醬腌菜檢測(cè)作業(yè)指導(dǎo)書(shū)

醬腌菜檢測(cè)作業(yè)指導(dǎo)書(shū)(總64頁(yè))--本頁(yè)僅作為文檔封面，使用時(shí)請(qǐng)直接刪除即可------1-醬腌菜檢測(cè)作業(yè)指導(dǎo)書(shū)醬腌菜檢測(cè)作業(yè)指導(dǎo)書(shū)醬腌菜檢測(cè)作業(yè)指導(dǎo)書(shū)TOC\o“1-1“\h\z\uHYPERLINK\l“_TOC_250010“第一章水分的測(cè)定 1HYPERLINK\l“_TOC_250009“其次章食鹽的測(cè)定… 5HYPERLINK\l“_TOC_250008“第三章總酸的測(cè)定… 8HYPERLINK\l“_TOC_250007“第四章復(fù)原糖和總糖的測(cè)定… 9HYPERLINK\l“_TOC_250006“第五章二氧化硫殘留的檢測(cè)… 11HYPERLINK\l“_TOC_250005“第六章亞硝酸鹽和硝酸鹽的測(cè)定… 12HYPERLINK\l“_TOC_250004“第七章總砷的測(cè)定… 16HYPERLINK\l“_TOC_250003“第八章鉛的測(cè)定… 18HYPERLINK\l“_TOC_250002“第九章大腸菌群的檢測(cè)… 20HYPERLINK\l“_TOC_250001“第十章菌落總數(shù)的測(cè)定… 25HYPERLINK\l“_TOC_250000“第十一章沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)… 29-2-第一章水分的測(cè)定執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：GB5009.3—2023第一法直接枯燥法原理利用食品中水分的物理性質(zhì)，在101.3kPa〔一個(gè)大氣壓〕，溫度101℃～該條件下能揮發(fā)的物質(zhì)，再通過(guò)枯燥前后的稱(chēng)量數(shù)值計(jì)算出水分的含量。試劑和材料除非另有規(guī)定，本方法中所用試劑均為分析純?！矁?yōu)級(jí)純〕、氫氧化鈉〔NaOH〕〔優(yōu)級(jí)純〕〔6mol/L〕100mL〕、氫氧化鈉溶液〔6mol/L〕〔24g100mL〕〔取用水洗去泥土的海砂或河砂0.5h0.5h，用水洗至105℃枯燥備用〕儀器和設(shè)備〔內(nèi)附有效枯燥劑〕、天平〔感量為0.1mg〕分析步驟101℃～105℃枯燥箱1.0h0.5h，稱(chēng)量，并2mg，即為恒重。將混合均勻的試樣快速磨2mm2g～10g試樣〔準(zhǔn)確至0.0001g〕，放入此稱(chēng)量瓶中，試樣厚度不超過(guò)5mm，如為疏松試樣，厚度不10mm101℃～1052h～4h0.5h后稱(chēng)量。然后再放入1h0.5h2mg，即為恒重。〔注：兩次恒重值在最終計(jì)算中，取最終一次的稱(chēng)量值。〕10g海砂及一根小玻棒，置于1.0h0.5h后稱(chēng)量，5g～10g試樣〔0.0001g〕，置于蒸發(fā)皿中，用小玻棒攪勻放在沸水浴上蒸干，并隨時(shí)攪拌，擦去皿底的水滴，置4h0.5h后稱(chēng)量。自“101℃～1051h左右“起依法操作。5分析結(jié)果的表述試樣中的水分的含量按式〔1〕進(jìn)展計(jì)算。式中：X——試樣中水分的含量，單位為克每百克〔g/100g)；-3-m1——稱(chēng)量瓶(加海砂、玻棒)和試樣的質(zhì)量，單位為克〔g〕；(加海砂、玻棒)和試樣枯燥后的質(zhì)量，單位為克〔g〕；m3——稱(chēng)量瓶(加海砂、玻棒)的質(zhì)量，單位為克〔g〕。水分含量≥1g/100g時(shí)，計(jì)算結(jié)果保存三位有效數(shù)字；水分含量＜1g/100g時(shí)，結(jié)果保存兩位有效數(shù)字。周密度5%。其次法 減壓枯燥法原理40kPa～53kPa壓力后加熱至60℃±水分的含量。儀器和設(shè)備真空枯燥箱、扁形鋁制或玻璃制稱(chēng)量瓶、枯燥器〔內(nèi)附有效枯燥劑〕、天平〔感量為0.1mg〕分析步驟用。2g～10g〔0.0001g〕試樣，放入真〔所需壓力一40kPa53kPa)60℃±5℃。關(guān)閉真空泵上的活塞，停頓抽氣，使真空枯燥箱內(nèi)保持肯定的溫度和壓力，經(jīng)4h后，翻開(kāi)活塞，-4-使空氣經(jīng)枯燥裝置緩緩?fù)ㄈ胫琳婵湛菰锵鋬?nèi)，待壓力恢復(fù)正常后再翻開(kāi)。取出2mg，即為恒重。分析結(jié)果的表述5。周密度10%。第三法 蒸餾法原理用于含較多其他揮發(fā)性物質(zhì)的食品，如油脂、香辛料等。試劑和材料〔化學(xué)純〕：取甲苯或二甲苯，先以水飽和后，分去水層，進(jìn)展蒸餾，收集餾出液備用。儀器和設(shè)備〕5mL，最小0.1mL，0.1mL。-5-1.250mL蒸餾瓶； 2.水分接收管，有刻度；3.冷凝管。圖1水分測(cè)定器0.1mg。分析步驟2mL～5mL，但最多取樣量不得mL)75mL，連接冷凝管與水分接收管，從冷凝管頂端注入甲苯，裝滿(mǎn)水分接收管。加熱漸漸蒸餾，使每秒鐘的餾出液為兩滴，待大局部水分蒸出后，加速蒸餾約每4端參加甲苯?jīng)_洗。如冷凝管壁附有水滴，可用附有小橡皮頭的銅絲擦下，再蒸餾片刻至接收管上部及冷凝管壁無(wú)水滴附著，接收管水平面保持10min不變?yōu)檎麴s終點(diǎn)，讀取接收管水層的容積。分析結(jié)果的表述試樣中水分的含量按式〔2〕進(jìn)展計(jì)算。式中：〔mL/100g〕〔20℃0.998，20g/mLV——接收管內(nèi)水的體積，單位為毫升〔mL〕；-5-m——試樣的質(zhì)量，單位為克〔g〕。位有效數(shù)字。周密度10%。第四法 卡爾?費(fèi)休法原理1mol1molC5H5N?2I+C5H5N?SO2+C5H5N+H2O+CH3OH2C5H5N?HI+C5H6N[SO4CH3]卡爾?-6-1:1的含量。試劑和材料卡爾?費(fèi)休試劑、無(wú)水甲醇〔CH 4O〕：優(yōu)級(jí)純卡爾?費(fèi)休水分測(cè)定儀、天平〔感量為0.1mg〕、分析步驟卡爾?費(fèi)休試劑的標(biāo)定〔容量法〕在反響瓶中加肯定體積〔浸沒(méi)鉑電極〕的甲醇，在攪拌下用卡爾?費(fèi)休試劑10mg〔0.0001g)，滴定至終點(diǎn)并記錄卡爾?費(fèi)休試劑的用量〔V〕?？?費(fèi)休試劑的滴定度按式〔3〕計(jì)算：式中：T——卡爾·費(fèi)休試劑的滴定度，單位為毫克每毫升〔mg/mL〕；M——水的質(zhì)量，單位為毫克〔mg〕；V——滴定水消耗的卡爾·費(fèi)休試劑的用量，單位為毫升〔mL〕。試樣前處理可粉碎的固體試樣要盡量粉碎，使之均勻。不易粉碎的試樣可切碎。試樣中水分的測(cè)定于反響瓶中加肯定體積的甲醇或卡爾·費(fèi)休測(cè)定儀中規(guī)定的溶劑浸沒(méi)鉑電極，在攪拌下用卡爾·費(fèi)休試劑滴定至終點(diǎn)?？焖賹⒁兹苡谏鲜鋈軇┑脑嚇又苯訁⒓拥味ū校粚?duì)于不易溶解的試樣，應(yīng)承受對(duì)滴定杯進(jìn)展加熱或參加已測(cè)定水分的其他溶劑關(guān)心溶解后用卡爾?費(fèi)休試劑滴定至終點(diǎn)。建議承受庫(kù)侖法測(cè)10g，容量法應(yīng)大于100g。對(duì)于某些需要較長(zhǎng)時(shí)間滴定的試樣，需要扣除其漂移量。漂移量的測(cè)定-6-在滴定杯中參加與測(cè)定樣品全都的溶劑，并滴定至終點(diǎn)，放置不少于10min〔D〕。分析結(jié)果的表述固體試樣中水分的含量按式〔4〕，液體試樣中水分的含量按式〔5〕進(jìn)展計(jì)算。式中：X——試樣中水分的含量，單位為克每百克〔g/100g〕；V1——滴定樣品時(shí)卡爾?費(fèi)休試劑體積，單位為毫升〔mL〕；T——卡爾?費(fèi)休試劑的滴定度，單位為克每毫升〔g/mL〕；M——樣品質(zhì)量，單位為克〔g〕；V2——液體樣品體積，單位為毫升〔mL〕；D——漂移量，單位為毫升每分鐘〔mL/min〕；〔min〕；——液體樣品的密度，單位為克每毫升〔g/mL)。-7-<1g/100g時(shí)，計(jì)算結(jié)果保存兩位有效數(shù)字。周密度10%。-7-其次章食鹽的測(cè)定執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：GB12457-2023食品中氯化鈉的測(cè)定-8--9-補(bǔ)充：SB/T10213—1994醬腌菜理化檢驗(yàn)方法試劑硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液〔C(AgNO3)=0.1000mol/lGB601100ml。樣品處理5.000g～10.000g，250ml100ml200ml，然后用濾紙過(guò)濾，此濾液為樣品稀釋液，供測(cè)定用。測(cè)定50ml，100g/l酸鉀指示劑0.5ml，用0.1000mol/l硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至剛顯磚紅色即為終V。計(jì)算〕含量，g/100mlC——硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液實(shí)際濃度，mol/l；V——樣品耗用硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，ml；V0——空白耗用硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，ml；C(AgNO3)=1.000mol/l〕相當(dāng)?shù)穆然c的重量，g；W——樣品質(zhì)量，g；-10--11--11-ml。允許誤差：0.20g/100g第三章總酸的測(cè)定原理豆制品中含有多種有機(jī)酸，用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，以乳酸計(jì)算。試劑氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液〔C=0.050mol/L〕、酚酞指示液〔稱(chēng)取0.50g酚酞用乙醇50ml〕儀器磁力攪拌器、酸度計(jì)分析步驟試樣處理150ml100ml紙或脫脂棉過(guò)濾，濾液備用。酸度計(jì)法150ml80mlpH8.290.0ml100.0ml空白試驗(yàn)。酚酞指示液滴定法150ml50ml，33指示液，用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至初現(xiàn)粉紅色，0.5min結(jié)果計(jì)算見(jiàn)式〔1〕.式中：X——試樣中的酸度〔以乳酸計(jì)〕，單位為克每百克〔g/100g〕；〔ml〕；試劑空白消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，單位為毫升〔ml〕；V3——滴定用試樣溶液的體積，單位為毫升〔ml〕；C——?dú)溲趸c標(biāo)準(zhǔn)溶液實(shí)際濃度看，單位為摩爾每升〔mol/ml〕；0.09——與1.00ml氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液(C=1.000mol/l)相當(dāng)?shù)娜樗岬馁|(zhì)量，單位為克〔g〕〔g〕。計(jì)算結(jié)果保存兩位有效數(shù)字。周密度5.-12-第四章復(fù)原糖和總糖的測(cè)定執(zhí)行SB/T10213—1994醬腌菜理化檢驗(yàn)方法一、復(fù)原糖的測(cè)定試劑0.05g1000ml50g，54g4g1000ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：1g/l100℃烘箱中烘至恒重的無(wú)水葡萄糖1000ml水反復(fù)沖洗燒杯，洗液一并倒入容量瓶，加濃鹽酸5ml，用蒸餾水稀釋至刻度。樣品處理5.000g～10.000g，250ml100ml200ml，然后用濾紙過(guò)濾，此濾液為樣品稀釋液，供測(cè)定用。操作空白滴定5.00ml150ml10ml〔15min2min30s3s～4s〔空白滴定，預(yù)備滴1g/l-12-0.5ml～1mlA。預(yù)備滴定5.00ml150ml10ml1.00ml，依據(jù)樣品含糖量的凹凸〔估量數(shù)〕，用糖滴管參加不定量的30s3s～4s1g/l葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液，至藍(lán)紫色消逝即為終點(diǎn)。記錄沸騰前后共耗用標(biāo)準(zhǔn)糖液的毫升數(shù)。正式滴定5.00ml150ml10ml0.5ml1g/l30s3s～4s1g/lB。計(jì)算式中：X5——樣品中復(fù)原糖的含量，g/100g；，ml；，ml；1g/l葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液的含糖量；W——所用稀釋液相當(dāng)樣品重量，g。-13-允許誤差：0.05g/100ml。-14-二、全糖的測(cè)定試劑斐林溶液甲液：稱(chēng)取69.3g硫酸銅，加蒸餾水溶解配成1000ml。斐林溶液乙液：稱(chēng)取346g酒石酸鉀鈉和100g氫氧化鈉，加蒸餾水溶解，配成1000ml。1％次甲基藍(lán)指示劑、200g/l100g/l6mol/l2g/l[〔20％V/V〕乙醇溶液配制]斐林氏溶液的標(biāo)定：在分析天平上準(zhǔn)確稱(chēng)取經(jīng)烘干冷卻的分析純葡萄糖250ml用。2.5ml，150ml20ml，置電爐上加熱至沸，用配好的葡萄糖溶液滴定至溶液變紅時(shí)，參加次甲12min，1滴，連續(xù)用葡萄糖溶液滴定至終點(diǎn)。按下式計(jì)算其濃度：W——葡萄糖的重量，g；V——滴定時(shí)消耗葡萄糖溶液的體積，ml。操作樣品切碎混合，準(zhǔn)確稱(chēng)取3.000～4.000g樣品，置于乳缽中參加少量蒸餾200g/ml15ml～-13-15ml～20ml100g/l溶液。至不再產(chǎn)生沉淀為止，加水至刻度，搖勻，過(guò)濾。6ml/l10ml70℃1℃水10min，2g/l1200g/l100ml品中總糖。計(jì)算X6——樣品中全糖的含量〔以葡萄糖計(jì)〕，g/100g；W——樣品重量，g；V——滴定時(shí)消耗樣品溶液的量，ml；允許誤差：0.5g/100ml.留意事項(xiàng)檢驗(yàn)方法中，所用試劑除特別注明者外均為分析純。允許誤差，取其平均值作為分析結(jié)果。-14-第五章二氧化硫殘留的檢測(cè)GB/T5009.34—2023其次法 蒸餾法原理糖漿、果脯。試劑鹽酸〔1:1〕：濃鹽酸用水稀釋1倍。乙酸鉛溶液〔20g/l〕：2g100ml。[C(1/2I2)=0.010mol/l]:將碘標(biāo)準(zhǔn)溶液〔0.100mol/l〕用水稀10淀粉指示液〔10g/l〕:1g100ml沸水中，隨加隨攪拌，煮沸2min，放冷，備用，此溶液應(yīng)臨用時(shí)配。儀器全玻璃蒸餾器、碘量瓶、酸式滴定管分析步驟試樣處理固體試樣用刀切或剪刀剪成碎末后混勻，稱(chēng)取約5.00g均勻試樣〔試樣量5.0ml10.0ml500ml底蒸餾燒瓶中。-14-測(cè)定蒸餾：將稱(chēng)好的試樣置入圓底蒸餾燒瓶中，參加250ml水，裝上冷凝管，25ml〔20g/l〕吸取液中，然后在蒸餾瓶10ml〔1:1〕，200ml。在檢測(cè)試樣的同時(shí)要做空白試驗(yàn)。滴定：向取下的碘量瓶中依次參加10ml濃鹽酸、1ml淀粉指示液〔0.010mol/l〕30s不退色為止。計(jì)算試樣中的二氧化硫總含量按下式進(jìn)展計(jì)算。式中：X——試樣中的二氧化硫總含量，單位為克每千克〔g/kg〕；滴定試樣所用碘標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液〔0.010mol/l〕的體積，單位為毫升〔ml〕；滴定試劑空白所用碘標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液〔0.010mol/l〕的體積，單位為毫升〔ml〕；m——試樣質(zhì)量，單位為克〔g〕-15---15-[C(1/2I2)=1.0mol/l]相當(dāng)?shù)亩趸虻馁|(zhì)量，單位為克〔g〕。第六章亞硝酸鹽和硝酸鹽的測(cè)定GB5009.33—2023食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測(cè)定分光光度法原理亞硝酸鹽承受鹽酸萘乙二胺法測(cè)定，硝酸鹽承受鎘柱復(fù)原法測(cè)定。含量，即得試樣中硝酸鹽含量。試劑和材料除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純。水為GB/T6682規(guī)定的二級(jí)水或去離子水。亞鐵氰化鉀〔K4Fe(CN)6·3H2O〕。乙酸鋅〔Zn(CH3COO)2·2H2O〕。冰醋酸〔CH3COOH〕。硼酸鈉〔Na2B4O7·10H2O〕。2.5鹽酸〔ρ＝1.19g/mL〕。2.6氨水〔25%〕。對(duì)氨基苯磺酸(C6H7NO3S〕。鹽酸萘乙二胺(C12H14N2·2HCl〕。亞硝酸鈉〔NaNO2〕。硝酸鈉〔NaNO3〕。-17--17-鋅皮或鋅棒。硫酸鎘。106.0g亞鐵氰化鉀〔2.1〕，用水溶1000mL。乙酸鋅溶液(220g/L220.0g〔2.2〕，先加30mL冰醋酸1000mL。5.0g〔2.4〕，100mL熱水中，冷卻后備用。2.16〔pH9.6～9.7〕：30mL〔2.5〕，100mL水，混1000mL，pH9.6～9.7?！?.16〕，加水稀釋至500mL，混勻。鹽酸(0.1mol/L5mL600mL。0.4ｇ對(duì)氨基苯磺酸〔2.7〕，100mL20%〔V/V〕鹽酸中，置棕色瓶中混勻，避光保存。鹽酸萘乙二胺溶液〔2g/L〕：0.2g鹽酸萘乙二胺〔2.8〕，溶于100mL水中, 混勻后，置棕色瓶中，避光保存。2.21亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液〔200μg/mL〕：準(zhǔn)確稱(chēng)取0.1000ｇ于110℃～120℃枯燥500mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液〔5.0μg/mL〕：臨用前，吸取亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液200mL硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液〔200μg/mL，以亞硝酸鈉計(jì)〕：0.1232g500mL容量瓶中，并稀釋至刻度。硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液〔5μg/mL〕：臨用時(shí)吸取硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液2.50mL，置100mL儀器和設(shè)備天平〔0.1mg1mg〕、組織搗碎機(jī)、超聲波清洗器、恒溫枯燥箱、分光光度計(jì)鎘柱海綿狀鎘的制備：投入足夠的鋅皮或鋅棒于500mL 硫酸鎘溶液中，經(jīng)過(guò)3h～4h，當(dāng)其中的鎘全部被鋅置換后，用玻璃棒輕輕刮下，取出剩余鋅棒，使鎘沉底，傾去上層清液，以水用傾瀉法屢次洗滌，然后移入碎約2s，用水將金屬細(xì)粒洗至標(biāo)準(zhǔn)篩上，取20～40目之間的局部。鎘柱的裝填：如圖2。用水裝滿(mǎn)鎘柱玻璃管，并裝入2cm高的玻璃棉做墊，將玻璃棉壓向柱底時(shí)，應(yīng)將其中所包含的空氣全部排出，在輕小扣擊8cm～10cm1cm斗，末端要穿過(guò)橡皮塞與鎘柱玻璃管?chē)?yán)密連接。如無(wú)上述鎘柱玻璃管時(shí)，可以25mL，鎘柱不用時(shí)用水封蓋，隨時(shí)都要保持水平面在鎘層之上，不得使鎘層夾有氣泡。-18-〔0.1mol/L〕洗滌，再以25mL，最終用水掩蓋鎘柱。鎘柱復(fù)原效率的測(cè)定：吸取20mL硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液，參加5mL氨緩沖液的稀釋液，混勻后注入貯液漏斗，使流經(jīng)鎘柱復(fù)原，以原燒杯收集流出5mL10.0mL復(fù)原后的溶液〔10μg〕50mL4.40.00mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL……”起依法操作，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算測(cè)得結(jié)果，與參加量全都，復(fù)原效率應(yīng)大于98%為符合要求。復(fù)原效率計(jì)算復(fù)原效率按式〔2〕進(jìn)展計(jì)算。式中：X——復(fù)原效率，%；A——測(cè)得亞硝酸鈉的含量，單位為微克〔μg〕；10——測(cè)定用溶液相當(dāng)亞硝酸鈉的含量，單位為微克〔μg〕。分析步驟試樣的預(yù)處理加水量。提取-18-〔如制備過(guò)程中加水，應(yīng)按加水量折算〕，50mL12.5mL〔2.15〕，攪拌均勻，以70℃左右的水約300mL將試樣洗入500mL容量瓶中，于沸水浴中加熱15min，取出置冷水浴中冷卻，并放置至室溫。提取液凈化在振蕩上述提取液時(shí)參加5mL亞鐵氰化鉀溶液〔2.13〕,搖勻,再參加5mL30min,除去上層30mL,濾液備用。亞硝酸鹽的測(cè)定40.0mL50mL0.00mL、0.20mL、、0.60mL、0.80mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL用液〔相當(dāng)于0.0μｇ、1.0μｇ、2.0μｇ、3.0μｇ、4.0μｇ、5.0μｇ、7.5μｇ、10.0μｇ、12.5μｇ亞硝酸鈉〕，分別置50mL帶塞比色管中。于標(biāo)準(zhǔn)管與〔2.19〕，3min～5min(2.20)，15min2cm538nm時(shí)做試劑空白。硝酸鹽的測(cè)定鎘柱復(fù)原3mL/min～2mL/min～3mL/min〕。-19-5mL〔2.16〕，混合后注5mL將全部收集液如前再經(jīng)鎘柱復(fù)原一次，其次次流出液收集于100mL容20mL，洗液一并收集于同一容量瓶中，加水至刻度，混勻。亞硝酸鈉總量的測(cè)定10mL～20mL復(fù)原后的樣液于50mL11.40.00mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL……”起依法操作。分析結(jié)果的表述亞硝酸鹽含量計(jì)算亞硝酸鹽〔以亞硝酸鈉計(jì)〕的含量按式〔3〕進(jìn)展計(jì)算。式中：試樣中亞硝酸鈉的含量，單位為毫克每千克〔mg/kg〕；A1——測(cè)定用樣液中亞硝酸鈉的質(zhì)量，單位為微克〔μg〕；m——試樣質(zhì)量，單位為克〔ｇ〕；V1——測(cè)定用樣液體積，單位為毫升〔mL〕；V0〔mL〕。位有效數(shù)字。硝酸鹽含量的計(jì)算-19-硝酸鹽〔以硝酸鈉計(jì)〕的含量按式〔4〕進(jìn)展計(jì)算。式中：X2——試樣中硝酸鈉的含量，單位為毫克每千克〔mg/kg〕；A2——經(jīng)鎘粉復(fù)原后測(cè)得總亞硝酸鈉的質(zhì)量，單位為微克〔μg〕；m——試樣的質(zhì)量，單位為克〔g〕；1.232——亞硝酸鈉換算成硝酸鈉的系數(shù)；V2——測(cè)總亞硝酸鈉的測(cè)定用樣液體積，單位為毫升〔mL〕；V0——試樣處理液總體積，單位為毫升〔mL〕；V3——經(jīng)鎘柱復(fù)原后樣液總體積，單位為毫升〔mL〕；V4——經(jīng)鎘柱復(fù)原后樣液的測(cè)定用體積，單位為毫升〔mL〕；X1——由式〔3〕計(jì)算出的試樣中亞硝酸鈉的含量，單位為毫克每千克〔mg/kg〕。-20---20-位有效數(shù)字。周密度10%。第七章總砷的測(cè)定執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：GB/T5009.11—2023-22---23-第八章鉛的測(cè)定GB5009.12—2023其次法 氫化物原子熒光光譜法原理試樣經(jīng)酸熱消化后，在酸性介質(zhì)中，試樣中的鉛與硼氫化鈉(NaBH4)或硼氫化鉀(KBH4)反響生成揮發(fā)性鉛的氫化物(PbH4)。以氬氣為載氣，將氫化物導(dǎo)入電熱石英原子化器中原子化，在特制鉛空心陰極燈照耀下，基態(tài)鉛原子被激發(fā)至高能態(tài)；在去活化回到基態(tài)時(shí)，放射出特征波長(zhǎng)的熒光，其熒光強(qiáng)度與鉛含量成正比，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)系列進(jìn)展定量。試劑和材料硝酸+高氯酸混合酸(9+1)：900mL100mL，混勻。鹽酸(1+1)：250mL鹽酸倒入250mL水中，混勻。草酸溶液(10g/L1.0g100mL，混勻。(100g/L)：10.0g鐵氰化鉀，加水溶解并100mL，混勻。氫氧化鈉溶液(2g/L2.0g1L水中，混勻。5.0g500mL氫氧化鈉溶液(2g/L)中，混勻，臨用前配制。鉛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)藏液(1.0mg/mL)。鉛標(biāo)準(zhǔn)使用液(1.0μg/mL)：準(zhǔn)確吸取鉛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)藏液(10.7)，逐級(jí)稀釋至1.0μg/mL。儀器和設(shè)備原子熒光光度計(jì)、鉛空心陰極燈、電熱板、天平〔感量為1mg〕分析步驟試樣消化2.00g〔mL〕～10.00g〔或mL〕〔0.001g〕，50mL～100mL〔錐形瓶〕，然后參加硝酸+高氯酸混合酸〔2.1〕5mL～10mL20mL0.5mL～1.0mL25mL〔2.2〕0.5mL，草酸溶液〔2.3〕0.5mL，搖勻，再參加鐵氰化鉀溶液〔2.4〕1.0mL，用水準(zhǔn)確稀25mL，30min后測(cè)定。同時(shí)做試劑空白。標(biāo)準(zhǔn)系列制備25mL〔2.8〕0.00mL、0.125mL、0.25mL、0.50mL、0.75mL、1.00mL、1.25mL(0.0ng/mL、、10.0ng/mL、20.0ng/mL、30.0ng/mL、40.0ng/mL、50.0ng/mL)，用〔2.2〕0.5mL〔2.3〕搖勻，再參加鐵氰化鉀溶液〔2.4〕1.0mL，30min后待測(cè)。測(cè)定儀器參考條件負(fù)高壓：323V；鉛空心陰極燈燈電流：75mA；原子化器：爐溫750℃～800℃，8mm；氬氣流速：載氣800mL/min；屏蔽氣：1000mL/min；加復(fù)原劑時(shí)讀數(shù)時(shí)間：15.0s；延遲時(shí)間：0.0s；測(cè)量方式：標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法；讀數(shù)方式：峰面積；進(jìn)樣體積：2.0mL。測(cè)量方式10min～20min開(kāi)頭測(cè)量：連續(xù)用標(biāo)準(zhǔn)系列的零管進(jìn)樣，待讀數(shù)穩(wěn)定之后，轉(zhuǎn)入標(biāo)準(zhǔn)系列的測(cè)〔2〕進(jìn)展計(jì)算。試中：X——試樣中鉛含量, 或mg/L〕；c1——試樣消化液測(cè)定濃度，單位為納克每毫升〔ng/mL〕；c0——試劑空白液測(cè)定濃度，單位為納克每毫升〔ng/mL〕；V——試樣消化液定量總體積，單位為毫升〔mL〕；m——試樣質(zhì)量或體積，單位為克或毫升〔g或mL〕。位有效數(shù)字。周密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果確實(shí)定差值不得超過(guò)算術(shù)平均值10%。-24-第九章大腸菌群的檢測(cè)食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸菌群計(jì)數(shù)1 設(shè)備和材料除微生物試驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培育設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：恒溫培育箱〔36℃±1℃〕、冰箱〔2℃～5℃〕、恒溫水浴箱〔46±1℃〕、天平〔感量0.1g〕、均質(zhì)器、振蕩器、無(wú)菌吸管[1mL〔具0.01mL刻度〕、10mL〔具0.1mL刻度〕或微量移液器及吸頭]、無(wú)菌錐形瓶〔容量直徑90mm〕、pH計(jì)或pH比色管或周密pH試紙、菌落計(jì)數(shù)器培育基和試劑月桂基硫酸鹽胰蛋白胨〔LaurylSulfateTryptose，LST〕肉湯：見(jiàn)附錄A中A.1。煌綠乳糖膽鹽〔BrilliantGreenLactoseBile，BGLB〕肉湯：見(jiàn)附錄A中A.2。RedBileAgar，VRBA〕：見(jiàn)附錄A中A.3。磷酸鹽緩沖液：見(jiàn)附錄A中A.4。無(wú)菌生理鹽水：見(jiàn)附錄A中A.5。無(wú)菌1mol/LNaOH：見(jiàn)附錄A中A.6。無(wú)菌1mol/LHCl：見(jiàn)附錄A中A.7。第一法 大腸菌群MPN計(jì)數(shù)法-25-檢驗(yàn)程序大腸菌群MPN計(jì)數(shù)的檢驗(yàn)程序見(jiàn)圖1。-26-圖1大腸菌群MPN計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)程序操作步驟樣品的稀釋25g225mL液或生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)杯內(nèi),8000r/min～10000r/min1min～2min,225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)1min～2min，制成1:10的樣品勻液。液體樣品：以無(wú)菌吸管吸取25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖〔瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌玻璃珠〕中，充分混1:10的樣品勻液。樣品勻液的pH6.5～7.51mol/LNaOH1mol/LHCl調(diào)整。1:101mL，沿管壁9mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌試管中〔留意吸管或吸頭尖端11mL1:100的樣品勻液。依據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估量，按上述操作，依次制成十倍遞增系列11mL品勻液至樣品接種完畢，全過(guò)程不得超過(guò)15min。初發(fā)酵試驗(yàn)每個(gè)樣品，選擇3個(gè)適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液〔液體樣品可以選擇原〔LST〕1mL-26-〔1mLLST肉湯〕，36℃±124h±2h，觀察倒管內(nèi)是否有氣泡產(chǎn)生，24h±2h產(chǎn)氣者進(jìn)展復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)，如未產(chǎn)氣則連續(xù)48h±2h，產(chǎn)氣者進(jìn)展復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)。未產(chǎn)氣者為大腸菌群陰性。復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)LST1環(huán)，移種于煌綠乳糖膽鹽肉湯〔BGLB〕管中，36℃±148h±2h，觀看產(chǎn)氣狀況。產(chǎn)氣者，計(jì)為大腸菌群陽(yáng)性管。大腸菌群最可能數(shù)〔MPN〕的報(bào)告按6.3確證的大腸菌群LST陽(yáng)性管數(shù)，檢索MPN表〔見(jiàn)附錄B〕，報(bào)告每gMPN值。其次法 大腸菌群平板計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)程序2。-27---27-8操作步驟8.1樣品的稀釋8.26.1進(jìn)展。平板計(jì)數(shù)2大腸菌群平板計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)程序,2個(gè)無(wú)菌平1mL1mL生理鹽水參加無(wú)菌平皿作空白比照。準(zhǔn)時(shí)將15mL～20mL冷至46℃的結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂〔VRBA〕約傾注于每個(gè)平皿中。留神旋轉(zhuǎn)平皿，將培育基與樣液充分混勻，待瓊脂凝固3mL～4mLVRBA36℃±1℃培育18h～24h。平板菌落數(shù)的選擇選取菌落數(shù)在之間的平板，分別計(jì)數(shù)平板上消滅的典型和可疑大腸菌群菌落。典型菌落為紫紅色，菌落四周有紅色的膽鹽沉淀環(huán)，菌落直徑為0.5mm或更大。證明試驗(yàn)從平板上挑取BGLB肉湯管內(nèi)，36℃±1℃培育24h～48h，觀看產(chǎn)氣狀況。凡BGLB肉湯管產(chǎn)氣，即可報(bào)告為大腸菌群陽(yáng)性。大腸菌群平板計(jì)數(shù)的報(bào)告-28--28-經(jīng)最終證明為大腸菌群陽(yáng)性的試管比例乘以8.3中計(jì)數(shù)的平板菌落數(shù)，再g〔mL〕樣品中大腸菌群數(shù)。例：10-4樣品稀釋液1VRBA10010BGLB肉湯6個(gè)陽(yáng)性管，則該樣品的大腸菌群數(shù)為：100×6/10×104/g〔mL〕=6.0×105CFU/g〔mL〕。A〕培育基和試劑月桂基硫酸鹽胰蛋白胨〔LST〕肉湯成分胰蛋白胨或胰酪胨20.0g氯化鈉5.0g乳糖5.0g磷酸氫二鉀〔K2HPO4〕2.75g磷酸二氫鉀〔KH2PO4〕2.75g月桂基硫酸鈉0.1g蒸餾水pH6.8±0.2A.1.2制法1000mLpH。分裝到有玻璃小倒管的試管中，每10mL。121℃高壓滅菌15min。煌綠乳糖膽鹽〔BGLB〕肉湯成分蛋白胨 10.0g乳糖 10.0g牛膽粉〔oxgall或oxbile〕溶液 200mL0.1%煌綠水溶液 13.3mL蒸餾水 800mLpH7.2±0.1制法500mL200mL〔將pH7.0～7.5〕，用蒸餾水稀975mL，pH，0.1%13.3mL，用蒸餾水補(bǔ)足到1mL10mL。121℃15min。結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂〔VRBA〕成分蛋白胨7.0g酵母膏3.0g乳糖10.0g氯化鈉5.0g31.5g-29--29-中性紅0.03g結(jié)晶紫0.002g瓊脂15g～18g蒸餾水 1000mLpH7.4±0.1制法將上述成分溶于蒸餾水中，靜置幾分鐘，充分?jǐn)嚢瑁{(diào)整pH。煮沸23h。磷酸鹽緩沖液成分磷酸二氫鉀〔KH2PO4〕 34.0g蒸餾水 500mLpH7.2制法34.0g500mL175mL1mol/LpH，1000mL1000mL，分裝于適宜容器12115min。無(wú)菌生理鹽水成分氯化鈉 8.5g蒸餾水 1 000mL制法8.5ｇ1000mL，12115min。1mol/LNaOH成分NaOH 40.0g蒸餾水 1000mL制法40g1000mL，121℃高壓滅菌15min。1mol/LHCl成分HCl 90mL蒸餾水 1000mL制法1000mL，12115min。B〔標(biāo)準(zhǔn)性附錄〕大腸菌群最可能數(shù)〔MPN〕檢索表B.1大腸菌群最可能數(shù)〔MPN〕檢索表g〔mL〕檢樣中大腸菌群最可能數(shù)〔MPN〕B.1。B.1大腸菌群最可能數(shù)〔MPN〕檢索表-29-第十章菌落總數(shù)的測(cè)定食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定設(shè)備和材料除微生物試驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培育設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：恒溫培育箱〔36℃±1℃，30℃±1℃〕、冰箱〔2℃～5℃〕、恒溫水浴箱〔46±1℃〕、天平〔感量為0.1g〕、均質(zhì)器、振蕩器、無(wú)菌吸管[1mL〔具0.01mL刻度〕、10mL〔具0.1mL刻度〕或微量移液器及吸頭]、無(wú)菌錐形瓶〔容量250mL、500mL〕、無(wú)菌培育皿〔直徑90mm〕、pHpH比色管或周密pH試紙、放大鏡或/和菌落計(jì)數(shù)器培育基和試劑平板計(jì)數(shù)瓊脂培育基：見(jiàn)附錄A中A.1。磷酸鹽緩沖液：見(jiàn)附錄A中A.2。無(wú)菌生理鹽水：見(jiàn)附錄A中A.3。檢驗(yàn)程序1。-30---31-圖1菌落總數(shù)的檢驗(yàn)程序操作步驟樣品的稀釋固體和半固體樣品：稱(chēng)取25g樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000r/min～10000r/min均質(zhì)1min～2min，或放入盛有225mL稀釋液的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min，制成1:10的樣品勻液。液體樣品：以無(wú)菌吸管吸取25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液〔瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌玻璃珠〕中，充分混勻，制成1:10的樣品勻液。用1mL無(wú)菌吸管或微量移液器吸取1:101mL，沿管壁緩慢注于盛有9mL稀釋液的無(wú)菌試管中〔留意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面〕，振搖試管或換用1支無(wú)菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液。按6.1.3操作程序，制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用11mL無(wú)菌吸管或吸頭。依據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估量，選擇2個(gè)～3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液〔液體樣品可包括原液〕，在進(jìn)展10倍遞增稀釋時(shí)，吸取1mL樣品勻液于無(wú)菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。同時(shí)，分別吸取1mL空白稀釋液參加兩個(gè)無(wú)菌平皿內(nèi)作空白比照。準(zhǔn)時(shí)將15mL～20mL冷卻至46℃的平板計(jì)數(shù)瓊脂培育基〔可放置于46±1℃℃恒溫水浴箱中保溫〕傾注平皿，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。培育待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36±148h±2h。水產(chǎn)品30±1℃℃培育72h±3h。的瓊脂外表掩蓋一薄層瓊脂培育基〔約4mL〕，凝固后翻轉(zhuǎn)平板，按6.2.1條件進(jìn)展培育。菌落計(jì)數(shù)量。菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位〔colony-formingunits，CFU〕表示。選取菌落數(shù)在30CFU～300CFU之間、無(wú)集中菌落生長(zhǎng)的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)。低于的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300CFU的可記錄為多不行計(jì)。每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)承受兩個(gè)平板的平均數(shù)。生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；假設(shè)片狀菌落不到平板的一半，而其余一半2，代表一個(gè)平板菌落數(shù)。當(dāng)平板上消滅菌落間無(wú)明顯界限的鏈狀生長(zhǎng)時(shí)，則將每條單鏈作為一個(gè)菌落計(jì)數(shù)。結(jié)果與報(bào)告菌落總數(shù)的計(jì)算方法落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每g〔mL〕樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。假設(shè)有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時(shí)，按公式〔1〕計(jì)算：式中：N——樣品中菌落數(shù)；〔含適宜范圍菌落數(shù)的平板〕菌落數(shù)之和；n1——第一稀釋度〔低稀釋倍數(shù)〕平板個(gè)數(shù)；n2——其次稀釋度〔高稀釋倍數(shù)〕平板個(gè)數(shù)；d——稀釋因子〔第一稀釋度〕。300CFU，則對(duì)稀釋度最高的平板進(jìn)展計(jì)數(shù)，其他平板可記錄為多不行計(jì)，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。-32--33--33-30CFU，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。假設(shè)全部稀釋度〔包括液體樣品原液〕平板均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。CFU～300CFU30CFU300CFU乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。菌落總數(shù)的報(bào)告菌落數(shù)小于100CFU菌落數(shù)大于或等于100CFU時(shí)，第3后，取前2位數(shù)字，后面用0代替位數(shù)；也可用10的指數(shù)形式來(lái)表示，按“四舍五入”原則修約后，承受兩位有效數(shù)字。假設(shè)全部平板上為集中菌落而無(wú)法計(jì)數(shù)，則報(bào)告菌落集中。假設(shè)空白比照上有菌落生長(zhǎng)，則此次檢測(cè)結(jié)果無(wú)效。稱(chēng)重取樣以CFU/g為單位報(bào)告，體積取樣以CFU/mL為單位報(bào)告。A〕培育基和試劑平板計(jì)數(shù)瓊脂〔platecountagar，PCA〕培育基成分胰蛋白胨5.0g酵母浸膏2.5g葡萄糖1.0g瓊脂 15.0g蒸餾水 1000mLpH7.0±0.2制法將上述成分加于蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)整pH。分裝試管或錐形瓶，12115min。A.2磷酸鹽緩沖液A.2.1成分磷酸二氫鉀〔KH2PO4〕34.0g蒸餾水pH7.2500mLA.2.2制法34.0g500mL175mL1mol/LpH，1000mL-34--34-1000mL，分裝于適宜容器12115min。磷酸鹽緩沖液成分磷酸二氫鉀〔KH2PO4〕 34.0g蒸餾水 500mLpH7.2制法34.0g500mL175mL1mol/LpH，1000mL1000mL，分裝于適宜容器12115min。無(wú)菌生理鹽水成分氯化鈉 8.5g蒸餾水 1000mL制法8.5ｇ1000mL，12115min。第十一章沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)設(shè)備和材料除微生物試驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培育設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：冰箱〔2℃～5℃、恒溫培育箱〔36℃±1℃，42℃±1℃〕、均質(zhì)器、振蕩器、電子天平〔感量0.1g〕、無(wú)菌錐形瓶〔容量500mL，250mL〕、無(wú)菌吸管[1mL〔具0.01mL刻度〕、10mL〔具0.1mL刻度〕或微量移液器及吸頭]、無(wú)菌培育皿〔直徑90mm〕、無(wú)菌試管〔3mm×50mm、10mm×75mm〕、無(wú)菌毛細(xì)管、pH計(jì)或pH比色管或周密pH試紙、全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)培育基和試劑附錄A中A.1]、四硫磺酸鈉煌綠〔TTB〕增菌液[見(jiàn)附錄A中A.2]、 亞硒酸鹽胱氨酸〔SC〕增菌液[見(jiàn)附錄A中A.3]、亞硫酸鉍瓊脂[見(jiàn)附錄A中A.4]、HE瓊脂[見(jiàn)附錄A中A.5]、木糖賴(lài)氨酸脫氧〔XLD〕瓊脂[見(jiàn)附錄A中A.6]、沙門(mén)氏菌屬顯色培育基、三糖鐵〔TSI〕見(jiàn)附錄中、蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑[見(jiàn)附錄A中A.8]、尿素瓊脂7.2〕[見(jiàn)附錄A中A.9]、氰化鉀〔KCN〕培育基[見(jiàn)附錄A中A.10]、賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)培育基[見(jiàn)附錄A中A.11]、糖發(fā)酵管[見(jiàn)附錄A中A.12]、鄰硝基酚β-D半乳糖苷〔ONPG〕培育基[見(jiàn)附錄A中A.13]、半固體瓊脂[見(jiàn)附錄A中A.14]、丙二酸鈉培育基[見(jiàn)附錄A中A.15]、沙門(mén)氏菌O和H診斷血清、生化鑒定試劑盒。檢驗(yàn)程序-35-操作步驟前增菌稱(chēng)取25g〔mL〕樣品放入盛有225mLBPW的無(wú)菌均質(zhì)杯中，以8000000r/min1min～2min，或置于盛有225mLBPW的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min。假設(shè)樣品為液態(tài)，不需要均質(zhì)，振蕩混勻。如需測(cè)定pH值，用1mol/mL無(wú)菌NaOH或HCl調(diào)pH至6.8±0.2。無(wú)菌操作將樣品轉(zhuǎn)至500mL錐形瓶中，如使用均質(zhì)袋，可直接進(jìn)展培育，于36℃±18h～18h。如為冷凍產(chǎn)品,應(yīng)在45℃以下不超過(guò)15min,或2℃～5℃不超過(guò)18h解凍。增菌輕輕搖動(dòng)培育過(guò)的樣品混合物，移取1mL10mLTTB內(nèi)，于42℃±1℃培育18h～24h1mL10mLSC36℃±118h～24h。分別分別用接種環(huán)取增菌液1環(huán)，劃線(xiàn)接種于一個(gè)BS瓊脂平板和一個(gè)XLD瓊脂平板〔或HE瓊脂平板或沙門(mén)氏菌屬顯色培育基平板〕36℃±1℃分別培育18h～24h〔XLD瓊脂平板、HE瓊脂平板、沙門(mén)氏菌屬顯色培育基平板〕或40h～48h〔BS瓊脂平板〕，觀看各個(gè)平板上生長(zhǎng)的菌落,各個(gè)平板上的菌落特征見(jiàn)表1。-35-生化試驗(yàn)自選擇性瓊脂平板上分別挑取2個(gè)以上典型或可疑菌落，接種三糖鐵,直接接種賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)培育基和養(yǎng)分瓊脂平板，于36℃±1℃培育18h～24h，必要時(shí)可延長(zhǎng)至48h。在三糖鐵瓊脂和賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)培育基內(nèi)，沙門(mén)氏菌屬的反響結(jié)果見(jiàn)表2。-36-接種三糖鐵瓊脂和賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)培育基的同時(shí),可直接接種蛋白胨水〔供做靛基質(zhì)試驗(yàn)〕、尿素瓊脂〔pH7.2〕、氰化鉀〔KCN〕培育基，也可在初步推斷結(jié)果后從養(yǎng)分瓊脂平板上挑取可疑菌落接種。于36℃±1℃培育18h～24h，必要時(shí)可延長(zhǎng)至48h，按表3判定結(jié)果。將已挑菌落的平板儲(chǔ)存于2℃～5℃或室溫至少保存24h，以備必要時(shí)復(fù)查。反響序號(hào)A1：典型反響判定為沙門(mén)氏菌屬。如尿素、KCN和賴(lài)氨酸脫羧酶項(xiàng)中有項(xiàng)特別，按表42項(xiàng)特別為非沙門(mén)氏菌。反響序號(hào)A2：補(bǔ)做甘露醇和山梨醇試驗(yàn)，沙門(mén)氏菌靛基質(zhì)陽(yáng)性變體兩項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果均為陽(yáng)性，但需要結(jié)合血清學(xué)鑒定結(jié)果進(jìn)展判定。-36-A3：ONPG。ONPG酶陽(yáng)性,甲型副傷寒沙門(mén)氏菌為賴(lài)氨酸脫羧酶陰性。必要時(shí)按表5-37-如選擇生化鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)，可依據(jù)5.4.1當(dāng)?shù)木鷳乙海褂蒙b定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)進(jìn)展鑒定。血清學(xué)鑒定抗原的預(yù)備一般承受1.2％～1.5％瓊脂培育物作為玻片凝集試驗(yàn)用的抗原。O血清不凝集時(shí)，將菌株接種在瓊脂量較高的〔如2％～3％〕培育基上再檢查；假設(shè)是由于Vi抗原的存在而阻擋了O凝集反響時(shí)，可挑取菌苔于1mL生理鹽水中做成濃菌液，于酒精燈火焰上煮沸后再檢查。H抗原發(fā)育不良時(shí)，將菌株接種在0.55％～0.65％半固體瓊脂平板的中心，俟菌落集中生長(zhǎng)時(shí)，在其邊緣局部取菌檢查；或?qū)⒕晖ㄟ^(guò)裝有0.3％～0.4％半固體瓊脂的小玻管1次～2次，自遠(yuǎn)端取菌培育后再檢查。多價(jià)菌體抗原〔O〕鑒定在玻片上劃出2個(gè)約1cm×2cm的區(qū)域，挑取1環(huán)待測(cè)菌，各放1/2環(huán)于玻片上的每一區(qū)域上部，在其中一個(gè)區(qū)域下部加1滴多價(jià)菌體〔O〕抗血清，在另一區(qū)域下部參加1滴生理鹽水，作為比照。再用無(wú)菌的接種環(huán)或針?lè)?37-1min，并對(duì)著黑暗背景進(jìn)展觀看，任何程度的凝集現(xiàn)象皆為陽(yáng)性反響。〔H〕鑒定同5.5.2。血清學(xué)分型〔選做工程〕O用A～F多價(jià)O血清做玻片凝集試驗(yàn)，同時(shí)用生理鹽水做比照。在生理A～FOO4；O3、O10；O7；O8；O9；O2O11因子血清做凝集試驗(yàn)。依據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，O群。被O3、O10血清凝集的菌株，再用O10、O15、O34、O19單因子血清做凝集試驗(yàn)，判定E1、E2、E3、E4各亞群，每一個(gè)O定均應(yīng)依據(jù)O單因子血清的檢查結(jié)果，沒(méi)有O單因子血清的要用兩個(gè)O因子血清進(jìn)展核對(duì)。不被A～FO血清凝集者，先用9種多價(jià)-38-OOOOO多價(jià)1 A，B，C，D，E，F(xiàn)，群 〔并包括6,14群〕O440，41，42，43群H屬于A～FO6H12相的H-38--39--39-再用這一種或兩種血清所包括的各種H1相和第2H8種多價(jià)HHH多價(jià)1 a，b，c，d，iH多價(jià)2 eh，enx，enz15，fg，gms，gpu，gp，gq，mt，gz51H多價(jià)3 k，r，y，z，z10，lv，lw，lz13，lz28，lz40H多價(jià)4 1,2；1,5；1,6；1,7；z6H多價(jià)5 z4z23，z4z24，z4z32，z29，z35，z36，z38H多價(jià)6 z39，z41，z42，z44H多價(jià)7 z52，z53，z54，z55H多價(jià)8 z56，z57，z60，z61，z62HHH1H2H2H1相H抗原的,可在瓊脂斜面上移種H查其另一個(gè)相。單相菌不必做位相變異檢查。位相變異試驗(yàn)方法如下：小玻管法：將半固體管〔每管約1mL～2mL〕在酒精燈上溶化并冷至℃，取相的H0.05mL～0.1mL另一端挑取細(xì)菌進(jìn)展檢查。培育基內(nèi)血清的濃度應(yīng)有適當(dāng)?shù)谋壤?，過(guò)高時(shí)細(xì)菌不能生長(zhǎng)，過(guò)低時(shí)同一相細(xì)菌的動(dòng)力不能抑制。一般按原血清1：200～1：800小倒管法：將兩端開(kāi)口的小玻管〔下端開(kāi)口要留一個(gè)缺口，不要平齊〕501內(nèi)，略加攪動(dòng)，使其混勻，俟凝固后，將待檢菌株接種于小套管中的半固體表層內(nèi)，每天檢查結(jié)果，待另一相細(xì)菌解離后，可從套管外的半固體外表取菌檢1％軟瓊脂斜面，于37℃培育后再做凝集試驗(yàn)。簡(jiǎn)易平板法：將0.35％～0.4％半固體瓊脂平板烘干外表水分，挑取因子位的中心點(diǎn)種待檢菌株，培育后，在形成集中生長(zhǎng)的菌苔邊緣取菌檢查。Vi-40--40-ViVi副傷寒沙門(mén)氏菌,都柏林沙門(mén)氏菌。5.5.4.4菌型的判定依據(jù)血清學(xué)分型鑒定的結(jié)果，依據(jù)附錄B或有關(guān)沙門(mén)氏菌屬抗原表判定菌型。5結(jié)果與報(bào)告25g〔mL〕樣品中檢出或未檢出沙門(mén)氏菌。A〕培育基和試劑緩沖蛋白胨水〔BPW〕成分蛋白胨 10.0g氯化鈉 5.0g磷酸氫二鈉〔含12個(gè)結(jié)晶水〕 9.0g磷酸二氫鉀 1.5g蒸餾水 1000mLpH7.2±0.2制法10min，煮沸溶解，調(diào)整pH121℃，15min。四硫磺酸鈉煌綠〔TTB〕增菌液根底液蛋白胨10.0g牛肉膏5.0g氯化鈉3.0g碳酸鈣45.0g蒸餾水1000mLpH7.0±0.2除碳酸鈣外，將各成分參加蒸餾水中，煮沸溶解，再參加碳酸鈣，調(diào)整pH121℃，20min。硫代硫酸鈉溶液硫代硫酸鈉〔含5個(gè)結(jié)晶水〕 50.0g蒸餾水 加至100mL高壓滅菌 121℃，20min。碘溶液碘 片 20.0g-41--41-碘化鉀 25.0g蒸餾水 加至100mL溶解為止，然后加蒸餾水至規(guī)定的總量，貯存于棕色瓶?jī)?nèi)，塞緊瓶蓋備用。0.5％煌綠水溶液煌綠 0.5g蒸餾水 100mL溶解后，存放暗處，不少于1d，使其自然滅菌。牛膽鹽溶液牛膽鹽 10.0g蒸餾水 100mL加熱煮沸至完全溶解，高壓滅菌121℃，20min。制法根底液 900mL硫代硫酸鈉溶液100mL碘溶液20.0mL煌綠水溶液2.0mL牛膽鹽溶液50.0mL均應(yīng)搖勻后再參加另一種成分。亞硒酸鹽胱氨酸〔SC〕增菌液成分蛋白胨5.0g乳糖4.0g磷酸氫二鈉10.0g亞硒酸氫鈉4.0gL-胱氨酸0.01g蒸餾水 1000mLpH7.0±0.2制法除亞硒酸氫鈉和L-胱氨酸外，將各成分參加蒸餾水中，煮沸溶解，冷至551g/LL-10mL〔稱(chēng)取0.1gL1mol/L15mL，使溶解，再加無(wú)菌蒸餾水100mL即成，如為DL-胱氨酸，用量應(yīng)加倍〕。搖勻，調(diào)整pH。亞硫酸鉍〔BS〕瓊脂成分蛋白胨10.0g牛肉膏5.0g葡萄糖5.0g硫酸亞鐵0.3g磷酸氫二鈉4.0g煌 綠 檸檬酸鉍銨 2.0g亞硫酸鈉 6.0g-42--42-瓊 脂 18.0g～20g蒸餾水 1000mLpH7.5±0.2制法300mL〔制作根底液〕，硫酸亞鐵和磷酸氫二20mL30mL20mL和30mL蒸餾水中，瓊脂參加600mL蒸餾水中。然后分別攪拌均勻，80℃左右時(shí)，先將硫酸亞鐵和磷酸氫二鈉混勻，倒入根底液中，混勻。將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉混勻，倒入根底液中，再混勻。調(diào)整pH，50℃～55后馬上傾注平皿。注：本培育基不需要高壓滅菌，在制備過(guò)程中不宜過(guò)分加熱，避開(kāi)降低其選擇天使用。HE瓊脂〔HektoenEntericAgar〕成分蛋白胨12.0g牛肉膏3.0g乳糖12.0g蔗糖12.0g水楊素2.0g膽鹽20.0g氯化鈉5.0g瓊脂 18.0g～20.0g蒸餾水1000mL0.4％溴麝香草酚藍(lán)溶液16.0mLAndrade指示劑20.0mL甲液20.0mL乙液pH7.5±0.220.0mLA.5.2制法將前面七種成分溶解于400mL蒸餾水內(nèi)作為根底液;將瓊脂參加于600mLpH50℃～55℃傾注平皿。性。②甲液的配制硫代硫酸鈉 34.0g檸檬酸鐵銨 4.0g蒸餾水 100mL③乙液的配制去氧膽酸鈉 10.0g蒸餾水 100mL-43--43-④Andrade 指示劑酸性復(fù)紅 0.5g1mol/L氫氧化鈉溶液 16.0mL蒸餾水 100mL將復(fù)紅溶解于蒸餾水中,參加氫氧化鈉溶液。數(shù)小時(shí)后如復(fù)紅褪色不全,再1mL～2mL。木糖賴(lài)氨酸脫氧膽鹽〔XLD〕瓊脂成分酵母膏3.0gL-賴(lài)氨酸5.0g木糖3.75g乳糖7.5g蔗糖7.5g去氧膽酸鈉2.5g檸檬酸鐵銨0.8g硫代硫酸鈉6.8g氯化鈉5.0g瓊脂15.0g酚紅 0.08g蒸餾水 1000mLpH7.4±0.2制法除酚紅和瓊脂外，將其他成分參加400mL蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)整再參加指示劑，待冷至50℃～55℃傾注平皿。擇性，貯于室溫暗處。本培育基宜于當(dāng)天制備，其次天使用。三糖鐵〔TSI〕瓊脂成分蛋白胨20.0g牛肉膏5.0g乳 糖10.0g蔗 糖10.0g葡萄糖1.0g硫酸亞鐵銨〔6〕0.2g酚 紅0.025g或5.0g/L溶液5.0mL氯化鈉5.0g硫代硫酸鈉0.2g瓊 脂12.0g蒸餾水pH7.4±0.21000mLA.7.2制法除酚紅和瓊脂外，將其他成分參加400mL蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)整。另將瓊脂參加600mL-44--44-再參加指示劑，混勻，分裝試管，每管約2mL～4mL121℃10min115℃15min，滅菌后置成高層斜面，呈桔紅色。蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑蛋白胨水蛋白胨〔或胰蛋白胨〕 20.0g氯化鈉 5.0g蒸餾水 1000mLpH7.4±0.2將上述成分參加蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)整pH，分裝小試管,121℃高壓滅菌15min。靛基質(zhì)試劑柯凡克試劑：將對(duì)