GB/T 29393-2012柑桔黃龍病菌的檢疫檢測與鑒定

ICS6502001

B16..

中華人民共和國國家標準

GB/T29393—2012

柑桔黃龍病菌的檢疫檢測與鑒定

DetectionandidentificationofCandidatusliberobacterasiaticum

2012-12-31發(fā)布2013-03-01實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

GB/T29393—2012

前言

本標準按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由全國植物檢疫標準化技術(shù)委員會提出并歸口

(SAC/TC271)。

本標準起草單位全國農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心浙江省植物保護檢疫局

:、。

本標準主要起草人吳立峰嚴鐵林云彪項宇朱景全朱莉

:、、、、、。

Ⅰ

GB/T29393—2012

柑桔黃龍病菌的檢疫檢測與鑒定

1范圍

本標準規(guī)定了柑桔黃龍病菌亞洲種Candidatusliberobacterasiaticum的檢測與鑒

jagoueixetal.

定方法

。

本標準適用于植物檢疫過程中對柑桔黃龍病菌亞洲種的檢測與鑒定

。

2病菌基本信息

中文名柑桔黃龍病菌

:。

學(xué)名Candidatusliberobacterasiaticum

:jagoueixetal.

病害英文名

:CitrusHuanglongbingHLB。

屬薄壁菌門韌皮部桿菌屬Liberobacter

Gracilicutes、。

3方法原理

根據(jù)柑桔黃龍病菌侵染柑桔植株發(fā)病典型癥狀進行田間鑒定經(jīng)嫁接或經(jīng)柑桔木虱Diahorina

;(p

citri傳病后可根據(jù)木本指示植物發(fā)病癥狀鑒定聚合酶鏈反應(yīng)檢

),;(PolymeraseChainReaction,PCR)

測技術(shù)對柑桔黃龍病菌進行體外擴增可得到快速有效的鑒定結(jié)果

DNA,、。

4儀器及用具

紫外線透射儀或凝膠成像系統(tǒng)離心機核酸電泳儀計移液器

,,,pH,:10μL、20μL、100μL、

儀水浴器超純水系統(tǒng)電子天平

1000μL,PCR,、,。

5試劑與材料

緩沖液三羥甲基氨基甲烷鹽酸乙二胺四乙酸十二烷基硫酸鈉

TAE,()-(Tris-HCl),(EDTA),

乙酸鈉Taq酶緩沖液鎂離子2+脫氧核苷三

(SDS),(NaAc),,10×PCR,25mmol/L(Mg),20mmol/L

磷酸熒光染料瓊脂糖溴酚藍高錳酸鉀三氯甲烷氯仿異戊醇異丙醇

(dNTP),5μLDNA(GV),,,,(),,,

乙醇

。

6癥狀識別法

柑桔黃龍病主要鑒定依據(jù)是田間出現(xiàn)的葉片斑駁型黃化和黃梢葉片斑駁型黃化即葉片轉(zhuǎn)綠

“”“”。

后從主側(cè)脈附近和葉片基部開始黃化黃化部分擴展形成黃綠相間分布不均的斑駁后來可以全葉黃

、,,

化黃梢即在發(fā)病初期綠色樹冠上少部分新梢枝葉片黃化有些柑桔結(jié)果樹果實呈紅鼻子果在

。,?！啊?。

柑桔黃龍病區(qū)符合上述典型癥狀的病苗病樹可直接鑒定為柑桔黃龍病

、。

對難以下結(jié)論的疑似病苗病樹可根