呼吸系統(tǒng)藥物動物模型

最新資料推薦呼吸系統(tǒng)藥物動物模型呼吸系統(tǒng)藥物實(shí)驗法呼吸系統(tǒng)藥物實(shí)驗法包括祛痰藥物實(shí)驗法、鎮(zhèn)咳藥物實(shí)驗法以及呼吸興奮藥物實(shí)驗法。1祛痰藥物實(shí)驗法1.1呼吸道分泌液量測定法呼吸道液時氣管、支氣管腺體以及杯細(xì)胞的分泌物。在粘膜組織中的支氣管腺是漿液腺和粘液腺的混合體，因為它們的導(dǎo)管時共通的，所以漿液和粘液時適當(dāng)?shù)幕旌系模?xì)胞產(chǎn)生和分泌粘液。呼吸道液的一部分被肺吸收，總的呼吸道液在正常情況下處于恒定的狀態(tài)。呼吸道液的主要任務(wù)是濕潤氣道粘膜，使之潤滑，保護(hù)上皮的纖毛運(yùn)動；呼吸道液還在呼吸道內(nèi)包裹微粒、細(xì)菌等異物，不斷運(yùn)送或溶解，從粘膜上清楚，通過咳嗽從呼吸道咳出，對這些輸送過程起主要作用的是纖毛運(yùn)動。大多數(shù)祛痰藥是通過增加呼吸道分泌液，使附著呼吸道粘膜的痰變稀，容易從氣道壁脫落，在咳嗽時咳出，增加的分泌液覆蓋粘膜后使之光滑，保護(hù)粘膜壁免受能引起咳嗽的有害刺激的損害，最常用的方法是測定反映呼吸道分泌道分泌增加的呼吸道液量測定法和杯細(xì)胞、肺泡2型細(xì)胞分泌功能測定法。1.1.1小鼠酚紅排泄法【原理】利用酚紅小鼠腹腔注射后部分從氣道排泄的特定，測定小鼠氣道酚紅排泄量，以判斷受試物對氣道分泌液量的影響?！静牧稀勘椒蛹t用生理鹽水配成2.5%苯酚紅生理鹽水溶液，稱取一定量放研缽中逐漸加生理鹽水研磨后，溶于生理鹽水中?！静僮鞑襟E】小鼠饑餓16h過夜，給受試藥30min后脫頸處死小鼠，暴露氣管，氣管插管并與注射器相連，用5%NaHCO3溶液1ml，緩慢注入氣管內(nèi)，然后輕輕吸出，再用5%NaHCO3水溶液1ml，同上沖洗，如此反復(fù)3次，合并3次沖洗液放置一定時間使雜質(zhì)沉淀，得到的透明紅色上清液，用545nm分光光度計比色，根據(jù)酚紅的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出酚紅的排泄量。【注意事項】氣道內(nèi)注入NaHCO3溶液后吸出時藥輕輕的進(jìn)行，一旦用力過度，肺泡會破裂流入胸腔。1.1.2兔酚磺酞排泄法作野氏方法【原理】在兔耳靜脈注射酚磺酞，一部分色素會分泌至呼吸道。于一定時間后將動物放血至死，將呼吸道內(nèi)的色素和粘液一并用碳酸氫鈉水溶液溶解，從色素的濃度推算出分泌量。【操作步驟】將體重2kg左右的兔，給藥一定時間（根據(jù)藥物起效時間定），在耳靜脈注射0.6%酚磺酞（PSP）注射液1ml/kg，30min后放血致死，暴露氣管，插入氣管插管，用橡膠管連接注射器，注入5%NaHCO3溶液（38°C）。用12.5ml/kgNaHCO3溶液輕輕注入氣管內(nèi)，放置10min，輕輕地吸出，再輕輕地注入，間隙5min后進(jìn)行同樣的操作，來回4次，共計5次。將沖洗液放試管中，離心分離除去渾濁物，調(diào)節(jié)PH至7.8~8.0后，在545nm（綠色濾光片）下比色定量。作一標(biāo)準(zhǔn)曲線，求酚磺酞排出量。【注意事項】同小鼠。本法操作簡單，無需特殊的裝置，即知祛痰藥的臨床效果，但由于同一動物不能前后比較，故測定值的差值很大，要得到正確的數(shù)據(jù)，必須做很多動物是最大的缺點(diǎn)。1.1.3兔呼吸道分泌液量測定法【操作步驟】烏拉坦腹腔注射麻醉兔，背位20度斜度，頭低位固定。切開前頸部的皮膚暴露器官，插入Y字形氣管插管。插管的一端連接調(diào)節(jié)器，吸入溫度、濕度恒定的空氣，另一端連接有刻度的試管，收集流出的呼吸道液體。這個操作是簡單的，但是要得到正確的結(jié)果，最重要的是吸入的空氣要定溫定時。本法收集24h的液量（ml/kg）:兔1.0~3.3ml/kg貓1.5~5.1ml/kg，豚鼠2.3~5.6ml/kg,大鼠5.0~11.7ml/kg,呼吸次數(shù)與量沒有關(guān)系，秋冬季減少?！咀⒁馐马棥繉?shí)驗開始后，最初1h的液量多，但2h后就相當(dāng)穩(wěn)定了。第2個小時后作為對照，大約收集2~4h，給藥后再繼續(xù)收集2h或以上。因為實(shí)驗過程長，麻醉藥有一定的深度和持續(xù)時間，所以烏拉坦最常用。1.1.4大鼠氣管毛細(xì)管引流分泌液量測定法【操作步驟】取體重160~180gSD大鼠，腹腔注射烏拉坦1.0g/kg麻醉，仰位固定，解剖分離氣管，在甲狀軟骨下緣正中兩軟骨之間插入已知重量的玻璃毛細(xì)管（毛細(xì)管長10cm，內(nèi)徑0.8mm左右）使分泌液沿毛細(xì)管上升，收集60min氣管分泌引流，稱重后計算60min/100g體重的引流mg數(shù)。正常分泌量2.961.6mg/100g體重。1.2呼吸道纖毛運(yùn)動實(shí)驗法從末梢細(xì)支氣管到上部呼吸道粘膜上皮布滿纖毛。通過纖毛的運(yùn)動可使呼吸道液體、微粒、痰和其它異物以大約2~3cm/min的速度向口腔方向運(yùn)動，這對呼吸道異物的排除起重要作用。對于作用于呼吸道的藥物，特別是使用祛痰藥時，對纖毛運(yùn)動究竟產(chǎn)生什么影響，有必要加以研究，祛痰藥對纖毛運(yùn)動的影響的經(jīng)典方法是鴿纖毛運(yùn)動實(shí)驗法。1.2.1鴿纖毛運(yùn)動實(shí)驗法【器械和裝置】鴿子固定臺、木屑片（能通過5號篩，而不能通過6號篩的染色木屑）?！静僮鞑襟E】將無麻醉鴿背位固定沿頸部中線先后將皮膚和氣管切開，暴露氣管粘膜可觀察到氣管內(nèi)面的粘膜，把木屑片放在氣管下段，隨著粘液的移動，測定移動2cm所需的時間。正常鴿平均所需4~5min。1.2.2兔離體氣管纖毛實(shí)驗法【操作步驟】兔體重1.5~2kg左右，雌雄兼用，木槌擊昏后迅速分離氣管，置通O2的臺式液中，保存?zhèn)溆?。?shí)驗時，剪取氣管1~0.5cm長。正中剪開，縱向分成兩片，取單片斜放于37°C臺式液濕潤的棉花上（喉頭端朝上）。將發(fā)絲（0.17~0.23mm）置于下端用低倍鏡觀察，并記錄發(fā)絲運(yùn)行2mm所需時間，計算出運(yùn)行速度，每觀察1次，將氣管片放入37C臺式液中漂洗1次。每個標(biāo)本觀察三次，取均值，然后放入含藥液的營養(yǎng)液中5min，同法觀察三次，取均值。發(fā)絲運(yùn)動速度為0.80~0.810.26~0.34mm/min。1.3豚鼠氣道粘液多糖的測定咔唑比色法【試劑】①25mmol/L四硼酸鈉濃硫酸溶液：稱取9.48gNa2B4O710H2O溶于1L濃硫酸（相對密度1.84）中；②7.5mmol/L咔唑溶液：稱取62.5mg咔唑溶于50ml無水乙醇中。③D-葡萄糖醛酸內(nèi)酯貯存標(biāo)準(zhǔn)液：稱取D-葡萄糖醛酸內(nèi)酯9.07mg,溶于3mol/L氯化鈉100ml中?！静僮鞑襟E】健康豚鼠，麻醉處死，取出氣管稱重，剪開氣管用棉棒取氣道粘液，取出的粘液用3ml蒸餾水洗下，3000r/15min離心，上清液待用。取25mmol/L四硼酸硫酸溶液2.5ml加上清液2.5ml，冷卻后混勻，沸水浴中加熱10min，返回室溫，加7.5mmol/L咔唑溶液0.1ml，混勻后再100°C水浴中15min加熱，返回室溫，分光光度計530nm比色。D-葡萄糖醛酸內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)曲線：D-葡萄糖醛酸內(nèi)酯儲存標(biāo)準(zhǔn)液用3mol/L氯化鈉稀釋成25~200g/ml，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。1.4大鼠氣道粘液中肺表面活性物質(zhì)的測定對祛痰藥進(jìn)行肺泡2型細(xì)胞分泌肺表面活性物質(zhì)的研究，有利于闡明祛痰藥的作用機(jī)制。肺表面活性物質(zhì)在成熟肺由肺泡2型細(xì)胞生成，其主要成分為飽和型卵磷脂，它的作用是降低肺泡表面張力，祛痰藥可通過促進(jìn)肺表面活性物質(zhì)分泌，降低肺泡表面張力，有利促進(jìn)肺泡-支氣管的廓清作用，測定飽和型卵磷脂可了解肺泡2型細(xì)胞功能及祛痰藥對其的影響?！緦?shí)驗操作】（1）支氣管肺泡灌洗液的取得：大鼠灌胃給予祛痰藥，半小時后麻醉，分離氣管，行氣管插管后用生理鹽水5ml沖洗肺，約得3ml支氣管肺泡灌洗液。（2）磷脂的提?。褐夤芊闻莨嘞匆航?jīng)離心后，取上清液1ml,加氯仿2ml,搖勻后2500r/10min離心，下層溶液吸入到具塞試管內(nèi)50~60°C水浴氮?dú)馕?。飽和卵磷脂的分離：再具塞試管內(nèi)加鋨酸溶液0.5ml,振搖后放置通風(fēng)櫥內(nèi)靜置15min,再在40~50C水浴中，通氮?dú)馕伞１由V掃描定量活化：將硅膠板G置110C烤箱1h。點(diǎn)樣：將分離后的樣品加定量的氯仿溶解，點(diǎn)樣于薄層板上，置110C烤箱15~20min。展開：將板放入展開劑中，待展開劑前緣離點(diǎn)樣處1cm后取出。顯色：展開后將板放置110C烤箱5~10min取出，用漠百里香酚藍(lán)染色后清水沖板至本底無色，濾液吸干，110C烤箱5~10min，顯示清晰的藍(lán)色斑點(diǎn)。然后用日本島津Cs-930型薄層掃描儀，630nm波長對標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)及樣品斑點(diǎn)進(jìn)行掃描定量。2鎮(zhèn)咳藥物實(shí)驗法2.1咳嗽反射:咳嗽反射弧由4個環(huán)節(jié)組成。（1）感受器：目前了解至少有三種：①呼吸道上皮下的感受器，能感受化學(xué)刺激或機(jī)械刺激；②伸展感受器位于呼吸道的平滑肌束中，能為肺呼吸氣所激動；③軟骨周圍的感受器。（2）傳入神經(jīng)：包括①迷走神經(jīng)及其分支，大部分沖動起源于肺的伸展感受器和呼吸道上皮下的感受器；②喉部的感受神經(jīng)末梢，由喉上神經(jīng)所支配；③舌喉神經(jīng)；④某些交感神經(jīng)支。傳入神經(jīng)纖維主要在迷走神經(jīng)中。迷走神經(jīng)切斷后，咳嗽反射可部分消失。2.2誘發(fā)咳嗽的方法從咳嗽反射弧來看，目前采用的誘發(fā)咳嗽的方法主要是刺激感受器和傳入神經(jīng)，常用的方法有：（1）機(jī)械刺激法；（2）化學(xué)刺激法；（3）電刺激法（1）機(jī)械刺激法：對麻醉動物，可用一細(xì)塑料管或小毛刷插入喉部或直至氣管內(nèi)，來回2~3次，可引起動物短促的劇咳。亦有直接由氣管套管內(nèi)，插入細(xì)塑料管或細(xì)銅絲刺激氣管叉隆凸，亦可引起動物劇咳。后一種刺激方法結(jié)果可靠。這些刺激方法簡便可行，不需要特殊的儀器，但刺激強(qiáng)度不能控制，無法進(jìn)行定量比較。（2）化學(xué)刺激法：二氧化硫、氨、丙烯醛、硫酸、枸櫞酸等刺激性物質(zhì)氣霧吸入呼吸道內(nèi)，刺激呼吸道上皮下的感受器，可引起咳嗽。給予刺激性物質(zhì)的方式一般有兩種：氣霧吸入：將不麻醉動物（多采用豚鼠、小鼠，亦有采用大鼠）置于恒定容積的密閉容器內(nèi)，注入定量的刺激性氣體，動物吸入后即可引起咳嗽。刺激性酸類則借恒壓的氣霧發(fā)生器噴入密閉容器內(nèi)，氣霧顆粒直徑要求為2~7m，使能充分彌散呼吸系統(tǒng)內(nèi)，引起咳嗽。直接注入：麻醉動物（多采用豚鼠、貓、狗、亦有采用兔）插入氣管套管，將定量的刺激性氣體直接注入氣管套管內(nèi)，即能引起咳嗽。亦有將肥皂粉、淀粉或滑石粉直接吹入氣管內(nèi)，亦能引起咳嗽?；瘜W(xué)刺激法還包括利用化學(xué)物質(zhì)刺激咳嗽反射弧的任何環(huán)節(jié)而引起咳嗽的其他方式，今年來發(fā)現(xiàn)在貓經(jīng)脈注射二甲基苯基哌嗪，這是一種神經(jīng)節(jié)興奮劑，它能引起咳嗽，且其注射劑量與發(fā)生咳嗽次數(shù)在一定范圍內(nèi)呈線性關(guān)系。該方法已作為鎮(zhèn)咳藥的篩選方法。3電刺激法：以電刺激法誘發(fā)咳嗽，常用的刺激部位有兩種：①喉上神經(jīng)：多采用貓或豚鼠；②氣管粘膜：多采用豚鼠或狗。此外，亦有直接刺激貓的延髓背側(cè)部或狗的胸膜而誘發(fā)咳嗽的。點(diǎn)刺激法可用一定的刺激頻率和刺激強(qiáng)度引起可靠的咳嗽，用藥前后可進(jìn)行定量的比較，該法較機(jī)械刺激法可靠。2.3動物的選擇豚鼠對化學(xué)刺激物或機(jī)械刺激都很敏感，刺激后能誘發(fā)咳嗽；刺激其喉上神經(jīng)亦能引起咳嗽，加之一般實(shí)驗室較易得到，因此，豚鼠使篩選鎮(zhèn)咳藥常用的動物。貓在生理條件下很少咳嗽，但受機(jī)械刺激或化學(xué)刺激后易誘發(fā)咳嗽，而貓較豚鼠難得，故貓選用于刺激喉上神經(jīng)誘發(fā)咳嗽，在初篩的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步肯定藥物的鎮(zhèn)咳作用。狗不論在清醒或麻醉條件下，化學(xué)刺激、機(jī)械刺激、電刺激胸膜、氣管粘膜或頸部迷走神經(jīng)均能誘發(fā)咳嗽；狗對反復(fù)應(yīng)用化學(xué)刺激所引起的咳嗽反應(yīng)較其他動物變異少，故特別適用于觀察藥物的鎮(zhèn)咳作用持續(xù)時間。但狗從經(jīng)濟(jì)上和來源上較豚鼠和貓昂貴和難得，只能用于進(jìn)一步肯定藥物的鎮(zhèn)咳作用。兔對化學(xué)刺激或電刺激不敏感，刺激后誘發(fā)噴嚏的機(jī)會較咳嗽為多，故兔很少用于篩選鎮(zhèn)咳藥。小鼠和大鼠以化學(xué)刺激雖能誘發(fā)咳嗽，但噴嚏和咳嗽動作很難區(qū)別，變異較大，特別是反復(fù)刺激時變異更大，實(shí)驗可靠性較差。根據(jù)國內(nèi)有關(guān)單位的經(jīng)驗，認(rèn)為小鼠作為初篩鎮(zhèn)咳藥的動物，還是可取的。幾種常見的引咳動物實(shí)驗：2.3.1小鼠氨水引咳法【操作步驟】將小鼠置于500ml玻璃鐘罩內(nèi)，通過空氣壓縮機(jī)（或腳踏風(fēng)箱）連接玻璃噴霧頭，以400mmHg恒壓將氨水（25%~28%氫氧化銨）均勻的噴入鐘罩內(nèi)，噴霧5s，然后觀察和記錄小鼠的咳嗽潛伏期和2min內(nèi)咳嗽次數(shù)?！咀⒁馐马棥靠人詽摲谑侵竾婌F氨水開始時間至發(fā)生咳嗽所需的秒數(shù)。小鼠咳嗽表現(xiàn)以其腹肌收縮（縮胸），同時張大嘴為準(zhǔn)，有時可有咳聲，觀察必須仔細(xì)。亦有以引起一半小鼠咳嗽的噴霧時間（FDT50）為指標(biāo)。2.3.2小鼠二氧化硫引咳法【操作步驟】取25ml蒸發(fā)皿1只，內(nèi)盛0.5g無水硫酸鈉，將盛有50%硫酸的滴定管，置于蒸發(fā)皿上，迅即滴入硫酸5ml，并立即將500ml的玻璃燒杯或鐘罩扣在蒸發(fā)皿上，燒杯內(nèi)充滿恒定濃度的二氧化硫氣體。迅速將小鼠放入含有SO2的玻璃燒杯內(nèi)，然后觀察和記錄小鼠的咳嗽潛伏期和2min內(nèi)咳嗽次數(shù)?！咀⒁馐马棥勘緦?shí)驗無水硫酸鈉的稱量必須準(zhǔn)確，發(fā)生SO2、扣玻璃燒杯和放入小鼠的動作力求迅速，否則明顯影響實(shí)驗結(jié)果。亦可用0.5g硫代硫酸鈉加入1mol/L鹽酸5ml產(chǎn)生SO2。燒杯內(nèi)SO2濃度要求在1:50000,該濃度足以引起咳嗽。濃度過高（1:10000）易致中毒。2.3.3豚鼠枸櫞酸引咳法【操作步驟】取體重200~250g的豚鼠，置于2~4L容積的密閉鐘罩內(nèi)，以60mmHg的壓力通過玻璃噴頭噴入17.5%枸櫞酸（要求通過玻璃噴頭的氣流速度為15L/min）,噴霧1min，記錄5min內(nèi)豚鼠的咳嗽次數(shù)?！咀⒁馐马棥侩嗍蟮目人月曧懥?，應(yīng)以聽到的計算。實(shí)驗豚鼠應(yīng)預(yù)先挑選，5min內(nèi)咳嗽少于10次者棄除。2.3.4豚鼠丙烯醛引咳法【丙烯醛制備】以等量的甘油與硫酸氫鉀混合于燒瓶中，在200°C油浴上加熱，慢慢地把產(chǎn)生的丙烯醛收集于球膽中，供實(shí)驗用?！静僮鞑襟E】取體重200~250g的豚鼠，雌雄不拘，放入4~8L的密閉容器內(nèi)，通?？煞湃雰芍浑嗍?，1只為對照，1只為用藥的。然后用注射器從球膽中抽取丙烯醛8ml，訊即注入密閉容器內(nèi)，計算5min內(nèi)豚鼠的咳嗽次數(shù)，分別加以記錄?！咀⒁馐马棥侩嗍笠鄳?yīng)預(yù)先進(jìn)行挑選，5min內(nèi)咳嗽次數(shù)少于10次者棄除。2.3.5豚鼠電刺激引咳法【操作步驟】豚鼠，體重300~400g,雌雄不拘，烏拉坦麻醉（25%溶液，1g/kg，腹腔注射）。待麻醉后，切開頸部皮膚，分離氣管，插入Y形氣管套管，一個支管與氣鼓相連接，可將呼吸運(yùn)動記錄在記紋鼓上，一個支管連接一橡皮管，借助于再字夾的調(diào)節(jié)，使記紋鼓上描記的呼吸運(yùn)動維持在適當(dāng)?shù)乃?。亦可與壓力換能器相連接，通過自動記錄儀記錄呼吸運(yùn)動，靈敏度較氣鼓好。用一白金制的單級電極固定于氣管的背面，放置單極電極的部位盡可能接近胸部，另一無關(guān)電極使由縫針制成，插入胸部皮下組織。一般采用刺激強(qiáng)度3.5V，脈沖寬度50ms，頻率10次/s，刺激時間20s，兩次刺激的時間間隔為5min。電刺激時，由于咳嗽可使記紋鼓上的呼吸振幅明顯增高。受試藥物可經(jīng)靜脈、腹腔或灌胃給予，用藥后5、10、15、30、45min重復(fù)給予電刺激，比較記紋鼓上呼吸振幅的變化。受試藥物能抑制呼吸振幅，即認(rèn)為具有鎮(zhèn)咳作用。作用強(qiáng)度以抑制百分率表示?！咀⒁馐马棥恳员痉ㄒ燃s有5%的豚鼠可對刺激無反應(yīng)或不能發(fā)生復(fù)制反應(yīng)，這些動物應(yīng)棄除。本法測得磷酸可待因ED50為35mg/kg，非那根ED50為14mg/kg。2.3.6貓電刺激引咳法【操作步驟】貓電刺激引咳法最常用的是電刺激喉上神經(jīng)引咳法。以氯醛糖麻醉貓（氯醛糖以丙烯甘油溶解，按80mg/kg腹腔注射），如無氯醛糖，亦可用戊巴比妥鈉麻醉（30mg/kg,腹腔注射）。麻醉后，將貓背位固定于手術(shù)臺上，沿頸中線切開皮膚，分離皮下組織。喉上神經(jīng)系由結(jié)神經(jīng)節(jié)分出后由腹面穿過頸總動脈，在甲舌骨肌的尾端水平分布至喉部粘膜。因此，操作時可先找出迷走神經(jīng)，再沿迷走神經(jīng)向頭端找出結(jié)神經(jīng)節(jié)，即可見喉上神經(jīng)由神經(jīng)節(jié)分出。然后細(xì)致的分離出喉上神經(jīng)，注意不要損傷神經(jīng)，按上保護(hù)電極，為了避免神經(jīng)干燥，并保證神經(jīng)與電極接觸良好，可用低熔點(diǎn)液體石蠟涂在神經(jīng)與電極的接觸部位，最好能讓石蠟?zāi)?。固定電極，以備刺激。其次，切開腹部皮膚，暴露一部分腹直肌，并縫一絲線于肌肉上，牽引于描記杠桿上，描記膈肌收縮活動于記紋鼓上。亦可牽引于拉力換能器，通過自動記錄儀加以記錄。貓咳嗽時，由于膈肌活動，牽引腹直肌，借以記錄其咳嗽的次數(shù)及強(qiáng)度。分離股靜脈，供給藥用。手術(shù)完備后，開始刺激喉上神經(jīng)，找出每只貓的電刺激引咳閾值（以刺激電壓表示）。一般采用刺激頻率40~50次/次，脈沖寬度0.5ms，連續(xù)刺激5s，兩次刺激時間間隔為2~5min，刺激電壓由小至大逐步遞增，測出每側(cè)喉上神經(jīng)在連續(xù)刺激5s出現(xiàn)咳嗽的電壓數(shù)，即為該貓的咳嗽閾值。各貓的閾值分布在2~9V之間，多數(shù)貓在7~9V。兩側(cè)喉上神經(jīng)閾值接近。股靜脈注射磷酸可待因1~3mg/kg,可以明顯抑制，甚至完全抑制咳嗽反射。2.3.7貓二甲基苯基哌嗪（DMPP）引咳法【操作步驟】以氯醛糖麻醉貓（80mg/kg,腹腔注射），待麻醉后，由股靜脈注入碘化二甲基苯基哌嗪，該化合物的劑量與引咳的次數(shù)呈直線關(guān)系。DMPP的劑量與引咳的關(guān)系DMPP的劑量（g/kg）貓數(shù)咳嗽次數(shù)5151.130.4010152.070.3915153.330.6120154.000.3925155.000.4850156.200.6010097.781.612.3.8貓碘溶液引咳法【操作步驟】體重2.5kg以上的貓，用乙醚麻醉，背位固定于手術(shù)臺上，減去其胸廓右側(cè)沿腋中線倒數(shù)第5~6肋間的毛，用碘酊消毒該處皮膚，再以消毒注射器由這倒數(shù)第5~6肋間注入1%碘溶液（含碘1%，含K12%）1ml于胸膜腔內(nèi)，針頭插入深度約2cm。注射后24~72h，即有一部分貓發(fā)生咳嗽?？人源螖?shù)的測定，即用拇指和食指挾貓頸的甲狀軟骨（或環(huán)狀軟骨）兩側(cè)共4次，計算每次咳嗽次數(shù)，記錄其咳嗽的平均次數(shù)。用藥后觀察1/2、1、1.5、2、3h的咳嗽次數(shù)。胸膜內(nèi)注入2%碘溶液2ml,產(chǎn)生咳嗽的貓數(shù)雖較注入1%碘溶液1ml者略多，但貓死亡較快，故一般采用1%碘溶液1ml為宜。如選的強(qiáng)壯的貓，亦可在同一動物觀察數(shù)種藥物，能減少生物的參差性。2.3.9辣椒素引咳實(shí)驗法【基本原理】辣椒素主要通過刺激C纖維釋放遞質(zhì)引起咳嗽和支氣管收縮反應(yīng)，引起的豚鼠咳嗽反應(yīng)?！静僮鞑襟E】將350~500g豚鼠置于特制的密閉箱盒內(nèi)，用超聲波霧化器以0.5ml/min容量霧化吸入0.03mol/L辣椒素2min引咳，計數(shù)10min內(nèi)咳嗽次數(shù)（約10~20次）?！咀⒁馐马棥坷苯匪乜梢痣嗍髿獾朗湛s反應(yīng)，造成豚鼠窒息死亡。2.4麻醉問題一般認(rèn)為麻醉過深能明顯抑制咳嗽反射，影響實(shí)驗結(jié)果，例如以點(diǎn)刺激貓喉上神經(jīng)引咳，采用巴比妥類麻醉，往往可因麻醉過深，使電刺激失去反應(yīng)；或者刺激閥可受麻醉深淺度的影響，變異較大，且不宜連續(xù)觀察藥物的作用。又如以二甲基苯基哌嗪經(jīng)脈注射引咳，采用巴比妥類或烏拉坦麻醉時，即不能引起咳嗽。因此，進(jìn)行鎮(zhèn)咳藥篩選時，盡可能采用清醒動物進(jìn)行，以保證咳嗽反射的存在。即使采用麻醉，亦應(yīng)維持淺麻醉。麻醉劑選用氯醛糖較好，對咳嗽反射幾無影響。3呼吸興奮藥實(shí)驗法呼吸興奮藥實(shí)驗法由一系列實(shí)驗組成，主要包括:肺機(jī)械功能指標(biāo)的測定機(jī)呼吸興奮作用部位及機(jī)制研究的實(shí)驗方法。前者主要包括呼吸頻率、潮氣量或每分通氣量、血?dú)夥治黾胺闻輾釩O2含量測定方法等；后者包括中樞直接注射法、電活動導(dǎo)出實(shí)驗、和排除或確立反射性呼吸興奮作用等一些實(shí)驗。3.1呼吸興奮指標(biāo)的測定法【基本原理】置于密閉容器內(nèi)的動物呼吸時產(chǎn)生容器內(nèi)的氣壓變化，以壓力換能器轉(zhuǎn)換成電信號可以描記到呼吸時容積的變化和呼吸頻率?！静僮鞑襟E】動物可選用兔和貓，以烏拉坦（約1g/kg,iv或ip）麻醉后，分離頸靜脈插入導(dǎo)管以備給藥用，然后將動物置于一特制的身體體積描記器內(nèi)密閉，動物呼吸借皮管連接氣管插導(dǎo)管通向描記器，令其自然呼吸，動物的吸氣、呼氣引起胸廓起伏以壓力換能器連接到記錄儀描記呼吸時的容積變化，此乃麻醉動物正常呼吸運(yùn)動的潮氣量和呼吸頻率或每分通氣量測定方法。亦可以預(yù)先給予嗎啡（5~10mg/kg）、苯巴比妥（20mg/kg）等呼吸抑制劑造成呼吸抑制動物模型（應(yīng)用嗎啡劑量應(yīng)小于16mg/kg，iv為好）觀察呼吸運(yùn)動的變化，再給予受試物觀察上述指標(biāo)的改變。同時也可以進(jìn)行血?dú)夥治龌蚱渌姆喂δ苤笜?biāo)測定，以評價受試物的藥效?！咀⒁馐马椉霸u價】測定并繪制受試物的量效反應(yīng)曲線，并計算藥物產(chǎn)生呼吸興奮的劑量（RD50）、致驚厥劑量（CD50）、致死劑量（LD50）、和治療指數(shù)；或測定陽性藥物（尼可剎米50mg/kg）和受試物呼吸興奮作用的最小劑量（RD）和產(chǎn)生驚厥的劑量（CD），并計算相應(yīng)的CD/RD值。受試物的治療指數(shù)或CD/RD比值與陽性藥比較，可以得到受試物的特性。本試驗盡量避免干擾因素且受試物最好選用靜脈內(nèi)給藥。3.2呼吸興奮作用部位及機(jī)制實(shí)驗方法3.2.1呼吸