分子生物學(xué)導(dǎo)論分子生物學(xué)研究方法3

（優(yōu)選）分子生物學(xué)導(dǎo)論分子生物學(xué)研究方法現(xiàn)在是1頁\一共有66頁\編輯于星期四1第七節(jié) 核酸序列分析技術(shù)一、Sanger雙脫氧鏈終止法二、Maxam-GilbertDNA化學(xué)降解法三、DNA序列測定的自動(dòng)化四、DNA雜交測序法五、基因芯片測序六、最新測序技術(shù)現(xiàn)在是2頁\一共有66頁\編輯于星期四2現(xiàn)在是3頁\一共有66頁\編輯于星期四3原理：雙脫氧（2'，3'）-核苷酸可以象2'-脫氧核苷酸那樣直接摻入新合成的DNA鏈中，但因3’端不具OH基，DNA鏈合成至此中斷。由于雙脫氧核苷酸在每個(gè)DNA分子中摻入的位置不同，故可根據(jù)不同長度的DNA片段測定出核苷酸序列。不能和下一個(gè)核苷酸通過磷酸二酯鍵連接起來一、Sanger雙脫氧鏈終止法

現(xiàn)在是4頁\一共有66頁\編輯于星期四4過程：制備ss-DNA→與引物退火→分為4個(gè)反應(yīng)系統(tǒng)→每個(gè)系統(tǒng)中加入dNTP（其中dATP常帶同位素標(biāo)記）和一種雙脫氧核苷酸→DNA聚合酶定序反應(yīng)→反應(yīng)產(chǎn)物變性后電泳→凝膠干燥→放射自顯影。

該法亦適合mRNA的序列分析。

GC富集區(qū)常出現(xiàn)“隱影”或“停止”現(xiàn)象，如在反應(yīng)中加入dITP（脫氧三磷酸次黃嘌呤）或脫氧三磷酸-7-脫氧鳥苷可解決GC富集區(qū)的測序?，F(xiàn)在是5頁\一共有66頁\編輯于星期四5ATGCGGTACCAT5’3’測序模板5’5’5’5’5’5’5’5’5’

5’5’5’四套反應(yīng)體系1--dATP,dCTP,dGTP,dTTP.+ddATP

TATACGCCATACGCCATGGTATACTACGCTACGCCTACGTACGCCATGTACGCCATGGTTACGCCATTACGCCATGGT2--dATP,dCTP,dGTP,dTTP.+ddCTP3--dATP,dCTP,dGTP,dTTP.+ddGTP4--dATP,dCTP,dGTP,dTTP.+ddTTP現(xiàn)在是6頁\一共有66頁\編輯于星期四6雙脫氧法的特點(diǎn)需要單鏈模板、寡核苷酸引物和高質(zhì)量的DNA聚合酶。缺點(diǎn)：（1）聚合反應(yīng)會(huì)因二級(jí)結(jié)構(gòu)而提前終止，常常測不到準(zhǔn)確的DNA序列；（2）由于經(jīng)模板與引物結(jié)合后才能反應(yīng)并測序，因此對(duì)于寡聚核苷酸DNA序列（例如對(duì)引物DNA的序列）不能測定；（3）該法直接分析的是合成的新鏈序列，而不是模板鏈，因此不能分析模板中甲基化部位；（4）需要適當(dāng)?shù)囊锖湍芎铣蓡捂溎０宓妮d體。優(yōu)點(diǎn)：簡單、快速?，F(xiàn)在是7頁\一共有66頁\編輯于星期四7二、Maxam-GilbertDNA化學(xué)降解法基本步驟:(1)先將DNA的末端之一進(jìn)行標(biāo)記(通常為放射性同位素32P)；(2)在多組互相獨(dú)立的化學(xué)反應(yīng)中分別進(jìn)行特定堿基的化學(xué)修飾；(3)在修飾堿基位置化學(xué)法斷開DNA鏈；(4)聚丙烯酰胺凝膠電泳將DNA鏈按長短分開；(5)根據(jù)放射自顯影顯示區(qū)帶，直接讀出DNA的核苷酸序列。現(xiàn)在是8頁\一共有66頁\編輯于星期四8化學(xué)測序法的優(yōu)點(diǎn)：（1）待測的DNA序列來自原有的DNA分子，因此可以分析DNA被修飾的堿基；（2）測序反應(yīng)不受DNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的影響；（3）不需要將待測序的DNA亞克隆到其他載體上，不需要通過通用的引物；（4）可測定較短的DNA序列。化學(xué)測序法的缺點(diǎn)：（1）待測DNA需要進(jìn)行末端放射性標(biāo)記、變性聚丙酰烯胺凝膠電泳分離分析，操作較復(fù)雜；（2）該方法測序范圍約為250bp，稍低于雙脫氧法；（3）本方法主要限制因素是變性聚丙酰烯胺凝膠電泳分離分析分辨能力比較低。

現(xiàn)在是9頁\一共有66頁\編輯于星期四9三、DNA序列測定的自動(dòng)化

1.DNA測序步驟與自動(dòng)化1）模板制備：可自動(dòng)化2）定序反應(yīng)：可自動(dòng)化3）凝膠電泳：自動(dòng)化有一定困難，制膠、點(diǎn)樣、電泳、凝膠干燥、放射自顯影。4）核苷酸序列閱讀與計(jì)算機(jī)輸入：可自動(dòng)化

DNA序列分析自動(dòng)化包括兩個(gè)方面的內(nèi)容，一是指“分析反應(yīng)”的自動(dòng)化，另一方面則是指“讀片過程”的自動(dòng)化。現(xiàn)在是10頁\一共有66頁\編輯于星期四102.自動(dòng)測序儀

Conney等人于1987年設(shè)計(jì)了不同熒光染料標(biāo)記引物，然后做鏈終止測序，用激光掃描閱讀序列。紅色引物+T反應(yīng)系統(tǒng)（引物+DNA+dNTP+ddTTP）黑色引物+G反應(yīng)系統(tǒng)（引物+DNA+dNTP+ddGTP）

綠色引物+A反應(yīng)系統(tǒng)（引物+DNA+dNTP+ddATP）

蘭色引物+C反應(yīng)系統(tǒng)（引物+DNA+dNTP+ddCTP）現(xiàn)在是11頁\一共有66頁\編輯于星期四11現(xiàn)在是12頁\一共有66頁\編輯于星期四12現(xiàn)在是13頁\一共有66頁\編輯于星期四13優(yōu)點(diǎn):(1)四個(gè)反應(yīng)系統(tǒng)可合并點(diǎn)樣，大大節(jié)省制膠和點(diǎn)樣時(shí)間；(2)可同時(shí)讀出多個(gè)樣品核苷酸序列，不需干燥凝膠和放射自顯影；(3)可連續(xù)電泳，可讀出較多的核苷酸序列。缺點(diǎn)：無法保留原始記錄,四個(gè)反應(yīng)產(chǎn)物點(diǎn)在一條道上,相互間會(huì)發(fā)生干擾,導(dǎo)致讀序時(shí)分辨率下降?，F(xiàn)在是14頁\一共有66頁\編輯于星期四14四、DNA雜交測序法自從70年代末期DNA測序技術(shù)問世以來，人們已經(jīng)做了大量重要的改進(jìn)，但從根本原理上創(chuàng)新的則只有雜交測序法（sequencingbyhybridization，SBH）一種。它利用一組已知序列的寡核苷酸短序列作探針，同某一特定的較長的靶DNA分子進(jìn)行雜交，從而測定其核苷酸的序列。DNA雜交測序?qū)嵸|(zhì)上包括兩個(gè)主要的步驟：

首先是將待測定的靶DNA分子同一組已知其核苷酸順序的寡核苷酸探針進(jìn)行雜交，

然后與那些能夠同靶DNA形成完全的雙鏈雜合分子的寡核苷酸探針做比較分析，并據(jù)此推算出靶DNA的核苷酸序列?，F(xiàn)在是15頁\一共有66頁\編輯于星期四15如果將一種核苷酸順序?yàn)?'-AGCCTAGCTGAA-3'的12-mer的靶DNA，與一組完全隨機(jī)的8-mer寡核苷酸探針混合雜交，在總數(shù)為48=65536種的8-mer探針群體中，僅有5種會(huì)與靶DNA形成完全互補(bǔ)的雙鏈體分子。根據(jù)這5種發(fā)生了完全雜交作用的8-mer寡核苷酸探針之間的重疊序列的線性關(guān)系，便可推算出這段12-mer的靶DNA分子的核苷酸順序。當(dāng)然，這只是一種理想化狀態(tài)，實(shí)際上此種雜交模式要復(fù)雜得多，因?yàn)槟切]有同靶DNA片段完全互補(bǔ)的寡核苷酸探針，也仍然會(huì)與之形成不穩(wěn)定的雙鏈分子。現(xiàn)在是16頁\一共有66頁\編輯于星期四16上圖是兩條長度均為17-mer的靶DNA片段I和II的雜交測序結(jié)果，兩者僅在第8位堿基有不同，分別為C和T。靶DNA片段I可與1~8共8段彼此相互重疊的8-mer寡核苷酸形成完全的雙鏈分子，但不能與第9段8-mer寡核苷酸形成完全的雙鏈分子。根據(jù)相鄰的兩段8-mer寡核苷酸之間各自具有7個(gè)堿基的重疊情況，可以構(gòu)建出互補(bǔ)的DNA序列。靶DNA片段II的雜交結(jié)果表明，橫跨其第8位堿基T的6段8-mer寡核苷酸的雙鏈體，由于含有內(nèi)部的堿基錯(cuò)配，因此其雜交效率明顯下降；但與第1和第8兩段8-mer寡聚體形成的具有末端G-T錯(cuò)配的雙鏈分子，其穩(wěn)定性下降并不顯著。與第9段8-mer寡核苷酸能雜交形成完全的雙鏈體分子，證實(shí)與片段I相比，它在第8位發(fā)生了由C堿基到T堿基的變化。現(xiàn)在是17頁\一共有66頁\編輯于星期四17五、基因芯片測序現(xiàn)在是18頁\一共有66頁\編輯于星期四18基因芯片測序流程現(xiàn)在是19頁\一共有66頁\編輯于星期四19六、最新測序技術(shù)1.新一代測序技術(shù)（Nextgenerationsequencingtechnology）美國RocheAppliedScience公司的454基因組測序儀美國Illumina公司英國Solexatechnology公司合作開發(fā)的Illumina測序儀美國AppliedBiosystems公司的SOLiD測序儀Dover/Harvard公司的Polonator測序儀美國Helicos公司的HeliScope單分子測序儀

所有這些新型測序儀都使用了一種新的測序策略——循環(huán)芯片測序法（cyclic-arraysequencing），也可將其稱為“新一代測序技術(shù)或者第二代測序技術(shù)”。現(xiàn)在是20頁\一共有66頁\編輯于星期四20焦磷酸測序邊合成邊測序

邊連接邊測序3730xlSanger雙脫氧核苷酸新一代測序技術(shù)的發(fā)展為基因組學(xué)研究帶來了更大的機(jī)遇現(xiàn)在是21頁\一共有66頁\編輯于星期四21現(xiàn)在是22頁\一共有66頁\編輯于星期四22幾種新一代測序儀的比較現(xiàn)在是23頁\一共有66頁\編輯于星期四23新一代測序技術(shù)的應(yīng)用現(xiàn)在是24頁\一共有66頁\編輯于星期四242.第三代測序技術(shù)（Thirdgenerationsequencingtechnology）英國牛津納米孔公司——基于納米孔的單分子讀取技術(shù)。該技術(shù)在測序時(shí)DNA分子依靠核酸外切酶一次一個(gè)堿基地通過小孔，無需多次擴(kuò)增和熒光標(biāo)記?，F(xiàn)在是25頁\一共有66頁\編輯于星期四25第八節(jié) 轉(zhuǎn)基因技術(shù)一、植物基因轉(zhuǎn)化載體系統(tǒng)的構(gòu)建二、受體材料的選擇三、植物遺傳轉(zhuǎn)化體系四、轉(zhuǎn)化體的篩選和鑒定現(xiàn)在是26頁\一共有66頁\編輯于星期四26藍(lán)色妖姬，轉(zhuǎn)基因藍(lán)玫瑰？現(xiàn)在是27頁\一共有66頁\編輯于星期四27現(xiàn)在是28頁\一共有66頁\編輯于星期四28適宜外植體的選擇及再生體系的建立抗生素篩選壓的確定及農(nóng)桿菌菌株的選擇遺傳轉(zhuǎn)化操作載體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化方法DNA直接導(dǎo)入法種質(zhì)系統(tǒng)法選擇培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因植株鑒定獲得再生植株轉(zhuǎn)化質(zhì)粒的構(gòu)建轉(zhuǎn)基因植株的繁殖與應(yīng)用利用報(bào)告基因Southern雜交Northern雜交Western雜交植物遺傳轉(zhuǎn)化流程現(xiàn)在是29頁\一共有66頁\編輯于星期四291.一元載體系統(tǒng)一元載體系統(tǒng)是中間表達(dá)載體與改造后的受體Ti質(zhì)粒通過同源重組所產(chǎn)生的一種復(fù)合型載體，通常又稱為共整合載體。一、植物基因轉(zhuǎn)化載體系統(tǒng)的構(gòu)建現(xiàn)在是30頁\一共有66頁\編輯于星期四302.雙元載體系統(tǒng)雙元載體系統(tǒng)是指兩個(gè)分別含有T-DNA和Vir區(qū)的相容性突變Ti質(zhì)粒構(gòu)成的雙質(zhì)粒系統(tǒng)，由于其T-DNA和Vir區(qū)在兩個(gè)獨(dú)立的質(zhì)粒上，通過反式激活T-DNA轉(zhuǎn)移，故又稱為反式載體。一元載體(順式載體)雙元載體(反式載體)現(xiàn)在是31頁\一共有66頁\編輯于星期四31二、受體材料的選擇受體是指用于接受外源DNA的轉(zhuǎn)化材料。良好的植物基因轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)應(yīng)滿足如下條件：1.高效穩(wěn)定的再生能力；2.受體材料要有較高的遺傳穩(wěn)定性；3.外植體來源方便，如胚和其它器官等；4.對(duì)篩選劑敏感；5.轉(zhuǎn)化率高。現(xiàn)在是32頁\一共有66頁\編輯于星期四32常用的受體材料有以下幾大類型:1.愈傷組織再生系統(tǒng)外植體材料經(jīng)過脫分化培養(yǎng)誘導(dǎo)形成愈傷組織，轉(zhuǎn)化(帶有目的基因質(zhì)粒的農(nóng)桿菌侵染)，分化培養(yǎng)獲得再生植株。優(yōu)點(diǎn)：外植體來源廣，繁殖快，易接受外源基因，轉(zhuǎn)化效率高。缺點(diǎn)：遺傳穩(wěn)定性差、嵌合體因此需要連續(xù)的再生系統(tǒng)現(xiàn)在是33頁\一共有66頁\編輯于星期四332.直接分化再生系統(tǒng)

外植體材料細(xì)胞不經(jīng)過脫分化形成愈傷組織階段，而是直接分化出不定芽形成再生植株。優(yōu)點(diǎn)：周期短、操作簡單，體細(xì)胞變異小，遺傳穩(wěn)定；缺點(diǎn)：材料局限，轉(zhuǎn)化率低?，F(xiàn)在是34頁\一共有66頁\編輯于星期四343.原生質(zhì)體再生系統(tǒng)原生質(zhì)體恢復(fù)細(xì)胞壁具有分化再生能力，是應(yīng)用最早的再生受體系統(tǒng)之一。優(yōu)點(diǎn)：高效、廣泛地?cái)z取外源DNA或遺傳物質(zhì)，獲得基因型一致的克隆細(xì)胞，所獲轉(zhuǎn)基因植株嵌合體少，適用于多種轉(zhuǎn)化系統(tǒng)；缺點(diǎn)：不易制備、再生困難和變異程度高?，F(xiàn)在是35頁\一共有66頁\編輯于星期四354.胚狀體再生系統(tǒng)是指具有胚胎性質(zhì)的個(gè)體。優(yōu)點(diǎn)：個(gè)體數(shù)目巨大、同質(zhì)性好，接受外源基因能力強(qiáng)，嵌合體少，易于培養(yǎng)、再生。缺點(diǎn)：技術(shù)含量高，多數(shù)植物不易獲得胚狀體?，F(xiàn)在是36頁\一共有66頁\編輯于星期四365.生殖細(xì)胞受體系統(tǒng)以生殖細(xì)胞如花粉粒、卵細(xì)胞等受體細(xì)胞進(jìn)行外源基因轉(zhuǎn)化的系統(tǒng)。一是利用組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行小孢子和卵細(xì)胞的單倍體培養(yǎng)、轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)；二是直接利用花粉和卵細(xì)胞受精過程進(jìn)行基因轉(zhuǎn)化，如花粉管導(dǎo)入法，花粉粒浸泡法，子房微針注射法等。現(xiàn)在是37頁\一共有66頁\編輯于星期四37三、植物遺傳轉(zhuǎn)化體系（一）載體型遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)最常見的轉(zhuǎn)基因方法。將外源基因重組進(jìn)入適合的載體系統(tǒng)，通過載體將攜帶的外源基因?qū)胫参锛?xì)胞，整合在核染色體組中并隨核染色體復(fù)制和表達(dá)。農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒（tumor-inducingplasmid）或Ri質(zhì)粒(root-indcing

plasmid)介導(dǎo)法是迄今為止植物基因工程中應(yīng)用最多、機(jī)理最清楚、最理想的載體轉(zhuǎn)移方法?，F(xiàn)在是38頁\一共有66頁\編輯于星期四38農(nóng)桿菌共培養(yǎng)侵染誘導(dǎo)愈傷組織分化生芽生根葉盤轉(zhuǎn)化法(1)葉盤法

雙子葉植物較為常用、簡單有效的方法?，F(xiàn)在是39頁\一共有66頁\編輯于星期四39(2)真空滲入法將適宜轉(zhuǎn)化的健壯植株倒置浸于裝有攜帶外源目的基因的農(nóng)桿菌滲入培養(yǎng)基的容器中，經(jīng)真空處理，造傷，使農(nóng)桿菌通過傷口感染植株，在農(nóng)桿菌的介導(dǎo)下，發(fā)生遺傳轉(zhuǎn)化。該法簡便、快速、可靠，不需要組織培養(yǎng)。(3)愈傷組織共培養(yǎng)(4)原生質(zhì)體共培養(yǎng)現(xiàn)在是40頁\一共有66頁\編輯于星期四40（二）DNA直接轉(zhuǎn)化系統(tǒng)1.化學(xué)刺激法細(xì)胞融合劑：聚乙二醇（PEG）、聚乙烯醇（PVC）轉(zhuǎn)化順利，對(duì)細(xì)胞傷害??；避免嵌合體的生成；易于選擇；便于進(jìn)行理論研究；受體廣泛。

優(yōu)點(diǎn)：現(xiàn)在是41頁\一共有66頁\編輯于星期四41將外源DNA包裹在微小的鎢粉或金粉顆粒的表面，借助高壓動(dòng)力射入受體細(xì)胞或組織，最后整合到植物基因組并得以表達(dá)。步驟簡單易行：適合于大多數(shù)細(xì)胞或組織，克服了受體材料的限制，不必制備原生質(zhì)體，具有相當(dāng)廣泛的應(yīng)用范圍，已經(jīng)成為植物細(xì)胞轉(zhuǎn)化最有效方法之一。2.基因槍轟擊法（微彈轟擊技術(shù)micro-projectilebombardment)

現(xiàn)在是42頁\一共有66頁\編輯于星期四423.高壓電穿孔法電擊法＋＋＋＋＋＋＋－－－－－－－利用高壓脈沖作用，在原生質(zhì)體上形成可逆的瞬間通道，從而促進(jìn)外源DNA的攝取?，F(xiàn)在是43頁\一共有66頁\編輯于星期四434.微注射法

細(xì)胞操作：利用瓊脂糖包埋、聚賴氨酸粘連和微吸管吸附等方式將受體細(xì)胞（原生質(zhì)體或生殖細(xì)胞）固定，然后將供體DNA或RNA直接注射進(jìn)入受體細(xì)胞。子房注射法或花粉管通道法：具有較大子房或胚囊的植株可在田間進(jìn)行活體操作。操作簡便、成本低?，F(xiàn)在是44頁\一共有66頁\編輯于星期四44四、轉(zhuǎn)化體的篩選和鑒定1.轉(zhuǎn)化體的篩選外源目的基因轉(zhuǎn)化頻率低目的基因已被整合到核基因組并表達(dá)轉(zhuǎn)化細(xì)胞更少使用特異性選擇標(biāo)記基因（selectablemarkergenes）進(jìn)行標(biāo)記，有效地選擇出真正轉(zhuǎn)化細(xì)胞。常用選擇標(biāo)記基因：抗生素抗性基因；除草劑抗性基因?qū)⑦x擇標(biāo)記基因與適當(dāng)啟動(dòng)子構(gòu)成嵌合基因，克隆到質(zhì)粒載體上，與目的基因同時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)化。標(biāo)記基因在受體細(xì)胞表達(dá)，使轉(zhuǎn)化細(xì)胞具有抵抗相應(yīng)抗生素或除草劑的能力而存活下來。非轉(zhuǎn)化細(xì)胞則被抑制、殺死?，F(xiàn)在是45頁\一共有66頁\編輯于星期四452.轉(zhuǎn)化體的鑒定（1）DNA水平的鑒定（2）轉(zhuǎn)錄水平的鑒定（3）翻譯水平的鑒定現(xiàn)在是46頁\一共有66頁\編輯于星期四46第九節(jié) RNAi技術(shù)RNA干擾（RNAinterference,RNAi）是指在進(jìn)化過程中高度保守的、由雙鏈RNA（double-strandedRNA，dsRNA）誘發(fā)的、同源mRNA高效特異性降解的現(xiàn)象。一、RNAi的發(fā)現(xiàn)1995年，康乃爾大學(xué)的Guo等秀麗新小桿線蟲(C.elegans)現(xiàn)在是47頁\一共有66頁\編輯于星期四47二、RNA干擾的作用機(jī)制現(xiàn)在是48頁\一共有66頁\編輯于星期四48基因敲除又叫基因打靶，通過外源DNA與染色體DNA之間的同源重組，進(jìn)行精確的定點(diǎn)修飾和基因改造，具有專一性強(qiáng)、染色體DNA可與目的片段共同穩(wěn)定遺傳等特點(diǎn)。完全基因敲除條件型基因敲除第十節(jié)基因敲除技術(shù)(geneknock-out)現(xiàn)在是49頁\一共有66頁\編輯于星期四49現(xiàn)在是50頁\一共有66頁\編輯于星期四50第十節(jié) 蛋白組學(xué)及其研究技術(shù)一、蛋白質(zhì)組學(xué)的研究內(nèi)容二、蛋白質(zhì)組學(xué)的研究技術(shù)1.免疫組織化學(xué)技術(shù)2.雙向電泳技術(shù)3.生物質(zhì)譜技術(shù)4.酵母雙雜交和噬菌體展示技術(shù)5.芯片技術(shù)6.凝膠阻滯電泳（EMSA）7.DNaseI足跡法現(xiàn)在是51頁\一共有66頁\編輯于星期四51mRNA經(jīng)翻譯產(chǎn)生蛋白質(zhì)，一個(gè)細(xì)胞在特定生理或病理狀態(tài)下表達(dá)的所有種類的蛋白質(zhì)稱為蛋白質(zhì)組(proteome)蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)是1994年澳大利亞學(xué)者Wilkins和Williams提出的。蛋白組學(xué)(proteomics)旨在闡明生物體全部蛋白質(zhì)的表達(dá)模式及功能模式，其內(nèi)容包括鑒定蛋白質(zhì)的表達(dá)、存在方式、結(jié)構(gòu)、功能和相互作用等?，F(xiàn)在是52頁\一共有66頁\編輯于星期四52一、蛋白質(zhì)組學(xué)的研究內(nèi)容1.蛋白質(zhì)鑒定2.翻譯后修飾3.蛋白質(zhì)功能確定4.醫(yī)學(xué)應(yīng)用現(xiàn)在是53頁\一共有66頁\編輯于星期四53二、蛋白質(zhì)組學(xué)的研究技術(shù)蛋白質(zhì)組學(xué)分為結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)組學(xué)和功能蛋白質(zhì)組學(xué)兩大類。前者主要研究蛋白質(zhì)氨基酸序列及三維結(jié)構(gòu)、種類分析和數(shù)量確定；后者主要研究蛋白質(zhì)的功能和相互作用。現(xiàn)在是54頁\一共有66頁\編輯于星期四54（一）免疫組織化學(xué)技術(shù)現(xiàn)在是55頁\一共有66頁\編輯于星期四55（二）雙向電泳技術(shù)現(xiàn)在是56頁\一共有66頁\編輯于星期四56（三）生物質(zhì)譜技術(shù)現(xiàn)在是57頁\一共有66頁\編輯于星期四57現(xiàn)在是58頁\一共有66頁\編輯于星期四58（四）酵母雙雜交和噬菌體展示技術(shù)現(xiàn)在是59頁\一共有66頁\編輯于星期四59（五）芯片技術(shù)現(xiàn)在是60頁\一共有66頁\編輯