細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療

第二章

細(xì)菌感染試驗(yàn)診療細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療1/58感染診療有賴(lài)于從標(biāo)本中檢出病原體或檢出病原體可溶性抗原,或病原體DNA病人血清中檢出病原體抗體本章主要討論檢出病原體問(wèn)題細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療2/58第一節(jié)試驗(yàn)診療目標(biāo)與要求細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療3/58進(jìn)行病原學(xué)診療進(jìn)行藥敏試驗(yàn),指導(dǎo)合理用藥用作流行病學(xué)調(diào)查,追蹤傳染源研究病原生物與感染關(guān)系一.目標(biāo)細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療4/58

鮑氏痢疾志賀菌13型暴發(fā)

時(shí)間：1992年9月發(fā)?。?6名死亡：10名地點(diǎn)：某嬰兒室傳染源：慢性攜帶者產(chǎn)婦傳輸方式：經(jīng)過(guò)污染操作臺(tái)接觸細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療5/58鼠傷寒暴發(fā)

時(shí)間：1991年11月地點(diǎn)：某嬰兒室發(fā)病：55名死亡：23名56件物品（被褥，尿布，奶瓶）中26件檢出鼠傷寒沙門(mén)菌細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療6/58二.診療試驗(yàn)選擇有價(jià)值快速簡(jiǎn)便特異性和敏感性高細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療7/58可用方法:查病原體:直接涂片分離,對(duì)純培養(yǎng)物進(jìn)行判定查可溶性抗原:用已知抗體查DNA:分子生物學(xué)方法查抗體:用已知抗原IgMIgG:效價(jià)有4倍以上增高細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療8/58三.細(xì)菌判定流程

雙歧檢索:以某一試驗(yàn)分表解:用各種試驗(yàn)整體分析數(shù)字編碼:將各種試驗(yàn)分別編碼,數(shù)字化后查表細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療9/58革蘭氏陰性桿菌葡萄糖發(fā)酵+-氧化酶+-弧菌腸桿菌非發(fā)酵菌細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療10/58ABCDE甲乙丙丁++--++++----++--+-++細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療11/58組別試驗(yàn)代碼結(jié)果結(jié)果代碼總值1A4-01B2-0C1+1

2D4+45E2-0F1+1

15…細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療12/58微量生化反應(yīng)系統(tǒng)和自動(dòng)化

各試驗(yàn)孔含不一樣試驗(yàn)脫水底物

加入純化被檢菌

孵育4-24h觀察結(jié)果人工讀取依據(jù)編碼資料判定菌種或電腦讀取細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療13/58第二節(jié)臨床標(biāo)本采集與處理細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療14/58一.標(biāo)本采集標(biāo)準(zhǔn)早期,用抗菌藥品前依據(jù)病原體存在部位采集對(duì)應(yīng)標(biāo)本無(wú)菌技術(shù),防止正常菌群污染,預(yù)防病原體播散采取適當(dāng)方法細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療15/58二.標(biāo)本處理盡快接種到適當(dāng)培養(yǎng)基上依據(jù)抵抗力選擇保留和運(yùn)輸條件厭氧菌奈瑟菌病毒細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療16/58第三節(jié)細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療17/58一.不染色標(biāo)本用懸滴法或壓片細(xì)菌是活,可觀察運(yùn)動(dòng)加入特異抗體可抑制其運(yùn)動(dòng)結(jié)合標(biāo)本起源可作初步診療,如霍亂,梅毒用相差或暗視野顯微鏡效果更加好細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療18/58壓片懸滴法細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療19/58二.染色標(biāo)本革蘭染色(Gramstain):紫色革蘭陽(yáng)性;紅色革蘭陰性.注意細(xì)菌大小,形狀,排列以及著色均一性抗酸染色(acid-faststain):紅色抗酸陽(yáng)性,藍(lán)色抗酸陰性熒光染色:更易觀察細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療20/58特殊染色可用于觀察莢膜,鞭毛等細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療21/58第四節(jié)細(xì)菌分離培養(yǎng)細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療22/58一.細(xì)菌生長(zhǎng)要求培養(yǎng)基:營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),pH7.4氣體:需氧菌,厭氧菌,兼性厭氧菌,微需氧菌溫度:普通37°C時(shí)間:普通18~24h細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療23/58二.培養(yǎng)基1.對(duì)培養(yǎng)基基本要求足夠營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)適當(dāng)pH無(wú)菌澄清細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療24/582.培養(yǎng)基種類(lèi)按培養(yǎng)基成份分:基礎(chǔ)培養(yǎng)基:滿足普通細(xì)菌要求營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基:滿足苛求細(xì)菌要求判別培養(yǎng)基:加有被利用物和指示劑選擇培養(yǎng)基:加有抑制劑,能抑制非目標(biāo)菌生長(zhǎng)特殊培養(yǎng)基:滿足特殊細(xì)菌要求細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療25/58按培養(yǎng)基物理性狀分:液體:增菌固體:加2%瓊脂,平板用于分離純種,斜面用于傳代或保留細(xì)菌半固體:加0.5%瓊脂,用于觀察動(dòng)力,保留菌種細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療26/58三.主要接種方法分區(qū)劃線法:用于分離純種,屢次燒灼降低菌數(shù),以獲取單個(gè)菌落連續(xù)劃線:不要求單個(gè)菌落,用于保留或繁殖細(xì)菌涂布:使細(xì)菌長(zhǎng)成菌苔,可觀察細(xì)菌被抑制情況或用于繁殖細(xì)菌傾注平板:少許細(xì)菌混于瓊脂中倒板,計(jì)數(shù),分離純種細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療27/58四.細(xì)菌生長(zhǎng)表現(xiàn)固體基:菌落形成,注意其

大小,形狀表面,邊緣質(zhì)地,透明度溶血情況液體基:渾濁,菌膜,沉淀細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療28/58五.純種取得純種是細(xì)菌學(xué)工作基礎(chǔ)取得方法:劃線分離法(傾注平板法)取得大單個(gè)菌落斜面純培養(yǎng)物純培養(yǎng)物外觀表現(xiàn)應(yīng)是一致細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療29/58細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療30/58細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療31/58六.培養(yǎng)細(xì)菌目標(biāo)確定有沒(méi)有細(xì)菌判定細(xì)菌藥敏試驗(yàn)計(jì)數(shù)細(xì)菌利用細(xì)菌:制備菌苗,生產(chǎn)抗生素或基因工程產(chǎn)品細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療32/58第五節(jié)細(xì)菌代謝產(chǎn)物檢測(cè)細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療33/58一.細(xì)菌毒素檢測(cè)內(nèi)毒素:致熱作用:兔體溫鱟試驗(yàn)外毒素:體內(nèi):毒素與抗毒素中和試驗(yàn)體外:Elek平板法:沉淀反應(yīng)ELISA細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療34/58毒素和抗毒素中和試驗(yàn)外毒素?外毒素?+已知抗體小白鼠小白鼠結(jié)果發(fā)病發(fā)病有毒性,但不是相應(yīng)發(fā)病不發(fā)病是對(duì)應(yīng)毒素不發(fā)病不發(fā)病無(wú)毒性細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療35/58抗毒素待測(cè)細(xì)菌沉淀線Elek試驗(yàn)細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療36/58二.生化反應(yīng)欲檢測(cè)細(xì)菌生化反應(yīng),普通是在適當(dāng)培養(yǎng)基中加入被測(cè)物和檢測(cè)其代謝產(chǎn)物試劑,即在判別培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng),或直接加試劑于培養(yǎng)物中,觀察呈色等現(xiàn)象判定結(jié)果

細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療37/58(一)碳水化合物代謝試驗(yàn)糖(醇)發(fā)酵試驗(yàn):酸,氣體氧化-發(fā)酵(O/F)試驗(yàn):?-半乳糖苷酶(ONPG)試驗(yàn)七葉苷水解試驗(yàn)甲基紅試驗(yàn)V-P試驗(yàn)細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療38/58(二)蛋白質(zhì)和氨基酸代謝試驗(yàn)

明膠液化試驗(yàn)Indol試驗(yàn)Ura試驗(yàn)H2S試驗(yàn)苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)氨基酸脫羧酶試驗(yàn)細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療39/58(三)碳源氮源利用枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)丙二酸鹽利用試驗(yàn)細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療40/58枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療41/58(四)酶氧化酶試驗(yàn)過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)硝酸鹽還原試驗(yàn)卵磷脂酶試驗(yàn)?zāi)堂冈囼?yàn)CAMP試驗(yàn)?zāi)懼芫囼?yàn)細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療42/58(五)抑菌試驗(yàn)O/129試驗(yàn)桿菌肽試驗(yàn)Optochin試驗(yàn)細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療43/58第六節(jié)感染血清學(xué)檢測(cè)已知抗體檢測(cè)細(xì)菌抗原用于判定細(xì)菌已知抗原檢測(cè)病人血清中抗體用于診療感染性疾病細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療44/58一.血清學(xué)判定了解微生物抗原結(jié)構(gòu)用已知抗體檢測(cè)細(xì)菌抗原組合特異性較高多在判定最終進(jìn)行可用各種血清學(xué)方法,細(xì)菌多用凝集反應(yīng),病毒多用中和試驗(yàn)細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療45/58二.血清學(xué)診療查抗體:用已知抗原IgM:感染指標(biāo)IgG:效價(jià)有4倍以上增高或高于當(dāng)?shù)厝巳核蕉嘤糜诓〕梯^長(zhǎng)全身性感染細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療46/58第七節(jié)感染分子生物學(xué)檢測(cè)檢出病原體DNA證實(shí)病原體存在細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療47/58一.核酸檢測(cè)用途細(xì)菌分類(lèi)臨床診療,快速判定耐藥性檢測(cè)毒素檢測(cè)流行病學(xué)調(diào)查細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療48/58二.核酸檢測(cè)方法

G+Cmol%PCR限制性?xún)?nèi)切酶片段長(zhǎng)度核酸雜交細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療49/58限制性?xún)?nèi)切酶酶切分析

限制性?xún)?nèi)切酶是能夠在一定部位切開(kāi)DNA酶一樣內(nèi)切酶可將相同DNA切成一樣數(shù)目標(biāo)，一樣大小分子量片段電泳后對(duì)所得圖譜進(jìn)行分析可判斷DNA是否相同細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療50/581989年國(guó)外某醫(yī)院泌尿科3周內(nèi)從病人血，尿中分出8株不動(dòng)桿菌，含有相同耐藥性，經(jīng)SmalI酶切后出現(xiàn)相同片段，但與環(huán)境中或其它科室分出不動(dòng)桿菌不一樣，表明泌尿科病人是由同一克隆引發(fā)暴發(fā)細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療51/58某醫(yī)院ICU病房，從水池和病人標(biāo)本中分出多株銅綠假單胞菌，將其染色體DNA用XBal酶切，發(fā)覺(jué)彼此之間沒(méi)有共同酶切片段圖譜，病人之間圖譜也不相同，說(shuō)明這不是一次暴發(fā)細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療52/58第八節(jié)動(dòng)物試驗(yàn)細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療53/58一.動(dòng)物試驗(yàn)用途分離細(xì)菌,獲取純種檢測(cè)其致病性,觀察發(fā)病或死亡,可同時(shí)加抗體進(jìn)行中和試驗(yàn)或保護(hù)試驗(yàn)制備抗體誘導(dǎo)變異建立感染模型檢測(cè)生物制品安全性

細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療54/58二.試驗(yàn)動(dòng)物選擇多用易感小動(dòng)物,如小白鼠,豚鼠按需要選擇純系,突變系,雜種無(wú)菌動(dòng)物(GF),悉生動(dòng)物(GB),無(wú)特殊病原體動(dòng)物(SPF),最低程度疾病動(dòng)物(MDA),普通動(dòng)物可選取各種路徑注射,如腹腔,靜脈,皮下,顱內(nèi)等細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診療55/58可供細(xì)菌判定方法形態(tài):個(gè)體,菌落,液體基生長(zhǎng)情況生長(zhǎng)需要:氧,溫度,營(yíng)養(yǎng)物生化反應(yīng):觀察其酶活性抗原性:用