可見(jiàn)紫外外分光光度法

關(guān)于可見(jiàn)紫外外分光光度法第一頁(yè)，共二十九頁(yè)，編輯于2023年，星期日

顏色的產(chǎn)生白光(太陽(yáng)光)：由各種單色光組成的復(fù)合光吸光光度法的基本原理第二頁(yè)，共二十九頁(yè)，編輯于2023年，星期日

有色物質(zhì)的不同顏色是由于吸收了不同波長(zhǎng)的光所致。溶液能選擇性地吸收某些波長(zhǎng)的光，而讓其他波長(zhǎng)的光透過(guò)，這時(shí)溶液呈現(xiàn)出透過(guò)光的顏色。透過(guò)光的顏色是溶液吸收光的互補(bǔ)色。有色溶液對(duì)各種波長(zhǎng)的光的吸收情況，常用光吸收曲線(xiàn)來(lái)描述。將不同波長(zhǎng)的單色光依次通過(guò)一定的有色溶液，分別測(cè)出對(duì)各種波長(zhǎng)的光的吸收程度（用字母A表示）。以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，吸光程度為縱坐標(biāo)作圖，所得的曲線(xiàn)稱(chēng)為吸收曲線(xiàn)或吸收光譜曲線(xiàn)。第三頁(yè)，共二十九頁(yè)，編輯于2023年，星期日能復(fù)合成白光的兩種顏色的光叫互補(bǔ)色光。物質(zhì)所顯示的顏色是吸收光的互補(bǔ)色。第四頁(yè)，共二十九頁(yè)，編輯于2023年，星期日第五頁(yè)，共二十九頁(yè)，編輯于2023年，星期日分光光度分析法是以物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收為基礎(chǔ)的分析方法。

根據(jù)物質(zhì)所吸收光的波長(zhǎng)范圍不同紫外分光光度法可見(jiàn)分光光度法紅外分光光度法第六頁(yè)，共二十九頁(yè)，編輯于2023年，星期日

幾乎所有的無(wú)機(jī)離子和許多有機(jī)化合物可以用分光光度法進(jìn)行測(cè)定。如土壤中的氮、磷以及植物灰、動(dòng)物體液中各種微量元素的測(cè)定。

通常，待測(cè)物質(zhì)的含量1～10－5％時(shí)，能夠用分光光度法準(zhǔn)確測(cè)定。所以它主要用于測(cè)定微量組分。第七頁(yè)，共二十九頁(yè)，編輯于2023年，星期日

光分析法：基于物質(zhì)發(fā)射的電磁輻射或電磁輻射能量與待測(cè)物質(zhì)相互作用后所產(chǎn)生的輻射信號(hào)與物質(zhì)組成及結(jié)構(gòu)關(guān)系所建立起來(lái)的分析方法吸光度,absorbance,是指光線(xiàn)通過(guò)溶液或某一物質(zhì)前的入射光強(qiáng)度與該光線(xiàn)通過(guò)溶液或物質(zhì)后的透射光強(qiáng)度比值的以10為底的對(duì)數(shù)（即lg(Iin/Iout)，影響它的因素有溶劑、濃度、溫度等等。簡(jiǎn)單的說(shuō)，吸光度就是表示物質(zhì)對(duì)光的吸收程度第八頁(yè)，共二十九頁(yè)，編輯于2023年，星期日（1）能源提供能量；（2）能量與被測(cè)物之間的相互作用；（3）產(chǎn)生信號(hào)。

基本特點(diǎn)：（1）一般光分析法均包含三個(gè)基本過(guò)程；（2）選擇性測(cè)量，不涉及混合物分離（不同于色譜分析）；（3）涉及大量光學(xué)元器件。三個(gè)基本過(guò)程第九頁(yè)，共二十九頁(yè)，編輯于2023年，星期日

溶液顏色與光吸收的關(guān)系

光波是一種電磁波。電磁波包括無(wú)線(xiàn)電波、微波、紅外光、可見(jiàn)光、紫外光、x射線(xiàn)等。如果按照其頻率或波長(zhǎng)的的大小排列，可見(jiàn)光只是電磁波中一個(gè)很小的波段。見(jiàn)表12－1第十頁(yè)，共二十九頁(yè)，編輯于2023年，星期日

在光譜分析中，依據(jù)物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收而建立起來(lái)的分析方法稱(chēng)為吸光光度法,主要有:

紅外吸收光譜：分子振動(dòng)光譜，吸收光波長(zhǎng)范圍2.51000m,主要用于有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)鑒定。

紫外吸收光譜：電子躍遷光譜，吸收光波長(zhǎng)范圍200400nm（近紫外區(qū)），可用于結(jié)構(gòu)鑒定和定量分析。

可見(jiàn)吸收光譜：電子躍遷光譜，吸收光波長(zhǎng)范圍400750nm，主要用于有色物質(zhì)的定量分析。

第十一頁(yè)，共二十九頁(yè)，編輯于2023年，星期日吸收曲線(xiàn)的討論

（1）同一種物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)光的吸光度不同。吸光度最大處對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)稱(chēng)為最大吸收波長(zhǎng)λmax

（2）不同濃度的同一種物質(zhì)，其吸收曲線(xiàn)形狀相似λmax不變。而對(duì)于不同物質(zhì)，它們的吸收曲線(xiàn)形狀和λmax則不同。

（3）吸收曲線(xiàn)可以提供物質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息，并作為物質(zhì)定性分析的依據(jù)之一。（4）不同濃度的同一種物質(zhì)，在某一定波長(zhǎng)下吸光度A有差異，在λmax處吸光度A的差異最大。此特性可作為物質(zhì)定量分析的依據(jù)。（5）在λmax處吸光度隨濃度變化的幅度最大，所以測(cè)定最靈敏。吸收曲線(xiàn)是定量分析中選擇入射光波長(zhǎng)的重要依據(jù)。第十二頁(yè)，共二十九頁(yè)，編輯于2023年，星期日KMnO4的顏色及吸收光譜第十三頁(yè)，共二十九頁(yè)，編輯于2023年，星期日葉綠素的結(jié)構(gòu)和吸收光譜第十四頁(yè)，共二十九頁(yè)，編輯于2023年，星期日第二節(jié)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)第十五頁(yè)，共二十九頁(yè)，編輯于2023年，星期日儀器

紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)第十六頁(yè)，共二十九頁(yè)，編輯于2023年，星期日一、基本組成

generalprocess光源單色器樣品室檢測(cè)器顯示1.光源

在整個(gè)紫外光區(qū)或可見(jiàn)光譜區(qū)可以發(fā)射連續(xù)光譜，具有足夠的輻射強(qiáng)度、較好的穩(wěn)定性、較長(zhǎng)的使用壽命。

可見(jiàn)光區(qū)：鎢燈作為光源，其輻射波長(zhǎng)范圍在320～2500nm。紫外區(qū)：氫、氘燈。發(fā)射185～400nm的連續(xù)光譜。第十七頁(yè)，共二十九頁(yè)，編輯于2023年，星期日

2.單色器

將光源發(fā)射的復(fù)合光分解成單色光并可從中選出一任波長(zhǎng)單色光的光學(xué)系統(tǒng)。①入射狹縫：光源的光由此進(jìn)入單色器；②準(zhǔn)光裝置：透鏡或返射鏡使入射光成為平行光束；③色散元件：將復(fù)合光分解成單色光；棱鏡或光柵；

④聚焦裝置：透鏡或凹面反射鏡，將分光后所得單色光聚焦至出射狹縫；⑤出射狹縫。第十八頁(yè)，共二十九頁(yè)，編輯于2023年，星期日3.樣品室

樣品室放置各種類(lèi)型的吸收池（比色皿）和相應(yīng)的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池兩種。在紫外區(qū)須采用石英池，可見(jiàn)區(qū)一般用玻璃池。4.檢測(cè)器利用光電效應(yīng)將透過(guò)吸收池的光信號(hào)變成可測(cè)的電信號(hào)，常用的有光電池、光電管或光電倍增管。5.結(jié)果顯示記錄系統(tǒng)檢流計(jì)、數(shù)字顯示、微機(jī)進(jìn)行儀器自動(dòng)控制和結(jié)果處理第十九頁(yè)，共二十九頁(yè)，編輯于2023年，星期日二、分光光度計(jì)的類(lèi)型

1.單光束

簡(jiǎn)單，價(jià)廉，適于在給定波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度或透光度，一般不能作全波段光譜掃描，要求光源和檢測(cè)器具有很高的穩(wěn)定性。2.雙光束

自動(dòng)記錄，快速全波段掃描?？上庠床环€(wěn)定、檢測(cè)器靈敏度變化等因素的影響，特別適合于結(jié)構(gòu)分析。儀器復(fù)雜，價(jià)格較高。第二十頁(yè)，共二十九頁(yè)，編輯于2023年，星期日3.雙波長(zhǎng)

將不同波長(zhǎng)的兩束單色光(λ1、λ2)快束交替通過(guò)同一吸收池而后到達(dá)檢測(cè)器。產(chǎn)生交流信號(hào)。無(wú)需參比池?！?1～2nm。兩波長(zhǎng)同時(shí)掃描即可獲得導(dǎo)數(shù)光譜。第二十一頁(yè)，共二十九頁(yè)，編輯于2023年，星期日第二十二頁(yè)，共二十九頁(yè)，編輯于2023年，星期日A原理第二十三頁(yè)，共二十九頁(yè)，編輯于2023年，星期日光柵和棱鏡分光原理第二十四頁(yè)，共二十九頁(yè)，編輯于2023年，星期日第二十五頁(yè)，共二十九頁(yè)，編輯于2023年，星期日雙光束光度計(jì)動(dòng)畫(huà)示意動(dòng)畫(huà)第二十六頁(yè)，共二十九頁(yè)，編輯于2023年，星期日雙波長(zhǎng)光度計(jì)光路示意圖第二十七頁(yè)，共二十九頁(yè)，編輯于2023年，星期日醫(yī)療器械產(chǎn)品對(duì)紫外吸光度的要求——GB8368-2005、GB8369-2005將浸提液通過(guò)孔徑為0.45μm的濾膜進(jìn)行過(guò)濾，以避免漫射光干擾。在制備后5h內(nèi)