大三上課程內(nèi)容-診斷學(xué)甲2013實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)2浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院楊大干內(nèi)容1.白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)*2.尿蛋白定性試驗(yàn)（加熱醋酸法）*3.尿糖定性試驗(yàn)（班氏糖還原試驗(yàn)）*4.尿液鏡檢*5.腦脊液蛋白質(zhì)定性試驗(yàn)（潘氏試驗(yàn)）示教6.漿膜粘蛋白定性試驗(yàn)（Rivalta試驗(yàn)）示教7.瑞氏染色方法1.取1滴血于潔凈的玻片上推制成長(zhǎng)約3~4cm的薄血片，要求頭、體、尾清晰可見。

2.室溫中自然干燥.3.瑞氏染色：加染液A3-5滴于血膜上，待覆蓋全部血膜后30秒，加染液B3-5滴，30秒后用水沖洗干凈待干。

4.選擇體尾交界的區(qū)域，用油鏡計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞，根據(jù)形態(tài)特征分類并計(jì)算出百分比。(保留好玻片，下節(jié)實(shí)驗(yàn)課做)大小約6-9um,雙面微凹，染粉紅色，中央有小淡染區(qū)，無(wú)細(xì)胞核，溶貧、白血病、MDS、骨纖或缺鐵貧、巨幼貧治療期會(huì)出現(xiàn)幼紅細(xì)胞。1.白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)1為嗜中性分葉核，細(xì)胞胞體圓形，約10-13um，胞質(zhì)豐富，染粉紅色，含較多細(xì)小均勻的淡粉紅色中性顆粒，核2-3葉居多，核間核絲相連。2為桿狀核核呈彎曲桿狀1.白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)1.白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)1.白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)1為嗜中性桿狀核2為嗜酸性分葉核，細(xì)胞胞體圓形，一般分兩葉，約13-15um，胞質(zhì)內(nèi)充滿粗大的橘黃色顆粒。1.白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)嗜堿性粒細(xì)胞，細(xì)胞胞體圓形，約10-12um，胞質(zhì)紫紅色，內(nèi)有少量粗大但大小不均的黑色嗜堿性顆粒，常覆蓋于核上。1.白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)淋巴細(xì)胞，可分為大淋巴和小淋巴，前者直徑10-15um，圓形，胞漿豐富，內(nèi)含少量嗜天青顆粒。后者直徑6-10um，胞體呈圓形，胞漿量少，染色質(zhì)較固縮。1.白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)1為單核細(xì)胞，胞體大，直徑14-20um，圓形或不規(guī)則形，胞質(zhì)較多，灰蘭色，胞核大，核形不規(guī)則。2為嗜中性分葉核粒細(xì)胞。1.白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)根據(jù)細(xì)胞大小、核形、胞漿顏色、顆粒特點(diǎn)等特征進(jìn)行分類2.尿液分析方法學(xué)和檢測(cè)方法的類別物理檢查顏色、濁度、比重

化學(xué)成分粗篩葡萄糖（GLU）、蛋白質(zhì)（PRO）、膽紅素（BIL）尿膽原（URO）、PH、紅細(xì)胞（BLD）、酮體（KET）亞硝酸鹽（NIT）和白細(xì)胞（LEU）有形成分細(xì)篩有形成份（顆粒），如：上皮細(xì)胞、血細(xì)胞結(jié)晶、管型、細(xì)菌、精子、粘液等

目視或自動(dòng)分析外觀,顏色,濁度折射率儀,滲透壓儀尿干化學(xué)分析儀(手工,半自動(dòng)或全自動(dòng))尿流式分析儀顯微鏡檢查和染色技術(shù)RBC、WBC、EC、CAST、BACT、P-CAST、SRC、YLC、CRYSTAL、SPERM、MUCUS、COND.紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)信息、尿電導(dǎo)率分級(jí)、UTI信息UF-1000i半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞/核酸熒光染色技術(shù)全新DNA/RNA染色細(xì)胞分析)草酸鈣結(jié)晶最常見的形狀是八面體形狀。這些結(jié)晶可在健康個(gè)體的酸性和中性的尿液中發(fā)現(xiàn)。在病理學(xué)上，草酸鈣可在嚴(yán)重的慢性腎病中發(fā)現(xiàn)。結(jié)晶–草酸鈣結(jié)晶(CAOX)IQ200報(bào)告結(jié)果畫面2.尿液標(biāo)本采集方法2.尿液測(cè)定濕化學(xué)法--尿蛋白定性檢查

加熱醋酸法（靈敏度5~10mg/dl）

原理加熱使蛋白質(zhì)變性凝固，加稀醋酸使PH下降，約達(dá)到蛋白質(zhì)等電點(diǎn)（PH4.7左右），有利于蛋白質(zhì)沉淀。加酸還可以消除因尿液受熱而出現(xiàn)的磷酸鹽結(jié)晶等。試劑5﹪醋酸：冰醋酸5ml，加蒸餾水至100ml方法

1.取試管1支，加清晰尿液至試管的2/3處。2.夾住試管下部，使試管傾斜，用酒精燈在尿液的上1/3處，逐漸加熱至煮沸。3.在尿液中滴加5％醋酸2～3滴，觀察結(jié)果?！九袛唷浚海?）：煮沸、加酸后尿液仍清晰透明者為陰性反應(yīng)。（2）：煮沸后產(chǎn)生混濁，加酸后混濁消失而不生氣泡者為磷酸鹽。（3）：煮沸后產(chǎn)生混濁，加酸后混濁消失并有氣泡生成者為碳酸鹽。（4）：加酸后混濁反而增加，表示尿內(nèi)含熱凝固性蛋白（白蛋白，球蛋白）。根據(jù)混濁程度，按下表判斷標(biāo)準(zhǔn)報(bào)告結(jié)果。

煮沸醋酸結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)定性結(jié)果煮沸所見蛋白約含量（g/dl）

－仍清晰，濁度不增加無(wú)

±僅在黑色背景下，有輕微混濁極微量

+白色混濁，無(wú)顆粒及絮狀沉淀0.01～0.05

++有明顯白色顆粒狀混濁，但無(wú)絮狀沉淀0.05～0.2

+++大量絮片狀混濁，一般不見出現(xiàn)凝快0.2～0.5

++++出現(xiàn)塊狀凝固，并有大量絮片狀沉淀＞0.5【參考值】陰性【注意事項(xiàng)】1.醋酸加的過多，PH低于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)時(shí)，已經(jīng)沉淀的蛋白質(zhì)又可溶解，可使陽(yáng)性減弱或呈假陰性。因此醋酸用量要控制在2～3滴（約50~100ul）之內(nèi)。2.不要在試管下部加熱，以便用下部尿液作對(duì)比。3.如尿液中電解質(zhì)含量太低（如限制食鹽的病人）時(shí)，因缺乏鹽析作用，在煮沸時(shí)蛋白質(zhì)部易生成沉淀，遇此情況須先加相當(dāng)于尿量1/6量的飽和鹽水溶液，混勻后再作檢查。4.應(yīng)在煮沸加酸后，立即觀察結(jié)果，延長(zhǎng)時(shí)間會(huì)影響結(jié)果的判斷?！驹怼科咸烟侨┗趬A性環(huán)境中加熱，能使二價(jià)硫酸銅還原為一價(jià)氧化亞銅，出現(xiàn)黃至磚紅色沉淀物。【試劑】班氏試劑3.尿糖定性試驗(yàn)--班（Benedict）氏法（靈敏度100mg/dl）【操作】:取班氏試劑約2ml至一中試管中,煮沸。加尿液0.2ml（比例約10：1）,直接在火焰上或沸水中煮2分鐘?！九袛唷?如尿中有糖,則因糖量的不同,試劑由藍(lán)色變?yōu)辄S綠色,直至磚紅色,可根據(jù)顏色判定結(jié)果.或在放冷后,根據(jù)沉淀的程度按下述標(biāo)準(zhǔn)判定結(jié)果糖定性結(jié)果判斷表

反應(yīng)表現(xiàn)符號(hào)大致糖量(g/dl)仍呈藍(lán)色－冷卻后有少量微綠色沉淀±煮沸2分鐘有少量綠黃色沉淀(以綠色為主)+<0.5煮沸1分鐘即有較多黃綠色沉淀（以黃為主)++0.5～1煮沸15秒,顯土黃色沉淀+++1～2開始沸騰即顯棕紅色沉淀++++>2

尿沉渣檢查是用顯微鏡或儀器對(duì)尿沉淀物進(jìn)行檢查，以識(shí)別尿液中各種細(xì)胞，各類管型，粘液絲，結(jié)晶，細(xì)菌，寄生蟲等各種病理成分，是重要的常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目。這些有形成分的識(shí)別對(duì)泌尿系統(tǒng)疾病的診斷、病情觀察、判斷預(yù)后有重要意義。

4.尿沉渣鏡檢尿沉渣檢驗(yàn)的操作步驟標(biāo)本收集隨機(jī)尿

門診、急診標(biāo)本過篩試驗(yàn)晨尿

尿常規(guī)檢查(特別是對(duì)蛋白、細(xì)菌、細(xì)胞及管型檢查)離心離心管中倒入充分混均的尿液10ml，2000轉(zhuǎn)，離心5分鐘。離心后傾倒上清液，留0.2ml鏡檢。鏡檢充分混勻標(biāo)本，取1滴（約50ul），均勻置于玻片上用低倍鏡（10×10）觀察全片，再用高倍鏡（10×40）仔細(xì)觀察并計(jì)數(shù)各類細(xì)胞在10個(gè)視野內(nèi)的最低和最高數(shù)目。在某些生理或病理情況下，沉渣尿中主要有以下幾種有形成分，現(xiàn)介紹如下：尿中紅細(xì)胞增多見于：a.腎病包括急、慢性腎小球腎炎、腎盂腎炎、狼倉(cāng)性腎炎、腎腫瘤、腎結(jié)石、腎盂積水、多囊腎等b.下尿道疾病包括急、慢性感染，尿道狹窄、腫瘤、結(jié)石c.腎外疾病，如急、慢性胰腺炎、亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、白血病等d.磺胺藥物、水楊酸藥物引起的中毒反映活體正常紅細(xì)胞經(jīng)阿利新蘭-中性紅染色，不著色或淡黃色，胞體呈現(xiàn)圓盤狀有折光尿液中常見紅細(xì)胞A正常紅細(xì)胞B大紅細(xì)胞C小紅細(xì)胞棘狀紅細(xì)胞尿白細(xì)胞見于膀胱炎、尿路感染、腎盂腎炎、前列腺炎等疾病

尿中常見白細(xì)胞A中性粒細(xì)胞，多見于新鮮尿液中，外形完整，圓形，漿內(nèi)顆粒清晰可見，胞核清楚，常分散存在B淋巴細(xì)胞C單核細(xì)胞膿細(xì)胞團(tuán)見于炎癥時(shí)，由白細(xì)胞變性、壞死粘連而成A活體中性粒細(xì)胞B膿粒細(xì)胞上皮細(xì)胞表層鱗狀上皮細(xì)胞：多見于女性尿液。移行上皮細(xì)胞：腎盂腎炎和膀胱炎時(shí)可見。腎小管上皮細(xì)胞：正常尿中無(wú)此細(xì)胞，一旦出現(xiàn)往往表示腎小管病變，如急性腎小管壞死性腎炎、腎病綜合癥、腎小管間質(zhì)性炎癥。

表層鱗狀上皮細(xì)胞細(xì)胞較大，形態(tài)不規(guī)則，扁平似魚鱗，含有小而圓或橢圓形的核。此細(xì)胞常成堆出現(xiàn)。經(jīng)阿利新蘭-中性紅染色，核呈紫紅色，胞漿紅色。

中層移行上皮細(xì)胞體積大小不一，常呈梨形、紡錘形或帶尾形，又名尾形上皮細(xì)胞。核較大呈圓或橢圓形。

底層移行上皮細(xì)胞體積較小，形態(tài)較圓，和腎小管上皮細(xì)胞統(tǒng)稱為小圓上皮細(xì)胞。底層移行上皮細(xì)胞核相對(duì)較小，整個(gè)胞體較腎小管上皮細(xì)胞為大。腎小管上皮細(xì)胞腎小管上皮細(xì)胞群，由多個(gè)腎小管上皮細(xì)胞組成，形似管型。

管型透明管型:在正常人清晨濃縮尿中偶可見到，在激烈運(yùn)動(dòng)后、高熱、全身麻醉等情況下，可一過性出現(xiàn)，腎小球腎炎時(shí)，可見明顯增多。顆粒管型：增多時(shí)表示腎有實(shí)質(zhì)性病變。細(xì)顆粒管型:多見于腎小球腎炎，少數(shù)可見于無(wú)腎臟疾病者尿中，特別在運(yùn)動(dòng)后，發(fā)熱或脫水時(shí)。粗顆粒管型:多見于慢性腎小球腎炎、腎病綜合癥時(shí)。細(xì)胞管型:1.紅細(xì)胞管型：常見于急性腎小球腎炎、慢性腎小球腎炎急性發(fā)作期、急性腎小管壞死、腎出血、腎移植術(shù)后急性排斥反應(yīng)。2.白細(xì)胞管型：提示腎有炎性變化，多見于腎盂腎炎或急性腎炎。3.腎小管上皮細(xì)胞管型：各種原因所致腎小管損傷時(shí)出現(xiàn)，如急性腎小管壞死、腎淀粉樣變性、腎移植后排斥反應(yīng)。脂肪管型:可見于腎病綜合癥、慢性腎小球腎炎急性發(fā)作、腎小管中毒等。蠟樣管型:出現(xiàn)時(shí)表示腎臟有長(zhǎng)期而嚴(yán)重的病變，見于慢性腎炎晚期、腎衰竭和腎淀粉樣變時(shí)。紅細(xì)胞管型可見未完全溶解的紅細(xì)胞紅細(xì)胞管型管型內(nèi)紅細(xì)胞呈圓盤、氣泡狀，大小不一白細(xì)胞管型管型內(nèi)充滿白細(xì)胞，一般為中性粒細(xì)胞，呈球形。因白細(xì)胞黏附性強(qiáng)，過多時(shí)呈集團(tuán)性粘合，有時(shí)白細(xì)胞破碎呈顆粒狀。白細(xì)胞管型A白細(xì)胞管型B紅細(xì)胞C小圓上皮細(xì)胞透明管型可見黏附少量白細(xì)胞，應(yīng)與白細(xì)胞管型區(qū)別上皮細(xì)胞管型管型內(nèi)含有腎小管上皮細(xì)胞，但大部分已變性，細(xì)胞大小不一。尿液中如大量出現(xiàn)上皮細(xì)胞管型，表示腎小管有病變和腎小管腔受到阻塞。細(xì)顆粒管型管型較長(zhǎng)而窄，內(nèi)含有許多細(xì)顆粒，不透明。管型內(nèi)顆粒主要是腎上皮細(xì)胞的分解產(chǎn)物，開始顆粒大而粗，再降解為細(xì)顆粒粗顆粒管型橘黃色，顆粒粗大，出現(xiàn)于膽紅素尿液中結(jié)晶尿是機(jī)體的代謝產(chǎn)物，大量的無(wú)機(jī)鹽隨尿液排出體外，維持機(jī)體的酸堿平衡。尿中折出的各種無(wú)機(jī)鹽類主要取決于這些物質(zhì)在尿液中的溶解度.濃度.PH，溫度及藥物等因素的影響。當(dāng)任何一種因素失衡時(shí)，可有鹽類或結(jié)晶析出，大量時(shí)可使尿液混濁。尿中鹽類及結(jié)晶可分為三類：1.酸性尿液：（PH＜6.0)常見的結(jié)晶為尿酸結(jié)晶，草酸鈣，硫酸鈣及各種氨基酸結(jié)晶和膽固醇結(jié)晶；鹽類為非結(jié)晶性尿酸鹽。在新鮮尿液中如大量出現(xiàn)酸性尿結(jié)晶，特別是尿酸和草酸鈣結(jié)晶又伴有紅細(xì)胞時(shí)，多為腎或膀胱，輸尿管結(jié)石。2.堿性尿液：（PH＞8.0）常見的結(jié)晶為磷酸鈣，碳酸鈣，尿酸銨，尿酸鈣和非結(jié)晶形磷酸鹽。這類結(jié)晶一般無(wú)臨床意義。3.藥物結(jié)晶：一種無(wú)定形的結(jié)晶，特別為磺胺類藥物，如大量持續(xù)出現(xiàn)磺胺類結(jié)晶時(shí)，并同時(shí)有紅細(xì)胞，管型存在，多表示腎已受磺胺類藥物損害，應(yīng)立即停用磺胺藥。

尿酸結(jié)晶草酸鈣結(jié)晶

為折光性強(qiáng)的八面體，兩條對(duì)角線在中間交叉，大小不一，邊緣較厚。如同時(shí)伴有較多紅細(xì)胞時(shí)應(yīng)考慮有尿結(jié)石可能。尿粘液絲及其他成份尿粘液絲：形狀呈長(zhǎng)絲狀，粗細(xì)不等，邊緣不整齊，兩端尖細(xì)也可一端尖細(xì)，彎曲，易誤認(rèn)為管型，應(yīng)引起重視。正常人尿中少見，出現(xiàn)大量粘液絲時(shí)，表示尿道受刺激或有炎癥反應(yīng)。其他成份：尿液沉渣中有時(shí)還可發(fā)現(xiàn)霉菌，滴蟲，精子等有形成分，這也應(yīng)引起注意。束狀黏液絲可見于正常人尿中，尤其是女性尿中。大量出現(xiàn)表示尿道受刺激或有炎癥反應(yīng)真菌孢子西瓜子樣，圓形或橢圓形，不著色或微綠色，折光性強(qiáng)，大小不一。真菌菌絲菌絲呈樹枝狀生長(zhǎng)，有折光性雙球菌球菌成雙排列精子A精子B白細(xì)胞C紅細(xì)胞桿菌(左)、球菌(中)、霉菌孢子(右)[報(bào)告方式]

5.腦脊液蛋白質(zhì)定性試驗(yàn)

潘氏（Pandy‘s）試驗(yàn)原理

腦脊液中球蛋白與苯酚結(jié)合，形成不溶性蛋白鹽而產(chǎn)生白色混濁或沉淀。生理狀態(tài)下，由于血腦屏障的作用，只允許少量白蛋白進(jìn)入腦脊液，因此，正常腦脊液有時(shí)也可呈弱陽(yáng)性反應(yīng)。試劑5%—7%苯酚液方法

取飽和苯酚溶液2mL于試管內(nèi)，加腦脊液一滴，于黑色背景下觀察。