流感病毒課件

第九章

流感病毒

?傳染性強(qiáng)，傳播速度快；

?引起的并發(fā)癥嚴(yán)重；

?全球每年流感病例為6億～12億，重癥流感的病死率為8％～10％；

?人感染高致病性禽流感，死亡率60%；

?容易變異，人群缺乏持久免疫力。

?20世紀(jì)5次大流行：

?1900、1918、1957、1968、1977??1918-1919第一次世界大戰(zhàn)期間，發(fā)生一次大流行，當(dāng)時(shí)全世界20億人口，10億被感染

死亡人數(shù)2000萬，超過一戰(zhàn)中死亡人數(shù)的總和

中層

基質(zhì)蛋白：

M1,M2外層

包膜蛋白

NAM112345678PB2PB1PARNA

RNA多聚酶

M2HA內(nèi)層

核糖核蛋白（RNP）

NP①分節(jié)段的(-)ssRNA②核蛋白（NP)核衣殼

③3種RNA多聚酶(PA,PB1,PB2)

一、分類

1、型

根據(jù)核蛋白（NP）和基質(zhì)蛋白（MA）抗原性的不同，分A、B和C3型，或稱甲、乙、丙3型。

甲型（A)：

–易變異，?？稍斐纱罅餍?。

–宿主：多種動物、人。

–根據(jù)HA和NA抗原性的不同，再區(qū)分若干亞型：H1~H16,N1~N9?乙型（B)：變異小，造成局部爆發(fā)。感染人和豬

?丙型（C)：不易變異，主要侵犯嬰幼兒。只感染人

2、亞型

A型流感病毒根據(jù)血凝素（HA）和神經(jīng)氨酸酶（NA）的不同進(jìn)一步分成亞型。

禽流感病毒的HA有16個(gè)亞型（H1-H14），NA有9個(gè)亞型（N1-N9）。

二、病毒的性質(zhì)

1.

形態(tài)

典型的流感病毒粒子呈球狀，直徑80~120nm，平均為100nm。病毒體有多形性，新分離的毒株通常為絲形，長短不一，長的可達(dá)數(shù)微米。

2.基因組：

A、B兩型流感病毒由8個(gè)節(jié)段的單股負(fù)鏈RNA組成

C型流感病毒基因組由7個(gè)RNA節(jié)段組成。

流感病毒RNA總分子量為5.9×106~6.3×106，甲、乙、丙流感病毒基因組的大小和堿基組成不盡相同，AU：GC比率甲型為1.25，乙型為1.42，丙型為1.46。

3.病毒體表面結(jié)構(gòu)

?1）HA糖蛋白

HA內(nèi)有4個(gè)抗原位點(diǎn)，這些位點(diǎn)中個(gè)別氨基酸的改變可引起病毒抗原性的微小改變，即發(fā)生抗原性漂移。

HA的生物學(xué)活性：

1）是病毒的吸附蛋白；

2）與病毒的侵入過程有關(guān)。病毒以膜融合方式進(jìn)入細(xì)胞需要HA的水解；

3）有血細(xì)胞凝集活性；

4）是病毒表面的主要抗原，誘生中和抗體和細(xì)胞免疫反應(yīng)，決定病毒的亞型。

2）NA糖蛋白

?完整的NA糖蛋白為蘑菇狀，由4×8.5nm的頭部和4×10nm的柄組成，單一的寡糖鏈可決定病毒的亞型。?作用：

1)

可水解細(xì)胞表面受體特異性糖蛋白末端的N-乙?；窠?jīng)氨酸。

2)

病毒在細(xì)胞表面成熟時(shí)，NA可以移去細(xì)胞膜出芽點(diǎn)上的神經(jīng)氨酸酶，有利于病毒粒子的成熟和釋放。

3)

具有免疫原性，能誘發(fā)相應(yīng)的抗體

HA和NA的關(guān)系

HA結(jié)合唾液酸

NA水解唾液酸

病毒與受體結(jié)合，

進(jìn)入細(xì)胞

病毒釋放

3)抗原性

?流感病毒的主要抗原成分有NP、MA、HA和NA。

?NP、MA具有型特異性，相應(yīng)抗體對病毒感染無保護(hù)力。

?HA、NA是種特異性抗原，HA能使動物產(chǎn)生中和抗體，對機(jī)體有保護(hù)作用；NA抗體不能中和病毒，但能減少病毒增殖，改變病程。

抗原漂移（antigenicdrift)：由于基因組自發(fā)的點(diǎn)突變引起小幅度的變異，當(dāng)氨基酸的改變積累到一定程度或突變氨基酸正好使抗原決定簇改變，則引起抗原性的變異。

變異機(jī)理：編碼血凝素基因發(fā)生一系列點(diǎn)突變，（某一核苷酸的堿基發(fā)生改變）導(dǎo)致氨基酸序列改變。

抗原變異幅度小，屬于量變，中小型流行，每年有發(fā)生。

抗原轉(zhuǎn)變（antigenicshift)：由于突變幅度較大，導(dǎo)致產(chǎn)生新的亞型，這種變異稱為抗原轉(zhuǎn)變。

變異機(jī)理：基因重組(交換核酸片斷）

變異幅度大，質(zhì)變，大流行。每10-40年出現(xiàn)一次。

人

肺細(xì)胞

人流感病毒

雞流感病毒

新病毒株

甲型流感病毒抗原轉(zhuǎn)變與流行年代

亞型H1N1H2N2H3N2H1N1HAH1H2H3H1NAN1N2N2N1流行年代1918-19571957-19681968-1977近年來流行型別：H3N2、H1N1三、病毒的復(fù)制

流感病毒的復(fù)制過程

四、理化特性

?抵抗力不強(qiáng)；

?56℃30min，滅活；

?對干燥、日光、紫外線敏感；

?室溫下感染性很快消失；

?乙醚、甲醛等敏感；

?酸性條件下更易滅活；

?但在-70℃或冷凍干燥后活性可長期保存。

五、致病性

（一）傳染源、傳播方式、潛伏期

?傳染源Source

急性感染者

?傳播方式Spread

飛沫或污染物

?潛伏期Incubation1-3days.

(二)流感病毒的致病機(jī)制

呼吸道局部感染,不引起病毒血癥

少數(shù)

病毒

呼吸道

局部炎癥

毒素樣物質(zhì)

肺炎

血流

全身癥狀

（三）常見癥狀

致病性

?全身癥狀：發(fā)熱fever、頭痛headache，肌肉酸痛myalgia（重）

?上炎：鼻塞、咽痛、咳嗽（輕）

（四）并發(fā)癥

?1.肺炎（合并細(xì)菌感染，常見的有肺炎球菌、金黃色葡萄球菌等）

常發(fā)生于老年人、兒童、

?2.其他病毒的雙重感染,eg.Adenovirus（腺病毒）

心肺功能異常者

（五）免疫性：感染后獲得對同型V免疫力

六.微生物學(xué)檢查法

1.快速診斷

–檢測病毒抗原：

?取材：鼻粘膜，呼吸道脫落上皮細(xì)胞

?免疫熒光法、ELISA–檢測核酸：RT-PCR

2.血清學(xué)

急性期，恢復(fù)期雙份血清檢測抗體效價(jià)，如果后者比前者升高4倍以上，可作出診斷。

3.病毒分離鑒定

–取急性期患者咽嗽液或鼻咽拭子，加抗生素處理后，放冰瓶內(nèi)送實(shí)驗(yàn)室

–接種雞胚

–接種培養(yǎng)細(xì)胞

七、預(yù)防與治療

1、建立流感檢測站，及時(shí)發(fā)現(xiàn)與隔離病人

2、預(yù)防接種

亞單位疫苗，70%protection.

抗流感病毒藥物

?金剛烷胺：M2阻滯劑

?奧司米韋：可以抑制神經(jīng)氨酸酶活性。

?干擾素

?中藥：清熱解毒

板藍(lán)根、大青葉、連翹、魚腥草，等

抗流感新藥“達(dá)菲”

八角＋大腸桿菌+炸藥

莽草酸

30：1葡萄糖

“達(dá)菲”成分中竟包含一種可爆炸物質(zhì)、一種中國調(diào)味料以及一種無害的大腸桿菌。

八、獸醫(yī)臨床上常見的流感病毒

（一）禽流感

1.分類地位：正粘病毒科/甲型流感病毒屬。

2.禽流感病毒一般特性

①

球形，直徑為80～120nm，但也常有同樣直徑的絲狀形式，長短不一；

②

單股負(fù)股RNA，分8節(jié)段；螺旋對稱核衣殼。

③

有囊膜，表面有10～12nm的纖突（HandN）；H和N是囊膜表面的主要糖蛋白；具有型特異性和多變性，在病毒感染過程中起著重要作用。H決定病毒的致病性，能誘發(fā)感染宿主產(chǎn)生具有保護(hù)作用的中和抗體；N誘發(fā)的抗體無中和作用,但可減少病毒增殖；高致病性毒株主要是H5和H7。

3.禽流感病毒的培養(yǎng)

①

常用：雞胚（初次羊膜腔、適應(yīng)后尿囊腔）及細(xì)胞培養(yǎng)（雞胚成纖維細(xì)胞、原代猴腎細(xì)胞、MDCK、Vero)；

②

有些毒株在鴿或其他細(xì)胞中培養(yǎng)后，對雞的毒力減弱。

4、禽流感病毒來源及傳播

–水禽是禽流感病毒的主要貯藏庫,水禽一般呈亞臨床感染;–將水禽與家禽混合飼養(yǎng)非常容易將病毒引入家禽;–散養(yǎng);–使用不能防止野鳥進(jìn)入的禽舍;–存在多種禽鳥的市場也可能是病毒的主要來源.–豬是不同病毒基因重配的“混合器”或活載體,是“禽-豬-人”種間傳播鏈中的中間宿主

水禽和野生鳥類、鷗類

活禽市場

豬混合器

主要來自野生禽類（尤其是野生水禽）、受感染的家禽以及觀賞鳥等。

禽流感的傳播

???可在感染的鳥類和禽群中持續(xù)存在數(shù)月

有多種傳播途徑

可通過污染的衣服、鞋、設(shè)施及鳥籠等傳播

5.禽流感病毒的致病性

①

引起各種類型的禽流感（Avianinfluenza，AI)。

②

高致病性禽流感又稱：真性雞瘟、歐洲雞瘟；OIEA類傳染病，嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)。

6.禽流感病毒的診斷

①

病毒的分離與鑒定

采取病禽的呼吸道滲出物或器官組織，制成懸液，離心沉淀或過濾以去除組織碎屑；無菌懸液0.1-0.2mL尿囊腔接種10～11日齡雞胚，35-37℃中培養(yǎng)。取雞胚的尿囊液,以HA試驗(yàn)和HI試驗(yàn)鑒定病毒。

②

血清學(xué)試驗(yàn)：禽流感病毒抗體的檢測，這種抗體在感染后7d便可被檢測出來。

用于血清學(xué)檢查的方法有：HI試驗(yàn)（檢測抗H抗體）、雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（檢測抗NP抗體）、病毒中和試驗(yàn)、神經(jīng)氨酸酶抑制試驗(yàn)、ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）以及瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)(AGP)等。通常是采取發(fā)病初期和康復(fù)期(發(fā)病后14～28d)的血清檢測，若康復(fù)期血清抗體比發(fā)病初期升高４倍以上，則可證實(shí)禽流感的發(fā)生。

③分子生物學(xué)診斷

?

RT-PCR

和RealtimeRT-PCR????熒光RT-PCR、RT-PCR-ELISA依賴核酸序列的擴(kuò)增技術(shù)(NASBA)環(huán)介導(dǎo)的等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(LAMP)基因芯片技術(shù)

7.預(yù)防與控制

（二）豬流感病毒（Swineinfluenzavirus，SIV）

（1）分類地位：正粘病毒科/甲型流感病毒屬

（2）血清型：主要有H1N1、H3N2；近年來，從豬體內(nèi)還分離到丙型流行性感冒病毒，但對豬不致病。

（3）抵抗力：流感病毒存在于病豬和帶毒豬的呼吸道分泌物中，對熱和