急性白血病免疫分型

關(guān)于急性白血病免疫分型第一頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期一簡(jiǎn)介白血病免疫分型是利用單克隆抗體（McAb）對(duì)骨髓或外周血中的白血病細(xì)胞進(jìn)行免疫標(biāo)記，檢測(cè)其細(xì)胞膜及細(xì)胞漿抗原，分析其表型，以了解被測(cè)白血病細(xì)胞所屬細(xì)胞系列及其分化程度，從而診斷白血病的類(lèi)型。第二頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期一原理造血細(xì)胞分化抗原：造血細(xì)胞分化過(guò)程中由細(xì)胞核內(nèi)染色體上的基因編碼的鑲嵌蛋白,

存在于細(xì)胞表面和（或）細(xì)胞漿內(nèi)，隨著分化成熟過(guò)程不斷發(fā)生改變。第三頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期一原理造血細(xì)胞分化抗原出現(xiàn)、增多、減少或消失與造血細(xì)胞所屬系列和分化程度密切相關(guān)，因而可作為鑒別和區(qū)分造血細(xì)胞的標(biāo)記。第四頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期一原理急性白血病細(xì)胞來(lái)自造血干/祖細(xì)胞的惡性克隆性增生，既保持造血細(xì)胞的部分性質(zhì)，又有其獨(dú)特的生物學(xué)和免疫學(xué)特性：（1）急性白血病主要表現(xiàn)在骨髓或外周血中原始幼稚細(xì)胞顯著增多，正常細(xì)胞成分受抑制，因此免疫分型表現(xiàn)在帶有某種抗原標(biāo)志的細(xì)胞比例異常增多或減少，例如T-ALL時(shí)的CD7+細(xì)胞遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)正常人的30%，而CD13+/CD33+細(xì)胞的比例降低，并可能同時(shí)伴有CD34+、TdT+細(xì)胞的異常增多；第五頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期一（2）錯(cuò)位表達(dá)：即同一細(xì)胞出現(xiàn)異系列抗原混合表達(dá)，如AML細(xì)胞出現(xiàn)CD7、CD10抗原，ALL細(xì)胞出現(xiàn)CD33、CD14等；（3）抗原非同步化表達(dá)：如CD34與分化成熟較晚期的抗原不應(yīng)該同步表達(dá)，但白血病細(xì)胞有時(shí)會(huì)出現(xiàn)CD34/CD56、CD34/CD20等同時(shí)表達(dá)的異?，F(xiàn)象；（4）抗原丟失：如CD13、CD33是髓系最常見(jiàn)抗原，但少數(shù)AML卻不表達(dá)或僅表達(dá)其中一項(xiàng)。原理第六頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期一如何進(jìn)行免疫分型選擇良好的設(shè)門(mén)方法：FSC/SSC設(shè)門(mén)法,CD45／SSC設(shè)門(mén)法；目的：排除正常細(xì)胞的干擾，將不正常的細(xì)胞群孤立出來(lái)便于重點(diǎn)分析。第七頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期一CD45是所有白細(xì)胞的抗原，其表達(dá)量與細(xì)胞分化程度具有高度相關(guān)性，即細(xì)胞分化程度高的細(xì)胞，CD45表達(dá)量高；分化程度低的細(xì)胞，CD45表達(dá)量低。CD45表達(dá)量在成熟淋巴細(xì)胞最高，單核細(xì)胞、粒細(xì)胞、早期造血細(xì)胞依次減弱。紅細(xì)胞(中、晚幼紅細(xì)胞、成熟紅細(xì)胞)不表達(dá)CD45。側(cè)向角光散射(SSC)反映細(xì)胞的顆粒性，成熟粒細(xì)胞SSC最高，依次為單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、早期造血細(xì)胞、紅細(xì)胞。第八頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期一通過(guò)CD45／SSC散點(diǎn)圖即可獲得初步印象。若同時(shí)加上一個(gè)或二個(gè)以上其它單抗進(jìn)行二、三色甚至四色分析，則很容易識(shí)別非正常細(xì)胞群的表型。通常在CD45/SSC散點(diǎn)圖上,白血病細(xì)胞群體多出現(xiàn)于由淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、粒細(xì)胞和紅細(xì)胞圍成的稱(chēng)為“白血病窗”的區(qū)域內(nèi)。第九頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期一根據(jù)骨髓細(xì)胞CD45/SSC圖中分布情況設(shè)門(mén)圈定各類(lèi)細(xì)胞

R1門(mén)為成熟淋巴細(xì)胞R2門(mén)為正常單核細(xì)胞位置R3門(mén)正常粒細(xì)胞位置R4門(mén)為幼稚淋巴細(xì)胞出現(xiàn)位置R5門(mén)為有核紅細(xì)胞或細(xì)胞碎片位置R6門(mén)為幼稚髓細(xì)胞出現(xiàn)位置白血病細(xì)胞通常會(huì)在R4R6兩門(mén)位置處出現(xiàn)第十頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期一正常骨髓經(jīng)CD45/SSC射門(mén)的散點(diǎn)圖CD45/SSC圖中可見(jiàn)CD45強(qiáng)陽(yáng)性SSC低信號(hào)的細(xì)胞群為淋巴細(xì)胞褐色細(xì)胞群體中等強(qiáng)度的CD45表達(dá)SSC信號(hào)最強(qiáng)的細(xì)胞群體為粒細(xì)胞藍(lán)色及紅色細(xì)胞群體CD45表達(dá)與SSC信號(hào)介于淋巴細(xì)胞與粒細(xì)胞之間的是單核細(xì)胞群體綠色細(xì)胞群體CD45陰性SSC信號(hào)最低的有核紅細(xì)胞和細(xì)胞碎片第十一頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期一單克隆抗體的選擇白血病免疫分型時(shí)盡量選用系列特異性強(qiáng)的單抗作為一線單抗，目前較為公認(rèn)系列特異性單抗有T系的CD3、CD2；B系的CD79a、CD22、CD19和髓系的MPO、CD117、CD13等。一般說(shuō)來(lái)胞漿比胞膜的標(biāo)志特異性強(qiáng)。用這些特異性強(qiáng)的標(biāo)志作為初篩，基本可確定T系、B系或髓系，隨后即以二線單抗（CD14,CD36,CD41,CD34,CyIg,SmIg等）做進(jìn)一步的免疫分型，以確定最后亞型。第十二頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期一各系列造血細(xì)胞表達(dá)的主要相關(guān)抗原：

T淋巴細(xì)胞系：CD1、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8；

B淋巴細(xì)胞系：CD10、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD79；

粒、單核細(xì)胞系：CD11b/c，CD13，CD14，CD15，CD33、CD64、CD65w、CD117及MPO；

巨核細(xì)胞系：CD41、CD42、CD61、CD62、CD36；

紅細(xì)胞系：CD71、CD36、血型糖蛋白A（Glycophorin）；

其它：造血干祖細(xì)胞共同抗原CD34、CD38及末端脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)換酶（TdT），人類(lèi)主要組織相容性抗原HLA-DR，白細(xì)胞共同抗原CD45等。

第十三頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期一CD45/SSC設(shè)門(mén)中白血病細(xì)胞群表面標(biāo)志陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性率>陰性對(duì)照的20％，對(duì)于MPO只需要>3％即可。第十四頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期一ANLL的免疫分型急性非淋巴細(xì)胞性白血?。ˋNLL）的分型主要依靠形態(tài)學(xué)（包括細(xì)胞化學(xué)染色）來(lái)區(qū)分，尤其是FAB分型中的M1、M2與M4、M5之間尚無(wú)明確的免疫標(biāo)志劃分，但對(duì)一些形態(tài)學(xué)難于分類(lèi)或特殊類(lèi)型的ANLL（如M0、M6、M7），細(xì)胞免疫學(xué)分析對(duì)臨床確診ANLL可提供重要信息。第十五頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期一ANLL的免疫分型CD34是造血干細(xì)胞的特征性標(biāo)記，與AML的分型有一定關(guān)系。CD34+的AML與低分化的FAB亞型M1及原始細(xì)胞比較高的M2a有明顯的相關(guān)性。而在分化程度較成熟的M3、M2b及M5b等白血病細(xì)胞則缺乏或極少有CD34抗原的表達(dá)。且隨著分化程度漸趨成熟，CD34的表達(dá)量逐漸減少。第十六頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期一ANLL的免疫分型特點(diǎn)FAB-M1/M2的免疫表型特點(diǎn)：CDl3+、CD15+、CD33+、HLA-DR+、CD34+，其中CD34在M1中的表達(dá)強(qiáng)于M2，而CD15在M2的表達(dá)較強(qiáng)。第十七頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期一ANLL的免疫分型特點(diǎn)FAB-M3典型的免疫表型是CDl3+、CD15+、CD33+、CD9+、CD38+、CD34-/+、HLA-DR-，部分病人可能出現(xiàn)CD2+，CD56+。第十八頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期一ANLL的免疫分型特點(diǎn)FAB-M4/M5的免疫表型特點(diǎn)：HLA-DR+、CD15+、CD14+、CD64+、CD33+/-、CD13+/-、CD34-/+、CD11b/c+。第十九頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期一ANLL的免疫分型特點(diǎn)FAB-M6免疫表型特征為HLA-DR-/+，CD36+,血型糖蛋白A或B（Gly-A/B）是陽(yáng)性，CD34+/-，髓系抗原也可以表達(dá)。第二十頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期一ANLL的免疫分型特點(diǎn)FAB-M7特征性的抗原表達(dá)是CD41，CD42，CD61，部分也可表達(dá)CD36。第二十一頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期一ALL的免疫分型從70年代開(kāi)始進(jìn)行免疫學(xué)分型第二十二頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期一1986年前五分法五分法：Common型 未分化型T細(xì)胞型前B細(xì)胞型B細(xì)胞型表型DR/CD9/CD10+復(fù)雜CD2/CD5+CyIg+SmIg+發(fā)生率：國(guó)外60-70%30%15-25%2--3%2--3%

國(guó)內(nèi)50%30%20%0.5%1.5%預(yù)后：兒童最好次之再次最次最次成人次之再次最好最次最次第二十三頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期一1986年后兩大類(lèi)九分法ALL免疫分型

－－兩類(lèi)九型法:

非T亞型HLA-DRCD9CD10CD20μ鏈SmIg發(fā)生率%

I+-----5

II++----15

III+++---30

IV++++--50

V+++/-+/-+-<5

VI++-+-+<2

第二十四頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期一1986年后兩大類(lèi)九分法T亞型CD7CD5CD2CD3CD4CD8

CD1a發(fā)生率I+++---

-55II++++(25%)+(90%)+(90%)+25III+

+

+++/--/+-20

第二十五頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期一1994年四型21類(lèi)法4型21類(lèi)法：這是1994年法國(guó)國(guó)際白血病歐洲協(xié)作組在過(guò)去白血病分型的基礎(chǔ)上，對(duì)ALL免疫學(xué)分型提出的新方法。首先，根據(jù)每個(gè)CD抗原特異性強(qiáng)弱，確定其相應(yīng)的積分，并在此基礎(chǔ)上將ALL分為4型:①裸型：此型中每個(gè)系列（T淋巴細(xì)胞系、B淋巴細(xì)胞系、髓細(xì)胞系）積分均<2。②純型：此型要求T、B、髓細(xì)胞某一系列積分≥2，而其它細(xì)胞系列積分為0。③變異型：此型要求某一系列積分≥2，其它系列積分<2。④多表型：此型要求2個(gè)或2個(gè)以上系列積分≥2。第二十六頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期一ALL的免疫學(xué)分類(lèi)（EGIL，1994年）1.B-ALL

早期前B-ALL（earlyPre-B-ALL）普通型B-ALL（common-B-ALL）前B-ALL（Pre-B-ALL）成熟B-ALL（mature-B-ALL）2.T-ALL

早期前T-ALL（Pro/Pre-T-ALL）成熟T-ALL（T-ALL）第二十七頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期一B-ALL分類(lèi)

免疫表記HLA-DR+、

TDT+、

CD19+等earlyPre-B-ALLCD34+、CD10-

common-B-ALLCD34+、CD10+Pre-B-ALLCD34-、CD10+/-、CyIgM+mature-B-ALLCD34-、C