個菌落。A同學的結果產生緣由可能有：A同學的培育基被雜菌污染，培育基混入了其它含氮物質，A同學所選用的土壤樣品與其他同學不同。三、試驗設計①1、篩選分解尿素分解菌方法：①方法：使用以尿素為唯一氮源的選擇培育基進展培育。①培育基要求：加瓊脂，加尿素，不加牛肉膏蛋白胨，加葡萄糖，不加抗生素。①1～2天，假設未接種的培育基無菌落，說明培育基沒有雜菌污染。①制備以尿素為唯一氮源的培育基〔A〕和牛肉膏蛋白胨培育基BA培育基上的菌落少于以B基上的數(shù)目，說明篩選成功★2、流程：土壤取樣→制備培育基→樣品稀釋涂布平板→微生物的培育與觀看→菌落計數(shù)H接近土壤中取樣。3～8cm的土壤層取樣。制備培育基：尿素唯一氮源的選擇培育基、牛肉膏蛋白胨培育基樣品的稀釋涂布平板：★①30~300之間、適于計數(shù)的平板。①稀釋倍數(shù)：測定土壤中細菌的數(shù)量，一般選用104 105 106的稀釋液進展平板培育；測定放線菌的數(shù)量，一般選用103 104 105的稀釋液進展平板培育；測定真菌的數(shù)量，一般選用102 103 104的稀釋液進展平板培育。微生物的培育與觀看①培育：不同種類的微生物，往往需要不同的培育溫度和培育時間。30~37①1~225~28①5~725~28①3~4天①a.24小時統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，★b.選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結果，可防止因培育時間缺乏而導致遺漏菌落數(shù)目。菌落計數(shù)菌落特征，包括外形、大小、隆起程度、顏色等方面?！?、鑒定分解尿素的細菌:試劑：酚紅指示劑原理：脲酶催化尿素分解成氨→培育基堿性增加→酚紅變紅→結論：該細菌能分解尿素。尿素唯一氮〔鑒別培育基H的變化。4、測定大腸桿菌的數(shù)目：方法：濾膜法培育基：伊紅美藍培育基計算培育基上黑色菌落數(shù)目五、試驗的具體操作〔一、無菌操作1、取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。2、應在火焰旁稱取土壤，倒入錐形瓶中，塞好棉塞。3、在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁進展?！捕⒆龊脴擞?，標明培育基種類、培育日期、平板上培育樣品的稀釋度〔三、制定打算★總結：為從富含纖維素的土壤中分別獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學設計了甲、乙兩種培育基〔成分見下表表示無。酵母膏無機鹽淀粉纖維素粉瓊脂CR溶液水培育基甲++++-++培育基乙+++-+++據(jù)表推斷，培育基甲不能〔填“能”或“不能”〕液體培育基不能分別單菌落培育基乙不能〔填“能”或“不能”〕用于分別和鑒別纖維素分解菌，緣由是乙培育基中沒有纖維素，不會形成CR-纖維素紅色復合物，即使消滅單菌落也不能確定其為纖維素分解菌現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌一、纖維素與纖維素酶

1．纖維素①根本單位：葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，①含量：是地球上含量最豐富的多糖類物質。①分布：棉花是自然界中纖維素含量最高的自然產物，木材、作物秸稈等也富含纖維素?！?．纖維素酶①種類：纖維素酶是一種復合酶C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，1 ①作用：C、C 酶使纖維素分解成纖維二糖，葡萄糖苷酶將纖維二糖分解成葡萄糖。1 ★二、纖維素分解菌的篩選篩選方法：剛果紅染色法。能夠通過顏色反響直接對微生物進展篩選。多糖物質形成紅色復合物，當纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅－纖維素的復合物就無法形成，培育基中會消滅以纖維素分解菌為中心的透亮圈。這樣，我們就可以通過是否產生透亮圈來篩選纖維素分解菌。染色方法：一種是先培育微生物，再參加剛果紅進展顏色反響；另一種是在倒平板時就參加剛果紅。NaCL作用：漂洗作用，洗去與纖維素結合不結實的剛果紅，以免消滅的透亮圈不夠清楚。三、試驗設計★土壤取樣→選擇培育→梯度稀釋→將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培育基上→選擇產生透亮圈的菌落〔其次步是否需要，應依據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量的多少來確定〕土壤采集：選擇富含纖維素的環(huán)境。選擇培育：目的：增加纖維素分解菌的濃度，以確保能夠從樣品中分別到所需要的微生物。30ml選擇培育基〔液體培育基〕的錐形瓶中，固定在搖床上，在肯定溫度下振蕩培育2-2d，直至培育液渾濁。梯度稀釋：涂布培育：將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培育基上，是固體培育基篩選菌株：剛果紅染色法，選擇產生透亮圈的菌落。四、課題延長1、為確定得到的透亮圈中的菌落是纖維素分解菌，需要進展發(fā)酵產纖維素酶的試驗，2、產纖維素酶的發(fā)酵方法有液體發(fā)酵和固體發(fā)酵兩種。2.纖維素酶的測定方法：對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產生的葡萄糖進展定量的測定。疑難解答為什么要在富含纖維素的環(huán)境中查找纖維素分解菌？答：由于生物與環(huán)境的相互依存關系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對提高，因此從這種土樣中獲得目的微生物的幾率要高于一般環(huán)境。將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認為濾紙應當埋進土壤多深？