動(dòng)物源性食品安全現(xiàn)狀及快速檢測(cè)技術(shù)進(jìn)展

動(dòng)物源性食品安全現(xiàn)狀及快速檢測(cè)技術(shù)進(jìn)展第1頁(yè)/共101頁(yè)主要內(nèi)容一、畜牧水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)及動(dòng)物源產(chǎn)品簡(jiǎn)況二、動(dòng)物源食品安全現(xiàn)狀三、食品安全監(jiān)控相關(guān)法律法規(guī)四、有害化合物殘留檢測(cè)技術(shù)五、快速檢測(cè)產(chǎn)品研制六、展望第2頁(yè)/共101頁(yè)

中國(guó)是養(yǎng)殖業(yè)大國(guó)，其中：豬，60960萬(wàn)頭奶牛，1300萬(wàn)頭禽，120億羽羊，28564.7萬(wàn)只一、畜牧水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)及動(dòng)物源產(chǎn)品簡(jiǎn)況第3頁(yè)/共101頁(yè)

中國(guó)又是動(dòng)物源產(chǎn)品生產(chǎn)和消費(fèi)大國(guó)，其中：肉類(lèi)，7300萬(wàn)噸，人均達(dá)56kg；蛋類(lèi)，2650萬(wàn)噸，人均達(dá)20kg；奶類(lèi)，3650萬(wàn)噸，人均達(dá)28kg；水產(chǎn)品，4900萬(wàn)噸，人均達(dá)38kg。第4頁(yè)/共101頁(yè)二、動(dòng)物源食品安全現(xiàn)狀全球經(jīng)濟(jì)一體化和食品貿(mào)易國(guó)際化使食品安全成為一個(gè)世界性的挑戰(zhàn)和全球重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題。其中外源化合物（獸藥、藥物添加劑、違禁藥物等）殘留超過(guò)最高殘留限量標(biāo)準(zhǔn)以及臨床使用不遵守休藥期是影響動(dòng)物源食品安全的最主要因素之一。盡管世界各國(guó)采取了一系列政策和監(jiān)控措施，但世界范圍內(nèi)涉及食品安全的惡性、突發(fā)事件時(shí)有發(fā)生，食品安全現(xiàn)狀仍然令人擔(dān)擾。我國(guó)目前食品檢測(cè)數(shù)量?jī)H占食品生產(chǎn)總量的1.5%，且大多數(shù)為出口食品，國(guó)內(nèi)消費(fèi)食品檢測(cè)比率極低。第5頁(yè)/共101頁(yè)1、國(guó)外動(dòng)物源食品安全事件

—1972年墨西哥抗氯霉素傷寒桿菌1400人死亡

—上世紀(jì)70年代意大利波多黎各玉米赤霉醇污染牛奶上千兒童性早熟

—1995年日本O157:H7

涉及44個(gè)都府縣上萬(wàn)人中毒死亡11人

—1996年英國(guó)瘋牛病損失300億美元

—1999年比利時(shí)二惡英1000萬(wàn)只雞被屠宰損失3.55億歐元

—1999年美國(guó)法國(guó)李斯特桿菌20人死

—2000年日本大阪牛奶金黃色葡萄球菌14500人腹瀉等80人住院強(qiáng)制召回

第6頁(yè)/共101頁(yè)—2001年英國(guó)口蹄疫迅速入侵歐洲大陸和南美洲—2003年歐洲甲孕酮污染豬飼料—2005年英國(guó)蘇丹紅事件—2006年美國(guó)毒菠菜事件大腸桿菌污染造成26個(gè)州200余人感染，其中3人死—2008年日本水銀大米水銀污染田種植水稻出售—2009年美國(guó)花生醬事件花生醬和花生糊被沙門(mén)氏菌污染，造成636人感染，至少9人死亡?！?009年加拿大李斯特桿菌事件1人死第7頁(yè)/共101頁(yè)2、國(guó)內(nèi)動(dòng)物源食品安全事件—1987年上海毛蚶甲肝30萬(wàn)市民感染—1997年香港禽流感事件—1998江西食用裝過(guò)有機(jī)錫油桶中的豬油200多人中毒3人死亡—1999年8月至2000年1月化學(xué)物或微生物污染出口到美國(guó)的634批食品遭銷(xiāo)毀—農(nóng)畜產(chǎn)品農(nóng)藥殘留超標(biāo)2001年24個(gè)?。ㄊ校?、自治區(qū)調(diào)查食品中農(nóng)藥殘留超標(biāo)率高達(dá)18.5%—2001年蘇皖等省腸出血性大腸桿菌O157:H7污染食物引起2萬(wàn)余人中毒177人死亡第8頁(yè)/共101頁(yè)—2002年廣西柳州市78人食用有機(jī)磷農(nóng)藥超標(biāo)菜花中毒事件—上世紀(jì)90年代畜產(chǎn)品和水產(chǎn)品出口歐盟、日本等屢屢受阻—2002年SARS食用野生動(dòng)物（動(dòng)物產(chǎn)品）—“瘦肉精”殘留事件常年發(fā)生上萬(wàn)人中毒—2003年廣西等地豬肉氯霉素殘留事件—2003年山東禽肉查出含呋嗎唑酮和呋喃唑酮?dú)埩舫隹谌鸬涞脑夥鈿ⅰ?005年以來(lái)禽流感—2005年出口香港水產(chǎn)孔雀石綠第9頁(yè)/共101頁(yè)—2006年上海多寶魚(yú)事件和河北紅心鴨蛋事件—2007年山東多寶魚(yú)事件—2008年出口日本禽產(chǎn)品硝基呋喃代謝物殘留事件—2008年三鹿奶粉事件—2009年2月浙江多省63名嬰兒多美滋嬰兒配方奶粉腎結(jié)石—2009年4月浙江晨園乳業(yè)皮革水解蛋白—2009年12月上海熊貓乳品有限公司因三聚氰胺超標(biāo)被查處—2010年1月貴州發(fā)現(xiàn)山東淄博綠賽爾乳業(yè)有限公司、遼寧省鐵嶺五洲食品有限公司和河北唐山樂(lè)亭縣凱達(dá)冷凍廠生產(chǎn)的奶制品含有過(guò)量的三聚氰胺第10頁(yè)/共101頁(yè)從1997年至2007年，中國(guó)農(nóng)產(chǎn)品外貿(mào)因食品安全綠色（技術(shù)）壁壘而受阻的產(chǎn)品總值超過(guò)2000億美元；1997年香港禽流感，內(nèi)地?fù)p失2億多元，香港損失5000多萬(wàn)元；2002年出口歐盟水產(chǎn)品因氯霉素殘留事件遭全面禁運(yùn)造成損失6億多美元；2004年山東出口禽肉因磺胺二甲嘧啶殘留超標(biāo)造成損失1.3億元；2007年山東多寶魚(yú)事件損失40億元。2008年三聚氰胺損失……?第11頁(yè)/共101頁(yè)

細(xì)菌（如沙門(mén)氏菌、彎曲菌、李氏桿菌等）病毒（如禽流感等）寄生蟲(chóng)（如旋毛蟲(chóng)等）

化學(xué)污染

獸藥殘留（包括允許使用和禁用品種）農(nóng)藥殘留（有機(jī)磷、有機(jī)氯等）環(huán)境污染物（如多氯聯(lián)苯等）重金屬（如鉛、鎘等）霉菌毒素（如玉米赤霉醇等）非法添加物（如三聚氰胺、皮革水解蛋白等）包裝材料

生物污染

在養(yǎng)殖源頭（如飼料、飼養(yǎng)環(huán)境）、飼養(yǎng)過(guò)程及產(chǎn)品運(yùn)輸、加工過(guò)程中出現(xiàn)：3、產(chǎn)生動(dòng)物源食品安全問(wèn)題的主要原因第12頁(yè)/共101頁(yè)豬及其產(chǎn)品殘留主要品種β-興奮劑類(lèi)，如克侖特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺等鎮(zhèn)靜藥物類(lèi)氯霉素喹諾酮類(lèi)，如恩諾沙星、環(huán)丙沙星等磺胺類(lèi)，如磺胺二甲嘧啶等四環(huán)素類(lèi)，如土霉素、金霉素等……第13頁(yè)/共101頁(yè)雞及其產(chǎn)品殘留主要品種硝基呋喃類(lèi)，如呋喃唑酮、呋喃它酮等氯霉素喹諾酮類(lèi)，如恩諾沙星、環(huán)丙沙星等磺胺類(lèi)，如磺胺二甲嘧啶等四環(huán)素類(lèi)，如土霉素、金霉素等激素類(lèi)?……第14頁(yè)/共101頁(yè)肉牛及其產(chǎn)品殘留主要品種β-興奮劑類(lèi)，如克侖特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺等玉米赤霉醇類(lèi)喹諾酮類(lèi)，如恩諾沙星、環(huán)丙沙星等……第15頁(yè)/共101頁(yè)奶牛及奶制品殘留主要品種三聚氰胺、β-內(nèi)酰胺酶霉菌毒素β-內(nèi)酰胺類(lèi)（青霉素類(lèi)和頭孢類(lèi)），如青霉素、阿莫西林、氨芐西林、氯唑西林、頭孢喹肟、頭孢噻呋等β-興奮劑類(lèi)，如克侖特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺等喹諾酮類(lèi)，如恩諾沙星、環(huán)丙沙星等氨基糖苷類(lèi)，如鏈霉素、慶大霉素等磺胺類(lèi)，如磺胺二甲嘧啶等四環(huán)素類(lèi)，如四環(huán)素、土霉素、金霉素等氯霉素激素類(lèi)?……第16頁(yè)/共101頁(yè)4、殘留危害對(duì)人類(lèi)健康的直接危害中毒、過(guò)敏、激素樣作用、腸道菌群紊亂等對(duì)人類(lèi)健康的間接危害動(dòng)物源耐藥病原菌沿食物鏈的傳遞、擴(kuò)散對(duì)動(dòng)物疾病防治的影響動(dòng)物病原菌耐藥性上升對(duì)環(huán)境的影響土壤中的蠕蟲(chóng)、微生物；水環(huán)境中的藻類(lèi)、微生物第17頁(yè)/共101頁(yè)三、食品安全監(jiān)控相關(guān)法律法規(guī)《中華人民共和國(guó)動(dòng)物及動(dòng)物源食品中殘留物質(zhì)監(jiān)控計(jì)劃》《官方取樣程序》《獸藥管理?xiàng)l例》《飼料和飼料添加劑管理?xiàng)l例》《動(dòng)物源食品中獸藥最高殘留限量》《飼料藥物添加劑使用規(guī)范》《食品動(dòng)物中禁止使用的化合物清單》

中國(guó)從1999年開(kāi)始?xì)埩舯O(jiān)控工作，先后發(fā)布以下法律法規(guī)：《禁止在飼料和動(dòng)物飲用水中使用的藥物品種目錄》《國(guó)家獸藥殘留基準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室藥物殘留檢測(cè)范圍》《獸藥停藥期規(guī)定》《中華人民共和國(guó)獸藥典》《中華人民共和國(guó)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全法》《中華人民共和國(guó)食品安全法》第18頁(yè)/共101頁(yè)農(nóng)業(yè)部235號(hào)公告中頒布了109種獸藥的限量標(biāo)準(zhǔn)，涉及馬、牛、羊、豬、禽、蜜蜂、魚(yú)、蝦等動(dòng)物。樣品有組織（肌肉、肝臟、腎臟、脂肪等）、牛奶、蜂蜜等。農(nóng)業(yè)部193號(hào)公告頒布了21種食品動(dòng)物禁用的獸藥及其它化合物清單。第19頁(yè)/共101頁(yè)藥物名稱(chēng)中國(guó)ppm美國(guó)ppm日本ppm歐盟ppm澳大利亞ppm新西蘭ppm食品法典委員會(huì)ppm加拿大ppm氰甲頭孢菌素///0.125////頭孢氨芐0.1/0.10.1////頭孢吡啉//0.030.06////頭孢呋肟////0.1///頭孢呱酮//0.050.05////頭孢喹啉0.02//0.02/0.03//頭孢喹咪//0.02/////頭孢洛啉////0.02///牛奶及奶制品中獸藥殘留限量第20頁(yè)/共101頁(yè)藥物名稱(chēng)中國(guó)ppm美國(guó)ppm日本ppm歐盟ppm澳大利亞ppm新西蘭ppm食品法典委員會(huì)ppm加拿大ppm頭孢洛寧//0.010.02////頭孢匹林/0.02//0.010.01/0.02頭孢噻呋0.10.1/0.10.10.10.10.1頭孢唑啉///0.05////雙氫鏈霉素0.2//0.20.2///雙氫鏈霉素/鏈霉素//0.2//0.20.2/卡那霉素//0.40.1////慶大霉素0.2/0.20.1//0.2/新霉素0.50.150.5/0.50.51.5/鏈霉素0.2//0.2////第21頁(yè)/共101頁(yè)藥物名稱(chēng)中國(guó)ppm美國(guó)ppm日本ppm歐盟ppm澳大利亞ppm新西蘭ppm食品法典委員會(huì)ppm加拿大ppm達(dá)氟沙星0.03/0.050.03////恩諾沙星0.1/0.050.1////氟甲喹//0.1/////麻保沙星//0.0750.075/0.075//阿莫西林//0.008/////阿撲西林//0.05/////氨芐青霉素0.010.010.020.0040.01///苯唑青霉素0.03/0.030.03////芐青霉素0.004/0.0040.004//0.004/第22頁(yè)/共101頁(yè)藥物名稱(chēng)中國(guó)ppm美國(guó)ppm日本ppm歐盟ppm澳大利亞ppm新西蘭ppm食品法典委員會(huì)ppm加拿大ppm鄰氯青霉素0.030.010.020.030.01///美西林//0.05/////奈夫西林//0.005/////普魯卡因青霉素0.004///0.002///青霉素////0.0015//0.01I.U./ml雙氯青霉素//0.010.3////四環(huán)素0.1///0.10.1//阿維菌素////0.02///伊維菌素0.01/0.01/0.050.010.01/莫能菌素//0.01/0.01///第23頁(yè)/共101頁(yè)藥物名稱(chēng)中國(guó)ppm美國(guó)ppm日本ppm歐盟ppm澳大利亞ppm新西蘭ppm食品法典委員會(huì)ppm加拿大ppm磺胺類(lèi)0.1/0.010.1////磺胺吡啶//0.01/////磺胺二甲嘧啶0.025/0.025///0.0250.01磺胺胍//0.01/////磺胺間二甲氧嘧啶/0.010.02////0.01磺胺喹噁啉//0.01/////磺胺嘧啶//0.07/0.1///磺胺噻唑//0.09/////磺胺溴甲嘧啶鈉//0.01/////磺胺乙氧噠嗪/不得檢出//////磺胺乙氧嗪//0.01/////乙?；前?/0.01/////周效磺胺//0.06/0.1///第24頁(yè)/共101頁(yè)農(nóng)業(yè)部193號(hào)《食品動(dòng)物禁用的獸藥及其它化合物清單》序號(hào)獸藥及其它化合物名稱(chēng)禁止用途禁用動(dòng)物1β-興奮劑類(lèi)：克侖特羅、沙丁胺醇、西馬特羅及其鹽、酯及制劑所有用途所有食品動(dòng)物2性激素類(lèi)：己烯雌酚及其鹽、酯及制劑所有用途所有食品動(dòng)物3具有雌激素樣作用的物質(zhì)：玉米赤霉醇、去甲雄三烯醇酮、醋酸甲孕酮及制劑所有用途所有食品動(dòng)物4氯霉素、及其鹽、酯（包括：琥珀氯霉素）及其制劑所有用途所有食品動(dòng)物5氨苯砜及制劑所有用途所有食品動(dòng)物6硝基呋喃類(lèi)：呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃苯烯酸鈉及制劑所有用途所有食品動(dòng)物7硝基化合物：硝基酚鈉、硝呋烯腙及制劑所有用途所有食品動(dòng)物8催眠、鎮(zhèn)靜類(lèi)：安眠酮及制劑所有用途所有食品動(dòng)物9林丹（丙體六六六）殺蟲(chóng)劑所有食品動(dòng)物10毒殺芬（氯化烯）殺蟲(chóng)劑、清塘劑所有食品動(dòng)物第25頁(yè)/共101頁(yè)序號(hào)獸藥及其它化合物名稱(chēng)禁止用途禁用動(dòng)物11呋喃丹（克百威）殺蟲(chóng)劑所有食品動(dòng)物12殺蟲(chóng)脒（克死螨）殺蟲(chóng)劑所有食品動(dòng)物13雙甲脒殺蟲(chóng)劑水生食品動(dòng)物14酒石酸銻鉀殺蟲(chóng)劑所有食品動(dòng)物15錐蟲(chóng)胂胺殺蟲(chóng)劑所有食品動(dòng)物16孔雀石綠抗菌劑、殺蟲(chóng)劑所有食品動(dòng)物17五氯酚酸鈉殺螺劑所有食品動(dòng)物18各種汞制劑包括：氯化亞汞（甘汞）、硝酸亞汞、醋酸汞、吡啶基醋酸汞殺蟲(chóng)劑所有食品動(dòng)物19性激素類(lèi)：甲基睪丸酮、丙酸睪酮、苯丙酸諾龍、苯甲酸雌二醇及其鹽、酯及制劑促生長(zhǎng)所有食品動(dòng)物20催眠、鎮(zhèn)靜類(lèi)：氯丙嗪、地西泮、及其鹽、酯及制劑促生長(zhǎng)所有食品動(dòng)物21硝基咪唑類(lèi)：甲硝唑、地美硝唑及其鹽、酯及制劑促生長(zhǎng)所有食品動(dòng)物第26頁(yè)/共101頁(yè)

已發(fā)布獸藥殘留檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)超過(guò)1000個(gè)，從2001年開(kāi)始實(shí)施獸藥殘留監(jiān)控計(jì)劃，各?。ㄊ校┮蚕鄳?yīng)制定并實(shí)施地方殘留監(jiān)控計(jì)劃。以2009年度農(nóng)業(yè)部動(dòng)物性產(chǎn)品中獸藥殘留監(jiān)控計(jì)劃為例，抽檢動(dòng)物包括牛、豬、羊、雞、水產(chǎn)和蜂，抽檢產(chǎn)品有牛奶、肉、肝、蜂蜜等，其他還有尿樣。第27頁(yè)/共101頁(yè)

已發(fā)布獸藥殘留檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)超過(guò)1000個(gè)，從2001年開(kāi)始實(shí)施獸藥殘留監(jiān)控計(jì)劃，各省（市）也相應(yīng)制定并實(shí)施地方殘留監(jiān)控計(jì)劃。以2009年度農(nóng)業(yè)部動(dòng)物性產(chǎn)品中獸藥殘留監(jiān)控計(jì)劃為例，抽檢動(dòng)物包括牛、豬、羊、雞、水產(chǎn)和蜂，抽檢產(chǎn)品有牛奶、肉、肝、蜂蜜等，其他還有尿樣。第28頁(yè)/共101頁(yè)1、雞組織中獸藥殘留監(jiān)控計(jì)劃化合物動(dòng)物/組織樣品來(lái)源檢樣數(shù)氟喹諾酮類(lèi)雞/蛋遼寧等8個(gè)省250雞/肝225磺胺類(lèi)雞/肝廣西等10個(gè)省355雞/肉387四環(huán)素類(lèi)雞/肉安徽等5個(gè)省350泰樂(lè)菌素雞/肉河北等3個(gè)省200氯羥吡啶雞/肉江蘇等2個(gè)省200氯霉素雞/肝北京等10個(gè)省750雞/肉山東等7個(gè)省500地美硝唑/甲硝唑雞/肝遼寧等6個(gè)省430硝基呋喃類(lèi)代謝物雞/肉上海等9個(gè)省550小計(jì)4197第29頁(yè)/共101頁(yè)2、牛奶中獸藥殘留監(jiān)控計(jì)劃化合物動(dòng)物/組織樣品來(lái)源檢樣數(shù)氨基糖苷類(lèi)牛/牛奶上海等5個(gè)省250青霉素類(lèi)牛/牛奶內(nèi)蒙古等9個(gè)省500磺胺類(lèi)牛/牛奶北京等5個(gè)省280四環(huán)素類(lèi)牛/牛奶北京50鏈霉素牛/牛奶河北等5個(gè)省300氯霉素牛/牛奶黑龍江等3個(gè)省155小計(jì)1535第30頁(yè)/共101頁(yè)3、羊組織中獸藥殘留監(jiān)控計(jì)劃化合物動(dòng)物/組織樣品來(lái)源檢樣數(shù)磺胺類(lèi)羊/肉新疆200氯霉素羊/肉內(nèi)蒙古50小計(jì)250第31頁(yè)/共101頁(yè)4、豬組織中獸藥殘留監(jiān)控計(jì)劃化合物動(dòng)物/組織樣品來(lái)源檢樣數(shù)磺胺類(lèi)豬/肉四川等13個(gè)省1062四環(huán)素類(lèi)豬/肉甘肅等4個(gè)省200氟喹諾酮類(lèi)豬/肉廣東等6個(gè)省350喹乙醇?xì)埩魳?biāo)示物豬/肉吉林等5個(gè)省350克倫特羅豬/肝北京等6個(gè)省350豬/尿湖南等7個(gè)省550卡巴氧殘留標(biāo)示物豬/肝黑龍江等5個(gè)省500硝基呋喃類(lèi)代謝物豬/肉浙江等5個(gè)省240地美硝唑/甲硝唑豬/肉重慶等6個(gè)省500小計(jì)4102第32頁(yè)/共101頁(yè)5、蜂蜜中獸藥殘留監(jiān)控計(jì)劃化合物動(dòng)物/組織樣品來(lái)源檢樣數(shù)四環(huán)素類(lèi)蜂/蜂蜜浙江等55氟喹諾酮類(lèi)蜂/蜂蜜北京等35磺胺類(lèi)蜂/蜂蜜四川等40氯霉素蜂/蜂蜜遼寧等80硝基咪唑類(lèi)蜂/蜂蜜湖北等40小計(jì)250第33頁(yè)/共101頁(yè)6、水產(chǎn)品中獸藥殘留監(jiān)控計(jì)劃化合物動(dòng)物/組織樣品來(lái)源檢樣數(shù)氯霉素斑點(diǎn)叉尾蛔/肉江西等129草魚(yú)/肉416大黃魚(yú)/肉42淡水小龍蝦/肉88對(duì)蝦/肉268鯽魚(yú)/肉304鯉魚(yú)/肉360其他322小計(jì)1929第34頁(yè)/共101頁(yè)化合物動(dòng)物/組織樣品來(lái)源檢樣數(shù)孔雀石綠斑點(diǎn)叉尾蛔/肉江蘇等179草魚(yú)/肉416鯽魚(yú)/肉264鯉魚(yú)/肉400甲魚(yú)/肉96羅非魚(yú)/肉175鰻鱺/肉114其他510小計(jì)2154第35頁(yè)/共101頁(yè)化合物動(dòng)物/組織樣品來(lái)源檢樣數(shù)己烯雌酚對(duì)蝦/肉江蘇等422淡水小龍蝦/肉44硝基呋喃代謝物斑點(diǎn)叉尾蛔/肉湖北等71草魚(yú)/肉133對(duì)蝦/肉86河蟹/肉51鯽魚(yú)/肉85甲魚(yú)/肉31鯉魚(yú)/肉103羅非魚(yú)/肉66其他178第36頁(yè)/共101頁(yè)化合物動(dòng)物/組織樣品來(lái)源檢樣數(shù)喹乙醇草魚(yú)/肉北京等416五氯酚納河蟹/肉遼寧等240甲基睪酮羅非魚(yú)/肉河北等175鰻鱺/肉114第37頁(yè)/共101頁(yè)化學(xué)物及代謝物分離純化監(jiān)控獸藥等化學(xué)物樣品檢測(cè)方法快速檢測(cè)方法儀器確證方法固相萃取技術(shù)基質(zhì)固相分散技術(shù)免疫親和色譜技術(shù)分子印跡技術(shù)超臨界萃取技術(shù)四、有害化合物殘留檢測(cè)技術(shù)第38頁(yè)/共101頁(yè)微生物抑制測(cè)定法酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法量子點(diǎn)標(biāo)記熒光檢測(cè)法熒光偏振免疫檢測(cè)法化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)法放射免疫測(cè)定法金標(biāo)試紙條生物傳感器生物芯片1、快速檢測(cè)方法第39頁(yè)/共101頁(yè)熒光偏振免疫分析技術(shù)熒光偏振免疫分析（Fluorescencepolarizationimmunoassay，F(xiàn)PIA）是競(jìng)爭(zhēng)性的均相免疫分析方法，就是檢測(cè)熒光標(biāo)記抗原（tracer）在結(jié)合特異性的抗體前后，熒光偏振值（FP）值的變化，不需要分離結(jié)合的和未結(jié)合的抗體，經(jīng)過(guò)幾分鐘甚至是幾秒鐘的溫育便可直接測(cè)量，很快得到被測(cè)藥物的濃度，實(shí)驗(yàn)的時(shí)間僅僅決定于加樣的時(shí)間第40頁(yè)/共101頁(yè)FPIA

是競(jìng)爭(zhēng)性的均相免疫分析抗原濃度低

FP值高AgAgAgAbAbAgAgAgAbAbAgAgPAgFAgFAgFAgF抗原濃度高

FP值小AgAbAbAgAbAgFAgFAbAgFAgFP第41頁(yè)/共101頁(yè)熒光素與磺胺二甲基嘧啶偶聯(lián)SM2-FITCTLC分離純化第42頁(yè)/共101頁(yè)FFFFFYYYYYYYFFYFYFFY測(cè)定熒光偏振值第43頁(yè)/共101頁(yè)

藥物最低檢測(cè)限ng/mL半數(shù)抑制量ng/mL回收率（%）磺胺二甲基嘧啶116雞肉：78-89磺胺氯吡嗪0.2529牛奶：60-120磺胺甲氧吡嗪0.711.5牛奶：68-145馬杜霉素2160雞肉：92-132雞脂肪：92-121雞蛋：125-82鹽霉素0.0833.2-喹諾酮類(lèi)（12種）0.1-110-20牛奶：70-110幾種獸藥檢測(cè)分析結(jié)果第44頁(yè)/共101頁(yè)FluorescencePolarizationImmunoassayforSalinomycinBasedonMonoclonalAntibody，ScienceChina:Chemistry，2010，53，553-555Determinationofveterinarydrugmaduramicininfoodbyfluorescencepolarizationimmunoassay,InternationalJournalofFoodScienceandTechnology.2008，43,114-122.Simultaneousdeterminationofsulphamerazine,sulphamethazineandsulphadiazineinhoneyandchickenmusclebyfluorescencepolarisationimmunoassaybasedonmonoclonalantibody.2008,

FoodAdditivesandContaminants,25(5):574-582.

MonoclonalAntibody-BasedFluorescencePolarizationimmunoassayfortheveterinarydrugSulfamethoxypyridazineandSulfachloropyridazineinMilk,JournalofAgricultureandFoodChemistry,2007，55(17):6871-6878.Fluorescencepolarisationimmunoassaybasedonamonoclonalantibodyforthedetectionofsulfamethazineinchickenmuscle,InternationalJournalofFoodScienceandTechnology，2007，42,36-44熒光偏振免疫分析檢測(cè)磺胺二甲基嘧啶殘留研究,分析化學(xué).2007，35(6):819–824發(fā)表文章第45頁(yè)/共101頁(yè)時(shí)間分辯免疫分析技術(shù)

時(shí)間分辨熒光免疫分析（TrFIA）是利用鑭系絡(luò)合物作為標(biāo)記物的免疫分析技術(shù)，其絡(luò)合物具有熒光壽命長(zhǎng)、激發(fā)光譜帶較寬、發(fā)射光譜帶甚窄和Stokes位移大等特點(diǎn)，可以消除背景熒光的干擾，有效提高檢測(cè)方法的靈敏度第46頁(yè)/共101頁(yè)雙抗夾心TR-FIA反應(yīng)原理示意圖氯霉素萊克多巴胺第47頁(yè)/共101頁(yè)發(fā)表文章Amonoclonalantibody-basedtime-resolvedfluoroimmunoassayforchloramphenicolinshrimpandchickenmuscle,AnalyticaChimicaActa,2006,

575(2):262-6Time-resolvedFluoroimmunoassayforRactopamineinSwineTissue，JournalofAgricultureFoodandChemistry.2007,387,1561-1564第48頁(yè)/共101頁(yè)化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)

化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA），一般分為兩種模式。第一種是以發(fā)光劑作為酶免疫測(cè)定的底物，通過(guò)發(fā)光反應(yīng)增強(qiáng)測(cè)定的敏感性；第二種是以發(fā)光劑作為抗體或抗原的標(biāo)記物，直接通過(guò)發(fā)光反應(yīng)檢測(cè)標(biāo)本中抗原或抗體的含量第49頁(yè)/共101頁(yè)Cl-ELISA與傳統(tǒng)ELISA靈敏度比較Cl-ELISAELISADevelopmentofaChemiluminescentELISAforDeterminingChloramphenicolinChickenMuscle，JournalofAgricultureFoodandChemistry,2006,54(16),5718–5722化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)氯霉素第50頁(yè)/共101頁(yè)

量子點(diǎn)標(biāo)記免疫分析技術(shù)

量子點(diǎn)(quantumdots，QDs)又稱(chēng)半導(dǎo)體納米微晶體，是一種由II-VI族或Ⅲ-V族元素組成的，直徑約為1-100nm，能夠接受激發(fā)光產(chǎn)生熒光的半導(dǎo)體納米顆粒，量子點(diǎn)表面結(jié)構(gòu)經(jīng)過(guò)修飾，借助于其外端的羧基，能與生物分子的氨基相結(jié)合，如抗體等偶聯(lián)第51頁(yè)/共101頁(yè)發(fā)表文章1.Simultaneousdetectionofmultiplechemicalresiduesinmilkusingbroad-specificityantibodiesinahybridimmunosorbentassay，Biosens.Bioelectron，2010，

aheadofprint2.Characterizationandapplicationofquantumdotnanocrystalmonoclonalantibodyconjugatesforthedeterminationofsulfamethazineinmilkbyfluoroimmunoassay.2007.AnalBioanalChem.389,2243-2250.3.Theapplicationofquantumdotantibodyconjugatesfordetectionofsulfamethaz-ineresidueinchickenmuscletissue.2006.JAgrFoodChem.54(17),6139-6142.4.量子點(diǎn)的應(yīng)用---種新型的熒光定量檢測(cè)技術(shù).中國(guó)獸醫(yī)雜志,2007,43(6):69~70.第52頁(yè)/共101頁(yè)2、儀器分析方法氣相色譜法（GC）高效液相色譜法（HPLC）原子熒光法(AF)原子吸收法(AA)氣譜-質(zhì)譜法（GC-MS）氣譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（GC-MS/MS）液譜-質(zhì)譜法（LC-MS）液譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）第53頁(yè)/共101頁(yè)1pg/g1ng/g1g/g1mg/g紫外/可見(jiàn)分光光度法放射免疫測(cè)定法/酶免疫測(cè)定法色質(zhì)聯(lián)用分析放射受體分析氣相色譜(ECD/NPD)氣相色譜(FID)高效液相色譜(FLD/UVD)極譜法熒光分光光度法微生物測(cè)定法比色法各種測(cè)定方法的靈敏度范圍第54頁(yè)/共101頁(yè)有害化合物殘留檢測(cè)：先用快速檢測(cè)產(chǎn)品進(jìn)行篩查，可疑陽(yáng)性樣品再用儀器分析方法尤其是色質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)方法加以確證。美國(guó)、歐盟、日本等均采用此策略，抽檢數(shù)量超過(guò)總樣品數(shù)的10%！第55頁(yè)/共101頁(yè)1、快速檢測(cè)產(chǎn)品種類(lèi)試劑盒試紙條生物傳感器免疫芯片快速檢測(cè)儀檢測(cè)箱目前主要的快速檢測(cè)產(chǎn)品包括:五、快速檢測(cè)產(chǎn)品研制第56頁(yè)/共101頁(yè)2、小分子抗體制備技術(shù)目前抗體種類(lèi)主要是多抗和單抗替代抗體：基因重組抗體、納米抗體、核酸適配體、抗轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、受體、分子印跡聚合物等均有相關(guān)研究核酸適配體抗轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白第57頁(yè)/共101頁(yè)第58頁(yè)/共101頁(yè)

獸藥分子量大都小于1000，藥物本身沒(méi)有免疫原性，必須經(jīng)過(guò)結(jié)構(gòu)改造后與大分子載體蛋白結(jié)合才能產(chǎn)生有效抗體半抗原第59頁(yè)/共101頁(yè)信息含量豐富的半抗原合理設(shè)計(jì)小分子結(jié)構(gòu)優(yōu)化計(jì)算化學(xué)性質(zhì)參數(shù)（物化、電量、空間等信息）最佳半抗原免疫動(dòng)物抗體合適抗原表位間隔臂最佳半抗原統(tǒng)計(jì)分析第60頁(yè)/共101頁(yè)應(yīng)用量子力學(xué)AM1，得到了磺胺類(lèi)和玉米赤霉醇類(lèi)藥物的物化、電性、疏水性等性質(zhì)，從分子水平比較各藥物與半抗原的異同（化學(xué)學(xué)報(bào)，2008，66，2613-2619）。為半抗原合理設(shè)計(jì)提供了方法指導(dǎo)SM2化學(xué)結(jié)構(gòu)SM2最低能量構(gòu)象SM2最高占據(jù)軌道（HOMO）和最低未占據(jù)軌道（LUMO）第61頁(yè)/共101頁(yè)玉米赤霉醇類(lèi)藥物的三維構(gòu)象和電荷分布第62頁(yè)/共101頁(yè)Table2.Physicalandchemicalindexesofα-zearalanolandanalogsHaptensVSRLogPPμHMWD18-14D18-16α-zearalanol937.37601.8590.381.1634.312.949952.51322.4011.189.37β-zearalanol925.51597.5790.381.1634.310.992254.12322.409.567.99α-zearalenol903.64583.5491.500.9034.123.203352.68320.397.996.47β-zearalenol916.33644.5591.500.9034.124.20850.39320.399.357.21zearalanone909.49593.3189.351.3733.763.4748113.07320.3910.059.33zearalenone905.71603.7490.471.1033.575.6308111.13318.378.106.44Table3.Quantumchemicalindexesofα-zearalanolandanalogsHaptensQO1QO3QO14QO16QO18QC11QC12QC17EHOMOELUMO△Eα-zearalanol-0.4326-0.4929-0.6257-0.6153-0.6187-0.2388-0.3347-0.4067-12.297-1.70610.591β-zearalanol-0.4346-0.4910-0.6262-0.6155-0.6129-0.2374-0.3352-0.4071-11.988-0.88711.101α-zearalenol-0.4753-0.4830-0.6256-0.6132-0.6588-0.0885-0.1590-0.3931-12.252-2.3889.864β-zearalenol-0.4275-0.4938-0.6267-0.6147-0.6223-0.0709-0.1646-0.4037-12.190-2.14810.042zearalanone-0.4088-0.5095-0.6254-0.6117-0.4218-0.2544-0.3338-0.4040-11.722-1.8089.914zearalenone-0.4201-0.5000-0.6295-0.6155-0.4277-0.0919-0.1465-0.4120-11.882-2.5399.343玉米赤霉醇類(lèi)藥物的結(jié)構(gòu)信息Table4.PearsonCorrelationanalysisformoleculardescriptorsandantibodyrecognitionabilityVHLogPRMWSμ△EQO1QO3QO14QO16QO18QC11QC12QC17D18-14D18-16PersonCorrelation-0.002-0.35-0.540.54-0.100.880.25-0.070.120.07-0.06-0.12-0.280.510.400.05-.001-0.22Sig.(2-tailed)0.9970.490.260.260.840.010.630.880.820.890.900.810.580.290.420.910.980.67ZHWang，JZShen.2009.JournalofMolecularRecognition,submitted.疏水性體積偶極距分子距離電量相關(guān)系數(shù)獲得的分子結(jié)構(gòu)信息，已用于半抗原的合理設(shè)計(jì)第63頁(yè)/共101頁(yè)單克隆抗體制備過(guò)程第64頁(yè)/共101頁(yè)脾細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞基因重組抗體制備第65頁(yè)/共101頁(yè)噬菌體展示抗體庫(kù)淘選策略scFv第66頁(yè)/共101頁(yè)雙特異性單鏈抗體制備策略ScFv1LinkerScFv2BispesificscFvBroad-specificityantibodypCANTAB5E-bispesificscFv磺胺類(lèi)喹諾酮類(lèi)識(shí)別磺胺類(lèi)和喹諾酮類(lèi)第67頁(yè)/共101頁(yè)抗體評(píng)價(jià)及指導(dǎo)抗體定向改造CoMFA初步測(cè)定抗體特性3D-QSAR重組抗體Docking獲取獸藥-抗體互作主要力場(chǎng)預(yù)測(cè)抗體三維結(jié)構(gòu)互作模型重組抗體定向改造同源模擬獲取獸藥-抗體互作結(jié)構(gòu)信息推測(cè)獸藥-抗體間發(fā)生作用的氨基酸性質(zhì)推測(cè)獸藥-抗體間發(fā)生作用的氨基酸位點(diǎn)ELISA第68頁(yè)/共101頁(yè)受體抗體（Acceptor）UniSenesor公司研發(fā)了基于受體的可同時(shí)檢測(cè)13種青霉素和四環(huán)素兩類(lèi)藥物的試紙條產(chǎn)品中國(guó)農(nóng)大和北京維德維康公司合作研發(fā)可同時(shí)檢測(cè)15種青霉素和頭孢類(lèi)藥物的試紙條產(chǎn)品受體作為特異性識(shí)別的生物大分子，因其分離純化及體外構(gòu)建均較復(fù)雜，應(yīng)用于免疫分析的報(bào)道很少TwinSensorBT第69頁(yè)/共101頁(yè)放射性受體分析法1978年美國(guó)波士頓大學(xué)教授Charm發(fā)明受體分析法 CHARMI是專(zhuān)用于牛奶中β一內(nèi)酰胺抗生素殘留檢測(cè)方法，也是美國(guó)AOAC承認(rèn)的第一個(gè)快速測(cè)定法，這個(gè)方法非常快速和靈敏，一個(gè)奶牛樣品分析只需15分鐘時(shí)間目前，CHARM被多國(guó)政府的農(nóng)業(yè)部和衛(wèi)生部采用作為的標(biāo)準(zhǔn)方法如我國(guó):四環(huán)素類(lèi)（SN/T2309-2009），β-內(nèi)酰胺類(lèi)(GB/T21174-2007)，磺胺類(lèi)(GB/T21173-2007)

細(xì)胞膜上或細(xì)胞內(nèi)能特異識(shí)別生物活性分子并與之結(jié)合，進(jìn)而引起生物學(xué)效應(yīng)的特殊蛋白質(zhì)第70頁(yè)/共101頁(yè)微孔板檢測(cè)系統(tǒng)基于膜的檢測(cè)系統(tǒng)表面等離子共振傳感器側(cè)流層析技術(shù)免疫滲濾技術(shù)熒光分析系統(tǒng)CHARM原理第71頁(yè)/共101頁(yè)受體分析法的優(yōu)勢(shì)：可以檢測(cè)同一類(lèi)抗生素難點(diǎn)：受體的制備檢測(cè)方法的應(yīng)用目的基因的調(diào)取目的蛋白活性鑒定目的蛋白的表達(dá)及純化表達(dá)載體的構(gòu)建基于受體的快速檢測(cè)方法建立檢測(cè)方法的優(yōu)化

青霉素等β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素通過(guò)與細(xì)菌膜蛋白結(jié)合，抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的生物合成，引起細(xì)菌細(xì)胞死亡從而發(fā)揮殺菌作用的。這種細(xì)菌蛋白被命名為青霉素結(jié)合蛋白(Penicillin-BindingProtein，PBP)2001年發(fā)現(xiàn)了肺炎鏈球菌野生R6株5個(gè)編碼明確的青霉素結(jié)合蛋白的基因，其中PBP2x對(duì)青霉素類(lèi)和頭孢類(lèi)抗生素都具有很高的敏感性第72頁(yè)/共101頁(yè)青霉素結(jié)合蛋白識(shí)別β-內(nèi)酰胺藥物列表第73頁(yè)/共101頁(yè)第74頁(yè)/共101頁(yè)基本原理目前常用的主要為ELISA試劑盒。在測(cè)定時(shí)，把受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)，結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量有一定的比例，加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺進(jìn)行定性或定量分析。

（1）試劑盒3、試劑盒、試紙條研制第75頁(yè)/共101頁(yè)1、加入待測(cè)物；2、加入抗體；3、加入酶標(biāo)二體；4、加入底物；5、加入終止液目前試劑盒最常用方法為間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法，其他還用直接法、夾心法等。第76頁(yè)/共101頁(yè)優(yōu)點(diǎn)

靈敏度高，特異性強(qiáng)，可進(jìn)行定性和定量測(cè)定檢測(cè)方便、快捷，一般1-2個(gè)小時(shí)就能出結(jié)果對(duì)操作者和實(shí)驗(yàn)室條件要求不高可以用于大量樣本的快速篩選第77頁(yè)/共101頁(yè)試劑盒組成

96孔酶標(biāo)版樣品稀釋液標(biāo)準(zhǔn)溶液底物溶液終止液酶標(biāo)二抗工作液濃縮洗滌液抗體工作液第78頁(yè)/共101頁(yè)試劑盒檢測(cè)需要的儀器恒溫?fù)u床離心機(jī)恒溫培養(yǎng)箱渦動(dòng)儀酶標(biāo)分析儀移液槍第79頁(yè)/共101頁(yè)試劑盒檢測(cè)所需試劑主要用于復(fù)雜樣品（如肌肉、肝臟等）的前處理。大多為常規(guī)有機(jī)或無(wú)機(jī)溶劑，1、甲醇2、乙腈3、乙酸乙酯4、磷酸鹽緩沖溶液5、……第80頁(yè)/共101頁(yè)YP1YP2YP3YP4YP5YP6YP7YP8YP1YP2YP3YP4YP5YP6YP7YP8YP9YP10YP11YP12YP13YP14YP15YP16YP9YP10YP11YP12YP13YP14YP15YP16YP17YP18YP19YP20YP21YP22YP23YP24YP17YP18YP19YP20YP21YP22YP23YP24YP25YP26YP27YP28YP29YP30YP31YP32YP25YP26YP27YP28YP29YP30YP31YP32YP33YP34YP35YP36YP37YP38YP39YP40YP33YP34YP35YP36YP37YP38YP39YP40BZ1BZ2BZ3BZ4BZ5BZ6陽(yáng)性陰性BZ1BZ2BZ3BZ4BZ5BZ6陽(yáng)性陰性ABCDEFGH123456789101112由低到高的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)陽(yáng)性添加樣品孔陰性添加樣品孔實(shí)測(cè)樣品區(qū)，最多可檢測(cè)40個(gè)樣品酶標(biāo)板實(shí)際檢測(cè)布局第81頁(yè)/共101頁(yè)試劑盒一般操作步驟1、向酶標(biāo)板微孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品溶液或樣本溶液，再加入一抗，用蓋板膜封板，37℃恒溫箱中孵育；2、倒出孔中液體，加入濃縮洗滌液，30s后倒出孔中液體，如此重復(fù)操作，用吸水紙拍干；3、加入酶標(biāo)二抗，37℃恒溫箱中孵育；4、倒出孔中液體，重復(fù)洗滌步驟；5、加入底物顯色液A液，底物顯色液B液，輕輕振蕩混勻，37℃恒溫箱避光顯色15min；6、加入終止液，輕輕振蕩混勻；7、用酶標(biāo)儀，測(cè)定每孔吸光度值。第82頁(yè)/共101頁(yè)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法：所獲得的每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。百分吸光度值（%）＝B/B0×100%B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值B0—0μg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值第83頁(yè)/共101頁(yè)以檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)濃度(μg/L)的自然對(duì)數(shù)值為X軸，百分吸光度值為Y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖。相對(duì)應(yīng)每一個(gè)樣品的濃度(μg/kg)可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上讀出。也可以用回歸方程法，計(jì)算出樣本溶液濃度。利用計(jì)算機(jī)專(zhuān)業(yè)軟件，更便于大量樣品的快速分析。0102030405060708090100103090270810待測(cè)物濃度（ppb）吸光度（%）1第84頁(yè)/共101頁(yè)試紙條結(jié)構(gòu)基本原理

采用競(jìng)爭(zhēng)法，樣品滴