實(shí)驗(yàn)十醋酸纖維薄膜電泳血清白蛋白分析

實(shí)驗(yàn)十醋酸纖維薄膜電泳血清白蛋白分析第1頁/共19頁實(shí)驗(yàn)十、醋酸纖維薄膜電泳－－

血清蛋白分析和

人體動(dòng)脈血壓的測(cè)定第2頁/共19頁一、目的和要求

１、了解電泳的原理，掌握醋酸纖維薄膜電泳的操作２、學(xué)習(xí)動(dòng)脈血壓的原理，測(cè)定收縮壓與舒張壓第3頁/共19頁二、實(shí)驗(yàn)原理

（一）電泳

在外界電場(chǎng)的作用下，生物大分子從電極一側(cè)向另一側(cè)移動(dòng)的現(xiàn)象

1、蛋白質(zhì)

由氨基酸通過肽鍵連接而成第4頁/共19頁第5頁/共19頁2、等電點(diǎn)(isoelectricpoint,pI)

在一定的pH條件下，當(dāng)其正、負(fù)電荷數(shù)相等時(shí)，整體便失去了所有電荷，這時(shí)的pH稱為等電點(diǎn)（pI）。氨基酸在等電點(diǎn)時(shí)電泳移動(dòng)速度為零在堿性環(huán)境中，蛋白分子負(fù)電陽極在酸性環(huán)境中，蛋白分子正電陰極第6頁/共19頁3、醋酸纖維素薄膜

(CelluloseAcetateMembranes)

采用醋酸纖維素為支持物的電泳方法叫醋酸纖維薄膜電泳，具有很高的流速和熱穩(wěn)定性以及非常低的吸附，將其溶于丙酮等有機(jī)溶劑中，即可涂布成均一細(xì)密的微孔薄膜第7頁/共19頁第8頁/共19頁4、血清蛋白電泳

將抽取的血液置入不加抗凝劑的試管中，使血凝固后，析出的上清液就是血清。血清中主要含白蛋白、球蛋白。第9頁/共19頁

血清蛋白電泳是一種臨床化驗(yàn)檢查項(xiàng)目。由于蛋白的絕大部分均由肝臟合成，所以，各種蛋白質(zhì)的質(zhì)與量的變化，除與免疫性疾病等有關(guān)外，主要反映肝臟的生理、病理情況第10頁/共19頁

血清中各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)均低于pH7.0，在pH8.6的緩沖液中帶負(fù)電，向正極移動(dòng)，分子小且?guī)щ姾啥嗾撸瑒t移動(dòng)速度較快第11頁/共19頁pI%球蛋白6.86~7.312~20球蛋白5.126.5~122球蛋白5.064~91球蛋白5.062~5清蛋白4.6457~72第12頁/共19頁（二）血壓測(cè)定

1、血壓

是指血管內(nèi)的血液對(duì)于單位面積血管壁的側(cè)壓，目前采用千帕(KPa)為單位。以前采用mmHg表示。收縮壓：收縮期動(dòng)脈血壓的最高值(高壓)

舒張壓：舒張期動(dòng)脈血壓的最低值(低壓)

第13頁/共19頁2、血壓測(cè)定方法此次實(shí)驗(yàn)采用Korotkoff氏聽診法正常的收縮壓/舒張壓(mmHg)

收縮壓:<130mmHg

舒張壓:<85mmHg第14頁/共19頁無光澤面座位號(hào)1.50.5三、實(shí)驗(yàn)方法（一）電泳

1、薄膜的使用

在毛（無光澤）面劃線，并寫上座位號(hào)（如右圖）

2、浸潤第15頁/共19頁3、點(diǎn)樣

（毛細(xì)管，一根，放回）4、電泳

點(diǎn)樣面朝下點(diǎn)樣端置于負(fù)極5、染色

染色10min6、漂洗脫色各5min（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）最后，水洗第16頁/共19頁（二）側(cè)血壓

1、血壓計(jì)的構(gòu)造：減壓計(jì)、袖帶、氣球

2、安靜時(shí)收縮壓/舒張壓（