感染性疾病及免疫學檢測

傳染病：是病原體以某種方式進入到人體后，并在人體內(nèi)生長繁殖，釋放毒素或?qū)е聶C體內(nèi)微生態(tài)平衡失調(diào)，給人體的組織和器官造成一定的損傷而引起的疾病。當前1頁，總共55頁。病原體易感人群當前2頁，總共55頁。免疫學檢驗主要用于：輔助診斷及鑒別診斷判斷療效及預(yù)后流行病學調(diào)查當前3頁，總共55頁。常用的免疫學檢測方法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）金標法（試紙條、試紙板）化學發(fā)光法1.電化學發(fā)光（羅氏）2.微粒子化學發(fā)光（雅培）免疫印跡法(Westernblotting)

凝集反應(yīng)（梅毒檢測)當前4頁，總共55頁。酶聯(lián)免疫吸附試驗ELISA（enzymelinkedimmunosorbentassay）

是一類常用的免疫酶技術(shù)。是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使抗原抗體反應(yīng)在固相表面進行。常用的酶：辣根過氧化物酶(HRP)

堿性磷酸酶（AP）。當前5頁，總共55頁。基本步驟包被封閉孵育洗滌顯色結(jié)果測定

缺點：1只是診斷的輔助手段，特異性和靈敏性有待提高。

2操作過程有些繁瑣，反應(yīng)時間過長，不能一蹴而就。當前6頁，總共55頁。金標法原理：金標層析法采用雙抗原夾心法免疫測定原理，選擇經(jīng)純化的基因工程制備的抗原，分別作為包被抗原和膠體金結(jié)合抗原。由于層析作用反應(yīng)復(fù)合物沿硝酸纖維膜向前移動，當遇到包被抗原時，形成紅色沉淀線。在包被膜上還有一條質(zhì)控線對照，故當有兩條紅線時判為陽性，只有一條紅線時，判為陰性。當前7頁，總共55頁。免疫印跡法免疫印跡法(Westernblotting)是一種將高分辨率凝膠電泳和免疫化學分析技術(shù)相結(jié)合的雜交技術(shù)。免疫印跡法具有分析容量大、敏感度高、特異性強等優(yōu)點，是檢測蛋白質(zhì)特性、表達與分布的一種最常用的方法。（病毒學檢測主要用于檢測HIV抗原確證試驗）當前8頁，總共55頁。凝集反應(yīng)

凝集反應(yīng)是指顆?？乖c相應(yīng)抗體結(jié)合反應(yīng)出現(xiàn)的可見性現(xiàn)象。顆?？乖缤暾募毦?、紅細胞等與相應(yīng)抗體相混合，在一定條件下出現(xiàn)凝集。當前9頁，總共55頁?；瘜W發(fā)光免疫分析

chemiluminescenceimmunoassay（CLIA）CLIA是將化學發(fā)光分析和免疫反應(yīng)相結(jié)合而建立的一種新的免疫分析技術(shù)。這種方法兼有發(fā)光分析的高靈敏度和抗原抗體反應(yīng)的高度特異性。當前10頁，總共55頁。CLIA優(yōu)越性高度敏感，可達pg／ml或pmol水平；特異性強，重復(fù)性好，CV＜5％。測定范圍寬，可達7個數(shù)量級。試劑穩(wěn)定，無毒害，無污染，有效期長，達數(shù)月甚至數(shù)年。操作簡單，耗時短，易于自動化。在對環(huán)保很重視的國家，CLIA成了取代RIA的首選方法。當前11頁，總共55頁。常見術(shù)前檢測甲型肝炎抗體（抗HAVIgM）乙肝五項丙型肝炎抗體（抗HCV)梅毒螺旋體抗體人類免疫缺陷病毒抗體（抗HIV）當前12頁，總共55頁。病毒性肝炎

ViralHepatitis是由一組嗜肝病毒引起的，以肝臟炎癥和壞死病變?yōu)橹鞯囊环N傳染病。主要表現(xiàn)為明顯的消化道癥狀、全身疲乏無力，肝臟腫大。肝功能異常，部分病例出現(xiàn)黃疸。當前13頁，總共55頁。甲型病毒性肝炎（HAV）HAV屬小RNA病毒，為正單鏈RNA病毒。HAV主要經(jīng)糞-口途徑傳播。潛伏期平均28天。HAV抵抗力較強，60℃加熱10-12h后仍具有感染性，85℃加熱立即滅活，對乙醚、氯仿及PH為3的酸性環(huán)境有抵抗力。當前14頁，總共55頁。HAVIgM：近期感染HAV,發(fā)病2周后陽性率為100%，3個月后轉(zhuǎn)陰。早期診斷。IgG：急性感染后6個月達高峰，然后逐漸下降，可終身存在。既往感染HAVRNA：早期診斷的特異性指標當前15頁，總共55頁。HBV(hepatitisBvirus）乙型肝炎病毒當前16頁，總共55頁。我國流行現(xiàn)狀現(xiàn)有HBV感染者約1.6億當前17頁，總共55頁。HBV顆粒管型小球型大球型當前18頁，總共55頁。HBV特點HBsAg與HBsAbHBeAg與HBeAbHBcAg與HBcAb有包膜雙股DNA病毒三組Ag-Ab系統(tǒng)：當前19頁，總共55頁。HBs-Ag是感染的標志見于體液和分泌物中，也可見于唾液、精液、乳汁中介導病毒結(jié)合肝細胞HBs-Ab3-6個月產(chǎn)生有抵抗力的標志阻斷病毒結(jié)合肝細胞當前20頁，總共55頁。HBeAg病毒復(fù)制的標志，傳染性強病毒合成后釋放到血液中治療的參考指標HBeAb病毒復(fù)制減少的標志，傳染性弱要先于HBsAb出現(xiàn)當前21頁，總共55頁。HBcAg存在于病毒核心，不釋放至血液抗原性強HBcAb出現(xiàn)早，消退晚IgM:近期感染HBVIgG:既往感染HBV當前22頁，總共55頁。臨床組合模式當前23頁，總共55頁。模式HBsAgAnti-HBsHBeAgAnti-HBeAnti-HBc臨床意義1+-+-+俗稱“大三陽”。急性或慢性乙肝；病毒在復(fù)制，傳染性強。2+--++俗稱“小三陽”。急性或慢性乙肝；傳染性低。這種模式在慢性無癥狀攜帶者以及急性感染人群中較常見，病毒復(fù)制可能仍在進行。3+---+急性或慢性乙肝感染，有傳染性4---++既往感染5----+處于HBsAg和HBeAg消失與Anti-HBe和Anti-HBs出現(xiàn)之間的一個缺口時期；既往感染6-+--+感染恢復(fù)期；既往感染，有免疫力7-+-++感染恢復(fù)期；既往感染8-+---主動免疫9-----未感染HBV,屬易感者當前24頁，總共55頁。10++-++少見的模式11+----12+-+--13-++-+14+-+++模式HBsAgAnti-HBsHBeAgAnti-HBeAnti-HBc臨床意義當前25頁，總共55頁。乙肝五項少見模式分析單一HBsAg：

主要見于急性HBV感染的最早期，一般隨之出現(xiàn)HBeAg和IgM的Anti-HBc。通常的慢性HBV感染中，HBsAg和Anti-HBc并存者約占95%，HBV慢性感染中不出現(xiàn)Anti-HBc是少見的。單一的HBsAg的異常表現(xiàn)主要由于Anti-HBc的缺失。當前26頁，總共55頁。HBsAg和Anti-HBs并存：在HBV感染恢復(fù)期中約有3%的個例可同時檢出HBsAg和Anti-HBs,然后HBsAg消失而Anti-HBs水平逐漸升高。在慢性HBV感染者中約3%-5%兩者共存，出現(xiàn)Anti-HBs并不表明HBsAg的清除和感染的恢復(fù)，可能由于：1.前后感染兩種亞型HBV，或HBsAg與其抗體之間僅有低親和性反應(yīng)；2.S基因變異，其編碼的HBsAg抗原性改變，原型Anti-HBs不能將其清除；3.α干擾素治療中出現(xiàn)Anti-HBs血清轉(zhuǎn)換，也因S基因的變異，而未能清除HBsAg。4.HBV疫苗接種者中也有少數(shù)個例雖有正常的Anti-HBs應(yīng)答，但仍能感染α決定簇變異的免疫逃逸病毒株，從而出現(xiàn)與HBsAg共存的現(xiàn)象。當前27頁，總共55頁。HBeAg和Anti-HBe并存：一般是處于乙肝e抗原和e抗體轉(zhuǎn)換時期，e抗原和e抗體以抗原抗體復(fù)合物的狀態(tài)共存。Anti-HBe試劑檢測時，血樣中的抗原抗體復(fù)合物同樣可以結(jié)合至包被板上，起到了競爭效果。當前28頁，總共55頁。呈世界性分布極易慢性化，與肝硬化、原發(fā)性肝癌關(guān)系密切HCV（hepatitisCvirus）丙型肝炎病毒當前29頁，總共55頁。HCV特點有包膜的單股正鏈RNA病毒抗HCV抗體非保護性抗體輸血和非腸道途徑傳播主要檢測IgG當前30頁，總共55頁。丙型病毒性肝炎(HCV)臨床意義HCV是輸血后肝炎和散發(fā)性非甲非乙型肝炎的主要病原。HCV感染后可導致慢性肝炎、肝硬化和肝細胞癌等多種肝臟疾病?？笻CV陽性而血清中沒有HCVRNA提示既往感染。當前31頁，總共55頁。檢測方法

常用檢測方法為ELISA法，金標記免疫層析法和化學發(fā)光法。當前32頁，總共55頁。檢測方法：ELISA化學發(fā)光當前33頁，總共55頁。HIV(HumanImmunodeficiencyVirus)

人獲得性免疫缺陷病毒當前34頁，總共55頁。我國歷年艾滋病病毒感染者和病人數(shù)當前35頁，總共55頁。HIV的結(jié)構(gòu)特點HIV-1和HIV-2逆轉(zhuǎn)錄病毒兩股相同的正鏈RNA當前36頁，總共55頁。CD4抗原輔助受體CD4+細胞HIVgp120結(jié)合CD4/輔助受體當前37頁，總共55頁。病毒經(jīng)黏膜或皮膚破損進入體內(nèi)感染黏膜或皮膚層樹突狀細胞病毒于24小時內(nèi)在樹突狀細胞繁殖病毒于24-28小時到達局部淋巴結(jié)病毒于5天內(nèi)出現(xiàn)在外周血液中每個感染細胞可產(chǎn)生5000個病毒顆粒，每人每天可產(chǎn)1010病毒。當前38頁，總共55頁。HIV的檢測篩選試驗：敏感性高，如ELISA，膠體金標記層析法。確診試驗：特異性高，如蛋白印跡試驗和IFA抗體最早在感染后二周，最晚三個月會轉(zhuǎn)為陽性初篩試驗2次陽性，再進行確認試驗當前39頁，總共55頁。樣品初篩檢測陽性反應(yīng)陰性反應(yīng)篩查試劑復(fù)查原有試劑加另一種篩選試劑均陽性反應(yīng)一陰一陽均陰性反應(yīng)送確認實驗室確認報告陰性當前40頁，總共55頁。結(jié)果判斷確診試驗陽性，有臨床癥狀，診斷為AIDS確診試驗陽性，無臨床癥狀，診斷為HIV感染者確診試驗陰性，但初篩試驗陽性或有臨床癥狀，3個月后復(fù)查當前41頁，總共55頁。梅毒

syphilis

是梅毒螺旋體引起的一種慢性傳染病，本病的特點是病程的長期性和潛匿性，病原體可侵犯任何器官，臨床表現(xiàn)出各種不同的癥狀。當前42頁，總共55頁。三個階段

一期梅毒：硬性下疳；二期梅毒：梅毒疹；三期梅毒：累及心、肝、神經(jīng)系統(tǒng)、骨等。當前43頁，總共55頁。后天性梅毒（獲得性）：95%性交傳播，少數(shù)因輸血、接吻、醫(yī)務(wù)人員不慎受染等直接接觸傳播。

先天性梅毒（胎傳梅毒）：梅毒螺旋體可自患病母體的血液經(jīng)胎盤傳給胎兒傳播方式當前44頁，總共55頁。非梅毒螺旋體抗原血清試驗：是以心磷脂、卵磷脂及膽固醇作為抗原檢查血清中的反應(yīng)素，用于初篩試驗及療效觀察。可以分為以下四種試驗，原理基本相同：

1、性病研究實驗室玻片試驗（VDRL)：由于試劑需現(xiàn)配現(xiàn)用，故而國內(nèi)實驗室很少采用。但VDRL是唯一可用于神經(jīng)性梅毒診斷的血清學方法

2、快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(RPR)：在特制的紙片上進行，加入一定量特制的炭粉，可使抗原抗體出現(xiàn)凝集，用肉眼可觀察結(jié)果。

3、甲苯胺紅試驗（TRUST)：在試劑中加入甲苯胺紅代替炭粉顆粒，使結(jié)果更易于觀察。

4、不加熱血清反應(yīng)素試驗（USR)梅毒的血清學試驗（一）當前45頁，總共55頁。RPRTRUSTVDRL非梅毒螺旋體抗原血清學試驗結(jié)果判斷滴度：出現(xiàn)凝集反應(yīng)的血清最高稀釋倍數(shù)。當前46頁，總共55頁。非梅毒螺旋體抗原血清試驗的缺陷：

1、特異性：由于在多種疾病，如急性病毒性感染、自身免疫性疾病、結(jié)締組織病、靜脈吸毒者以及懷孕婦女中均可出現(xiàn)反應(yīng)素，所以此類試驗有時會出現(xiàn)假陽性反應(yīng).

2、敏感性：非梅毒螺旋體抗原血清試驗有時出現(xiàn)弱陽性或陰性結(jié)果，而臨床上又像二期梅毒，此時應(yīng)將此血清稀釋后做定量試驗，如出現(xiàn)陽性結(jié)果，則為抗體過量引起的前帶現(xiàn)象。1－2％二期梅毒病人可出現(xiàn)此現(xiàn)象而發(fā)生梅毒血清假陰性反應(yīng)。此外，由于感染梅毒后反應(yīng)素的出現(xiàn)晚于特異性梅毒螺旋體抗體，晚期梅毒反應(yīng)素又可能轉(zhuǎn)陰，因此這類試驗不適于一、三期梅毒，對隱性梅毒和神經(jīng)梅毒也不敏感。因此此類試驗做梅毒初篩時，存在一定數(shù)量的漏檢.非梅毒螺旋體抗原血清試驗的優(yōu)點：

1、非梅毒螺旋體抗原血清試驗表現(xiàn)為滴度隨療程逐漸下降，故可以作為療效觀察的指標

2、此類方法價格低廉梅毒的血清學試驗（二）當前47頁，總共55頁。梅毒螺旋體抗原血清試驗：用梅毒螺旋體作為抗原檢測血清中的抗螺旋體IgM和/或IgG抗體，其敏感性和特異性均較高。常用的有以下五種方法：

1、熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS)2、梅毒螺旋體血球凝集試驗（TPHA）

3、梅毒螺旋體明膠凝集試驗（TPPA)4、梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗（TP-ELISA）

5、梅毒螺旋體快速診斷試驗（TP-RT）梅毒的血清學試驗（三）當前48頁，總共55頁。梅毒螺旋體明膠凝集試驗（TPPA）原理：TPPA的原理與TPHA基本相同，它以人工合成的惰性明膠顆粒代替TPHA試驗的紅細胞作為載體，是TPHA的升級產(chǎn)品優(yōu)點：1、試劑穩(wěn)定，批間差小

2、結(jié)果判讀更為清晰明確

3、敏感性和特異性較TPHA進一步提高

4、通過了國家的批批檢不足：結(jié)果判定主觀，較難實現(xiàn)自動化梅毒的血清學試驗（四）當前49頁，總共55頁。賽樂迪亞（Serodia）TPPA

梅毒螺旋體抗體明膠顆粒凝集試驗當前50頁，總共55頁。當前51頁，總共55頁。梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫試驗（TP-ELISA）原理：以梅毒螺旋體抗原包被聚丙乙烯板，再加入待檢血清以及酶標抗原，形成雙抗原夾心，同時檢測

IgG、IgM抗體。少數(shù)試劑采用間接法，檢測IgG

優(yōu)點：1、敏感性和特異性較高

2、價格較低，適合于對大量樣品的篩查不足：各家ELISA試劑盒采用的抗原和工藝不同，使測定的敏感性和特異性產(chǎn)生較大的差異，臨床實驗