2012同等學(xué)力分子生物學(xué)講義老師

第三章細(xì)胞信號傳遞受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)蛋白、轉(zhuǎn)錄因1傳遞途

G蛋白偶聯(lián)

組分簡介G 激酶(RTK)

2根據(jù)信息物質(zhì)的特點(diǎn)及作用方式將其分為1、局部化學(xué)介質(zhì)（旁分泌信號）：如生長因子細(xì)胞生長抑素等34、氣體信3（一）細(xì)胞間和細(xì)胞內(nèi)的信號分細(xì)胞間信號分細(xì)胞內(nèi)信號分（調(diào)控表達(dá)類DAG(二?；视?類固醇、NO和COIP3（1,4,5-肌醇三磷酸和 （二）氣體信號分子 硝酸甘油可產(chǎn)生NO5NO的調(diào)節(jié)作用：主要通過激活鳥苷酸環(huán)化引起鳥苷酸環(huán)化酶構(gòu)象改變,酶活性增高cGMP作為第二信使，產(chǎn)生生理效（平滑肌舒張6膜受體G蛋白偶聯(lián)受體（七跨膜螺旋）胞內(nèi)受體7（9經(jīng)膜受體起作用的信號分親水性信號分子：促甲狀腺素、 素少數(shù)疏水性信號分子： 素經(jīng)胞內(nèi)受體(核內(nèi)受體)起作用的信號分子 甲狀腺素、視黃酸、維生素D等。特和DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)方與信號分子形成激素-核受體復(fù)合→進(jìn)入細(xì)胞核與特異的轉(zhuǎn)調(diào)控區(qū)結(jié)合→調(diào)節(jié)表達(dá)（一）G蛋白偶聯(lián)受體和G蛋白(鳥苷酸結(jié)合蛋白G蛋白偶聯(lián)受G蛋特單一多肽鏈，含7螺旋。N端組成：由α三功能:G有GTPase段C3是G蛋白結(jié)合位點(diǎn)配體-G- GsG 激活G蛋白。 G蛋白（guanylatebinding是一類能和GTP或GDP相結(jié)合、位于細(xì)胞漿面的外周蛋白，由、、三個(gè)亞基組成。非活化型以GDP結(jié)合活化型亞基與GTP結(jié)合并導(dǎo)致二聚體G種 效應(yīng)分 細(xì)胞內(nèi)信 靶分 AC AC

磷脂酶c 二酯酶活

Ca2+,IP3

cAMP途徑（cAMP-PKA途徑）G腺苷酸環(huán)化酶Ca2+途徑（Ca2+-PKC途徑）：GqPLC 的（以β-腎上腺素受體介導(dǎo)的信號傳遞途徑為例

GTP和Gβγ

G-GTP結(jié)合并激活腺苷酸腺苷酸環(huán)化酶催化ATP

激素激素-Gs腺苷酸環(huán)化酶PKAcAMP的作用機(jī)理及PKA的激活機(jī)PKA的激R為調(diào)節(jié)亞基，可與結(jié)合PKA的激當(dāng)4分子cAMP與2個(gè)R結(jié)合后，R脫落，游離的C蛋白激酶活性 將NAD+的ADP核糖基團(tuán)轉(zhuǎn)移到G的ArgCys殘基上，使GGTPase活性，抑制GTP的水解，造成腺苷酸環(huán)化酶的持續(xù)激使Gi蛋白的α亞基ADP核糖基化 蛋白α亞基上的GDP被GTP取代，G蛋白GDP型(GDP三聚體)，失去對腺苷酸環(huán)霍亂毒素霍亂毒素

+C+N

G- 2 ONCN

+（有GTPase活性 CH2 G-GTP （無GTPase活性 （三）Ca2+信號傳遞途磷脂酶CPLC)催化DAG和IP3受受體激活GqPLC水解PIP2產(chǎn)生IP3和 +DAG、IP3的功 DAG：位于質(zhì)膜上，在磷脂酰絲氨酸和協(xié)同下激活PKCCa2+信號傳遞途徑G蛋白

Gq激活

水解

的Ca2+通道

釋放Ca2+， 激活蛋白激酶

PKC影響調(diào) 表IP3：受體Tyr激酶(RTK

兼有受體酶內(nèi)Tyr激酶25(ReceptorTyrosineKinase,絕大多數(shù)生長因子的受體：分6表皮生長因子受體（epidermalgrowth神經(jīng)生長因子受體血小板衍生生長因子-11個(gè)跨膜α螺旋，C端：胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域，有Tyr激酶活性RTK的靶蛋白 接頭蛋 SH2：識別并結(jié)合活化RTK的P-PP-Tyr

SOSP-TyrPGTP型（有活性）和GDP型（無活性Ras蛋白可水解酶活化蛋白(GAP)在有/無活性形式間轉(zhuǎn)換，Ser/Thr激酶級聯(lián)反應(yīng)。Ras-GDPGEP、 Ras-4、RTK-Ras-MAPK信號傳遞途生長因子RTK→→SOS蛋白（GEF）→Ras蛋→Raf蛋白（S/T激酶，MAPKKK→MEK蛋白（T/Y激酶→MAPK（S/T激酶功能：生生長因子→RTK→Ras→RafPPPPPPPmRNA PP1、受體型鳥苷酸環(huán)化酶：心鈉素(ANP)受ANP受體：腎細(xì)胞、血管平滑ANP與受體結(jié)合→激活鳥苷酸環(huán)化→激活PKG（Ser/Thr激酶2、受體型Tyr磷酸酶：白細(xì)胞表面的Tyr激酶使靶蛋白的Tyr磷酸化，磷酸酶可去磷酸基團(tuán)Tyr激 P-Tyr磷酸 如轉(zhuǎn)化生長因子受體(TGF-功能I、II型：具有蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶活I(lǐng)I型受體將I型受體磷酸化并激活I(lǐng)型受體的功能是將轉(zhuǎn)錄因子Smad磷酸化，使Smad進(jìn)入核內(nèi)，調(diào)節(jié)某些的轉(zhuǎn)錄III型受體：幫助TGF-β因子接近I型和II型受體。僅有受體功能，無酶的催化功紅細(xì)胞生成素(EPO)受體、干擾素(INF)EPO與受體結(jié)激活靶細(xì)胞內(nèi)的Tyr激酶靶蛋白磷酸

第四章糖蛋白、蛋白聚糖Glycoproteinand由共價(jià)鍵連接的糖－蛋白質(zhì)復(fù)合物（一）糖蛋白定義一種或多種糖以共價(jià)鍵連接到肽鏈上的蛋白質(zhì)特點(diǎn)現(xiàn)為蛋白質(zhì)的特性。每條糖鏈含約<15個(gè)單糖分布：細(xì)胞膜、溶酶體、細(xì)胞外單糖的種類及糖苷鍵 糖苷鍵糖環(huán)結(jié)

8種（多為D型2種構(gòu)型（α、2種（六元吡喃、五元呋喃糖鏈與蛋白質(zhì)的連接方式：N-連接，O-連參與分子識別和細(xì)胞識別作用（最重要（二）蛋白聚糖定 特糖占比例大，約一半以上，具有多糖性每條糖鏈平均含約80個(gè)單糖分組蛋糖胺聚糖：糖胺（葡萄糖胺、半乳糖胺糖醛酸（葡萄糖醛酸等體內(nèi)重要的糖胺聚（6種

抗凝血（肝素 Ac-β-(Asn-X-Ser/Thr)白連以N-糖苷鍵或O-（同糖蛋白方點(diǎn)理功 第九 表達(dá)調(diào)

乳 色氨

表達(dá)(geneexpression遺傳信息的經(jīng)過轉(zhuǎn)錄、翻譯合成過程（即轉(zhuǎn)錄及翻譯的過程）。 表達(dá)(constitutive2、適應(yīng)性表達(dá)(adaptive 表達(dá)(constitutive在發(fā)育的任一階段都能在大多數(shù)細(xì)胞中持續(xù)進(jìn)行的表達(dá)。其表達(dá)產(chǎn)物通常受環(huán)境因素的影響。這類通常被稱為管家（housekeegene）。 2、適應(yīng)性表達(dá)(adaptive 誘導(dǎo) 阻遏(repression)： 表達(dá)調(diào)控（generegulation）信息（相同的結(jié)構(gòu)），表達(dá)特定數(shù)量的特定的過程。（對表達(dá)過程的調(diào)節(jié) 轉(zhuǎn)錄水平 激活及轉(zhuǎn)錄起始 是核酸中遺傳信息的遺全部DNARNA中的RNA序列編碼序列（coding 非編碼序列（noncoding2、的調(diào)控序列 譯的DN 斷,含 調(diào)控序列,是非編碼序列。順式作用元件（cis-actingelement）指與結(jié)構(gòu)表達(dá)調(diào)控相關(guān)、能夠被調(diào)控蛋白特異性識別和結(jié)合、可影響自身表達(dá)活性的特異性DNA序列。通常是非編碼序列原核生物調(diào)控序列：啟動子真核生物的順式作用元件反應(yīng)元件（responseelement）、poly（A）加尾信號等 原核生 調(diào)控元件啟動子（RNA聚合酶識別、結(jié)合子至少有一個(gè)啟動子,一般在第一 5’側(cè)上游 結(jié)群 起始點(diǎn)上游-10和-35bp區(qū)域。BAD共有序

-35 -10 AArAAAA

RNA轉(zhuǎn)錄起終止子（terminato）： （operato）：原核生 的結(jié)

structural 啟動子（promoter 并啟動轉(zhuǎn)錄的DNA序列真核生物啟動子元件是TATA盒，幾乎所已發(fā)現(xiàn)的真 的啟動子均有此序列TATA盒序列的完整性與準(zhǔn)確影響其功 轉(zhuǎn)錄起始上游-25~-30bp，是轉(zhuǎn)錄因子TFIID的結(jié)合位點(diǎn)。作用：TATA盒與TFIID結(jié)合，再與RNA聚合酶II結(jié)合成復(fù)合物，啟動 TATA盒結(jié)合蛋白(TBP)是TFIID的亞基,序列：TATAAAA或啟動子可以分為兩種 啟動子元件(corepromoterelement)RNA聚合酶起始轉(zhuǎn)錄所必需的最小的DNA序列,包括轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)及其上游-25/-30bp處的TATA盒核和產(chǎn)生基礎(chǔ)水平的轉(zhuǎn)錄②上游啟動子元件(upstreampromoterelements)：用因子結(jié)合，調(diào) 的轉(zhuǎn)錄效率種類：位于-70bp附近的CAAT盒、GC盒和CACA作用：與相應(yīng)的蛋白因子結(jié)合，能提高或改變轉(zhuǎn)效率 調(diào)控（常為增強(qiáng)）鄰近的轉(zhuǎn)錄活性。 部位：一般位于轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游-100~-300bp處 特點(diǎn)：1增強(qiáng)子的功能與其位置和方向無關(guān)必須與啟動子共同起作有些增強(qiáng)子具有組織特異有些增強(qiáng)子屬于可誘導(dǎo)增強(qiáng) 5′--------AATAAA5′--------AATAAA----------GT------

含有II ，含有II，AATAAA順序及下游GT或T富在mRNA3’200個(gè)A。 調(diào)控序

結(jié) 調(diào)控序5′

3p開放閱讀框：openreadingframe非翻譯區(qū)：untranslatedregions 3.2x109 約為2.53萬（二）真 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子 （三 子的調(diào)控方式負(fù)調(diào)節(jié)方式為主—阻遏蛋白抑 轉(zhuǎn)兼有正調(diào)節(jié)方（一）轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控） 組成：包括依次排列著的啟動子(P) 序列(和3個(gè)結(jié) Y）：編碼-半乳糖苷乙?；D(zhuǎn)移酶cAMP-CAP的正性調(diào)乳 子的結(jié)調(diào)控 結(jié)II

OOayzP序z：ayzP序CAP結(jié)合位 CAP結(jié)合位乳糖 子的調(diào)控元件（5’3’2(蛋白質(zhì)調(diào) I

序列O)阻遏蛋白（4相同亞基旋-轉(zhuǎn)角-螺旋,即HTHa 調(diào)節(jié)I產(chǎn)生阻遏蛋白，阻遏蛋白與序列結(jié)合，子RNA聚合酶LacZYA。當(dāng)細(xì)胞中有乳糖或其他誘導(dǎo)物如白便與半乳糖或誘導(dǎo)物結(jié)合,轉(zhuǎn)錄, 阻AYZOIAYZOI阻遏蛋

乳 子被誘導(dǎo)物開 AYZOIAYZOI阻遏蛋

啟動轉(zhuǎn) 半乳 乳有乳糖存在cAMP-CAP系統(tǒng)的正調(diào) cAMPCAP結(jié)合位點(diǎn)受cAMP-CAP的正調(diào)節(jié)環(huán)化酶，降低cAMP的濃度葡萄糖濃度低降解物少,cAMP→cAMP-CAP復(fù)合物與DNA結(jié)RNA轉(zhuǎn)錄（利用其他糖供能葡萄糖濃度高降解物多cAMP→cAMP與CAP結(jié)合受阻→抑制RNA轉(zhuǎn)AYAYZOP無葡萄糖，cAMP濃度高 葡萄糖葡萄糖cAMP濃度ＩOＩO無轉(zhuǎn)cAMPＩＩ

OO 組成包括依次排列著的啟動子(P) 序列(和5個(gè)結(jié) （編碼色氨酸合成所需的酶） ——R由r 編碼,是獨(dú)立的轉(zhuǎn)錄單位。表達(dá)產(chǎn)物是阻遏蛋白，結(jié)合 序列作用—當(dāng)環(huán)境中色氨酸充足時(shí)，抑制色氨酸 色氨酸 子的調(diào)RR 結(jié) 在環(huán)境色氨酸供應(yīng)充分時(shí),抑制色氨酸 調(diào)節(jié) 結(jié)ABCDERNAABCDE

Trp

Trp

子 子產(chǎn)生mRNA的5’端有 34區(qū)互補(bǔ)形成的莖-環(huán)結(jié)構(gòu)，莖部富含GC,3’端有7個(gè)連續(xù)的U,導(dǎo)肽(十四肽),第10、11子為trp子，其終止子位于12環(huán)境中Trp供應(yīng)充分，前導(dǎo)肽的1412區(qū)，使3區(qū)和4區(qū)堿基互補(bǔ)，形成衰減子結(jié)構(gòu)，轉(zhuǎn)錄 PO

前導(dǎo)

終

14aa前導(dǎo)肽編碼區(qū):包含序列14aa前導(dǎo)肽編碼區(qū):包含序列

…形形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)能力強(qiáng)弱序列1/2>序列2/3>序列前導(dǎo)

RNA聚合 UUUU

33可使轉(zhuǎn)錄終4UUUUUUU前導(dǎo)

1.當(dāng)色氨酸濃度高前導(dǎo)

Trp合成酶系相結(jié) 被轉(zhuǎn)RNA聚合酶結(jié)21糖

UUUUU……

序列、不能形成衰減子結(jié)2.當(dāng)色氨酸濃度(二)翻譯水平調(diào)節(jié) 細(xì)菌 表達(dá)系統(tǒng)由70種蛋白質(zhì)組成，其中大部分是核蛋白質(zhì)，及RNApol的亞基 子內(nèi),,,α,f和。6個(gè)子的共同特征是，在同一個(gè)操縱子內(nèi),一個(gè)編碼的蛋白質(zhì)能抑制另一個(gè)（或自身）的表達(dá)。(三其他——反義影響mRNA的穩(wěn)定性反義RNA與和mRNA形成的雙鏈 分別在細(xì)胞核與細(xì)胞 mRNA降解 （失去一段序列或轉(zhuǎn)移到新位點(diǎn)④DNA甲基化和異染色質(zhì)DNA甲基化（A、C、CG或5-mC、6-DNA甲基化程度CpG島（CpG是指DNA上一個(gè)區(qū)域，此區(qū)(C)和鳥嘌呤(G)，以及使兩者在脊椎動物組DNA中,富含CpG二核苷酸的區(qū)域呈隨機(jī)分布，像大海中的一座座孤島，稱為“CpG島”。 組中CpG島的特點(diǎn) 長度為1~2kb的DN 一般DNA序列高10倍，GC含量約60%（一般DNA序列40%）經(jīng)常存在 位點(diǎn)（如啟動子區(qū)域作用：CpG島與調(diào) 在結(jié)構(gòu)異染色質(zhì)（heterochromatin）是轉(zhuǎn)錄非活性常染色質(zhì)轉(zhuǎn)錄活性區(qū)域?qū)怂崦福―NaseI）敏感，特別 (hypersensitivesites)。很 感位點(diǎn)是調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的結(jié)合序列，DNA甲基化程度低染色質(zhì)重塑（chromatin化稱為染色質(zhì)重塑?；罨鞍踪|(zhì)可以通過改變的核小體的組蛋白(H2A,H2B,H3,H4)酸與蘇氨酸殘基的修飾,如磷酸化、乙?；M蛋白共價(jià)修飾方式：N泛素化、ADP核糖基 (三)轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)節(jié)指mRNA的轉(zhuǎn)錄后加工包括5’保證mRNA在轉(zhuǎn)錄過程中不被降真核生物轉(zhuǎn)錄生成的mRNA在轉(zhuǎn)錄后保護(hù)轉(zhuǎn)錄體mRNA不受5’外切酶降解促進(jìn)mRNA(通過帽結(jié)mRNA剪定義：真核細(xì) 表達(dá)所轉(zhuǎn)錄出的 選擇性剪接（alternativesplicing）有 的mRNA前體,按不同方式剪接產(chǎn)生2種以上mRNA,翻譯產(chǎn)生多種蛋白質(zhì)(Alternativesplicing)在特定條件下可與另一個(gè)內(nèi)含子3’受點(diǎn)進(jìn)行 選擇性剪接產(chǎn)生型和型肌鈣蛋

mRNA的選擇性剪接的意選擇性剪接可以使同一產(chǎn)生不同由于剪接的多樣化，一個(gè)在轉(zhuǎn)錄或的蛋白質(zhì)。人類編碼蛋白的3-3.5萬個(gè)10萬種mRNA的編輯(mRNAmRNA人類apoBmRNAapoapo（分子量為500apo（分子量為240 RNA編輯作用說明，的編碼序列經(jīng)過轉(zhuǎn)錄化加工(differentialRNAprocessing)。

翻譯起始因子5’端非編碼區(qū)長度影響翻譯起始效率及mRNA穩(wěn)定性：主要取決于3’-UTR結(jié)poly(A)尾增加mRNA穩(wěn)定去polyA尾有關(guān)。3’-UTR中富含AU序列導(dǎo)致mRNA不穩(wěn)（3’-UTR中含AUUUA的拷貝數(shù)3、RNA結(jié)合蛋白調(diào)節(jié)翻譯 鐵蛋白mRNA3’-UTR富含AU區(qū)可IRE結(jié)合蛋白(IRE-BP):可與IRE結(jié)合

(五)翻譯后水平的調(diào) 原核與真 表達(dá)調(diào)控的特原 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)特主要在轉(zhuǎn)錄水平 子模型的普阻遏蛋白與阻遏機(jī)

真 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)特存在多級調(diào)控，轉(zhuǎn) 結(jié)構(gòu)發(fā)生變正性調(diào)節(jié)占主第十章 腫 的概腫 攜帶的

RNA腫 攜帶的 原

原 的概原 的特原 的激癌抑抑

的表達(dá)產(chǎn)DNA和RNA

機(jī)（一）腫

攜帶的 ,概念：能使敏感宿主產(chǎn)生腫瘤或使培養(yǎng)細(xì)。轉(zhuǎn)化細(xì)胞吸收并整合外源而發(fā)生持久的、可遺傳的改變的過程；或以腫瘤或劑分類：DNA腫瘤(全部攜帶癌)RNA腫瘤（均為逆轉(zhuǎn)錄，部分 ，長末端重復(fù)序列LTR）

oncogene，概念：腫 中能使敏感的宿主產(chǎn)生腫或使培養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化

早期表達(dá)在RNA

逆轉(zhuǎn)

的轉(zhuǎn)化作用一般較慢來源于宿主細(xì) 組，在宿主細(xì)

組整合過程示意RNA

細(xì) 組再 顆

宿主

(二)原 （proto-細(xì)胞癌,cellularoncogene概念：存在于正常生物細(xì)胞組中，與癌高度同源；以調(diào)節(jié)細(xì)胞生原 激活的主要機(jī)制插入突變（獲得啟動子與增強(qiáng)子）:插入活異常（缺失/獲得、移位DNA點(diǎn)突變或缺

插入突變（獲得啟動子與增強(qiáng)子當(dāng)逆轉(zhuǎn)錄細(xì)胞后，組啟動子和增強(qiáng)子）插入到細(xì)胞原癌附近游鄰近的轉(zhuǎn)錄和影響附近結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄水平，使原癌過度表達(dá)或由不表達(dá)變?yōu)楸磉_(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生。c的激活：獲得啟動子與增強(qiáng)(genetranslocationandgenerearrangement 易位后產(chǎn)生新的蛋白

c被免疫球蛋白增強(qiáng)子激活機(jī)制c致c

8易 不表E高表

可能導(dǎo)致的異常表達(dá)。 及bcr的特異融合 9,

mRNA

l融合蛋白（具PTK活性

s光鏡下檢查雙微體由于堿基置換或缺失導(dǎo)致原 達(dá)產(chǎn)物結(jié)構(gòu)和功能異常并 性。如癌第12 Ras蛋白的GlyValRas蛋白活性破壞,保持激活狀態(tài),引 Ras癌,蛋白

RAS有活性的Ras

輸出信 主要類

表達(dá)產(chǎn)o表達(dá)產(chǎn) o表達(dá)產(chǎn) 存

細(xì)胞內(nèi)信號物質(zhì)GTP/GDP結(jié)合蛋白(小G蛋白

與EGFR相似，但缺N-體結(jié)合區(qū)導(dǎo)致酪氨酸激酶持GTP/GDP結(jié)合蛋白(小G蛋白

二、抑癌（anti-(一)抑癌的概抑癌：細(xì)胞內(nèi)存在的一類控制細(xì)胞生長、遏制腫瘤形成的。它們在細(xì)胞從遺傳學(xué)角度來看，癌的突變是顯性的，而抑癌突變是隱性的，通常需要兩個(gè)等位均發(fā)生突變失活才能起作用，所以又稱為隱性癌。許多抑癌的表達(dá)產(chǎn)物在細(xì)胞周期中發(fā)

（二 與 位： 表達(dá)產(chǎn)物：Rb蛋化學(xué)修飾與活性狀態(tài)/的Rb蛋白作為細(xì)胞周期關(guān)卡，在細(xì)胞G1期抑用。（在細(xì)胞G期起抑制作用 G0G1

E-

S E-E- 位： 表達(dá)產(chǎn)物：P53蛋白①對細(xì)胞周期起負(fù)調(diào)控作用，抑制細(xì)胞從G1進(jìn)入S期②激活DNA損傷修復(fù)蛋白，保持 DNA腫瘤 （DNA腫瘤 DNA和RNA腫瘤 十一 本章基本內(nèi) cDNA文庫、PCR連接目 和載

目的的表達(dá)

1、工程是對進(jìn)行設(shè)計(jì)和改造的分子工程，包括重組、克隆和表達(dá)，其技術(shù)是在體外按照人的意愿，將不同來源的DNA分子通過酶切和拼接形成新的DNA分子（重組DNA分子）,將其大量，得到表達(dá)產(chǎn)物的技術(shù)2、克隆分子克?。?克隆DNA重組技術(shù)DNA經(jīng)限制性內(nèi)切酶切割后產(chǎn)生的片斷插入載體，形成DNA重組體，再導(dǎo)入宿主細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)（restrictionDNA的特異序列，并在識別位分類：分３種類型II型 II型限制性核酸內(nèi)切切割DNA后產(chǎn)生平末端或粘性末 H

?粘性末端（stickyendsorcohesiveends）:沿識別序列的對稱軸，對DNA的雙鏈同時(shí)交錯(cuò)切 H

定義：可以攜帶外源的載體，能夠?qū)胨拗骷?xì)胞，通過可以獲 ③含有多種限制酶的單一識別位點(diǎn)便于外源DNA的插入 組DNA文庫 斷插入克隆載 組的全部遺傳信息