第7章-體液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)

第七章體液蛋白質(zhì)檢測(cè)本章內(nèi)容概要：第一節(jié)概述第二節(jié)血清總蛋白測(cè)定第三節(jié)血清清蛋白第四節(jié)血漿纖維蛋白原測(cè)定第五節(jié)血清黏蛋白測(cè)定第六節(jié)其他體液蛋白質(zhì)測(cè)定第七節(jié)血清蛋白電泳分析一、血漿蛋白質(zhì)的組成、功能及分類(lèi)（一）血漿蛋白質(zhì)的組成

血漿蛋白質(zhì)是血漿固體成份中含量最多、組成復(fù)雜、功能廣泛的一類(lèi)化合物。占血漿固體成份90％左右，目前已經(jīng)研究的血漿蛋白質(zhì)有500多種，分離出的純品物200來(lái)種，除免疫球蛋白外，主要由肝細(xì)胞合成。蛋白質(zhì)第一節(jié)概述

（二）血漿蛋白質(zhì)的功能

1.營(yíng)養(yǎng)作用

用于組織蛋白質(zhì)的合成和氧化分解作用

2.維持血漿膠體滲透壓

清蛋白（含量高、分子?。?/p>

3.運(yùn)輸功能

如清蛋白能與多種物質(zhì)結(jié)合（FA、膽紅素）

而某些球蛋白具特異地運(yùn)輸某些物質(zhì)的功

能，運(yùn)鐵蛋白、運(yùn)皮質(zhì)醇蛋白

4.維持血漿正常pH

血漿蛋白PI一般都小于7.4是弱酸，一部分的弱酸鹽形式存在，構(gòu)成緩沖對(duì)

5.免疫功能

血漿中具有免疫功能的蛋白質(zhì)是補(bǔ)體和抗體，抗體又稱(chēng)免疫球蛋白（Ig）如IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。具有免疫作用的非特異球蛋白補(bǔ)體。

6.凝血與纖溶作用

凝血與纖溶是一對(duì)矛盾的統(tǒng)一、凝血因子與纖溶因子絕大部分是血漿蛋白質(zhì)，它們促進(jìn)血液凝固，防止血液流失和溶解血栓，防止重要臟器的動(dòng)脈栓塞。

7.催化作用

血漿中有很多酶類(lèi)，其中部分在血漿中發(fā)揮作用，稱(chēng)血漿功能性酶，參與血漿生理作用。如凝血酶原、纖溶酶原、銅藍(lán)蛋白、LPL、LCAT、腎素等。8.其他生理功能

合成組織蛋白或氧化供能、抑制蛋白水解。二、血漿蛋白質(zhì)測(cè)定方法及評(píng)價(jià)（1）總蛋白測(cè)定的常見(jiàn)方法物理法：凱氏定氮法（參考方法）雙縮脲法（常規(guī)方法）

酚試劑法電泳法紫外分光光度法化學(xué)法：染料結(jié)合法比濁法免疫化學(xué)法化學(xué)法

凱氏定氮法（參考方法）是測(cè)定蛋白質(zhì)的經(jīng)典方法，1883年Kjeldahl首創(chuàng)，精密度準(zhǔn)確度高，但操作復(fù)雜、費(fèi)時(shí)、技術(shù)性強(qiáng)，不適合臨床常規(guī)檢測(cè)，一般用于標(biāo)準(zhǔn)血清的標(biāo)定和校正。雙縮脲法原理：蛋白質(zhì)中的肽鍵（-CONH-）在堿性溶液中能與Cu2+作用而產(chǎn)生紫紅色絡(luò)合物，其顏色的深淺與蛋白質(zhì)的濃度成正比，而與蛋白質(zhì)的分子量及氨基酸成分無(wú)關(guān)。雙縮脲生成

加熱＋NH322H－180022222N端C端此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，但靈敏度較其它方法稍差，是目前臨床上最常規(guī)的方法。參考范圍：成人60－80g/L臨床意義：總蛋白升高：總蛋白降低：①丟失過(guò)多②消耗增加③白蛋白合成減少④水腫真性升高：巨球蛋白血癥、自身免疫性疾病等假性升高：機(jī)體明顯失水，總蛋白含量相對(duì)升高酚試劑法原理：蛋白質(zhì)分子中的酪氨酸殘基和色氨酸殘基能夠和酚試劑中的磷鎢酸-磷鉬酸反應(yīng)生成藍(lán)色化合物

Lowry改良法：在酚試劑中加入Cu2+（75%呈色），提高了呈色的靈敏度，為雙縮脲法的100倍左右。評(píng)價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，改良法靈敏度高（10μg-60μg），適合測(cè)定蛋白含量少的標(biāo)本。缺點(diǎn)：各種蛋白質(zhì)酪氨酸和色氨酸比例不同，只適合測(cè)定單一蛋白質(zhì)。受一些藥物干擾。

比濁法原理：

評(píng)價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便不需特殊儀器。缺點(diǎn)：濁度形成的干擾因素多（加試劑方法，反應(yīng)溫度，蛋白絮狀沉淀等）

某些酸類(lèi)（磺基水楊酸等）和血清蛋白質(zhì)結(jié)合產(chǎn)生沉淀，測(cè)其濁度，與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比，可求蛋白含量。物理法電泳法：操作：醋酸纖維素薄膜電泳染色晾干透明光密度儀掃描洗脫比色染色分離測(cè)得蛋白組分百分比計(jì)算得出各種蛋白質(zhì)含量半定量定量評(píng)價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：電泳特異性好，可了解血清蛋白質(zhì)全貌．缺點(diǎn)：電泳技術(shù)繁瑣，不易自動(dòng)化；白蛋白與染料親和力高會(huì)導(dǎo)致結(jié)果偏高紫外分光光度法

蛋白質(zhì)分子中的酪氨酸和色氨酸等芳香族氨基酸可使蛋白質(zhì)溶液在280nm處有一吸收峰?？捎糜跍y(cè)定蛋白質(zhì)但需避免核酸干擾。（1）Lowry-Kalcker公式蛋白質(zhì)濃度（mg/ml）=1.45A280-0.74A260

（2）Warburg-Christian公式蛋白質(zhì)濃度（mg/ml）=1.55A280-0.76A260

原理：評(píng)價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：敏感而簡(jiǎn)便，可保留蛋白生物活性。缺點(diǎn)：各種蛋白質(zhì)中芳香族氨基酸含量和比例不同；在280nm測(cè)定易受游離色aa和酪aa以及尿酸和膽紅素的干擾；導(dǎo)致準(zhǔn)確性和特異性受影響。染料結(jié)合法(推薦)原理:

血清ALB可通過(guò)離子鍵或疏水鍵與包括染料在內(nèi)的各種有機(jī)離子結(jié)合,而GLB很少結(jié)合外源性染料,可在不分離ALB與GLB的情況下直接測(cè)定ALB。染料溴甲酚綠BCG溴甲酚紫BCP優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)

易于和非人源性白蛋白結(jié)合

與白蛋白結(jié)合特異性較差

與白蛋白結(jié)合特異性好與非人源性白蛋白結(jié)合力弱4.免疫化學(xué)法原理及特點(diǎn):應(yīng)用：特異性高,但成本較高,費(fèi)時(shí),生化檢驗(yàn)用的不多.第二節(jié)血清總蛋白測(cè)定生化檢驗(yàn)中測(cè)定蛋白質(zhì)的方法很多，主要利用蛋白質(zhì)的分子組成，結(jié)構(gòu)或性質(zhì)進(jìn)行。方法：1.凱氏定氮法-參考方法2.雙縮脲法-推薦3.酚試劑法4.散射比濁法5.染料結(jié)合法6.UV法７.折光測(cè)定法實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖煜ぱ宓鞍椎臏y(cè)定方法（雙縮脲法）掌握血清總蛋白測(cè)定的臨床意義進(jìn)一步鞏固掌握721型分光光度計(jì)的使用實(shí)驗(yàn)原理蛋白質(zhì)中的肽鍵（-CONH-）在堿性溶液中能與Cu2+作用而產(chǎn)生紫紅色絡(luò)合物，其顏色的深淺與蛋白質(zhì)的濃度成正比，而與蛋白質(zhì)的分子量及氨基酸成分無(wú)關(guān)。

雙縮脲反應(yīng)并非是蛋白質(zhì)特有的顏色反映！

凡分子內(nèi)含有2個(gè)或2個(gè)以上甲?；被?

CONH2-）均可呈雙縮脲反映?！驹噭浚?）6mol/L氫氧化鈉：溶解240g優(yōu)質(zhì)純氫氧化鈉于新鮮制備的蒸餾水或剛煮沸冷卻的去離子水中，稀釋至1L，置聚乙烯瓶?jī)?nèi)蓋緊保存。（2）雙縮脲試劑：稱(chēng)取未風(fēng)化沒(méi)有丟失結(jié)晶水的硫酸銅（CuSO4·5H2O）3g，溶于500ml新鮮制備的蒸餾水或剛煮沸冷卻的去離子水中，加酒石酸鉀鈉9g，碘化鉀5g，待完全溶解后，加入6mol/L氫氧化鈉100ml，并用蒸餾水稀釋至1L。置聚乙烯瓶?jī)?nèi)蓋緊保存。（3）雙縮脲空白試劑：溶解酒石酸鉀鈉9g，碘化鉀5g，于新鮮制備的蒸餾水中。加6mol/L氫氧化鈉100ml，再加蒸餾水稀釋至1L。（4）蛋白標(biāo)準(zhǔn)液：收集混合血清，用覬氏定氮法測(cè)定蛋白含量，亦可用定值參考血清或白蛋白標(biāo)準(zhǔn)血清。實(shí)驗(yàn)操作取3支試管，按下表操作加入物（ml）測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管待測(cè)血清0.1——蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液—0.1—蒸餾水0.40.40.5雙縮脲試劑3.0

3.0

3.0混勻，37℃水浴放置10分鐘，以空白管調(diào)零點(diǎn)，在540nm波長(zhǎng)處進(jìn)行比色，分別讀取各管的吸光度。計(jì)算

測(cè)定管吸光度血清總蛋白（g/L）=---------------------*蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液濃度（g/L）

標(biāo)準(zhǔn)管吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線1.配制20g/L蛋白標(biāo)準(zhǔn)液2.取試管6支，標(biāo)記后，按下表操作血清蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制操作步驟加入物（ml）空白管1234520g/L蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液-0.10.20.30.40.5蒸餾水0.50.40.30.20.1-雙縮脲試劑3.03.03.03.03.03.0相當(dāng)于血清蛋白質(zhì)（g/L）020406080100注意事項(xiàng)：1.血清標(biāo)本以新鮮為宜，含脂類(lèi)極多的血清，加入雙縮脲試劑后會(huì)出現(xiàn)

混濁，可用乙醚3ml抽提后再進(jìn)行比色2.蛋白標(biāo)準(zhǔn)液要澄清，如果渾濁應(yīng)更換，否則需作標(biāo)準(zhǔn)空白管，以消除濁度的影響。3.試管，刻度吸管應(yīng)清潔，否則會(huì)有渾濁出現(xiàn)。4.高脂，黃疸及溶血標(biāo)本應(yīng)作清空白對(duì)照來(lái)校正誤差。5.銨離子能與氫氧化銅反應(yīng)，因此，實(shí)驗(yàn)所用器材不可含銨鹽?！九R床意義】（一）血清總蛋白增高

1.血液濃縮

嚴(yán)重腹瀉、嘔吐、高燒

2.合成增加

主要見(jiàn)于球蛋白合成增加，多發(fā)性骨髓瘤。（二）血清總蛋白降低

1.

血液稀釋

靜脈滴注過(guò)多低滲溶液，各種原因所引起的水鈉潴留。

2.攝入不足和消耗增加

營(yíng)養(yǎng)不良，慢性胃腸道疾病引起的

消化吸收不良，消耗性疾病，結(jié)核病、甲亢、惡性腫瘤。

3.合成障礙

主要見(jiàn)于肝臟疾患。

4.蛋白質(zhì)丟失

嚴(yán)重?zé)齻罅垦獫{滲出，腎病綜合癥。第三節(jié)血清清蛋白測(cè)定血清清蛋白測(cè)定（溴甲酚綠法）【原理】溴甲酚綠（BCG）在pH4.2的環(huán)境中，在有非離子去垢劑（Brij-35）存在時(shí)，可與清蛋白結(jié)合形成藍(lán)綠色復(fù)合物，顏色的深淺在一定范圍內(nèi)與清蛋白含量成正比。

注意：

BCG與清蛋白結(jié)合的特異性較低，它不僅與Alb結(jié)合呈色，還可與其他蛋白質(zhì)呈色，其中α1-球蛋白，TRF、Hp最明顯，但反應(yīng)速度不同，Alb可立即反應(yīng)（快反應(yīng)），其他蛋白質(zhì)反應(yīng)慢（慢反應(yīng)）?！驹噭?.10mmol/LBCG貯存液

BCG1.75g，溶于5ml1mol/LNaoH溶液中，加蒸餾水至250ml。2.0.5mol/L琥珀酸緩沖貯存液（pH4.0）NaoH10g，琥珀酸56g，溶解于800ml蒸餾水中，用1mol/LNaoH溶液調(diào)pH至4.10±0.05加蒸餾水至1L。3.疊氮鈉貯存液

疊氮鈉40g溶于1000ml蒸餾水中。4.聚氧乙烯月桂醚Brij-35溶液

Brij-3529g，加蒸餾水80ml，置80ml左右水溶使其溶解，然后加水至100ml。

5.BCG試劑

于IL容量瓶?jī)?nèi)加蒸餾水400ml，琥珀酸緩沖貯存液100ml，BCG貯存液8ml，疊氮鈉貯存液2.5ml，Brij-35溶液2.5ml，加蒸餾水至刻度，配好的BCG試劑的pH應(yīng)為4.15±0.05。

Brij-35可提高蛋白質(zhì)與染料的結(jié)合力及溶解度，提高呈色穩(wěn)定性，如無(wú)Brij-35可用吐溫-20代替，疊氮鈉有防腐作用。

6.清蛋白標(biāo)準(zhǔn)液實(shí)驗(yàn)操作取3支試管，按下表操作加入物（ml）測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管待測(cè)血清0.02——清白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液—0.02—蒸餾水----0.02BCG試劑4.04.0

4.0混勻，放置10分鐘，以空白管調(diào)零點(diǎn)，在630nm波長(zhǎng)處進(jìn)行比色，分別讀取各管的吸光度。計(jì)算

測(cè)定管吸光度血清清蛋白（g/L）=------------------*清蛋白標(biāo)準(zhǔn)液濃度（g/L）

標(biāo)準(zhǔn)管吸光度血清球蛋白g/L=血清總蛋白g/L-血清清蛋白g/L參考范圍血清清蛋白35-55g/L血清球蛋白

20-29g/L

2.臨床意義

血清清蛋白（1）清蛋白濃度增高：除嚴(yán)重脫水，血漿濃縮而使清蛋白增高外，尚未發(fā)現(xiàn)單純清蛋白濃度增高的疾病。（2）清蛋白濃度降低：同總蛋白濃度降低。

1.

血液稀釋

靜脈滴注過(guò)多低滲溶液，各種原因所引起的水鈉潴。

2.攝入不足和消耗增加

營(yíng)養(yǎng)不良，慢性胃腸道疾病引起的消化吸收不良，消耗性疾病，結(jié)核

病、甲亢、惡性腫瘤。

3.合成障礙

主要見(jiàn)于肝臟疾患。

4.蛋白質(zhì)丟失

嚴(yán)重?zé)齻?，大量血漿滲出，腎病綜合癥。血清球蛋白

球蛋白的含量是通過(guò)血清總蛋白測(cè)定值減去血清清蛋白測(cè)值計(jì)算出的。臨床意義球蛋白濃度增高：臨床上球蛋白增高多見(jiàn)于炎癥、免疫系統(tǒng)疾病和腫瘤1）細(xì)菌、病毒、寄生蟲(chóng)引起的急慢性感染：結(jié)核病、麻風(fēng)病、瘧疾、黑熱病、血吸蟲(chóng)病、病毒性肝炎。2）自身免疫性疾?。合到y(tǒng)性紅斑狼瘡、硬皮病、風(fēng)濕熱、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等。3）多發(fā)性骨髓瘤和淋巴瘤：多發(fā)性骨髓瘤是一種單克隆疾病，它是由漿細(xì)胞惡性增殖造成的異常高的單一Ig（多見(jiàn)于IgA或IgG）血癥。淋巴瘤也屬單克隆疾病。球蛋白濃度降低：見(jiàn)于血液稀釋、嚴(yán)重的營(yíng)養(yǎng)不良、胃腸道疾病等。白蛋白與球蛋白的比例A／G比值反映了清蛋白與球蛋白濃度變化的關(guān)系。正常A／G比值為1～2／1.臨床上常用A／G比值來(lái)衡量肝臟疾病的嚴(yán)重程度，當(dāng)A／G比值小于1時(shí)，稱(chēng)比值倒置，為慢性肝炎或肝硬化的特征之一。第四節(jié)血漿纖維蛋白測(cè)定血漿纖維蛋白原測(cè)定

血漿纖維蛋白原（Fib）是一種參與血液凝固的糖蛋白，又稱(chēng)凝血因子Ⅰ，在肝臟合成，電泳時(shí)位于β球蛋白區(qū)帶。血漿纖維蛋白原測(cè)定對(duì)于出血性疾病和肝臟損傷的診斷有重要意義。

復(fù)鈣雙縮脲法原理在稀釋血漿中加入鈣離子使纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為不溶性纖維蛋白凝塊，將凝塊分離后用雙縮脲法測(cè)定纖維蛋白含量。

試劑1）225.2mmol/L氯化鈣溶液：

2）154mmol/氯化鈉溶液：

3）雙縮脲空白試劑：

4）蛋白標(biāo)準(zhǔn)液：

注意事項(xiàng)1、標(biāo)本要新鮮，放置過(guò)久會(huì)使結(jié)果偏低。2、纖維蛋白凝塊要完全卷起。3、不能溶血，否則結(jié)果增高。4、卷、擠、吸、洗、溶的過(guò)程要輕柔，避免纖維蛋白丟失。

測(cè)定管吸光度0.01血清總蛋白（g/L）=----------------*標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)濃度（g/L）*----

標(biāo)準(zhǔn)管吸光度0.5參考范圍2-4g/L二、熱沉淀比濁法

原理

血漿經(jīng)

pH6.3

KH2PO4-NaOH緩沖液稀釋后，加熱至56℃，使纖維蛋白原凝集而呈現(xiàn)濁度，而其它蛋白質(zhì)仍處于溶解狀態(tài)，用比濁法測(cè)定其含量。熱沉淀比濁法試劑

0.1mol/LKH2PO40.1mol/LNaOHKH2PO4-NaOH緩沖液1.纖維蛋白原減少1.原發(fā)性纖維蛋白原減少為罕見(jiàn)的遺傳性疾病，通過(guò)常染色體隱性基因遺傳，此患者肝臟不能合成纖維蛋白原。男、女兩性均能發(fā)生，但以男嬰為多見(jiàn)，患嬰出生時(shí)，半數(shù)出現(xiàn)臍帶出血。血液凝固緩慢.

2.繼發(fā)性血漿纖維蛋白原減少由于纖維蛋白溶解酶溶解纖維蛋白所致。如胎盤(pán)早剝，分娩時(shí)羊水進(jìn)入血管形成血栓，引起彌漫性血管內(nèi)凝血，激活纖維蛋白溶酶原，使血中纖維蛋白溶酶活力增加，溶解纖維蛋白，消耗了體內(nèi)原有的纖維蛋白原，使其含量減少。有時(shí)可降至0.5g／L以下。3.嚴(yán)重的肝實(shí)質(zhì)損害如各種原因引起的肝壞死、慢性肝病晚期、肝硬化等都可出現(xiàn)纖維蛋白原的減少。此類(lèi)疾病還常伴有凝血酶原及第七因子缺乏，往往是病情嚴(yán)重的先兆。此外，嚴(yán)重的低纖維蛋白原血癥也可見(jiàn)于肺及前列腺手術(shù)中。2.纖維蛋白原增加纖維蛋白原是一種急性時(shí)相蛋白，其增加往往是機(jī)體的一種非特異反應(yīng)，常見(jiàn)于下列疾?。海?）感染：如毒血癥、肺炎、輕型肝炎、膽囊炎、肺結(jié)核及長(zhǎng)期的局部炎癥等。（2）無(wú)菌炎癥：如腎病綜合征、風(fēng)濕熱、惡性腫瘤、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等。

（3）其他：如外科手術(shù)、放射治療、月經(jīng)期及妊娠也可輕度增高。

3.纖維蛋白原異常纖維蛋白原異常是一種遺傳性疾病，是常染色體顯性遺傳。患者纖維蛋白原含量可能在正常范圍，但纖維蛋白原有質(zhì)的異常。主要是纖維蛋白原分子的一個(gè)多肽上出現(xiàn)了一個(gè)異常的氨基酸，臨床上可無(wú)癥狀或僅有輕度的出血傾向。第五節(jié)血清黏蛋白白測(cè)定血清粘蛋白血清粘蛋白占血清總蛋白量的1%～2%，是體內(nèi)一種粘多糖與蛋白質(zhì)分子結(jié)合成的耐熱復(fù)合蛋白質(zhì).屬于體內(nèi)糖蛋白的一種.其粘多糖往往是由氨基葡萄糖、氨基半乳糖、甘露糖、巖藻糖及唾液酸等組成。酚試劑法酚試劑與粘蛋白分子中的酪氨酸殘基作用,生成藍(lán)色化合物.試劑154mmol/L氯化鈉溶液1.8mmol/L過(guò)氯酸溶液17.74mmol/L磷鎢酸溶液酚試劑1.88mmol/L碳酸鈉溶液酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液實(shí)驗(yàn)操作取3支試管，按下表操作加入物（ml）測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管蒸餾水1.751.51.75酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液—0.25—碳酸鈉溶液0.500.500.50酚試劑0.250.250.25混勻，37℃水浴放置15分鐘，以空白管調(diào)零點(diǎn)，在650nm波長(zhǎng)處進(jìn)行比色，分別讀取各管的吸光度。參考范圍:0.71~0.87g/L注意事項(xiàng)過(guò)氯酸為強(qiáng)氧化劑,按危險(xiǎn)品保存,實(shí)驗(yàn)操作時(shí)多加小心.臨床意義

血清粘蛋白增高常見(jiàn)于各種急性或慢性炎癥,病理性增生,組織破壞等如腫瘤（尤其是女性生殖器腫瘤）、結(jié)核、肺炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、風(fēng)濕熱、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等

血清粘蛋白減少常見(jiàn)于實(shí)質(zhì)性肝病(如病毒性肝炎/中毒性肝炎/門(mén)靜脈肝硬化等),甲狀腺功能減退,腎病綜合癥.血清粘蛋白的連續(xù)測(cè)定對(duì)于同一病例病程的轉(zhuǎn)歸（病變的擴(kuò)大或縮小、腫瘤有無(wú)轉(zhuǎn)移、腫瘤手術(shù)切除或其他治療效果）的判斷有一定的參考價(jià)值。第六節(jié)其他體液蛋白質(zhì)測(cè)定腦脊液蛋白質(zhì)測(cè)定腦脊液蛋白質(zhì)來(lái)源:外源:經(jīng)脈絡(luò)膜的毛細(xì)血管壁超濾生成的內(nèi)源:由中樞神經(jīng)系統(tǒng)合成的腦脊液特有蛋白質(zhì).檢測(cè)方法1.磺基水楊酸-硫酸鈉比濁(SS-S)法2.鄰苯三酚紅鉬絡(luò)合顯色法目的對(duì)改良的磺基水楊酸-硫酸鈉比濁(SS-S)法測(cè)定腦脊液蛋白進(jìn)行評(píng)價(jià),選擇一種快速、準(zhǔn)確、低廉、適合臨床常規(guī)檢驗(yàn)的方法。試劑磺基水楊酸-硫酸鈉溶液疊氮鈉生理鹽水蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液實(shí)驗(yàn)操作取3支試管，按下表操作加入物（ml）測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管腦脊液0.5----蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液—0.5—生理鹽水----0.5磺基水楊酸-硫酸鈉溶液4.04.04.0實(shí)驗(yàn)操作混勻，37℃水浴放置10分鐘，以空白管調(diào)零點(diǎn)，在530nm波長(zhǎng)處進(jìn)行比色，分別讀取各管的吸光度。

測(cè)定管吸光度腦脊液總蛋白質(zhì)（g/L）=----------------*標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)濃度（g/L）標(biāo)準(zhǔn)管吸光度參考范圍新生兒400~1200mg/L兒童200~700mg/L成人150~400mg/L臨床意義臨床情況外觀總蛋白(mg-L)

健康成年人無(wú)色、透明、澄清150～450球菌性腦膜炎膿性、混濁1000～30000結(jié)核性腦膜炎無(wú)色、纖維薄膜500～3000，偶可達(dá)10000病毒性腦膜炎無(wú)色、清500～3000癲癇無(wú)色、清500～3000脊髓腫瘤無(wú)色、清、黃變1000～20000腦瘤無(wú)色、清150～2000腦膿腫清或微混300～3000腦出血無(wú)色、黃變或血性300～1500多發(fā)性硬化癥無(wú)色、清250～800尿總蛋白測(cè)定來(lái)源：２／３來(lái)自血漿蛋白，主要是ＡＬＢ１／３來(lái)自腎臟與尿路的組織蛋白。臨床應(yīng)用：正常兒童＜40mg／24h，成30mg－130mg/24h；異常：蛋白尿。檢測(cè)：用于泌尿系統(tǒng)疾病及一些全身性疾病的篩查、療效觀察，詳見(jiàn)腎臟功能檢驗(yàn)。檢測(cè)方法:1、濁度法：蛋白質(zhì)+磺基水楊酸-硫酸鈉沉淀比濁（受溫度等影響）H+2、鄰苯三酚紅鉬絡(luò)合顯色法正電負(fù)電3、雙縮脲比色法試劑1.顯色試劑鄰苯三酚紅鉬酸銨2.蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液實(shí)驗(yàn)操作取3支試管，按下表操作加入物（ml）測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管生理鹽水----0.1蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液—0.1—標(biāo)本0.1----顯色試劑5.05.05.0實(shí)驗(yàn)操作混勻，37℃水浴放置10分鐘，以空白管調(diào)零點(diǎn)，在600nm波長(zhǎng)處進(jìn)行比色，分別讀取各管的吸光度。

測(cè)定管吸光度尿蛋白（g/L）=----------------*標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)濃度（g/L）標(biāo)準(zhǔn)管吸光度參考范圍隨機(jī)蛋白質(zhì)10~140mg/L24H尿蛋白28~141mg/24H臨床意義生理性蛋白尿高蛋白飲食、劇烈運(yùn)動(dòng)、發(fā)熱、寒冷、精神過(guò)度緊張所導(dǎo)致的輕度、一過(guò)性蛋白尿。病理性蛋白尿腎小球、腎小管疾病所致的蛋白尿。1.腎小球性蛋白尿:急性腎小球性腎炎、急性腎功能衰竭、紅斑狼瘡性腎病等2.腎小管性蛋白尿:腎小管性酸中毒、腎盂腎炎、藥物中毒等3.混合型蛋白尿：慢性腎炎、慢性腎盂腎炎以及糖尿病、系統(tǒng)性紅包狼瘡等全身性疾病等第七節(jié)血清蛋白電泳分析醋酸纖維素薄膜電泳醋酸纖維薄膜電泳（celluloseacetatemembraneelectrophoresis）以醋酸纖維薄膜為支持物。它是纖維素的醋酸酯，由纖維素的羥基經(jīng)乙?；瞥?。它溶于丙酮等有機(jī)溶液中，即可涂布成均一細(xì)密的微孔薄膜，厚度以0.1mm—0.15mm為宜。太厚吸水性差，分離效果不好；太薄則膜片缺少應(yīng)有的機(jī)械強(qiáng)度則易碎。實(shí)驗(yàn)原理帶電粒子在電場(chǎng)作用下，向著與其所帶電荷相反的方向泳動(dòng)現(xiàn)象稱(chēng)為電泳。由于被分離物質(zhì)各組分所帶電荷的性質(zhì)、數(shù)量和分子顆粒的大小、形狀的不同，在同一電場(chǎng)作用下其移動(dòng)方向和移動(dòng)速度也不同，即它們的電泳遷移率（μ）不同，因此，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間電泳后即可被分離開(kāi)來(lái)。電泳法及其影響因素利用上述性質(zhì)，將混合物中各組分進(jìn)行分離分析的方法稱(chēng)為電泳法。電泳法應(yīng)用十分廣泛，是生物科學(xué)中非常重要的一門(mén)研究技術(shù)。影響電泳遷移率的外界因素：電場(chǎng)強(qiáng)度、溶液的pH值、溶液的離子強(qiáng)度和電滲現(xiàn)象影響電泳遷移率的內(nèi)在因素：質(zhì)點(diǎn)所帶凈電荷的量、質(zhì)點(diǎn)的大小和形狀。

電泳法及其影響因素采用醋酸纖維薄膜作為支持物的電泳方法稱(chēng)為醋酸纖維素薄膜電泳。醋酸纖維素薄膜具有均一的泡沫狀的結(jié)構(gòu)，厚度約為120μm，有很強(qiáng)的通透性，對(duì)分子移動(dòng)阻力很小，該法具有微量、快速、簡(jiǎn)便、分辨力高，對(duì)樣品無(wú)拖尾和吸附現(xiàn)象等優(yōu)點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)以醋酸纖維素為電泳支持物，分離各種血清蛋白。清中各主要蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)均低于pH8.6，在該緩沖液中均帶負(fù)電荷，在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)。血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白和各種脂蛋白等。

三、實(shí)驗(yàn)材料

醋酸纖維薄膜（2×8cm）常壓電泳儀點(diǎn)樣器（蓋玻片）培養(yǎng)皿粗濾紙載玻片鑷子人血清巴比妥緩沖液（pH8.6，離子強(qiáng)度0.07）染色液（氨基黑10B）漂洗液四、實(shí)驗(yàn)步驟

1.浸泡：

將2×8cm醋酸纖維薄膜迎著光辨別光澤面和無(wú)光澤面。在無(wú)光澤面距短邊一端1.5cm