內(nèi)毒素檢驗(yàn)講稿

內(nèi)毒素檢驗(yàn)講稿第一頁，共十九頁，2022年，8月28日細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)試劑：細(xì)菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品、細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品、鱟試劑、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水主要設(shè)備：超凈工作臺(tái)、恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴箱、電熱干燥箱、旋渦混合器。第二頁，共十九頁，2022年，8月28日試驗(yàn)前準(zhǔn)備器具處理試驗(yàn)所用器皿需經(jīng)處理除去可能存在的外源性內(nèi)毒素。玻璃器皿置電熱干燥箱內(nèi)180℃干烤至少2h或250℃干烤至少30min。塑料器皿置30%雙氧水中浸泡4h，再用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水充分沖洗后置60℃烘干備用。第三頁，共十九頁，2022年，8月28日內(nèi)毒素限值的確定輸液、輸血、注射器具細(xì)菌內(nèi)毒素限值在產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定，宜盡可能低；推薦輸液、輸血、注射器具細(xì)菌內(nèi)毒素限量每件不超過20EU；與腦脊液接觸和胸內(nèi)應(yīng)用醫(yī)療器械每件不超過2.15EU。根據(jù)每件的限值L及每件器械所用的提取液體積V，就可估算所需的鱟試劑靈敏度λ=L/V第四頁，共十九頁，2022年，8月28日試驗(yàn)前準(zhǔn)備鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)當(dāng)使用新批號(hào)的鱟試劑或試驗(yàn)條件發(fā)生了任何可能影響檢驗(yàn)結(jié)果的改變時(shí)，應(yīng)進(jìn)行鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)。試驗(yàn)步驟按《中國藥典(二部）附錄中“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”規(guī)定進(jìn)行。第五頁，共十九頁，2022年，8月28日編號(hào)內(nèi)毒素濃度/被加入內(nèi)毒素的溶液稀釋用液稀釋倍數(shù)平行管數(shù)結(jié)果舉例A無/供試品溶液——2C2λ/檢查用水12482λ1λ0.5λ0.25λ每個(gè)濃度均為4管++++++++--------D無/檢查用水——2鱟試劑靈敏度復(fù)核λc=antilg（ΣX/4）其中X為反應(yīng)終點(diǎn)濃度的對(duì)數(shù)值當(dāng)λc在0.5λ至2λ（包括0.5λ和2λ）時(shí)，鱟試劑靈敏度有效第六頁，共十九頁，2022年，8月28日試驗(yàn)前準(zhǔn)備供試品干擾試驗(yàn)對(duì)未知或可疑的供試品初次進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)之前應(yīng)先進(jìn)行干擾試驗(yàn)，以檢驗(yàn)供試品對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)是否有抑制或增強(qiáng)作用，以及其他影響細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)準(zhǔn)確性和敏感性的干擾作用。當(dāng)鱟試劑、供試品來源、供試品配方或生產(chǎn)工藝有變化或其他任何可能影響細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)結(jié)果的試驗(yàn)條件改變時(shí)，應(yīng)重新進(jìn)行干擾試驗(yàn)。第七頁，共十九頁，2022年，8月28日試驗(yàn)前準(zhǔn)備每種醫(yī)療器械產(chǎn)品應(yīng)取3批并分別使用不少于兩個(gè)制造商生產(chǎn)的鱟試劑進(jìn)行干擾試驗(yàn)。試驗(yàn)步驟按《中國藥典（二部）附錄“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”中“凝膠法”規(guī)定進(jìn)行。第八頁，共十九頁，2022年，8月28日編號(hào)內(nèi)毒素濃度/被加入內(nèi)毒素的溶液稀釋用液稀釋倍數(shù)平行管數(shù)結(jié)果舉例A無/供試品溶液——2B2λ/供試品溶液12482λ1λ0.5λ0.25λ每個(gè)濃度均為4管++++++-+---+----C2λ/檢查用水12482λ1λ0.5λ0.25λ每個(gè)濃度均為4管++++++++--------D無/檢查用水——2干擾試驗(yàn)溶液的制備第九頁，共十九頁，2022年，8月28日干擾試驗(yàn)Es=antilg（ΣXs/4）其中Xs為C溶液反應(yīng)終點(diǎn)濃度的對(duì)數(shù)值Et=antilg（ΣXt/4）其中Xt為B溶液反應(yīng)終點(diǎn)濃度的對(duì)數(shù)值當(dāng)Es在0.5λ至2λ（包括0.5λ和2λ）及當(dāng)Et在0.5λ至2λ（包括0.5λ和2λ）時(shí)，認(rèn)為供試液濃在該濃度下無干擾作用第十頁，共十九頁，2022年，8月28日試驗(yàn)前準(zhǔn)備供試品如對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)有干擾作用，可選用下列適宜方法排除干擾a)使用更靈敏的鱟試劑對(duì)供試液進(jìn)行更大倍數(shù)稀釋;b)采用無熱原氨基甲燒緩沖液稀釋供試液；c)采用無熱原氫氧化銷或鹽酸溶液調(diào)節(jié)供試液pH值在6.0~8.0范圍內(nèi)；d)采用陽離子緩沖液(MgSO4或MgCl2)稀釋供試液以調(diào)節(jié)離子濃度。第十一頁，共十九頁，2022年，8月28日確定最大有效稀釋倍數(shù)（MVD）MVD=cL/λL為限值c為供試品溶液濃度第十二頁，共十九頁，2022年，8月28日試驗(yàn)方法供試品數(shù)量：同一批號(hào)至少3個(gè)單位供試品漫提介質(zhì)：細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水第十三頁，共十九頁，2022年，8月28日試驗(yàn)方法供試液制備根據(jù)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的細(xì)菌內(nèi)毒素限值確定浸提介質(zhì)體積，選用下列適宜方法制備供試液:a)管類和容器類器具用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水浸泡器具內(nèi)腔，在(37±1)℃恒溫箱中浸提不少于1h；B)小型配件或?qū)嶓w類器具置無熱原玻璃器皿內(nèi)，加入細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水振搖數(shù)次，在37±1℃恒溫箱中浸泡不少于1h；供試液貯存應(yīng)不超過2h第十四頁，共十九頁，2022年，8月28日試驗(yàn)方法浸提介質(zhì)體積計(jì)算公式：V=L/λ式中：V—浸提介質(zhì)體積，單位為毫升(mL);L—產(chǎn)品細(xì)菌內(nèi)毒素限值，單位為細(xì)菌內(nèi)毒素單位每件(EU/件)λ—所用鱟試劑靈敏度標(biāo)示值，單位為細(xì)菌內(nèi)毒素單位每毫升(EU/mL)第十五頁，共十九頁，2022年，8月28日編號(hào)內(nèi)毒素濃度/被加入內(nèi)毒素的溶液平行管數(shù)A無/供試品溶液2B2λ/供試品溶液2C2λ/檢查用水2D無/檢查用水2A為供試品溶液；B為供試品陽性對(duì)照；C為陽性對(duì)照；D為陰性對(duì)照。第十六頁，共十九頁，2022年，8月28日結(jié)果判斷37℃±1℃保溫60分鐘后觀察結(jié)果D管的結(jié)果均為陰性，B、C管的結(jié)果均為陽性時(shí)試驗(yàn)有效A的2個(gè)平行管均為陰性時(shí)判定供試品符合規(guī)定A的2個(gè)平行管均為陽性時(shí)判定供試品不符合規(guī)定A的2個(gè)平行管1管陽性1管陰性時(shí)需進(jìn)行復(fù)試。復(fù)試時(shí)A液需做4管，全部陰性判定為符合規(guī)定，否則判定供試品不符合規(guī)定第十七頁，共十九頁，2022年，8月28日試驗(yàn)報(bào)告試驗(yàn)報(bào)告中宜給出下列信息:a)供試品名稱;b)生產(chǎn)批號(hào);c)供試液制備方法;d)細(xì)