臨床微生物檢查課件 第29章-人類(lèi)免疫缺陷病毒-11檢本

人類(lèi)免疫缺陷病毒

(humanimunodeficiencyvirus,HIV)人類(lèi)免疫缺陷病毒是獲得性免疫缺陷綜合癥(AcquiredImmunodeficiencysyndrome,AIDS，艾滋病)的病原體，艾滋病具有高度致死性與驚人的蔓延速度，可以稱(chēng)之為“超級(jí)癌癥”，“世紀(jì)殺手”屬逆轉(zhuǎn)錄病毒科，慢病毒屬1一、分類(lèi)與命名因帶有以RNA為模板合成DNA的逆轉(zhuǎn)錄酶而得名，共有7個(gè)屬。HIV分為兩型：HIV-1型引起全球愛(ài)滋病流行；分為M、N和O3個(gè)組，13個(gè)亞型；HIV-2主要局限于西部非洲分為A~F六個(gè)亞型。我國(guó)流行的主要是B和C亞型。2二、生物學(xué)性狀(一)形態(tài)與結(jié)構(gòu)HIV為RNA病毒，呈球形，直徑約100～120nm，病毒內(nèi)部有一致密的圓錐狀核心.核衣殼：兩條單股正鏈RNA，逆轉(zhuǎn)錄酶，整合酶，蛋白酶包膜：gp120(刺突)，gp41(跨膜蛋白)3電鏡下的HIV形態(tài)4HIV模型圖脂雙層膜gp120gp41包膜糖蛋白p24衣殼蛋白p14內(nèi)膜蛋白p7核衣殼蛋白逆轉(zhuǎn)錄酶蛋白酶整合酶567(二)基因組及其編碼產(chǎn)物三個(gè)結(jié)構(gòu)基因分別為：gag、pol和env基因其基因編碼的重要產(chǎn)物有：P24：衣殼蛋白，特異性最高，與多數(shù)其他逆轉(zhuǎn)錄病毒無(wú)交叉反應(yīng)。HIV-1或HIV-2的p24有輕度交叉反應(yīng)8gp120：包膜上的糖蛋白，構(gòu)成刺突，是病毒體與宿主細(xì)胞表面的CD4受體結(jié)合的部位。gp120能鑒別HIV-1與HIV-2gp41：具有介導(dǎo)病毒包膜與宿主細(xì)胞膜融合的作用9HIV包膜上的gp120吸附CD4＋細(xì)胞HIV的包膜與細(xì)胞膜融合RNA進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)逆轉(zhuǎn)錄酶DNA整合酶整合至宿主細(xì)胞的染色體上轉(zhuǎn)錄RNA拼接成子代RNA一部分一部分拼接成mRNA轉(zhuǎn)譯結(jié)構(gòu)蛋白調(diào)節(jié)蛋白核衣殼出芽的方式釋放獲得包膜子代HIV(三)病毒的復(fù)制101112(四)病毒的變異HIV是一種高度變異的病毒，各基因的變異程度不一，較多集中在env基因和nef基因。HIV的核心抗原和各種酶蛋白比較恒定HIV的抗原變異是病毒逃逸宿主免疫反應(yīng)的主要機(jī)制。13(五)病毒受體和細(xì)胞親嗜性主要受體細(xì)胞表面的CD4分子輔助受體T細(xì)胞表面的CXCR4巨噬細(xì)胞表面的CCR5靶細(xì)胞：主要是CD4＋T淋巴細(xì)胞和單核-巨噬細(xì)胞141516(六)培養(yǎng)特性實(shí)驗(yàn)室中常用新鮮分離的正常人T細(xì)胞或用病人自身分離的T細(xì)胞培養(yǎng)亦可在某些T細(xì)胞株(H9、CEM)中增殖感染后細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的病變，培養(yǎng)液中可測(cè)到逆轉(zhuǎn)錄酶活性，培養(yǎng)細(xì)胞中可查到病毒的抗原恒河猴及黑猩猩可作為HIV感染的動(dòng)物模型，但其感染過(guò)程與產(chǎn)生的癥狀與人類(lèi)不同17(七)理化性狀與抵抗力對(duì)理化因素的抵抗力較弱56℃30min可滅活，但在室溫(20～22℃)可保持活力達(dá)7天對(duì)包括肥皂在內(nèi)的各種去垢劑非常敏感0.2%次氯酸納、0.1%漂白粉、70%乙醇、50%乙醚、0.3%H2O2或0.5%來(lái)蘇處理5min，對(duì)病毒均有滅活作用18二、臨床意義HIV能引起AIDS,其是以侵犯CD4+T細(xì)胞為主,造成細(xì)胞免疫缺陷，并繼發(fā)體液免疫功能缺陷為基本特征的傳染病。傳染源：HIV無(wú)癥狀攜帶者和艾滋病患者傳播途徑性接觸傳播：最常見(jiàn)血液傳播：污染HIV的血液、血制品或針頭、手術(shù)器械等母嬰傳播19臨床表現(xiàn)從HIV感染到發(fā)展為典型的AIDS分為3個(gè)期：1)急性感染期：HIV初次感染人體后，即開(kāi)始在CD4+的T細(xì)胞和單核-巨噬細(xì)胞中大量增殖和擴(kuò)散。此時(shí)感染者血循環(huán)中的CD4+T細(xì)胞減少，出現(xiàn)HIV抗原。多數(shù)感染者此期表現(xiàn)出發(fā)熱、咽炎、淋巴結(jié)腫大等自限性癥狀。202)無(wú)癥狀感染期：急性感染期后轉(zhuǎn)入較長(zhǎng)時(shí)間的慢性感染期(6個(gè)月至十年)，在此期間感染者可不表現(xiàn)臨床癥狀而處于臨床潛伏期，外周血中HIV病毒含量或每ml病毒RNA拷貝數(shù)很低，常需用敏感的方法才能檢測(cè)出在潛伏期體內(nèi)淋巴樣組織中的HIV仍處于活躍增殖的狀態(tài)21

3)艾滋病(又稱(chēng)艾滋病完全型，AIDS)：

：實(shí)驗(yàn)室檢查：IgG明顯增高、CD4+T淋巴細(xì)胞記數(shù)低于200個(gè)/ul、CD4/CD8＜1、HIV抗體陽(yáng)性.此期出現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)等多器官多系統(tǒng)損害，合并多種感染(如條件致病菌、寄生蟲(chóng)、病毒等)或并發(fā)腫瘤。5年死亡率約為90%。22致病機(jī)制目前尚不清楚，主要的觀點(diǎn)有：HIV直接或間接損傷CD4+T淋巴細(xì)胞HIV抑制抗原遞呈細(xì)胞的功能HIV誘發(fā)自身免疫性疾病及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡HIV導(dǎo)致CD8+T細(xì)胞喪失抗病毒能力23機(jī)體對(duì)HIV感染的免疫應(yīng)答：HIV感染也刺激機(jī)體產(chǎn)生體液免疫(Gp120抗體)和細(xì)胞免疫應(yīng)答，但不能徹底清除體內(nèi)潛伏感染的細(xì)胞24四、微生物檢驗(yàn)HIV感染的標(biāo)志分為：病毒標(biāo)志、免疫標(biāo)志和相關(guān)標(biāo)志。標(biāo)本采集：血液：測(cè)定抗體、測(cè)定病毒及其組分體液：CSF、唾液、淚液、乳汁、尿、生殖器分泌液感染組織的活檢標(biāo)本25(一)標(biāo)本直接檢查1.抗原檢查P24：間接ELISA，急性感染期(＋)潛伏期常為(－)，用于早期診斷。262.核酸檢測(cè)(1)原位雜交：檢測(cè)不同細(xì)胞和組織內(nèi)的HIV核酸，以確定細(xì)胞中HIV潛伏感染的情況(2)PCR：PCR-DNAPCR-RNA(3)定量PCR檢測(cè)病毒載量監(jiān)測(cè)HIV慢性感染者病情的發(fā)展，以及作為評(píng)價(jià)抗HIV藥物治療效果的指標(biāo)27(二)病毒分離培養(yǎng)：正常人淋巴細(xì)胞或臍血淋巴細(xì)胞測(cè)逆轉(zhuǎn)錄酶活性測(cè)p24抗原測(cè)HIV抗原28(三)抗體檢測(cè)檢查血清中HIV抗體時(shí)應(yīng)注意以下情況：血清中如出現(xiàn)HLA、抗核抗體、自身抗體、瘧原蟲(chóng)抗體或56℃加熱，常出現(xiàn)假陽(yáng)性。晚期病人或極度衰竭的病人抗體常呈陰性.少數(shù)感染者病毒抗原陽(yáng)性而抗體陰性。291.初篩試驗(yàn)：酶免疫測(cè)定法(EIA)免疫熒光法(IFA)凝集試驗(yàn)2.確證試驗(yàn)：免疫印跡試驗(yàn)(WB)放射免疫沉淀試驗(yàn)30一般用ELISA進(jìn)行血清HIV抗體的初篩，(＋)者，要進(jìn)行第2、3次測(cè)定，如仍(＋)必須用免疫印跡試驗(yàn)檢測(cè)針對(duì)HIV不同結(jié)構(gòu)蛋白的抗體作確證試驗(yàn)?zāi)壳罢J(rèn)為，至少有對(duì)兩種HIV抗原同時(shí)測(cè)定其抗體，方可肯定診斷。如血清中同時(shí)檢出p24及gp120抗體(+)