單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)

單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)第1頁(yè)/共13頁(yè)沉淀反應(yīng)（precipetaiton）是可溶性抗原與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合所出現(xiàn)的反應(yīng)。1905凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)

1946試管免疫擴(kuò)散技術(shù)

1965單向免疫擴(kuò)散技術(shù)

1967散射比濁法第2頁(yè)/共13頁(yè)在瓊脂膠中混入一定量抗體，使待測(cè)的抗原溶液從局部向瓊脂內(nèi)自由擴(kuò)散，在抗原抗體比例合適區(qū)域內(nèi)形成可見的沉淀環(huán)。(抗原抗體反應(yīng)時(shí)，只有其中一種成分發(fā)生擴(kuò)散）根據(jù)試驗(yàn)形式可分為試管法和平板法兩種。第3頁(yè)/共13頁(yè)第4頁(yè)/共13頁(yè)測(cè)量沉淀環(huán)的直徑或計(jì)算環(huán)的面積。沉淀環(huán)直徑或面積的大小與抗原量相關(guān)，但不是直線相關(guān)，而是對(duì)數(shù)關(guān)系。同時(shí)，這種沉淀環(huán)與分子量和擴(kuò)散時(shí)間有關(guān)。第5頁(yè)/共13頁(yè)試劑與器材1.羊抗人IgG診斷血清2.人IgG標(biāo)準(zhǔn)液（30g/L）3.待測(cè)人血清4.瓊脂粉5.生理鹽水6.載玻片(玻璃板）、三角燒瓶、吸管、加樣器、打孔器、水浴箱、濕盒、直尺等第6頁(yè)/共13頁(yè)操作方法1.制備瓊脂凝膠（1）生理鹽水配制瓊脂凝膠（15g/L），煮沸溶化至澄清，置56℃水浴中備用。（2）取適量溶化瓊脂，以瓊脂∶抗體＝4∶1比例吸取相應(yīng)抗體，與瓊脂充分混合，置56℃水浴中備用。第7頁(yè)/共13頁(yè)2.制板（1）取潔凈干燥玻片，置于水平臺(tái)上（2）用吸管吸取4ml瓊脂（含抗體），于載玻片1/3處澆注，使瓊脂凝膠均勻鋪滿玻片，不要留有氣泡。

3.打孔待瓊脂凝固后，用直徑3mm的打孔器打孔，孔距10～12mm第8頁(yè)/共13頁(yè)4.加樣用微量加樣器吸取待檢血清10μl,加入相應(yīng)的試驗(yàn)孔中，做好標(biāo)記。將人IgG標(biāo)準(zhǔn)液（30g/L）用生理鹽水分別做如下稀釋：原倍，1:2，1:5，1:10，1:20，1:30，用微量加樣器吸取稀釋標(biāo)準(zhǔn)液10μl,加入相應(yīng)的試驗(yàn)孔中，做好標(biāo)記。

第9頁(yè)/共13頁(yè)5.擴(kuò)散將加樣的瓊脂凝膠板平放于濕盒內(nèi)，置37℃24h后觀察結(jié)果。第10頁(yè)/共13頁(yè)結(jié)果判斷精確測(cè)量各試驗(yàn)孔沉淀環(huán)的直徑，以沉淀環(huán)直徑為橫坐標(biāo)，相應(yīng)孔中IgG含量的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。(logC/d=K)第11頁(yè)/共13頁(yè)注意事項(xiàng)1.玻片須干燥、潔凈，邊緣無破損。置水平處。2.澆制瓊脂板時(shí)動(dòng)作要?jiǎng)蛩?.打孔時(shí)避免水平移動(dòng)4.加樣時(shí)避免氣泡或加至孔外，加樣要準(zhǔn)確5.應(yīng)同步繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線6