動物肝臟中DNA的提取及檢測實驗報告

動物肝臟中DNA的提取及檢測試驗報告動物肝臟中DNA的提取及檢測一、前言脫氧核糖核酸脫氧核糖核酸，又稱去氧核糖核酸，是脫氧核糖核酸染色體的主要化學(xué)成分，同時也是組成基因的材料。有時也被稱為“遺傳微?！保売墒窃谏尺^程中，父代會把它們自己DNA的一局部復(fù)制傳遞到子代中，從而完成性狀的傳播。DNADNADNA對紫外線有吸取作用，利用這一特性，可以對DNA進展含量測定。當(dāng)核酸變性時，吸光度上升，稱為增色效應(yīng)；當(dāng)變性核酸重復(fù)性時，吸光尿素、酰胺等都可以引起DNA分子變性，即DNA雙鏈堿基間的DNA在細(xì)胞內(nèi)，DNA46條染色體。染色體在細(xì)胞分裂之前會先在分裂間期完成復(fù)G1期-DNAS期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。對于真核生物，如動物、植物及真菌而言，染色體主要存在于細(xì)胞核內(nèi)；而對于原核生物，如細(xì)菌而言，則主要存在于細(xì)胞質(zhì)中的擬核內(nèi)。染色體上的染色質(zhì)蛋白，如組織蛋白，能夠?qū)NA進展組織并壓縮，以幫助DNA與其他蛋白質(zhì)進展交互作用，進而調(diào)整基因的轉(zhuǎn)錄。脫氧核糖核酸的構(gòu)造DNA的構(gòu)造：DNA的構(gòu)造一般可劃分為一級構(gòu)造、二級構(gòu)造、三級構(gòu)造和四級構(gòu)造四個水平。DNA即腺嘌呤脫氧核苷酸、胸腺嘧啶脫氧核苷酸、胞嘧啶脫氧核苷酸、鳥嘌呤脫氧核苷酸。而脫氧核糖與磷酸分子借酯鍵相連，組成其長鏈骨架，排列在外側(cè)，四種堿基排列在內(nèi)側(cè)。每個糖分子都與四種堿基里的其中一種相連，這些堿基沿著DNA的合成。讀取密碼的過程稱為轉(zhuǎn)錄，是以DNA雙鏈中的一條mRNADNA是很多脫氧核苷酸按肯定堿基挨次彼此用3’，5’DNA長鏈，也有的DNA為單鏈，如大腸桿菌噬菌體φX174、G4、M13DNADNA和鏈狀DNADNADNA的5-甲基胞嘧啶特別豐富。在某些噬菌體中，5-羥甲基40年月后期，查加夫覺察不同物種DNA數(shù)等于其胸腺嘧啶數(shù)，鳥嘌呤數(shù)等于胞嘧啶數(shù)，因而嘌DNA的構(gòu)造。濃鹽法從動物組織中提取DNA核酸和蛋白質(zhì)在生物體中常以核蛋白的形式存在，其中DNP能溶于水及高濃度鹽溶液，但在M的鹽溶液中溶解度很RNP則可溶于低鹽溶液，因此可利用不同濃度的NaCl溶液將其從樣品中分別抽提出來。將抽提得到的DNP用SDSDNA淀除去可得DNA上清，參加冷乙醇即可將其呈纖維狀析出。肝臟細(xì)胞肝臟是肝細(xì)胞組成，肝細(xì)胞微小，肉眼看不到，必需通過顯微鏡才能看到。人肝約有25億個肝細(xì)胞，5000個肝細(xì)胞組成一個肝小葉，因此人肝的肝小葉總數(shù)約有50肝細(xì)胞為多角形，直徑約為20-30/加(微米)，有6-8個面，不同的生理條件下大小有差異，如饑餓時肝細(xì)胞體積變大。每個肝細(xì)胞外表可分為竇狀隙面、肝細(xì)胞面和膽小管面三種。肝細(xì)胞里面含有許很多多簡單的微小構(gòu)造:如肝細(xì)胞核、肝細(xì)胞質(zhì)、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、溶酶體、高爾基氏體、微粒體及飲液泡等組成。二、試驗?zāi)康?DNA三、試驗原理核酸和蛋白質(zhì)在生物體中常以核蛋白的形式存在，其中DNP能溶于水及高濃度鹽溶液，但在M的鹽溶液中溶解度很RNP則可溶于低鹽溶液，因此可利用不同濃度的NaCl溶液將其從樣品中分別抽提出來。將抽提得到的DNP用SDS處理可將其分別DNA和蛋白質(zhì)，DNA醇即可將其呈纖維狀析出。四、試驗器材和材料試劑試驗器材： ①勻漿器 ②量筒 ③離心機④離心管 ⑤試管 ⑥吸管 ⑦恒溫水浴鍋試驗材料： ①豬肝試驗試劑：①/L/L檸檬酸鈉溶液②95%乙醇 ③NaCl固體④5%SDS溶液 ⑤V(氯仿)：V20：1的混合液五、試驗操作稱量①稱取肯定質(zhì)量的豬肝，參加2倍肝重的/L/L檸檬酸鈉緩沖液并用勻漿器磨碎。提取DNA4ml于104000r/min10min，沉淀中再參加8ml4000r/min5min；②棄上清，取沉淀；10ml5ml氯仿-異戊醇混合液、1mlSDS30min；NaCl1mol/L；⑤將2104000r/min5min，取上清水相；95%乙醇，邊加邊用玻棒漸漸朝一個方向攪動，將纏繞在玻棒上的凝膠狀物用DNA8mlDNA10ml③在粗提取DNA操作中，頻繁地將DNA提取液轉(zhuǎn)移至各個儀器內(nèi)，可能有微小局部DNA提取液未倒凈，殘留在儀器壁上損耗掉，導(dǎo)致試驗誤差；④在使用移液槍的過程中，可能由于操作不當(dāng)或移液槍DNA樣液不準(zhǔn)確，消滅試驗誤差；⑤在水相中參加乙醇析出DNADNA均析出，DNA⑥標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程中消滅些許誤差；總的來講，本次試驗結(jié)果是相比照較成功的，較為粗略地測量出豬肝中DNA的含量，并且較為嫻熟地把握了濃鹽法從動物組織中提取DNA的原理與技術(shù)，根本到達了本次試驗的目的。在今后的試驗中會著重留意試驗操作的嚴(yán)謹(jǐn)性，嚴(yán)格依據(jù)試驗前擬定完全的試驗步驟進展，保證將試驗操作過程中可能消滅的誤差概率降到最低，盡可能到達預(yù)期的試驗效果，完成自我的學(xué)習(xí)及熬煉過程。動物肝臟中DNA的提取及檢測一、前言脫氧核糖核酸脫氧核糖核酸，又稱去氧核糖核酸，是脫氧核糖核酸染色體的主要化學(xué)成分，同時也是組成基因的材料。有時也被稱為“遺傳微粒”，緣由是在生殖過程中，父代會把它們自己DNA的一局部復(fù)制傳遞到子代中，從而完成性狀的傳播。DNADNADNA對紫外線有吸取作用，利用這一特性，可以對DNA進展含量測定。當(dāng)核酸變性時，吸光度上升，稱為增色效應(yīng)；當(dāng)變性核酸重復(fù)性時，吸光尿素、酰胺等都可以引起DNA分子變性，即DNA雙鏈堿基間的DNA在細(xì)胞內(nèi)，DNA46條染色體。染色體在細(xì)胞分裂之前會先在分裂間期完成復(fù)G1期-DNAS期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。對于真核生物，如動物、植物及真菌而言，染色體主要存在于細(xì)胞核內(nèi)；而對于原核生物，如細(xì)菌而言，則主要存在于細(xì)胞質(zhì)中的擬核內(nèi)。染色體上的染色質(zhì)蛋白，如組織蛋白，能夠?qū)NA進展組織并壓縮，以幫助DNA與其他蛋白質(zhì)進展交互作用，進而調(diào)整基因的轉(zhuǎn)錄。脫氧核糖核酸的構(gòu)造DNA的構(gòu)造：DNA的構(gòu)造一般可劃分為一級構(gòu)造、二級構(gòu)造、三級構(gòu)造和四級構(gòu)造四個水平。DNA即腺嘌呤脫氧核苷酸、胸腺嘧啶脫氧核苷酸、胞嘧啶脫氧核苷酸、鳥嘌呤脫氧核苷酸。而脫氧核糖與磷酸分子借酯鍵相連，組成其長鏈骨架，排列在外側(cè)，四種堿基排列在內(nèi)側(cè)。每個糖分子都與四種堿基里的其中一種相連，這些堿基沿著DNA的合成。讀取密碼的過程稱為轉(zhuǎn)錄，是以DNA雙鏈中的一條mRNADNA是很多脫氧核苷酸按肯定堿基挨次彼此用3’，5’DNA長鏈，也有的DNA為單鏈，如大腸桿菌噬菌體φX174、G4、M13DNADNA和鏈狀DNADNA中，5-甲基胞嘧啶可在肯定限度內(nèi)取代胞嘧啶，其中小麥胚DNA的5-甲基胞嘧啶特別豐富。在某些噬菌體中，5-羥甲基40年月后期，查加夫覺察不同物種DNA數(shù)等于其胸腺嘧啶數(shù)，鳥嘌呤數(shù)等于胞嘧啶數(shù)，因而嘌DNA的構(gòu)造。濃鹽法從動物組織中提取DNA核酸和蛋白質(zhì)在生物體中常以核蛋白的形式存在，其中DNP能溶于水及高濃度鹽溶液，但在M的鹽溶液中溶解度很RNP則可溶于低鹽溶液，因此可利用不同濃度的NaCl溶液將其從樣品中分別抽提出來。將抽提得到的DNP用SDSDNA淀除去可得DNA上清，參加冷乙醇即可將其呈纖維狀析出。肝臟細(xì)胞肝臟是肝細(xì)胞組成，肝細(xì)胞微小，肉眼看不到，必需通過顯微鏡才能看到。人肝約有25億個肝細(xì)胞，5000個肝細(xì)胞組成一個肝小葉，因此人肝的肝小葉總數(shù)約有50肝細(xì)胞為多角形，直徑約為20-30/加(微米)，有6-8個面，不同的生理條件下大小有差異，如饑餓時肝細(xì)胞體積變大。每個肝細(xì)胞外表可分為竇狀隙面、肝細(xì)胞面和膽小管面三種。肝細(xì)胞里面含有許很多多簡單的微小構(gòu)造:如肝細(xì)胞核、肝細(xì)胞質(zhì)、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、溶酶體、高爾基氏體、微粒體及飲液泡等組成。二、試驗?zāi)康?.把握濃鹽法從動物組織中提取DNA的原理與技術(shù)三、試驗原理核酸和蛋白質(zhì)在生物體中常以核蛋白的形式存在，其中DNP能溶于水及高濃度鹽溶液，但在M的鹽溶液中溶解度很RNP則可溶于低鹽溶液，因此可利用不同濃度的NaCl溶液將其從樣品中分別抽提出來。將抽提得到的DNP用SDS處理可將其分別DNA和蛋白質(zhì)，DNA醇即可將其呈纖維狀析出。四、試驗器材和材料試劑試驗器材： ①勻漿器 ②量筒 ③離心機④離心管 ⑤試管 ⑥吸管 ⑦恒溫水浴鍋試驗材料： ①豬肝試驗試劑：①/L/L檸檬酸鈉溶液②95%乙醇 ③NaCl固體④5%SDS溶液 ⑤V(氯仿)：V20：1的混合液五、試驗操作稱量①稱取肯定質(zhì)量的豬肝，參加2倍肝重的/L/L檸檬酸鈉緩沖液并