免疫質(zhì)量管理

免疫質(zhì)量管理第一頁，共七十二頁，2022年，8月28日定性檢測的性能驗證Nanchongcitycenterhospital李金明教授----衛(wèi)生部臨檢中心第二頁，共七十二頁，2022年，8月28日

幾個概念：

性能驗證診斷試驗臨床敏感性篩查試驗臨床特異性確認試驗臨界點CUT-OFF

第三頁，共七十二頁，2022年，8月28日篩查試驗臨床上，篩查方法通常是用于檢測整個人群（或人群中的特定部分）中特定指標的情況。如糞便隱血檢測梅毒血清學(xué)試驗（VDRL)等。一般來說，這類試驗要求其敏感性要高，以確保真陽性的檢出。第四頁，共七十二頁，2022年，8月28日5預(yù)測值

?陽性預(yù)測值（positivepredictivevalue）是指篩檢試驗陽性者患目標疾病的可能性?陰性預(yù)測值（negativepredictivevalue）

是指篩檢試驗陰性者不患目標疾病的可能性

第五頁，共七十二頁，2022年，8月28日6第六頁，共七十二頁，2022年，8月28日7靈敏度越高，陰性預(yù)測值越高特異度越高，陽性預(yù)測值越高與受檢人群目標疾病患病率（P）密切相關(guān)

第七頁，共七十二頁，2022年，8月28日診斷試驗通常用于臨床懷疑某種特定疾病或狀況是否存在的診斷定性試驗。如細菌培養(yǎng)等。診斷試驗應(yīng)具有很好的敏感性和特異性。第八頁，共七十二頁，2022年，8月28日9

篩檢試驗

診斷試驗

對象不同

健康人或無癥狀的病人

病人

目的不同

把病人及可疑病人與無病者區(qū)分開來

病人與可疑有病但實際無病的人區(qū)分開來

要求不同

快速、簡便、高靈敏度

科學(xué)性、準確性

費用不同

簡單、廉價

一般花費較貴

處理不同

陽性者須進一步作診斷試驗以便確診

結(jié)果陽性者要隨之以治療

篩檢試驗與診斷試驗的區(qū)別第九頁，共七十二頁，2022年，8月28日確認試驗確認試驗用于驗證篩查試驗或者診斷試驗結(jié)果。該試驗必須具有較高的特異性以及高陽性預(yù)測值。如螺旋體抗體熒光吸附(FTA-ABS)梅毒血清學(xué)試驗。第十頁，共七十二頁，2022年，8月28日臨床敏感性在患有明確臨床疾病的患者中，其測定陽性或超過正常范圍的比率（即出現(xiàn)陽性結(jié)果和確定犯?。┡R床特異性在沒有特定臨床疾病的患者中，其測定引性或在正常范圍的比率第十一頁，共七十二頁，2022年，8月28日臨界點（CUT-OFF)指一個處于試劑檢測臨界點的樣本濃度，同一份樣本在多次重復(fù)實驗中各有50%的幾率獲得陽性或陰性的結(jié)果時該分析物的濃度一旦確定是不變的。試劑或系統(tǒng)說明書提供。區(qū)別于試劑盒陽性反應(yīng)判斷值第十二頁，共七十二頁，2022年，8月28日有反應(yīng)性（reactivity）無反應(yīng)性（anergy）陽性（positive)、陰性(negative)是、不是（或有、沒有）臨床定性檢測的報告方式第十三頁，共七十二頁，2022年，8月28日定性測定系統(tǒng)/試劑性能驗證特異性敏感性測定下線重復(fù)性（包括CUT-OFF值的重復(fù)性）準確性抗干擾能力第十四頁，共七十二頁，2022年，8月28日性能驗證的合格標準第十五頁，共七十二頁，2022年，8月28日什么時候需性能驗證使用新的檢測試劑或系統(tǒng)更換檢測試劑或系統(tǒng)儀器大修或者搬遷后重新安裝第十六頁，共七十二頁，2022年，8月28日性能驗證前的準備熟悉待驗證的試劑或系統(tǒng)必要的培訓(xùn)制定質(zhì)量保證計劃確定樣本數(shù)量及強弱（重復(fù)性）確定比較的方法第十七頁，共七十二頁，2022年，8月28日重復(fù)性驗證第十八頁，共七十二頁，2022年，8月28日特異性驗證特定病原體以外感染性疾病患者的標本含有干擾物質(zhì)的樣本：RF陽性、異嗜性抗體、溶血、脂血、高膽紅素樣本結(jié)果判斷：非特定病原體感染患者樣本均為陰性；含一定濃度干擾物質(zhì)的樣本為陰性第十九頁，共七十二頁，2022年，8月28日準確性驗證：方法比較另一種已驗證的定性方法金標準方法某種定量方法或臨床診斷要求：1.量要足夠大；2.穩(wěn)定3.兩種方法同時使用4.持續(xù)10—20天第二十頁，共七十二頁，2022年，8月28日PCR試劑盒的質(zhì)檢(定性測定)性能質(zhì)檢采用血清（樣本）盤（Panel）質(zhì)檢：PCR試劑血清（樣本）盤由一定數(shù)量的原血清陰、陽性樣本、2～3份純化核酸（DNA或RNA或cDNA）樣本以及3～5份系列稀釋陽性樣本所組成。樣本總數(shù)可定在20份左右。原血清樣本用于判斷試劑盒對特定病原體核酸檢出的特異性、靈敏度和符合率；純化核酸樣本用于判斷DNA擴增或逆轉(zhuǎn)錄及DNA擴增的有效性；系列稀釋陽性樣本用于判斷試劑的測定下限。第二十一頁，共七十二頁，2022年，8月28日試劑特異性、靈敏度和符合率計算公式第二十二頁，共七十二頁，2022年，8月28日試劑特異性、靈敏度和符合率計算公式靈敏度（％）＝(a/a+c)100%特異性（％）＝(d/b+d)100%符合率（％）＝(a+d/a+b+c+d)100%第二十三頁，共七十二頁，2022年，8月28日24⒈靈敏度與假陰性率?靈敏度(sensitivity)(真陽性率)

即實際有病而按該篩檢標準被正確地判為有病的百分率

?假陰性率(falsenegativerate)(漏診率、第二類錯誤)

即實際有病，但根據(jù)該篩檢標準被定為非病者的百分率

第二十四頁，共七十二頁，2022年，8月28日25⒉特異度與假陽性率

?特異度(specificity)(真陰性率)

實際無病按該診斷標準被正確地判為無病的百分率

?假陽性率(falsepositiverate)(誤診率、第一類錯誤)

即實際無病，但根據(jù)該診斷標準被定為有病的百分率

第二十五頁，共七十二頁，2022年，8月28日26r＝1－（假陽性率＋假陰性率）

＝（靈敏度＋特異度）－1

r值范圍在0--1之間。r越大，準確性越高，與實際越符合。3.正確診斷指數(shù)（約登指數(shù)Youden’sindex）第二十六頁，共七十二頁，2022年，8月28日274.符合率（agreement/consistencyrate）

又稱一致率，是篩檢試驗判定的結(jié)果與標準診斷的結(jié)果相同的數(shù)占總受檢人數(shù)的比例

第二十七頁，共七十二頁，2022年，8月28日人員比對持續(xù)10-20天測定20批判定：1.人員間陽性和陰性符合率2.人員間室內(nèi)質(zhì)控批內(nèi)變異（弱陽性標本測20孔）3.批間變異第二十八頁，共七十二頁，2022年，8月28日ISO15189免疫評審體會

江蘇省臨檢中心許斌第二十九頁，共七十二頁，2022年，8月28日現(xiàn)場評審的關(guān)注點檢測系統(tǒng)人員能力室內(nèi)質(zhì)控實驗室環(huán)境和設(shè)置室間質(zhì)控檢驗報告溯源及測量不確定度安全現(xiàn)場試驗第三十頁，共七十二頁，2022年，8月28日個人技術(shù)檔案數(shù)量（足夠的人力資源）科室授權(quán)及崗位職責清單（科室結(jié)構(gòu)圖）培訓(xùn)：1免疫手工項目的培訓(xùn)效果評價是否：人員比對；每半年進行崗位考核。2上崗培訓(xùn)：職業(yè)道德培訓(xùn)；基本技能培訓(xùn)；安全培訓(xùn)；實驗室管理培訓(xùn)；檢驗流程培訓(xùn)；質(zhì)量管理（室間室內(nèi)質(zhì)控）培訓(xùn)；咨詢服務(wù)培訓(xùn)等

人力資源檔案第三十一頁，共七十二頁，2022年，8月28日實驗室環(huán)境和設(shè)置

第三十二頁，共七十二頁，2022年，8月28日

檢驗前程序觀察申請表的完整性標本唯一標識標本類型量抗凝劑的影響讓步檢驗項目的干擾評價（少血、溶血、抗凝不完全等）按未檢、檢畢分類儲存標本第三十三頁，共七十二頁，2022年，8月28日檢驗報告及分析后程序定性項目的報告格式危急值報告（抗HIV)原始數(shù)據(jù)與LIS輸出的一致性結(jié)果修改權(quán)限檢畢常規(guī)標本保留方式時間為進一步檢驗的建議和臨床診斷的一致性評價第三十四頁，共七十二頁，2022年，8月28日咨詢服務(wù)于檢驗后程序崗位（檢驗醫(yī)師崗位)職責（檢驗醫(yī)師職責）內(nèi)容核查記錄第三十五頁，共七十二頁，2022年，8月28日檢測儀器第三十六頁，共七十二頁，2022年，8月28日檢測系統(tǒng)的性能評價定量項目參照臨床生化要求定性項目的性能評價內(nèi)容：

靈敏度、特異性、符合率和總精密度檢測限COT-OFF值。

總精密度可以采用室內(nèi)質(zhì)控的RCV第三十七頁，共七十二頁，2022年，8月28日COT-OFF值選擇的標準及應(yīng)用考慮敏感性特異性預(yù)測值Galen和Gambino推薦標準陰性來源：X+3S陽性來源：X-3SCOT-OFF值用于：灰區(qū)的設(shè)定；質(zhì)控圖的控制限確定。第三十八頁，共七十二頁，2022年，8月28日室內(nèi)質(zhì)控室內(nèi)質(zhì)控相關(guān)SOP文件

（質(zhì)控要求、失控處理等）質(zhì)控物基質(zhì)質(zhì)控物穩(wěn)定性質(zhì)控物數(shù)量實驗位置和頻次濃度范圍冰凍血清的融化和凍干品復(fù)溶自制品要求質(zhì)控記錄質(zhì)控分析第三十九頁，共七十二頁，2022年，8月28日風(fēng)濕免疫病相關(guān)自身抗體的臨床應(yīng)用四川省人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科周斌第四十頁，共七十二頁，2022年，8月28日

風(fēng)濕性疾病

(Rheumaticdiseases)

是泛指影響骨、關(guān)節(jié)及其周圍軟組織、肌肉、滑囊、肌腱、筋膜等的一組疾病，不管其發(fā)病原因是感染性的、免疫性的、代謝性的、退化性的等等。近年來隨著人們對疾病認識的深化和發(fā)展，風(fēng)濕性疾病的分類日見完善。第四十一頁，共七十二頁，2022年，8月28日風(fēng)濕病的病因感染：如萊姆病、淋球菌性關(guān)節(jié)炎。免疫：如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡。代謝：如痛風(fēng)。內(nèi)分泌：如指端肥大癥、甲狀旁腺功能亢進癥。退化：如骨關(guān)節(jié)炎。地理環(huán)境：大骨節(jié)病、氟中毒。腫瘤:骨瘤、多發(fā)性骨髓瘤?！?。第四十二頁，共七十二頁，2022年，8月28日流行病學(xué)調(diào)查（以16歲以上人群為例）類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎為0.32%~0.36%強直性脊柱炎約為0.25%系統(tǒng)性紅斑狼瘡約為0.07%原發(fā)性干燥綜合征約為0·3%骨性關(guān)節(jié)炎在50歲以上者可達50%痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎也日益增多第四十三頁，共七十二頁，2022年，8月28日

風(fēng)濕性疾病與風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎風(fēng)濕性疾病：是指所有風(fēng)濕性疾病的總稱。風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎：是指以關(guān)節(jié)炎為主要表現(xiàn)的風(fēng)濕熱。第四十四頁，共七十二頁，2022年，8月28日第四十五頁，共七十二頁，2022年，8月28日第四十六頁，共七十二頁，2022年，8月28日風(fēng)濕性疾病的分類一、彌漫性結(jié)締組織病二、與脊柱相關(guān)的關(guān)節(jié)炎三、骨關(guān)節(jié)炎四、感染所致的風(fēng)濕性綜合癥五、伴有風(fēng)濕性疾病的代謝或內(nèi)分泌疾病六、腫瘤七、神經(jīng)血管疾病八、骨及軟骨疾病九、關(guān)節(jié)外疾病十、其它有關(guān)節(jié)表現(xiàn)的疾病第四十七頁，共七十二頁，2022年，8月28日彌漫性結(jié)締組織病

1、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎2、幼年類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎3、紅斑狼瘡4、硬皮病5、彌漫性筋膜炎、有或無嗜酸粒細胞血癥6、多肌炎7、壞死性血管炎和其他血管病8、干燥綜合癥9、重疊綜合征10、其他第四十八頁，共七十二頁，2022年，8月28日自身抗體的定義

由于某些不明原因造成免疫系統(tǒng)對自身成分的免疫耐受性減低或破壞，體內(nèi)出現(xiàn)的針對自身組織成分（細胞內(nèi)、表面和細胞外成分）為靶抗原的相應(yīng)抗體；其對自身免疫病診斷及鑒別診斷以及判斷疾病愈后具有重要價值。第四十九頁，共七十二頁，2022年，8月28日自身抗體的臨床應(yīng)用

目前，研究比較清楚的與自身抗體密切相關(guān)的疾病有：（1）風(fēng)濕性疾?。合到y(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）、干燥綜合癥（SS）、系統(tǒng)性硬化癥（SSc）、多發(fā)性皮肌炎/肌炎（PM/DM）、混合性結(jié)締組織?。∕CTD）、ANCA相關(guān)性血管炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）、抗磷脂綜合征(APS)等；（2）腎臟疾病：抗腎小球基底膜腎炎、快速進展性腎小球腎炎、肺出血-腎炎綜合征等；（3）皮膚?。簩こＬ彀挴?、大泡性類天皰瘡、皰疹性皮炎；第五十頁，共七十二頁，2022年，8月28日自身抗體的臨床應(yīng)用（4）消化及呼吸系統(tǒng)疾病：潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病、萎縮性胃炎及惡性貧血、自身免疫性肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化、結(jié)節(jié)病、部分肺間質(zhì)疾??；（5）內(nèi)分泌?。篏rave′s病、橋本氏甲狀腺炎、I型糖尿病、自身免疫性Addison′s病、特發(fā)性甲狀旁腺功能低下、自身免疫性多腺體綜合征等；（6）神經(jīng)肌肉疾病：重癥肌無力(MG)、多發(fā)性硬化(MS)、格林巴利綜合征(GBS)；第五十一頁，共七十二頁，2022年，8月28日自身抗體的臨床應(yīng)用（7）血液?。鹤陨砻庖咝匀苎载氀?AIHA)、免疫性血小板減少性紫癜（ITP）

(8)心臟疾?。猴L(fēng)濕性心臟病、心肌病、心肌梗塞后綜合征等（9）眼病:自身免疫性眼病（10）不孕癥及某些惡性腫瘤等。第五十二頁，共七十二頁，2022年，8月28日自身抗體的分類針對細胞內(nèi)抗原抗體：ANA、ds-DNA、ENA、組蛋白抗體、ANCA、AMA、抗核糖體抗體、SMA等針對細胞表面抗原抗體：

細胞表面抗原決定簇的抗體，如HLA-Ab、RBC-Ab、血小板抗體等針對細胞外抗原抗體：RF、TgAb、某些凝血因子抗體、內(nèi)因子抗體等第五十三頁，共七十二頁，2022年，8月28日自身免疫病的標記ANA（抗核抗體）提示彌漫性結(jié)締組織病ANCA（抗中性粒細胞胞漿抗體）提示小血管炎ACL（抗心磷脂抗體）提示磷脂抗體綜合征第五十四頁，共七十二頁，2022年，8月28日抗核抗體抗核抗體包含：1抗DNA抗體：(anti-dsDNAanti-ssDNA)2抗組蛋白抗體：(histone:H1H2aH2bH3H4H2a-H2b復(fù)合物)抗非組蛋白抗體：抗ENA抗體抗ACA抗體抗核仁抗體：（RNA多聚酶U3RNP原纖維）抗其他細胞成分抗體：（線粒體高爾基體溶酶體細胞角蛋白等）第五十五頁，共七十二頁，2022年，8月28日特異性較強的自身抗體有助于CTD的診斷和鑒別診斷抗Sm（U族RNA+核蛋白）系統(tǒng)性紅斑狼瘡抗Scl-70（DNA拓撲異構(gòu)酶）系統(tǒng)性硬化癥抗SSA/SSB（Y族RNA+核蛋白）干燥綜合征抗CCP（環(huán)瓜氨酸多肽）類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎抗AKA（角蛋白微絲蛋白）類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎抗Jo-1(組氨酸t(yī)RNA合成酶）多發(fā)性肌炎第五十六頁，共七十二頁，2022年，8月28日抗體滴度的高低有判斷疾病活動性的作用抗雙鏈DNA(ds-DNA) SLEcANCA（蛋白酶-3）Wegener肉芽腫ACL（含磷脂結(jié)構(gòu)的抗原成分）SLE、抗磷脂抗體綜合征

RF (變性IgG分子Fc片段）RASS第五十七頁，共七十二頁，2022年，8月28日預(yù)測疾病的預(yù)后及臨床亞型抗Jo-1

(55Kd組氨酸t(yī)RNA合成酶） 皮肌炎合并肺間質(zhì)病變抗Scl-70（DNA拓撲異構(gòu)酶） 系統(tǒng)性硬化彌漫性病變抗rRNP（核糖體上的磷酸蛋白）狼瘡腦病第五十八頁，共七十二頁，2022年，8月28日ANA譜及其臨床意義ANA

彌漫性結(jié)締組織?。–TD）抗組蛋白

多種CTD，以SLE及服異煙肼者雙鏈DNA

活動的SLEAIH抗單鏈DNA無特異性抗核仁

SSc抗著絲點

SSc(CREST型)、pSS(原發(fā)性干燥綜合征）抗ENA

見后第五十九頁，共七十二頁，2022年，8月28日抗ENA（鹽水可提取核抗原）抗體譜

及其臨床意義抗RNP（U1RNP)MCTD、SLE抗Sm(U1-6RNP) SLE抗SSA(Ro) pSS、SLE抗SSB(La) pSS、SLE抗rRNP SLE抗Scl-70 SSc抗Jo-1抗SRP抗Mi-2DM/PM第六十頁，共七十二頁，2022年，8月28日RA自身抗體譜及臨床意義RF:60-70％RA中出現(xiàn)，量與RA活動性及嚴重性呈正相關(guān)。亦在其它CTD出現(xiàn)抗CCP

（抗環(huán)瓜氨酸抗體）:

在50％RA中出現(xiàn)關(guān)節(jié)畸形發(fā)生AKA（抗角蛋白抗體）:40％RA陽性APF（抗核周因子）:

在52％RA陽性抗RA33: RA陽性率為35％

以上抗體陽性有助于早期RA及不典型RA的診斷和早期開展治療，改善預(yù)后。第六十一頁，共七十二頁，2022年，8月28日ANCA譜及其臨床意義cANCA

靶抗原：PR-3(蛋白酶3〕pANCA

靶抗原：MPO(髓過氧化酶)

彈性蛋白酶乳鐵蛋白其它Wegener肉芽腫其量提示病情活動

MPACSSPAN及其它血管炎炎性腸病等第六十二頁，共七十二頁，2022年，8月28日第六十三頁，共七十二頁，2022年，8月28日磷脂抗體譜及其臨床意義ACL（抗心磷脂抗體）SLE，原發(fā)性磷脂綜合征 感染、腫瘤抗2GP1(載脂蛋白) ACL與磷脂結(jié)合的輔助因子LAC（狼瘡抗凝物） SLE、感染、腫瘤抗磷脂酰絲氨酸抗體抗磷脂酸抗體磷脂抗體是診斷磷脂抗體綜合征的必備條件之一，但并非有磷脂抗體患者均屬該綜合征，必需同時有臨床癥狀（血栓、血小板減少、反復(fù)自發(fā)性流產(chǎn)）第六十四頁，共七十二頁，2022年，8月28日其它自身抗體及臨床意義AMA（抗線粒體抗體）原發(fā)性膽汁性肝硬化 發(fā)性干燥綜合征抗Mi-2抗體 多發(fā)性肌炎皮肌炎SMA（抗平滑