白細胞血型HLA法醫(yī)學

白細胞血型（HLA）

HLA的命名、遺傳、應用、抗原在體內的分布、測定I類抗原的試驗名稱、原理，NIH技術HLA抗原的結構、HLA抗體的來源、特性及交叉反應，DNA分型方法。掌握了解要求一、MHC與HLA第一節(jié)概述紅細胞血型抗原白細胞特有抗原與其它組織共有抗原：HLA人類白細胞膜上的抗原1HLA又稱移植抗原、組織相容性抗原.2基因群MHC主要組織相容性復合體人類的MHC稱為HLA系統(tǒng)Ⅱ類抗原：

D、DR、DP、DQⅠ類抗原：

A、B、C人類組織相容性抗原分七個座位人類組織相容性抗原

小鼠腫瘤移植排斥，多次輸血病人體內及經(jīng)產婦體內有抗體，發(fā)現(xiàn)白細胞抗原存在多數(shù)組織中，微量淋巴細胞毒試驗，國際專題討論會，分子生物學研究。二.研究簡史三、抗原結構與細胞分布45kd，由MHC編碼，有5個結構域：α1、α2有多態(tài)性，α3與β2m以非共價鍵連接，α4越膜部分，α5在胞漿內?？扇苄钥乖次挥诎ね獠糠帧＜处?m(β2微球蛋白)，12kd，基因在第15號染色體，影響重鏈表現(xiàn)出抗原性。Ⅰ類抗原：A、B、C抗原β鏈（輕鏈）α鏈（重鏈）Ⅱ類抗原：DR、DP、DQ三、抗原結構與細胞分布α鏈、β鏈均為重鏈，非共價鍵連接，由MHC編碼，二條鏈各有4個結構域，多態(tài)性主要由α1、β1結構域決定。人體分布Ⅰ類Ag幾乎所有有核細胞膜上，淋巴細胞密度最高。以可溶性形式存在血漿、體液中。成熟紅細胞無，血小板有。Ⅱ類Ag免疫活性細胞上：樹突狀細胞、單核細胞、B細胞。精子Ⅰ、Ⅱ類Ag都有，且以單倍型形式表達。1妊娠6周2（月經(jīng)期、排卵期）可能與激素有關。3與細胞膜代謝有關。發(fā)育和變異發(fā)育早4藥物、疾病，如腫瘤。主要表現(xiàn)為抗原與抗體反應減弱，或可逆性喪失。

5使蛋白質變性的因素都會使HLA抗原發(fā)生不可逆的變化生理周期獻血員病理理化性質變異6大寫英文字母：A、B、C、D、DR、DP、DQ第二節(jié)命名阿拉伯數(shù)字：1、2、3……A、B座位數(shù)字不重疊；C座位，Cw為與補體區(qū)分；

D、DP座位，Dw、DPw為用細胞學方法測定。HLA-A*0201（A座位，A2抗原，1號亞型基因）~A*0210（10號亞型基因）HLA-A23(9)：9為寬特異性，23為窄特異性

抗原座位每一座位特異性等位基因命名似血清學命名大寫英文字母：A、B、C、D、DR、DP、DQ抗原座位大寫英文字母：A、B、C、D、DR、DP、DQ抗原座位大寫英文字母：A、B、C、D、DR、DP、DQ抗原座位大寫英文字母：A、B、C、D、DR、DP、DQ抗原座位第三節(jié)遺傳一、基因定位及結構Ⅰ類Ⅱ類Ⅲ類基因區(qū)基因區(qū)基因區(qū)主要編碼A、B、C抗原的α鏈18個外顯子和7個內含子2多態(tài)性主要由外顯子2和3決定3Ⅰ類基因區(qū)主要編碼DR、DP、DQ的α、β鏈DRA有3個等位基因，DRB有9個基因位點6個外顯子和5個內含子多態(tài)性主要由外顯子2決定Ⅱ類基因區(qū)二、遺傳特征共顯性遺傳特異性單倍型遺傳重組連鎖不平衡基因單位點遺傳

一個座位最多檢出二個抗原。A2，A-：表示為A2純合子或A2和一個空白抗原或A2和一個至今尚未發(fā)現(xiàn)的抗原。遺傳特征1.共顯性遺傳遺傳特征⒉各座位特異性連鎖成單倍型遺傳。表型：A9,A11；B5,B13基因型：A9,A11；B5,B13單倍型：A11,B5,/A9,B13；A11,B13,/A9,B5同胞間關系:1/4全相同,1/4全不同,1/2半相同⒊重組遺傳特征A、B座位間重組率0.87%。單倍型頻率等于組成基因頻率的乘積，但有些單倍型觀察頻率高于或低于期望頻率。A2頻率0.3，B46頻率0.05，A2,B46預期頻率0.015，但實際觀察值0.04。因此計算親權指數(shù)時要用單倍型頻率。遺傳特征⒋連鎖不平衡遺傳特征⒌基因單位點遺傳父HLA-DRB1*0401純合子母HLA-DRB1*0302純合子子為此兩基因雜合子HLA群體分布不同人群HLA抗原分布差異大，提供某些人類遷移和混雜信息。第四節(jié)分型一、血清學分型二、細胞學分型(D、DP抗原分型)三、DNA分型一、血清學分型1、A、B、C抗原分型2、DR、DQ抗原分型微量淋巴細胞毒性實驗NIH技術原理微量淋巴細胞毒實驗步驟1、A、B、C抗原分型抗體+相應抗原+補體——>細胞膜受損，著色，估計死細胞占全部細胞的%，判定抗原。微量淋巴細胞毒性實驗NIH技術原理制備淋巴細胞懸液，多用外周血，通過密度梯度離心法取得淋巴細胞，調細胞數(shù)2000個/ul1ul抗原+1ul抗體→(30min、20～25℃)+5ul補體（兔血清）→(60min、20～25℃)+3ul伊紅→(5～8min)+8ul甲醛→(過夜)低倍鏡觀察、判讀結果。微量淋巴細胞毒實驗步驟圖示

B淋巴細胞從全淋巴細胞中通過尼龍棉柱法分離B淋巴細胞作微量淋巴細胞毒實驗。2、DR、DQ抗原分型:抗血清同種異體免疫：妊娠、輸血、器官移植，以產婦血清獲得為主；單克隆抗體；免疫動物等。來源抗血清特性多為IgG,少為IgM，有細胞毒作用，部分有凝集作用。效價低，多數(shù)為多價.抗血清交叉反應:多數(shù)為同一座位上的Ag、Ab間；同一特異性分出來的幾個特異性間往往強交叉，如：A23－A24；B座位交叉反應多于A座位。交叉反應一般較弱，打分<6分。B7抗原刺激產生的抗體與B7、B27、B22抗原均可反應，說明B7、B27、B22間有交叉。

A11抗原A11抗體｜—交叉。

A3抗原二、細胞學分型(D、DP抗原分型)混合淋巴細胞培養(yǎng)。PCR-RFLP(限制性片段長度多態(tài)性)PCR-SSP(序列特異性引物)

PCR-SSO(等位基因特異性寡核苷酸探針（