高效液相色譜操作步驟

高效液相色譜儀的應(yīng)用1.環(huán)境污染物分析：大氣、水、土壤和食品中的多環(huán)芳烴、多環(huán)聯(lián)苯，陰離子表面活性劑，有機(jī)氯農(nóng)藥、有機(jī)磷農(nóng)藥，除草劑，酚類胺類、黃曲霉毒素等污染物的分離與測定。2.精細(xì)化工：在精細(xì)化工生產(chǎn)中使用的具有較高分子量和較高沸點(diǎn)的有機(jī)化合物，如高碳數(shù)脂肪族或芳香族的醇、劑、藥物、農(nóng)藥、燃料、炸藥等工業(yè)產(chǎn)品的醛、酮、醚、酸、酯等化工原料，以及各種表面活性分離與測定。3.食品質(zhì)量分析：農(nóng)藥殘留，獸藥殘留；防腐劑、抗氧化劑、人工合成色素等食品添加劑的分離與測定，保健食品中的功效成分檢測，真菌毒素分析等當(dāng)前1頁，總共19頁。

前后當(dāng)前2頁，總共19頁。

高效液相色譜分析儀的型號、外形因生產(chǎn)廠家的不同而有較大的差異。各型號儀器配有相應(yīng)的數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。1、溶劑（流動相）真空脫氣機(jī)2、輸液系統(tǒng)（四元泵）3、手動進(jìn)樣器4、柱溫箱（色譜柱，固定相）5、檢測器6、色譜工作站當(dāng)前3頁，總共19頁。一：流動相的配制1：有機(jī)溶劑的過濾（使用0.45um的一次性水系濾膜過濾）2：流動相超聲脫氣（10~30min）濾膜開關(guān)當(dāng)前4頁，總共19頁。二：樣品處理1：樣品過濾（過濾裝置：一次型注射器;一次性濾頭）進(jìn)入高效液相色譜儀樣品液都必須經(jīng)過樣品過濾裝置過濾2:把經(jīng)過稱量、定容、超聲處理后的樣品溶液，用一次性注射器和一次性濾頭過濾后，加入2ml具塞試管中備用。一次性濾頭：由機(jī)系、水系組成；

濾膜的孔徑為0.45um當(dāng)前5頁，總共19頁。三：色譜柱的連接將色譜柱按流動相流動方向即色譜柱標(biāo)示箭頭方向安裝在儀器上擰緊色譜柱的接口色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等。當(dāng)前6頁，總共19頁。四：放置流動相1：將儲存流動相的貯液瓶放置于貯液瓶架上2：更換儀器泵頭里清洗瓶中的超純水（以確保儀器外回路系統(tǒng)清潔和良好的工作狀態(tài)）清洗瓶當(dāng)前7頁，總共19頁。依次打開：

穩(wěn)壓器柱溫箱高壓泵檢測器計算機(jī)電源開關(guān)五：開機(jī)當(dāng)前8頁，總共19頁。排氣六：系統(tǒng)排氣1：擰松泵右側(cè)的快速排氣閥（兩圈即可）3：進(jìn)入色譜工作站，待儀器自檢完成后進(jìn)行進(jìn)樣系統(tǒng)的清洗快速排氣閥4：用一次性平頭微量注射器吸入1~2ml的樣品溶液，注入手動進(jìn)樣閥的進(jìn)樣口2：按下泵前面的“排氣”鍵排氣5min后擰緊快速排氣閥色譜工作站一次性平頭微量注射器當(dāng)前9頁，總共19頁。作用：平衡活化色譜柱并清除管路中的雜質(zhì)和殘留的水分。步驟：分析樣品前先用甲醇或乙腈沖洗流路20min~30min

如果流動相為有機(jī)相和純水相的混合液，在用甲醇或乙腈沖洗流路后，按照分析樣本的需要調(diào)節(jié)比例閥的比例，沖洗流路約20min；

如果流動相含有緩沖鹽溶液、有機(jī)酸、無機(jī)酸或其他電解質(zhì)，則應(yīng)該用與分析樣品流動相中緩沖鹽溶液或有機(jī)酸、無機(jī)酸、其他電解質(zhì)與有機(jī)相相同比例的水加有機(jī)相沖洗流路約20min以上，再按照分析樣品的需要調(diào)節(jié)有機(jī)相與緩沖溶液等的比例沖洗流路約20min，平衡進(jìn)樣環(huán)境。簡而言之：根據(jù)流動相的不同選擇不同的溶液沖洗流路。

具體問題具體分析！七：沖洗流路（進(jìn)樣前的系統(tǒng)準(zhǔn)備）當(dāng)前10頁，總共19頁。八：設(shè)定分析方法1：設(shè)置程序文件（流動相通道、流速、比例、檢測器檢測波長、分析時間、最高壓力、最低壓力）2：設(shè)定分析方法的方法文件（文件名稱，表示濃度的單位）3：設(shè)定樣品分析表（標(biāo)準(zhǔn)名稱、測定次數(shù)、樣品名稱、編號）4：待進(jìn)樣環(huán)境平衡后，打開檢測器的氘燈，檢測器開始自檢和教正，進(jìn)行基線檢測，待基線平穩(wěn)后進(jìn)樣分析。打開檢測器的氘燈簡而言之：軟件的各種設(shè)置；繁雜但不復(fù)雜當(dāng)前11頁，總共19頁。九：進(jìn)樣分析1：啟動設(shè)置程序文件、設(shè)定分析方法的方法文件、設(shè)定樣品分析表按照樣品分析表的順序，用平頭微量注射器將經(jīng)過0.45um濾膜過濾的標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液逐次注入六通進(jìn)樣閥中，2：順時針旋轉(zhuǎn)六通閥，儀器開始進(jìn)行分析順時針旋轉(zhuǎn)當(dāng)前12頁，總共19頁。1：根據(jù)樣品的出峰時間定性2：根據(jù)樣品的峰面定量（在一定的色譜操作條件下，流入檢測器的待測組分的含量、質(zhì)量或濃度與檢測器的響應(yīng)信號：峰面積或峰高成正比。）十：數(shù)據(jù)處理色譜圖示例當(dāng)前13頁，總共19頁。1：沖洗流路和色譜柱a:若流動相為有機(jī)相和超純水的混合溶劑，則直接用甲醇或乙腈沖洗流路約30min，待基線無雜質(zhì)峰出現(xiàn)走平穩(wěn)后可停泵關(guān)機(jī)。b:若流動相含有緩沖鹽溶液、有機(jī)酸、無機(jī)酸或其他電解質(zhì)溶，則先用5%甲醇沖洗流路30~60min，其次用50%甲醇溶液沖洗流路約30min，再用甲醇或乙腈沖洗流路約30min，待基線無雜質(zhì)峰出現(xiàn)走平穩(wěn)后可停泵關(guān)機(jī)。2：沖洗進(jìn)樣系統(tǒng)a:清洗手動進(jìn)樣閥，將手動進(jìn)樣閥的扳手逆時針扳到頭，用一次性平頭微量注射器吸入2~4ml的50%甲醇，注入手動閥的進(jìn)樣口。b:每次樣品測定完后，一定要用50%甲醇清洗；若樣品水系，則先用超純水清洗，再用50%甲醇清洗。十一：儀器工作完成后的必要維護(hù)當(dāng)前14頁，總共19頁。依次關(guān)閉檢測器的氘燈將高壓泵的流速降為“0”關(guān)閉檢測器開關(guān)關(guān)閉高壓泵開關(guān)關(guān)閉儀器色譜工作站關(guān)閉檢測器電源開關(guān)關(guān)閉高壓泵電源開關(guān)關(guān)閉柱溫箱電源開關(guān)關(guān)閉電腦開關(guān)關(guān)閉穩(wěn)壓電源開關(guān)并在儀器使用登記本上記錄環(huán)境溫度、濕度、儀器工作狀態(tài)及使用情況結(jié)束操作，整理實(shí)驗(yàn)臺十二：關(guān)機(jī)當(dāng)前15頁，總共19頁。流動相

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1、流動相應(yīng)選用色譜純試劑、高純水或雙蒸水，酸堿液及緩沖液需經(jīng)過濾后使用，過濾時注意區(qū)分水系膜和油系膜的使用范圍；

2、水相流動相需經(jīng)常更換（一般不超過2天），防止長菌變質(zhì)；操作過程中應(yīng)注意的事項(xiàng)當(dāng)前16頁，總共19頁。色譜柱：

1、使用前仔細(xì)閱讀色譜柱附帶的說明書，注意適用范圍，如pH值范圍、流動相類型等；

2、使用符合要求的流動相；

3、使用保護(hù)柱；

4、如所用流動相為含鹽流動相，反相色譜柱使用后，先用水或低濃度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇沖洗。

5、色譜柱在不使用時，應(yīng)用甲醇沖洗，取下后緊密封閉兩端保存；

6、不要高壓沖洗柱子；

7、不要在高溫下長時間使用硅膠鍵合相色譜柱；當(dāng)前17頁，總共19頁。樣品：

1、采用過濾或離心方法處理樣品，確保樣品中不含固體顆粒；

2、用流動相或比流