臨床病原學(xué)檢查詳解

（優(yōu)選）臨床病原學(xué)檢查課件第一頁(yè)，共四十八頁(yè)。[目的要求]掌握：感染性疾病的診斷和治療原則熟悉：感染性疾病病原學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷及抗生素治療的主要實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)方法了解：病原學(xué)診斷的重要性，現(xiàn)代感染的類(lèi)型和病原微生物的變遷第二頁(yè)，共四十八頁(yè)。病原體檢查的作用

1.感染性疾病的明確診斷2.通過(guò)藥敏試驗(yàn)指導(dǎo)臨床合理用藥3.病原體監(jiān)控和耐藥性監(jiān)控第三頁(yè)，共四十八頁(yè)。

第一節(jié)標(biāo)本采集、運(yùn)送和檢查方法第四頁(yè)，共四十八頁(yè)。一.標(biāo)本采集和運(yùn)送采集標(biāo)本注意點(diǎn)：1.標(biāo)本容器必須無(wú)菌或清潔容器2.選擇最佳時(shí)間采集標(biāo)本，在抗菌藥物使用前3.獲取標(biāo)本時(shí)，須嚴(yán)格無(wú)菌操作4.標(biāo)本采集后，應(yīng)盡快送實(shí)驗(yàn)室第五頁(yè)，共四十八頁(yè)。㈠血液發(fā)熱初期和高峰期采集抗菌藥物治療前成人每次10-20ml，嬰幼兒1-2ml標(biāo)本不用抗凝劑24小時(shí)內(nèi)，可在不同部位采血3次第六頁(yè)，共四十八頁(yè)。㈡尿液無(wú)菌采集清潔中段尿?qū)蚧虬螂状┐太@得第七頁(yè)，共四十八頁(yè)。㈢糞便取含膿、血或粘液糞便置于清潔容器內(nèi)排便困難者或嬰幼兒可用直腸拭子對(duì)傳染性腹瀉須三次送檢第八頁(yè)，共四十八頁(yè)。㈣呼吸道標(biāo)本1.痰：⑴自然咳痰法⑵氣管鏡采集法2.鼻咽拭標(biāo)本：同痰標(biāo)本用清水漱口后采集第九頁(yè)，共四十八頁(yè)。㈤腦脊液與其他無(wú)菌體液腦脊液標(biāo)本應(yīng)立即保溫送檢胸腹水等體液標(biāo)本應(yīng)抽取2-5ml送檢第十頁(yè)，共四十八頁(yè)。㈥泌尿生殖道標(biāo)本性傳播疾病取尿道口分泌物、陰道宮頸口分泌物生殖道皰疹常穿刺取皰疹液第十一頁(yè)，共四十八頁(yè)。㈦創(chuàng)傷、組織和膿腫標(biāo)本開(kāi)放性膿腫：無(wú)菌棉拭采集膿液封閉性膿腫：無(wú)菌注射器穿刺抽取第十二頁(yè)，共四十八頁(yè)。二.病原體檢查的基本方法1.臨床標(biāo)本細(xì)菌檢驗(yàn)一般程序第十三頁(yè)，共四十八頁(yè)。一般程序

標(biāo)本直接涂片，染色鏡檢分離培養(yǎng)增菌培養(yǎng)需氧培養(yǎng)

二氧化碳培養(yǎng)厭氧培養(yǎng)觀察菌落形態(tài)

單個(gè)菌落涂片、染色鏡檢

血清學(xué)鑒定生化鑒定藥敏試驗(yàn)

確定致病菌發(fā)出報(bào)告第十四頁(yè)，共四十八頁(yè)。2.病原體診斷的基本方法

直接顯微鏡檢測(cè)（microscopicexamination）⑴染色標(biāo)本檢查法：革蘭染色和抗酸染色⑵不染色標(biāo)本檢查法：懸滴法和壓滴法第十五頁(yè)，共四十八頁(yè)。2.病原體診斷的基本方法病原體分離培養(yǎng)(isolationandculture)和鑒定(identification)培養(yǎng)基選擇生長(zhǎng)條件：一般大氣條件厭氧條件微需氧條件第十六頁(yè)，共四十八頁(yè)。2.病原體診斷的基本方法鑒定技術(shù)：生化鑒定血清學(xué)鑒定數(shù)碼鑒定自動(dòng)化鑒定第十七頁(yè)，共四十八頁(yè)。2.病原體診斷的基本方法血清學(xué)診斷：查特異性抗體——肥達(dá)氏試驗(yàn)病原體特異性抗原檢測(cè)病原體核酸檢測(cè)：查特異基因片段DNA/RNA——PCR、DNA探針雜交技術(shù)第十八頁(yè)，共四十八頁(yè)。

第二節(jié)細(xì)菌耐藥性檢查第十九頁(yè)，共四十八頁(yè)。

一.抗微生物藥物敏感性試驗(yàn)（AST）

1.定義：對(duì)敏感性不能預(yù)測(cè)的臨床分離菌株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，以指導(dǎo)臨床選擇治療藥物和了解區(qū)域或醫(yī)院內(nèi)常見(jiàn)病原菌耐藥性變遷，有助于臨床經(jīng)驗(yàn)性治療選藥。第二十頁(yè)，共四十八頁(yè)。一.抗微生物藥物敏感性試驗(yàn)（AST）2.常用敏感性試驗(yàn)方法⑴手工試驗(yàn):①K-B紙片瓊脂擴(kuò)散法結(jié)果表示:S-SusceptibleI-IntermediateR-Resistant②稀釋法（MIC）③Etest④聯(lián)合藥敏試驗(yàn)第二十一頁(yè)，共四十八頁(yè)。一.抗微生物藥物敏感性試驗(yàn)（AST）⑵自動(dòng)化儀器Vitek，Microscan⑶分子試驗(yàn)PCR直接檢測(cè)mecA基因⑷補(bǔ)充試驗(yàn)Nitrocefin第二十二頁(yè)，共四十八頁(yè)。一.抗微生物藥物敏感性試驗(yàn)（AST）3.藥敏試驗(yàn)結(jié)果與臨床抗生素劑量關(guān)系敏感(S)——一般劑量有效，推薦使用該抗生素用于臨床治療中介(I)——大劑量有效，提示藥物MIC接近體液或組織可達(dá)到藥物濃度耐藥(R)——大劑量無(wú)效,即常規(guī)用藥劑量不能達(dá)到MIC第二十三頁(yè)，共四十八頁(yè)。一.抗微生物藥物敏感性試驗(yàn)（AST）4.K-B紙片擴(kuò)散試驗(yàn)的影響因素瓊脂厚度與抑菌圈直徑成反比菌液濃度與抑菌圈直徑成反比藥敏試紙含量–與抑菌圈直徑成反比保存溫度–20℃，使用前室溫平衡

30min后開(kāi)啟濕度-密封容器，硅膠防潮NCCLS標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)種類(lèi)(MH),厚度(4mm)

接種量(0.5MF)

選藥標(biāo)準(zhǔn),判讀標(biāo)準(zhǔn),質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

第二十四頁(yè)，共四十八頁(yè)。質(zhì)控參考菌金黃色葡萄球菌ATCC25923大腸埃希菌ATCC25922銅綠假單胞菌ATCC26853第二十五頁(yè)，共四十八頁(yè)。二.耐藥機(jī)制及耐藥性監(jiān)測(cè)試驗(yàn)1.耐藥菌株：耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）耐青霉素肺炎鏈球菌（PRSP）耐萬(wàn)古霉素腸球菌（VRE）質(zhì)粒介導(dǎo)的超廣譜-內(nèi)酰胺酶（ESBL）多重耐藥的銅綠假單胞菌、嗜麥芽假單胞菌和不動(dòng)桿菌第二十六頁(yè)，共四十八頁(yè)。二.耐藥機(jī)制及耐藥性監(jiān)測(cè)試驗(yàn)2.耐藥機(jī)制：⑴藥物滲入細(xì)菌減少⑵產(chǎn)生滅火酶和鈍化酶(-內(nèi)酰胺酶)⑶細(xì)菌抗生素結(jié)合蛋白發(fā)生改變（PBP）⑷代謝拮抗劑產(chǎn)生第二十七頁(yè)，共四十八頁(yè)。二.耐藥機(jī)制及耐藥性監(jiān)測(cè)試驗(yàn)3.耐藥性監(jiān)測(cè)的特殊試驗(yàn)⑴-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)方法:頭孢哨噻吩濾紙片法(nitrocefin)意義:-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)陽(yáng)性,即對(duì)青霉素、氨卞西林等抗生素耐藥第二十八頁(yè)，共四十八頁(yè)。二.耐藥機(jī)制及耐藥性監(jiān)測(cè)試驗(yàn)⑵超廣譜-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)（ESBL）定義：是水解青霉素，一代、二代和三代頭孢菌及單酰胺類(lèi)藥物的酶，產(chǎn)生ESBL的細(xì)菌對(duì)上述抗生素耐藥。

ESBL主要存在于大腸桿菌和肺炎克雷伯菌等革蘭陰性菌中。第二十九頁(yè)，共四十八頁(yè)。二.耐藥機(jī)制及耐藥性監(jiān)測(cè)試驗(yàn)⑵超廣譜-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)（ESBL）方法：紙片擴(kuò)散法和稀釋法意義：ESBL陽(yáng)性預(yù)示對(duì)頭孢泊肟、頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢曲松和氨曲南等抗菌藥物無(wú)效。第三十頁(yè)，共四十八頁(yè)。二.耐藥機(jī)制及耐藥性監(jiān)測(cè)試驗(yàn)⑶瓊脂篩選試驗(yàn)（agarscreentest）是以單一藥物單一濃度檢測(cè)細(xì)菌耐藥性，如耐甲氧西林葡萄球菌和耐萬(wàn)古霉素腸球菌檢測(cè)。第三十一頁(yè)，共四十八頁(yè)。二.耐藥機(jī)制及耐藥性監(jiān)測(cè)試驗(yàn)⑷耐藥基因檢測(cè)如MRSA中mecA基因檢測(cè)第三十二頁(yè)，共四十八頁(yè)。耐藥性統(tǒng)計(jì)和分析

WHONET

建立本院、本地區(qū)和本國(guó)的細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)和網(wǎng)絡(luò)第三十三頁(yè)，共四十八頁(yè)。

第三節(jié)

醫(yī)院感染檢查（NosocomialInfection）第三十四頁(yè)，共四十八頁(yè)。醫(yī)院感染檢查1.定義:病人入院時(shí)不存在,也不處于潛伏期，而在醫(yī)院內(nèi)發(fā)生的感染，包括醫(yī)院內(nèi)獲得而在出院后發(fā)病的感染。第三十五頁(yè)，共四十八頁(yè)。醫(yī)院感染檢查2.醫(yī)院感染常見(jiàn)病原體（細(xì)菌）：革蘭陰性桿菌、革蘭陽(yáng)性球菌（MRSA）、厭氧菌和深部真菌等第三十六頁(yè)，共四十八頁(yè)。醫(yī)院感染檢查3.感染源:外源或內(nèi)源性病原體外源性：其他住院患者、醫(yī)務(wù)人員、探望者（多為條件致病菌）內(nèi)源性：患者自身皮膚、口腔、咽部和胃腸道固有的正常菌群等（免疫力低下患者）第三十七頁(yè)，共四十八頁(yè)。醫(yī)院感染檢查4.常見(jiàn)臨床類(lèi)型下呼吸道感染尿路感染手術(shù)切口感染胃腸道感染血液感染皮膚和組織感染第三十八頁(yè)，共四十八頁(yè)。醫(yī)院感染檢查5.感染途徑：接觸傳播空氣、飛沫傳播經(jīng)注射或輸液、輸血傳播經(jīng)口傳播第三十九頁(yè)，共四十八頁(yè)。醫(yī)院感染檢查6.易感因素：年齡：老年和嬰幼兒慢性疾病患者基礎(chǔ)疾病或醫(yī)源性燒傷或創(chuàng)傷產(chǎn)生壞死性組織大量使用抗生素接受侵襲性治療操作第四十頁(yè)，共四十八頁(yè)。醫(yī)院感染檢查7.醫(yī)院感染常見(jiàn)病原菌監(jiān)測(cè)尿液標(biāo)本病原菌——大腸埃希菌，變形桿菌，肺炎克雷伯氏菌，腸球菌，金黃色葡萄球菌，銅綠色假單胞菌菌落計(jì)數(shù)>104/ml以上——尿路感染第四十一頁(yè)，共四十八頁(yè)。醫(yī)院感染檢查7.醫(yī)院感染常見(jiàn)病原菌監(jiān)測(cè)痰（咽拭子）培養(yǎng)病原菌——肺炎鏈球菌，肺炎克雷伯氏菌，大腸埃希菌，腸球菌，金黃色葡萄球菌，銅綠色假單胞菌等半定量3+~4+為致病菌，1+~2+懷疑為污染菌第四十二頁(yè)，共四十八頁(yè)。醫(yī)院感染檢查7.醫(yī)院感染常見(jiàn)病原菌監(jiān)測(cè)痰（咽拭子）培養(yǎng)

甲型溶血性鏈球菌是亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎的主要致病菌第四十三頁(yè)，共四十八頁(yè)。醫(yī)院感染檢查7.醫(yī)院感染常見(jiàn)病原菌監(jiān)測(cè)糞培養(yǎng)病原菌——金黃色葡萄球菌，傷寒及其他沙門(mén)氏菌，志賀氏菌屬，致病性大腸埃希菌，霍亂弧菌，副溶血性弧菌，彎曲菌，念珠菌等第四十四頁(yè)，共四十八頁(yè)。醫(yī)院感染檢查7.醫(yī)院感染常見(jiàn)病原菌監(jiān)測(cè)血培養(yǎng)：病原菌：金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等單次血培養(yǎng)不易區(qū)分污染菌或感染菌。兩次培養(yǎng)均為同種皮膚正常菌群可認(rèn)為感染菌。第四十五頁(yè)，共四十八頁(yè)。醫(yī)院感染檢查8.醫(yī)院環(huán)境監(jiān)測(cè)和消毒滅菌監(jiān)測(cè)空氣培