輸血前相容性檢測閻

輸血前相容性檢測閻第一頁，共七十五頁，2022年，8月28日教學目的和要求掌握鹽水法、抗人球蛋白法、聚凝胺法的原理、方法及意義。熟悉微柱凝膠法原理、方法。了解酶法、白蛋白介質法、Liss法的原理和方法。

熟悉ABO/Rh血型鑒定方法及影響因素熟悉抗體篩選原理和意義熟悉交叉配血方法及意義了解抗體鑒定原理和意義

第二頁，共七十五頁，2022年，8月28日血型鑒定抗體篩選及鑒定交叉配血紅細胞抗原抗體檢測技術紅細胞抗原抗體檢測技術應用第三頁，共七十五頁，2022年，8月28日

微柱凝膠免疫學技術

聚凝胺試驗酶介質凝集試驗鹽水介質凝集試驗抗人球蛋白試驗增強技術第四頁，共七十五頁，2022年，8月28日鹽水介質凝集試驗懸浮于鹽水介質中的紅細胞與相應抗體分子結合，交叉聯(lián)結形成肉眼可見的凝集。主要檢測IgM類抗體（ABO系統(tǒng)、抗E）?？笰抗B特異性IgG類抗體有時可直接凝集懸浮于鹽水中的紅細胞，與紅細胞表面抗原位點數目和抗原決定簇位置有關。

第五頁，共七十五頁，2022年，8月28日鹽水介質凝集試驗方法：玻片法-便于顯微鏡觀察結果

試管法-適用于不同溫度、便于洗滌反應溫度：4～22℃臨床意義：鹽水凝集試驗陽性，并在37℃也有活性的抗體有意義，這些抗體通常能用其他方法證明。室溫有活性，37℃無活性者臨床意義不大。

第六頁，共七十五頁，2022年，8月28日

試驗記錄4+（++++）：一個大凝集塊，背景透明，無游離細胞3+（+++）：數個大凝集塊，背景透明，無游離細胞2+（++）：許多小凝集塊，背景稍混濁，有游離細胞1+（+）：細小的凝集塊，背景渾濁W+（±）：極細小凝集塊，要用顯微鏡觀察結果0（-）：無凝集，無溶血，細胞呈游離散在狀態(tài)PH：部分溶血H：完全溶血第七頁，共七十五頁，2022年，8月28日第八頁，共七十五頁，2022年，8月28日Weakreactionsoftendifficulttointerpret.Canalsobedowngradedduetoshakingthecompletedtest.ConventionalTesting.第九頁，共七十五頁，2022年，8月28日第十頁，共七十五頁，2022年，8月28日鹽水介質凝集試驗◆結果分析：陽性-凝集或溶血 陰性-無凝集或溶血 先觀察有無溶血、再觀察有無凝集◆注意事項：細胞濃度2～5%（嚴格按說明 書操作）、血清與細胞比例、反應溫 度、弱凝集分析

◆優(yōu)點：簡便、快捷、直觀?！羧秉c：不能發(fā)現(xiàn)不完全抗體。第十一頁，共七十五頁，2022年，8月28日

微柱凝膠免疫學技術

聚凝胺試驗酶介質凝集試驗鹽水介質凝集試驗抗人球蛋白試驗增強技術第十二頁，共七十五頁，2022年，8月28日抗人球蛋白試驗抗球蛋白試驗是1945年由Coombs等人建立的，又稱Coombs試驗?？骨虻鞍自囼灥慕⒃谘脱鍖W上有著非常重要的意義。分為直接抗球蛋白試驗（DAT）和間接抗球蛋白試驗（IAT）。第十三頁，共七十五頁，2022年，8月28日抗人球蛋白試驗原理IgG類血型抗體（主要是免疫抗體，如Rh血型抗體）分子量小，與紅細胞相應抗原結合后，在鹽水介質中不出現(xiàn)肉眼可見的凝集反應，稱之為不完全抗體，但在加入抗-IgG后，以其搭橋作用則可出現(xiàn)凝集反應。補體成分在體內被紅細胞抗原抗體復合物激活以后，結合在紅細胞表面。在體外含補體的多克隆抗體，或抗C3b、抗C3d等單特異性抗體與補體致敏的紅細胞反應，使之凝集也稱為抗球蛋白試驗。第十四頁，共七十五頁，2022年，8月28日抗人球蛋白試劑多特異性抗球蛋白試劑：應含有抗IgG和抗-C3d。單特異性抗球蛋白試劑：抗IgG、抗IgM、抗IgA、抗C3、C4的片段。第十五頁，共七十五頁，2022年，8月28日直接抗人球蛋白試驗DAT是用來檢測體內紅細胞致敏情況，尤其是IgG和C3d包被的紅細胞。用于：HDN和自身免疫溶血性貧血的診斷紅細胞被藥物抗體致敏的檢查急性和遲發(fā)性溶血性輸血反應的檢查第十六頁，共七十五頁，2022年，8月28日第十七頁，共七十五頁，2022年，8月28日間接抗人球蛋白試驗用于測定在體外能引起紅細胞致敏的抗體。用不完全抗體測定紅細胞血型，如Rh血型。交叉配血。第十八頁，共七十五頁，2022年，8月28日第十九頁，共七十五頁，2022年，8月28日結果分析-假陽性●用免疫兔或羊制備的抗人球蛋白含有種間抗體。●紅細胞在用鹽水洗滌時已有凝集?！馡AT試驗中所用紅細胞本身DAT陽性?！癫豢鼓龢吮驹诶洵h(huán)境里經過一段時間的保存后，自身冷抗體發(fā)生作用，激活補體，補體成分結合在紅細胞上，用多特異性抗球蛋白試劑會發(fā)生假陽性?！耠x心過度，紅細胞壓積過緊，不易充分搖散第二十頁，共七十五頁，2022年，8月28日結果分析-假陰性致敏后的紅細胞洗滌不充分,殘留的球蛋白中和了試劑中的抗球蛋白，造成假陰性。操作過程不連續(xù)，時間過長，結合在紅細胞上的抗體解離。紅細胞、血清和抗人球蛋白試劑保存不當都可能發(fā)生活性減弱或喪失。紅細胞過多，反應減弱；紅細胞過少，看結果不準確，都影響結果。試劑中抗人球蛋白濃度過大，有前帶現(xiàn)象。孵育時間和溫度不當，會使反應結果減弱或變?yōu)榧訇幮?。觀察結果時過度搖動試管，搖散細小凝塊。第二十一頁，共七十五頁，2022年，8月28日注意事項每次試驗要設有陰性和陽性對照。陰性結果要加入一滴IgG致敏紅細胞實驗器材清潔。注意抗原抗體比例、孵育時間、溫度等條件。嚴格按照實驗方法操作。排除自身抗體干擾。第二十二頁，共七十五頁，2022年，8月28日微柱凝膠免疫學技術

聚凝胺試驗酶介質凝集試驗鹽水介質凝集試驗抗人球蛋白試驗增強技術抗人球蛋白試驗第二十三頁，共七十五頁，2022年，8月28日微柱凝膠試驗

原理：微柱凝膠技術是用特定的化學物質做成微型凝膠柱，柱的上端有一個加樣反應室?？乖贵w反應后離心，凝膠柱起過篩作用，紅細胞凝集塊不能通過凝膠的間隙而留在凝膠的上部，未凝集的紅細胞通過凝膠的間隙，沉積到底部。

第二十四頁，共七十五頁，2022年，8月28日微柱凝膠反應本質：凝集反應紅細胞抗原與相應抗體反應出現(xiàn)凝集。根據紅細胞在膠質介質中的位置肉眼判斷。第二十五頁，共七十五頁，2022年，8月28日結果判斷標準

結果判定標準第二十六頁，共七十五頁，2022年，8月28日微柱凝膠試驗注意事項

▲嚴格按照試劑說明書操作?！I血者DAT陽性，干擾結果判讀。▲患者自身抗體干擾?！⒁饧訕禹樞??！渲萍毎麧舛葴蚀_。

第二十七頁，共七十五頁，2022年，8月28日

微柱凝膠免疫學技術聚凝胺試驗酶介質凝集試驗抗人球蛋白試驗增強技術抗人球蛋白試驗鹽水介質凝集試驗第二十八頁，共七十五頁，2022年，8月28日聚凝胺試驗原理：聚凝胺是一種多價陽離子聚合物，在溶液中有多個陽離子基團，能中和紅細胞表面的負電荷，并籍助正負電荷的作用，引起紅細胞的非特異性凝集。當紅細胞與血清在低離子介質中孵育后，IgG抗體與紅細胞上相應的抗原結合，在聚凝胺的作用下發(fā)生凝聚。凝集和凝聚在表面上不能區(qū)分，再加入枸櫞酸鈉重懸液，枸櫞酸根的負電荷與聚凝胺上的正電荷中和，非特異性凝集現(xiàn)象消失，而真正的凝集不會消失。第二十九頁，共七十五頁，2022年，8月28日+++聚凝胺+無凝集+有凝集反應-----枸櫞酸納-----第三十頁，共七十五頁，2022年，8月28日聚凝胺試驗優(yōu)點：簡便快捷，可用于某些不完全抗體檢測。缺點：對無唾液酸的紅細胞無作用， 例如多凝集紅細胞。 可增強自身抗體或冷凝集素干擾。注意事項：抗原抗體比例適當 聚凝胺（1液）去除干凈。

第三十一頁，共七十五頁，2022年，8月28日

微柱凝膠免疫學技術

聚凝胺試驗酶介質凝集試驗鹽水介質凝集試驗抗人球蛋白試驗增強技術抗人球蛋白試驗第三十二頁，共七十五頁，2022年，8月28日酶介質凝集試驗

原理：紅細胞表面有豐富的唾液酸，帶有負電荷，使紅細胞相互排斥。蛋白水解酶能消化破壞這種唾液酸，減少紅細胞表面的負電荷以及紅細胞之間的排斥力，縮短了紅細胞之間的距離，使IgG分子能與有相應抗原的紅細胞產生凝集。第三十三頁，共七十五頁，2022年，8月28日酶介質凝集試驗

●常用的酶：菠蘿酶、木瓜酶、胰酶、無花果酶?！穹椒ǎ孩衿诜?酶液直接加入血清和細胞的混合物中。

Ⅱ期法-用酶處理細胞再與血清 進行反應?！駜煞N方法比較：Ⅰ期法操作方便 Ⅱ期法敏感第三十四頁，共七十五頁，2022年，8月28日酶介質凝集試驗

●優(yōu)點：可以增強一些抗原抗體系統(tǒng)的反應活性Rh和Kidd系統(tǒng)最明顯●缺點：會破壞一些抗原的結構(M、N、Fya、Fyb)酶液批次不同，都需標化最適孵育時間。操作繁復，少數人對酶液過敏。第三十五頁，共七十五頁，2022年，8月28日

微柱凝膠免疫學技術

聚凝胺試驗酶介質凝集試驗鹽水介質凝集試驗抗人球蛋白試驗增強技術抗人球蛋白試驗第三十六頁，共七十五頁，2022年，8月28日增強技術●白蛋白增強凝集法 ★原理：白蛋白能提高紅細胞懸浮液中的介電常數，從而降低zete電位，縮小了細胞間距離，增加細胞與細胞的接觸面。

★應用：血型鑒定和交叉配血 ★結果判定：出現(xiàn)凝集和溶血現(xiàn)象為陽性結果。

第三十七頁，共七十五頁，2022年，8月28日增強技術●低離子強度鹽溶液（Liss）法

★原理：在凝集反應第一階段，若降低介質的離子強度，就會減少紅細胞周圍的陽離子云，促進帶正電荷的IgG與帶負電荷的紅細胞發(fā)生反應?！镒⒁馐马棧翰荒茉黾宇~外血清量 延長孵育時間會使某些抗原 變質，如Fya。

第三十八頁，共七十五頁，2022年，8月28日抗體篩選及鑒定交叉配血紅細胞抗原抗體檢測技術紅細胞抗原抗體檢測技術應用紅細胞抗原抗體檢測技術血型鑒定第三十九頁，共七十五頁，2022年，8月28日ABO血型鑒定

●方法：常用室溫鹽水技術檢測紅細胞上 的血型抗原，以及血清中存在的血型 抗體。結果判定參見凝集試驗?！馎BO血型鑒定的常規(guī)試驗：

1、正定型：用已知抗體的標準血清檢查紅細胞上未知的抗原。常規(guī)用抗A抗B

2、反定型：用已知血型的標準紅細胞檢查血清中未知的抗體。常規(guī)用A、B和O三種紅細胞。第四十頁，共七十五頁，2022年，8月28日正反定型的意義

◆準確的血型判定利于指導臨床用血◆發(fā)現(xiàn)亞型◆抗原強度的改變與疾病相關◆新抗原出現(xiàn)與疾病相關◆排除假陰性或假陽性結果干擾第四十一頁，共七十五頁，2022年，8月28日ABO血型反應格局

血型正定型反定型抗A抗BAcBcOc

A+--+-B-++--O--++-AB++---第四十二頁，共七十五頁，2022年，8月28日CellsvSerumSerumvCells第四十三頁，共七十五頁，2022年，8月28日ABO亞型鑒定

◆亞型通常表現(xiàn)為凝集反應強度弱，或正、反定型不符◆增加試劑：抗A1-區(qū)分A1和A2 抗H-有較強的H抗原性 抗A,B-與Ax的反應強度增強◆增加方法：吸收放散試驗 唾液中血型物質鑒定 PCR方法第四十四頁，共七十五頁，2022年，8月28日Rh血型鑒定

▲紅細胞Rh表型可用特殊的具有抗D、C、c、E、和e抗血清檢測來鑒定。但常規(guī)只用抗D血清檢查有無D抗原

▲D抗原陽性者為Rh陽性，否則為陰性

第四十五頁，共七十五頁，2022年，8月28日Rh血型鑒定方法

●Rh抗體屬IgG類，一般不能在鹽水介質中與紅細胞發(fā)生凝集，因此須采用以下鑒定方法（其中一種）：1、酶介質法2、抗人球蛋白法+增強試驗（Liss/白蛋白技術）●RhD檢測常用鹽水法。第四十六頁，共七十五頁，2022年，8月28日血型鑒定交叉配血紅細胞抗原抗體檢測技術紅細胞抗原抗體檢測技術應用紅細胞抗原抗體檢測技術抗體篩選及鑒定第四十七頁，共七十五頁，2022年，8月28日抗體篩選和鑒定

●有臨床意義的抗體：能引起新生兒溶血病、引發(fā)溶血性輸血反應，或者使輸入的紅細胞存活期減少，在37℃有反應的同種抗體。●意外抗體：抗A，抗B以外的抗體。第四十八頁，共七十五頁，2022年，8月28日目的和原則

▲目的：對受血者的血清或血漿，應常規(guī)作抗體篩選實驗，以發(fā) 現(xiàn)有臨床意義的意外抗體?！瓌t：讓受檢血清或血漿與特殊的試劑紅細胞（篩選細胞）起反應，以發(fā)現(xiàn)37℃有反應活性的抗體。第四十九頁，共七十五頁，2022年，8月28日對血清中抗體檢測的要求

選擇足夠敏感、高特異性的技術檢測出受檢者血清中低水平的有臨床意義的抗體。2.要高度注意，即使受血者血清中的抗體對輸入的不相容紅細胞抗原呈弱反應，也能夠發(fā)生快速回憶反應，抗體迅速產生，破壞紅細胞。第五十頁，共七十五頁，2022年，8月28日對試劑紅細胞的要求

●不能將多人份紅細胞混合，一定要用2-3人份的試劑紅細胞，以避免紅細胞混合后，對弱抗原紅細胞的稀釋。●美國FDA對注冊和批準作為商品供應的用作不規(guī)則抗體篩檢的試劑紅細胞的要求為必須表達：D、C、E、c、e、M、N、S、s，Pl、Lea、Leb、K、k、Fya、Fyb，JKa、JKb。第五十一頁，共七十五頁，2022年，8月28日第五十二頁，共七十五頁，2022年，8月28日

臨床重要的人血清紅細胞抗體

抗體自然發(fā)生免疫鹽水Coombs/LISSHDNHTR相容表型抗-AyesyesmostmostyesyesB、O抗-ByesyesmostmostyesyesA、O抗-AByesyesmostmostyesyesO抗-HyesyesmostmostyesyesOh第五十三頁，共七十五頁，2022年，8月28日抗體自然發(fā)生免疫鹽水Coombs/LISSHDNHTR相容表型抗Dyes罕見mostyesyesD陰性血抗Cyes罕見mostyesyesC陰性血抗EyessomemostyesyesC陰性血抗cyes罕見mostyesyesc陰性血抗eyes罕見mostyesyese陰性血第五十四頁，共七十五頁，2022年，8月28日抗體篩選方法

◆鹽水凝集法◆抗人球蛋白法◆聚凝胺法◆微柱凝膠法◆LISS抗球蛋白法第五十五頁，共七十五頁，2022年，8月28日DCEce患者1患者21R1R1++00++-2R2R2+0++0++3rr000++--第五十六頁，共七十五頁，2022年，8月28日

結果的判讀和解釋

◆溶血和血液凝集意義相同，都是抗原抗體反應陽性結果。先觀察有無溶血，后觀察有無凝集?！粲涗浗Y果，并與以前結果對照?！艨贵w篩選試驗不一定能檢出所有有臨床意義的抗體。一些低頻抗原的抗體或有劑量效應的抗體，可能被漏檢。第五十七頁，共七十五頁，2022年，8月28日抗體鑒定

通過篩選，抗體一經檢出，應進一步作抗體鑒定試驗，以確定其特異性。自身細胞檢查-排除非特異性2.譜紅細胞檢查第五十八頁，共七十五頁，2022年，8月28日譜紅細胞：一般是由8-16人份的已知血型表現(xiàn)型O型紅細胞組成，具有各種不同的抗原成分，根據譜紅細胞的反應格局一般可以鑒定常見的抗體。方法：在鹽水法基礎上、靈活應用白蛋白介質法、酶技術及抗人球蛋白實驗。第五十九頁，共七十五頁，2022年，8月28日血型鑒定抗體篩選及鑒定交叉配血紅細胞抗原抗體檢測技術紅細胞抗原抗體檢測技術應用紅細胞抗原抗體檢測技術第六十頁，共七十五頁，2022年，8月28日交叉配血

◆主側：受血者血清+供者紅細胞 檢測對供者紅細胞起反應的抗體◆次側：受血者紅細胞+供者血清 檢測對受者紅細胞起反應的抗體◆自身對照：受血者紅細胞+受血者血清 排除自身抗體、直接抗球蛋白試驗陽性及紅細胞緡錢狀凝集干擾第六十一頁，共七十五頁，2022年，8月28日接收申請單和血標本

核對無誤（如有錯誤與醫(yī)生/護士聯(lián)系）進行交叉配血

相合結果輸入微機不相合打印發(fā)血單血液中心交叉配血工作流程第六十二頁，共七十五頁，2022年，8月28日注意事項

◆用于交叉配血的標本應該是新獲得的（3天之內）；供者血標本應剛從血袋上剪下?！舨荒苡貌Ｆㄗ鹘徊媾溲??！舯匾獣r用生理鹽水洗滌細胞?！艏t細胞濃度一般是2-5%?！魢栏癜凑赵噭┱f明書操作。第六十三頁，共七十五頁，2022年，8月28日抗篩和配血結果分析紅細胞方面問題處理血清方面問題處理常見問題處理紅細胞抗原抗體檢測技術第六十四頁，共七十五頁，2022年，8月28日抗體篩選和交叉配血結果分析

抗體篩選陰性，交叉配血相合◆見于臨床上絕大多數標本?！艨贵w篩選陰性，血清中仍有可能含有臨床有意義的抗體（方法或篩選細胞）◆鹽水介質試驗作配血可能漏檢有意義的IgG類抗體?！糁挥杏梅躯}水介質交叉配血，才能保證待輸的血和受者相合。第六十五頁，共七十五頁，2022年，8月28日抗體篩選和交叉配血結果分析

抗體篩選陰性，鹽水直接離心交叉配血不合◆ABO血型錯誤?！艨笰1存在于A2或A2B，在直接鹽水交叉配血實驗中，抗A1能引起大部分A型紅細胞不相合?！舸嬖谑覝胤磻耐N抗體，如抗M。第六十六頁，共七十五頁，2022年，8月28日抗體篩選和交叉配血結果分析

抗體篩選陰性，抗人球蛋白交叉配血不合◆獻血者紅細胞DAT陽性（約1/10000）◆患者抗體弱，獻血者紅細胞抗原性很強，表現(xiàn)為抗人球蛋白試驗陽性?！翎槍Φ皖l抗原的抗體，如Diego系統(tǒng)抗-Wra。第六十七頁，共七十五頁，2022年，8月28日抗體篩選和交叉配血結果分析

抗體篩選陽性，交叉配血不合◆同種抗體、自身抗體、試劑問題、緡錢狀凝集，應在輸血前查明原因?！舯仨氝M行包括抗人球蛋白試驗在內的交叉配血?！艟o急情況下無法找到血清學配合的血液時，輸血科人員應告之主管醫(yī)生此種情況下輸血存在的可能危險。第六十八頁，共七十五頁，2022年，8月28日同種抗體的處理對策

◆交叉配合相合與否取決于涉及抗原的頻率?！翳b定抗體的特異性后，先用抗血清篩選相應抗原陰性者，再與受者血清作交叉配血。用受血者血清還是試劑抗血清篩選血液，應根據病人的血清反應強度，能得到的受者血清量以及抗血清的來源和費用等決定?！翎t(yī)院庫存血中難以找到配合血時，求助血液中心。第六十九頁，共七十五頁，2022年，8月28日自身抗體

◆冷自身抗體干擾血型鑒定、抗體篩選和鑒定以及交叉配血試驗，結果判讀困難。最常見的