W6101高效液相色譜法的分離原理2微

高效液相色譜法的分離原理儀器分析技術(shù)高效液相色譜法1分離流程2色譜原理3色譜分離的特點(diǎn)4目錄頁(yè)CONTENTSPAGE1高效液相色譜法過(guò)渡頁(yè)TRANSITIONPAGE以液體為流動(dòng)相的色譜法稱為液相色譜法。采用普通規(guī)格的固定相及流動(dòng)相，常壓輸送的液相色譜法，為經(jīng)典液相柱色譜，其柱效低、而且一般不具備在線檢測(cè)器。HPLC是以經(jīng)典的液相柱色譜為基礎(chǔ)，引入了氣相色譜的理論與實(shí)驗(yàn)方法。

該法具有分離效能高、分析速度快及儀器化等特點(diǎn)，因而稱為高效液相色譜法。高效液相色譜法

1.與經(jīng)典的液相柱色譜法相比

(1)柱內(nèi)徑↓，填充劑粒度↓、均勻性↑，新型固定相的問(wèn)世→分離效率↑。

(2)柱長(zhǎng)↓，填充劑機(jī)械強(qiáng)度↑，供液壓力和進(jìn)樣壓力↑，流動(dòng)相流速↑→分離速度↑。

(3)采用光學(xué)原理的檢測(cè)器→靈敏度↑。

高效液相色譜法

2.與GC相比

(1)樣品受限制少，對(duì)易分解、不容易氣化、分子量大、高極性的有機(jī)物可用HPLC分析。

(2)不用制備衍生物，減少了誤差。

(3)進(jìn)樣量大（500~800μL），易制備。

(4)分離效率降低。高效液相色譜法2分離流程過(guò)渡頁(yè)TRANSITIONPAGE分離流程3色譜原理過(guò)渡頁(yè)TRANSITIONPAGE色譜原理HPLC：以溶劑或某種溶液為流動(dòng)相，以裝在柱子里的固體為固定相，用高壓輸液泵將流動(dòng)相壓入柱子，使樣品組分在柱子里進(jìn)行分離的柱色譜法。一、概念色譜原理根據(jù)色譜柱所用填充劑的不同，HPLC分離原理有：吸附色譜，分配色譜,鍵合相色譜，離子交換色譜，凝膠色譜等。二、分類色譜原理色譜的分離過(guò)程：（a）在裝好填料的柱子中加上樣品，然后用溶劑洗脫，樣品中各組分的分子沿流動(dòng)相流動(dòng)方向移動(dòng)。（b）和（c）表示組分的移動(dòng)。（d）表示經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的洗脫以后，三個(gè)組分已經(jīng)被分離開(kāi)，不同組分在柱子中移動(dòng)速度不同而得到了分離。三、原理三組分樣品分離過(guò)程示意圖色譜原理另外，對(duì)照（a）和（d）可以發(fā)現(xiàn)剛上樣后，溶質(zhì)分子形成的色帶（又叫譜帶）較窄，而到了（d）中，各組分的譜帶明顯變寬，這說(shuō)明同一組分沿柱子移動(dòng)時(shí)，存在著擴(kuò)散問(wèn)題，即譜帶的擴(kuò)散。三、原理三組分樣品分離過(guò)程示意圖4色譜分離的特點(diǎn)過(guò)渡頁(yè)TRANSITIONPAGE色譜分離的特點(diǎn)一、差速遷移差速遷移：不同組分在柱子中移動(dòng)速度不同而使其混合物得到分離，即不同的組分在柱子上存在差速遷移現(xiàn)象。引起原因：在分配色譜中，由于不同組分在固液兩相的分配系數(shù)不同引起；在離子交換色譜中，主要是由于各組分對(duì)固定相的靜電引力不同造成的。色譜分離的特點(diǎn)二、譜帶擴(kuò)展譜帶擴(kuò)展：同一組分沿色譜柱移動(dòng)時(shí)，色帶由窄變寬，即同一組分在柱子上存在譜帶擴(kuò)展現(xiàn)象。產(chǎn)生原因：由于同一個(gè)化合物的不同分子，在通過(guò)柱子時(shí)平均遷移速度不同造成的。其原因是由于渦流擴(kuò)散和各種傳質(zhì)情況的差異造成了同一物質(zhì)不同分