口腔細(xì)胞培養(yǎng)及其應(yīng)用

口腔細(xì)胞培養(yǎng)及其應(yīng)用第1頁(yè)/共21頁(yè)TheNobelPrizeinPhysiologyorMedicine2012

SirJohnB.GurdonShinyaYamanaka第2頁(yè)/共21頁(yè)第3頁(yè)/共21頁(yè)提要：

細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理及基本方法

口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)

細(xì)胞培養(yǎng)在口腔再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用

口腔生物學(xué)其他研究方法第4頁(yè)/共21頁(yè)第一節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)CellcultureHEK293cell第5頁(yè)/共21頁(yè)一、細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理PrinciplesincellcultureCal27cell第6頁(yè)/共21頁(yè)（一）細(xì)胞培養(yǎng)的基本概念細(xì)胞培養(yǎng)

原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)

第7頁(yè)/共21頁(yè)細(xì)胞培養(yǎng)：

模擬體內(nèi)的生理環(huán)境，在適當(dāng)?shù)臈l件下，使活體組織細(xì)胞在體外環(huán)境存活、生長(zhǎng)增殖，并維持其結(jié)構(gòu)功能第8頁(yè)/共21頁(yè)原代培養(yǎng)(Primarycellculture)：取自體內(nèi)新鮮組織并置于體外條件下生長(zhǎng)的細(xì)胞在傳代之前稱為原代培養(yǎng)。Tumortissue第9頁(yè)/共21頁(yè)傳代培養(yǎng)（subculture）：

細(xì)胞在培養(yǎng)器皿中生長(zhǎng)一定時(shí)間后，被分開(kāi)接種到新的培養(yǎng)器皿中293cell第10頁(yè)/共21頁(yè)（二）體外細(xì)胞生物學(xué)形態(tài)特點(diǎn)貼壁型細(xì)胞（adherent-typecell）必須貼附于支持物表面才能生長(zhǎng)。大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞貼附生長(zhǎng)，屬于貼壁依賴性細(xì)胞懸浮型細(xì)胞（suspension-typecell）于懸浮狀態(tài)下即可生長(zhǎng),不需要貼附于支持物表面,多見(jiàn)于血液淋巴細(xì)胞生長(zhǎng)增殖過(guò)程培養(yǎng)細(xì)胞生命期培養(yǎng)細(xì)胞一代生存期第11頁(yè)/共21頁(yè)1.貼壁型細(xì)胞按照培養(yǎng)細(xì)胞的主要形態(tài)，可分為幾大類型：上皮型成纖維型NIH3T3cellCal27cell第12頁(yè)/共21頁(yè)

游走型

多形型Nervecell(/wiki/File:Macrophage.jpg)Macrophage第13頁(yè)/共21頁(yè)2.懸浮型細(xì)胞THP-1cell（acutemonocyticleukemia）第14頁(yè)/共21頁(yè)培養(yǎng)細(xì)胞生命期所謂培養(yǎng)細(xì)胞生命期，指細(xì)胞在培養(yǎng)中持續(xù)增殖和生長(zhǎng)的時(shí)間

細(xì)胞全部生存過(guò)程大致分為以下三個(gè)階段：原代培養(yǎng)期傳代期衰退期第15頁(yè)/共21頁(yè)原代培養(yǎng)期：也稱初代培養(yǎng)，即從體內(nèi)取出組織接種培養(yǎng)到第一次傳代階段，一般持續(xù)1～4周傳代期：初代培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)傳代后便改稱為細(xì)胞系。在全生命期中此期的持續(xù)時(shí)間最長(zhǎng)衰退期：此期細(xì)胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖；細(xì)胞形態(tài)輪廓增強(qiáng)，最后衰退凋亡第16頁(yè)/共21頁(yè)第17頁(yè)/共21頁(yè)passagingphase(2-4M)Cultureofratdentalpulpcellsdigestingprimaryculture/cellspassagingculture/cellsprimaryphase(2W)senescencephase第18頁(yè)/共21頁(yè)細(xì)胞永生性細(xì)胞獲持久性增殖能力，成為無(wú)限細(xì)胞系主要發(fā)生在第二期末，或第三期初階段細(xì)胞獲不死性后，核型大多變成異倍體。可能惡性變細(xì)胞永生性和惡性性非同一性狀HEK293cellCal27cell第19頁(yè)/共21頁(yè)培養(yǎng)細(xì)胞一代生存期所謂細(xì)胞“一代”，系僅指從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)時(shí)的一段時(shí)間，細(xì)胞傳代后，一般要經(jīng)過(guò)以下三個(gè)階段:潛伏期（游離期，貼壁期）對(duì)數(shù)生長(zhǎng)