血小板抗原抗體檢測(cè)及其輸血科應(yīng)用

血小板抗原抗體檢測(cè)及其輸血科應(yīng)用第一頁，共五十一頁，2022年，8月28日010203目錄/contents血小板抗原血小板抗體與疾病血小板抗體檢測(cè)的臨床意義和臨床應(yīng)用第二頁，共五十一頁，2022年，8月28日血小板簡(jiǎn)介血小板：D:2-5um

V:紅細(xì)胞*1/5功能：促進(jìn)止血和加速凝血正常范圍：100-300×109/L骨髓干細(xì)胞胞質(zhì)塊脫落來源：多功能祖細(xì)胞巨核祖細(xì)胞幼巨核細(xì)胞巨核細(xì)胞血小板第三頁，共五十一頁，2022年，8月28日血小板形態(tài)靜息狀態(tài)活化狀態(tài)第四頁，共五十一頁，2022年，8月28日血小板抗原血小板“非特異性”抗原血小板“特異性”抗原

HPA抗原

HLA-Ⅰ類抗原

ABH抗原第五頁，共五十一頁，2022年，8月28日血小板具有HLA-Ⅰ類抗原（HLA-A、HLA-B抗原和少量HLA-C抗原），無HLA-Ⅱ類抗原。故輸注血小板要比器官移植所需配型簡(jiǎn)單。血小板個(gè)體間HLA-Ⅰ類抗原位點(diǎn)數(shù)差別不大。每個(gè)血小板上至少有20000個(gè)HLA抗原位點(diǎn)。HLA抗原第六頁，共五十一頁，2022年，8月28日部分為血小板的固有蛋白，另一部分從血漿中吸附。血小板上的ABH抗原個(gè)體之間表達(dá)不同，約5%的非O型個(gè)體為A抗原或B抗原的高表達(dá)者。故血小板輸血應(yīng)同型輸注；抗體檢測(cè)應(yīng)采用O型血小板，以排除ABO系統(tǒng)抗體的干擾。◆GPIb、GPIIb/IIIa、

GPIa/Iia、CD109等也攜帶少量ABH抗原ABH抗原第七頁，共五十一頁，2022年，8月28日主要存在于血小板膜的GP分子上，也少量存在于血管內(nèi)皮細(xì)胞、結(jié)締組織細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞。1990年國(guó)際輸血協(xié)會(huì)血小板免疫學(xué)工作組提出了HPA命名，以發(fā)現(xiàn)的時(shí)間順序排列：HPA-1、HPA-2、HPA-3等系統(tǒng)。HPA抗原第八頁，共五十一頁，2022年，8月28日已確定了33個(gè)HPA，其中12個(gè)抗原為雙等位基因表達(dá)（HPA-1,-2,-3,-4，-5和-15）。其中高頻率抗原命名a，低頻率抗原命名b。其余21個(gè)抗原為低頻率抗原，尚未發(fā)現(xiàn)對(duì)偶抗原，命名為bw。單核苷酸多態(tài)性（SNP）:33個(gè)HPA中均已搞清楚基因背景，其中32個(gè)HPA的多態(tài)性型是由一個(gè)氨基酸置換所致，而這又是由編碼血小板膜糖蛋白（GP）基因的一個(gè)核苷酸的不同所致。HPA-14bw不具有單核苷酸多態(tài)性。其核苷酸置換發(fā)生在AAG1929-31。HPA抗原第九頁，共五十一頁，2022年，8月28日HPA抗原第十頁，共五十一頁，2022年，8月28日HPA抗原第十一頁，共五十一頁，2022年，8月28日血小板抗原定型血清學(xué)定型即用已知特異性抗體檢測(cè)血小板血型抗原缺點(diǎn)：特異性抗體來源困難

---人血清中血小板抗體通常為多特異性

---單克隆抗體匱乏，目前國(guó)際上僅有HPA-1a單抗，

無其它HPA單抗?；蚨ㄐ拖拗菩云伍L(zhǎng)度多態(tài)性分析（RFLP）序列特異性寡核苷酸聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-SSO)序列特異性引物聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-SSP)第十二頁，共五十一頁，2022年，8月28日用途：（1）健康人群HPA基因分型，建立已知HPA基因型的血小板獻(xiàn)血員庫(kù)。（2）檢測(cè)受者HPA基因型，以便從血小板獻(xiàn)血員庫(kù)中尋找與其HPA基因型相匹配的血小板供者。（3）檢測(cè)患者HPA基因型，輔助臨床胎兒/新生兒免疫性血小板減少癥、輸血后紫癜及血小板輸注無效癥等疾病的病因診斷。（4）對(duì)特定區(qū)域或種族人群HPA基因分型，可為人類遺傳學(xué)研究提供相關(guān)資料和證據(jù)。1aa2aa3ab4aa5aa6aa7aa8aa9aa10aa11aa12aa13aa14aa15ab16aa17aa血小板抗原定型第十三頁，共五十一頁，2022年，8月28日血小板抗體的產(chǎn)生方式

以上途徑產(chǎn)生的血小板同種抗體與血小板上的相應(yīng)抗原結(jié)合，導(dǎo)致血小板被內(nèi)皮網(wǎng)狀系統(tǒng)清除。懷孕移植（骨髓、器官）藥物、自身免疫輸血小板、紅細(xì)胞（尤其是沒有濾白的紅細(xì)胞）第十四頁，共五十一頁，2022年，8月28日血小板抗體與部分相關(guān)疾病

抗體分類疾病HLA/HPA抗體其它抗體同種抗體格蘭茨曼血小板功能不全病抗GPⅡb/Ⅲa抗體同種異體抗體新生兒同種異體免疫性血小板減少癥HPA1a(78%),HPA5b(19%)HPA-2,3,4(3%),HPA-15,HPA-9bw,Anti-CD36血小板輸注無效癥HLA-I抗體50~80%,HPA17~25%(日本人為HPA-2b),HPA-15,anti-CD36極少數(shù)為ABO抗體血小板輸血后紫癜HPA-1a,HPA-1b,HPA-2b,HPA-3a,HPA-3b,HPA-15,anti-CD36少數(shù)為抗GPIa/IIa抗體被動(dòng)同種異體免疫性血小板減少癥HPA-1a,HPA-5b移植相關(guān)同種異體免疫性血小板減少癥HPA-1a,HPA-3,HPA-5b自身抗體自發(fā)性血小板減少癥多數(shù)位于GPⅡb/ⅢaGPIb/IX/V，少數(shù)位于GPIV/V和GPIa/IIa繼發(fā)于母體自發(fā)性血小板減少癥同上藥物依賴性抗體奎寧/奎尼丁抗體所致疾病抗原位于GPⅡb/Ⅲa和GPIb/IX肝素抗體所致疾病抗原表位是PF4第十五頁，共五十一頁，2022年，8月28日胎盤屏障YYYY母體同種異體抗體通過胎盤母體同種異體免疫胎兒血小板減少舉例——NAIT第十六頁，共五十一頁，2022年，8月28日NAIT胎母同種異體免疫血小板減少癥（fetomaternalalloimmunethrombocytopenia，F(xiàn)MAIT）致病機(jī)理與新生兒溶血病（HDN）相似，前者是由胎兒父母血小板抗原不合引起的血小板減少癥，后者為紅細(xì)胞抗原不合引起的溶血性疾病。由于胎兒遺傳自父親的血小板抗原刺激母體產(chǎn)生IgG型的抗血小板抗體，該抗體能通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)并與具有相應(yīng)抗原的血小板結(jié)合，此致敏血小板在胎兒的血液循環(huán)中被清除而使得胎兒血小板減少，出現(xiàn)瘀點(diǎn)和瘀斑，其嚴(yán)重者會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)損傷（占已報(bào)道病例的20%）、10%出現(xiàn)顱內(nèi)出血(死亡率近100%）。因多數(shù)病例在出生后才得以診斷，故此病也稱作新生兒同種異體免疫血小板減少癥。初次妊娠婦女即可發(fā)生FMAIT，其發(fā)病率大約為1/800-1500。第十七頁，共五十一頁，2022年，8月28日FMAIT患兒病情變化較大，具有自限性，常在出生后2-3周恢復(fù)。輕度血小板減少患兒有時(shí)沒有任何臨床癥狀。病情較重患兒臨床表現(xiàn)為皮膚、體內(nèi)外黏膜出血，出現(xiàn)紫癜、瘀點(diǎn)或瘀斑。嚴(yán)重患兒可能發(fā)生顱內(nèi)出血（intracranialhaemorrhage，ICH），占10%。與FMAIT相關(guān)的ICH

80%發(fā)生在子宮內(nèi)，其中14%發(fā)生在妊娠20周前，28%發(fā)生在妊娠30周前。NAIT臨床表現(xiàn)第十八頁，共五十一頁，2022年，8月28日母體血清抗HPA抗體檢測(cè)，然而母體抗體水平到預(yù)產(chǎn)期時(shí)逐漸下降，約有30%的病例抗體陰性。父母雙親的HPA基因檢測(cè)，在高加索地區(qū)采取對(duì)其HPA-1和HPA-5基因檢測(cè)，而在亞洲地區(qū)應(yīng)考慮進(jìn)行HPA-4和HPA-5基因檢測(cè)。父母雙親交叉配型實(shí)驗(yàn)，將母體血清與父親血小板進(jìn)行交叉配型實(shí)驗(yàn)，即使不能確切知道不相合的抗原，但這種方法也能發(fā)現(xiàn)母體是否存在血小板同種異體免疫反應(yīng)。

NAIT早期診斷與篩查第十九頁，共五十一頁，2022年，8月28日NAIT第二十頁，共五十一頁，2022年，8月28日NAIT第二十一頁，共五十一頁，2022年，8月28日舉例——血小板輸注無效第二十二頁，共五十一頁，2022年，8月28日血小板抗體檢測(cè)常用方法功能性試驗(yàn)酶標(biāo)法熒光法固相凝集法應(yīng)用范圍抗體檢測(cè)√√√√交叉配型√√√性能靈敏度低高極高高特異性不好好一般較好反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)＞2h＞2h＜1h所用儀器不定酶標(biāo)儀熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀平板離心機(jī)16th版AABB評(píng)價(jià)未提及特異性鑒定的可靠方法敏感性高特異性不足血小板交叉配型應(yīng)用最為廣泛的方法方法指標(biāo)第二十三頁，共五十一頁，2022年，8月28日血小板抗體檢測(cè)方法-固相凝集法第二十四頁，共五十一頁，2022年，8月28日血小板抗體篩檢，包括HLA抗體、HPA抗體及其它血小板反應(yīng)性抗體。輔助血小板相關(guān)免疫性疾病的診斷。血小板交叉配型，為患者篩選相容性的血小板或血小板供者，避免血小板輸注無效癥的發(fā)生?；颊咦陨砜贵w檢測(cè)，包括血小板結(jié)合抗體和血清中游離抗體。檢測(cè)血小板結(jié)合抗體可將患者血小板平鋪在反應(yīng)孔后，直接加入抗人IgG和指示紅細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。血清中的游離抗體可通過患者自身血小板和血清反應(yīng)來檢測(cè)。用途：血小板抗體檢測(cè)方法-固相凝集法第二十五頁，共五十一頁，2022年，8月28日

1.主要應(yīng)用科室：輸血科，血液病科，婦產(chǎn)科，新生兒科。2.輸血科：⑴.預(yù)防血小板輸注無效癥的發(fā)生：通過對(duì)患者進(jìn)行血小板抗體篩查以及隨后的與血小板供者的交叉配型試驗(yàn)，篩選和患者血小板抗原配合性高的血小板供者，以提高血小板輸注有效率，防止血小板輸注無效癥的發(fā)生。⑵.指導(dǎo)臨床輸血，保障輸血安全：輸血科在常規(guī)血型鑒定中加入血小板抗體檢測(cè)，可對(duì)臨床輸血中出現(xiàn)發(fā)熱、黃疸、急性肺損傷等非溶血性輸血反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)作出評(píng)估。血小板抗體檢測(cè)臨床意義第二十六頁，共五十一頁，2022年，8月28日

3.婦產(chǎn)科:孕前，孕期，產(chǎn)后

1).反復(fù)流產(chǎn)、不孕不育查因：對(duì)于反復(fù)和習(xí)慣性流產(chǎn)史（尤其是孕早期）和不孕不育史的患者，檢測(cè)患者血清和血漿中血小板抗體的水平，可對(duì)其造成流產(chǎn)和不孕不育的原因作出輔助診斷。2).產(chǎn)檢（尤其針對(duì)高齡和二胎產(chǎn)婦）孕早期檢測(cè)：在孕早期（三個(gè)月）產(chǎn)檢中常規(guī)檢測(cè)母親與胎兒的血小板相容性，對(duì)于孕早期出現(xiàn)流產(chǎn)和死胎的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)具有非常重要的意義孕晚期檢測(cè)：在孕晚期（胎兒出生前）檢測(cè)母體血清或血漿中血小板抗體水平，對(duì)胎兒出生后罹患新生兒血小板同種免疫性疾病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)具有非常重要的意義。3).妊娠期血小板降低的查因：孕婦在妊娠期血小板減少是一種常見現(xiàn)象，如是生理性降低則危害不大，往往生產(chǎn)后會(huì)恢復(fù)正常。但如果血小板的降低是由于孕婦自身免疫性疾病引起的則會(huì)引起流產(chǎn)、死胎、以及新生兒相關(guān)的血小板減少性疾病，危害嚴(yán)重。血小板抗體檢測(cè)臨床意義第二十七頁，共五十一頁，2022年，8月28日

4.血液病科：在血液腫瘤科檢測(cè)患者血清和血漿中自身血小板抗體的水平和特異性，可輔助診斷自身免疫性疾病如ITP等。5.新生兒科：新生兒血小板同種免疫性疾病的診斷。血小板抗體檢測(cè)臨床意義第二十八頁，共五十一頁，2022年，8月28日

婦產(chǎn)科領(lǐng)域輸血科常規(guī)輸血前的檢測(cè)（術(shù)前備血）預(yù)防血小板輸注無效血小板抗體檢測(cè)臨床應(yīng)用第二十九頁，共五十一頁，2022年，8月28日曾有反復(fù)流產(chǎn)史的育齡婦女，可在懷孕前進(jìn)行夫妻雙方的血小板相關(guān)抗體檢測(cè)，對(duì)由于母嬰血小板血型不合而導(dǎo)致的流產(chǎn)或NAIT進(jìn)行早期的診斷和治療。青年女性流產(chǎn)率逐年上升每一次懷孕、流產(chǎn)都可能造成母體因外來抗原刺激而產(chǎn)生抗體，危及下一次妊娠。如何在孕前/孕期正確地評(píng)估因父母血小板血型不合引起的流產(chǎn)、NAIT的風(fēng)險(xiǎn)？血小板抗體檢測(cè)在婦產(chǎn)科領(lǐng)域的應(yīng)用第三十頁，共五十一頁，2022年，8月28日血小板抗體檢測(cè)在婦產(chǎn)科領(lǐng)域的應(yīng)用第三十一頁，共五十一頁，2022年，8月28日父母血小板血型不合引起新生兒同種免疫性血小板減少癥的初步研究鄧晶、夏文杰、葉欣、徐秀章、邵媛、陳揚(yáng)凱、丁浩強(qiáng)、羅廣平、王嘉勵(lì)（廣州血液中心臨床輸血研究所）熱帶醫(yī)學(xué)雜志2012年11月第12卷第11期文中觀點(diǎn)：通過收集22例臨床上確診為新生兒免疫性血小板減少癥（NIT）的患兒為研究對(duì)象，采用ELISA方法檢測(cè)患兒及其父母的血小板相關(guān)抗體，應(yīng)用PCR-SSP法對(duì)患兒及父母進(jìn)行HLA及HPA基因分型，根據(jù)相應(yīng)的抗原進(jìn)行抗體特異性分析。結(jié)果22例NIT患兒中，14例是由于同種免疫性因素引起的，其中27.3％（6例)由HLA抗體引起,13.6％（3例）由HPA抗體引起，22.7％（5例）由HLA＋HPA抗體引起；9.1％（2例）由于被動(dòng)免疫性因素引起;27.3％（6例）由自身抗體引起。其中,同種免疫性抗體以抗HLA-A2、19，抗-B40及抗HPA-3a多見。結(jié)論：在新生兒免疫性血小板減少癥中，主要以父母血小板血型不合引起新生兒同種免疫性血小板減少癥為主，臨床產(chǎn)前診斷預(yù)防和產(chǎn)后治療具有重要意義。血小板抗體檢測(cè)在婦產(chǎn)科領(lǐng)域的應(yīng)用第三十二頁，共五十一頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)血小板抗體檢測(cè)在婦產(chǎn)科領(lǐng)域的應(yīng)用第三十三頁，共五十一頁，2022年，8月28日血小板抗體檢測(cè)在婦產(chǎn)科領(lǐng)域的應(yīng)用第三十四頁，共五十一頁，2022年，8月28日血小板抗體檢測(cè)在婦產(chǎn)科領(lǐng)域的應(yīng)用第三十五頁，共五十一頁，2022年，8月28日血小板抗體檢測(cè)在婦產(chǎn)科領(lǐng)域的應(yīng)用第三十六頁，共五十一頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)結(jié)果血小板抗體檢測(cè)在婦產(chǎn)科領(lǐng)域的應(yīng)用第三十七頁，共五十一頁，2022年，8月28日血小板抗體檢測(cè)在婦產(chǎn)科領(lǐng)域的應(yīng)用第三十八頁，共五十一頁，2022年，8月28日血小板抗體檢測(cè)應(yīng)用：非溶血性輸血反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

白細(xì)胞特異性和組織相容性（HLA）抗體是引起臨床非溶血性發(fā)熱性輸血不良反應(yīng)的最主要原因，尤其是有輸血史、輸血小板史、妊娠史、器官移植史、自身免疫性疾病史等的患者的臨床輸血工作中，非溶血性發(fā)熱反應(yīng)是臨床最常見的輸血不良反應(yīng)（約70%），文獻(xiàn)報(bào)道輸注紅細(xì)胞為2～6%，輸注血小板為20～30%，多次輸血患者高達(dá)27％～63％，而非溶血性發(fā)熱性輸血反應(yīng)與白細(xì)胞特異性和組織相容性（HLA）抗體密切相關(guān)，是影響臨床安全輸血的嚴(yán)重因素。白細(xì)胞特異性和組織相容性（HLA）抗體的檢測(cè)對(duì)于預(yù)防和減少非溶血性發(fā)熱性輸血反應(yīng)非常有意義。第三十九頁，共五十一頁，2022年，8月28日輸血反應(yīng)與血小板抗體的關(guān)系癥狀報(bào)告數(shù)抗HLA抗體（HLA-I+HLA-II類抗體）抗血小板抗體（HPA+HLA-I類抗體）蕁麻疹37828/326(8.6%)5/296(1.7%)過敏反應(yīng)373/36(8.3%)1/33(3.0%)過敏性休克11112/104(11.5%)2/96(2.1%)血壓降低290/25(0.0%)0/23(0.0%)呼吸困難4611/43(25.6%)3/38(2.4%)發(fā)熱反應(yīng)15444/139(31.7%)9/115(7.9%)其它335/31(16.1%)2/26(7.7%)總計(jì)788103/704(14.6%)22/627(3.65)血小板抗體檢測(cè)應(yīng)用：非溶血性輸血反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估第四十頁，共五十一頁，2022年，8月28日

血小板輸血是提高患者（特別是腫瘤和移植患者）血小板計(jì)數(shù)，防止出血最為快速、有效的方法和手段。然而，血小板輸血并不是每次都能達(dá)到滿意效果，特別是反復(fù)多次隨機(jī)輸注血小板的患者，體內(nèi)極易產(chǎn)生血小板抗體，從而破壞輸入的血小板并引起輸注無效。文獻(xiàn)報(bào)道約有20％~50％白血病患者，80％的再生障礙性貧血患者長(zhǎng)期隨機(jī)輸注血小板后會(huì)出現(xiàn)輸注無效狀態(tài)，導(dǎo)致患者因血小板計(jì)數(shù)低下而自發(fā)出血或出血不止，甚至死亡。我國(guó)目前大多數(shù)臨床單位采用隨機(jī)輸注血小板，導(dǎo)致血小板輸注無效頻繁發(fā)生。后果：患者病情得不到改善，病危甚至死亡；浪費(fèi)財(cái)力、物力；浪費(fèi)寶貴的血小板資源；不利于血站及輸血科業(yè)務(wù)水平的提高。血小板抗體檢測(cè)的應(yīng)用：血小板輸注無效的預(yù)防第四十一頁，共五十一頁，2022年，8月28日血小板輸注無效的危害

1）患者發(fā)生免疫反應(yīng)，加重病情。

2）患者病情得不到改善，病危甚至死亡。

3）浪費(fèi)財(cái)力、物力、寶貴的血小板資源。

4）存在醫(yī)療糾紛隱患。

5）不利于采供血機(jī)構(gòu)和醫(yī)療機(jī)構(gòu)業(yè)務(wù)水平的提高。血小板抗體檢測(cè)的應(yīng)用：血小板輸注無效的預(yù)防第四十二頁，共五十一頁，2022年，8月28日血小板抗體檢測(cè)的應(yīng)用：血小板輸注無效的預(yù)防第四十三頁，共五十一頁，2022年，8月28日血小板抗體檢測(cè)的應(yīng)用：血小板輸注無效的預(yù)防第四十四頁，共五十一頁，2022年，8月28日血小板輸血采用隨機(jī)供者血小板有效率不超過30%；采用交叉配型相容性血小板有效率為92%，而對(duì)于重度血小板免疫患者，輸注相容性血小板有效率為70%。血小板交叉配型意義血小板抗體檢測(cè)的應(yīng)用：血小板輸注無效的預(yù)防第四十五頁，共五十一頁，2022年，8月28日

對(duì)844例貧血、白血病、血小板減少及腫瘤等疾病患者進(jìn)行血小板抗體檢測(cè)。其中有效病例766例，其余78例患者病例不祥。檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)如下：病例數(shù)男性女性平均年齡血小板抗體陽性數(shù)抗體陽性率貧血（包括再障和溶血性貧血）30314016345.955116.8%白血病99524741.602525.25%血小板減少27111642.30933.33%腫瘤60213956.3311.67%出血90424852.3466.67%骨髓纖維化及骨髓異常綜合癥1912755.74736.84%其它病癥168798948.12137.74%