微生物微生物

微生物微生物第1頁(yè)/共59頁(yè)一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物質(zhì)量控制的意義

二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物等級(jí)第2頁(yè)/共59頁(yè)

不可以在以下情況使收集整理我們發(fā)布的免費(fèi)資源后，刻錄光碟銷售。一、微生物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化的意義不同的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳背景不同,對(duì)某種疾病的易感性也不同.某些烈性傳染病如鼠痘、兔出血癥、犬細(xì)小病毒性腸炎等的流行，可導(dǎo)致動(dòng)物大批死亡或質(zhì)量下降，從而給動(dòng)物的生產(chǎn)和實(shí)驗(yàn)的正常進(jìn)行帶來(lái)嚴(yán)重影響，另外許多實(shí)驗(yàn)動(dòng)物傳染病為人獸共患性疾病，這些傳染病可在人與動(dòng)物之間傳播流行，因而也對(duì)飼養(yǎng)和研究人員的健康構(gòu)成威脅。第3頁(yè)/共59頁(yè)1.預(yù)防隱性感染和潛伏感染；2.防止人畜共患??；3.避免對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響；4.生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及生物制品第4頁(yè)/共59頁(yè)1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物感染的形式

顯性感染：具有明顯的病癥；隱性感染：病原體攜帶者，可因刺激而發(fā)病，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，向外排毒；潛伏感染：感染的潛伏期，有的很長(zhǎng)時(shí)間。病原攜帶狀態(tài)：經(jīng)過(guò)感染后耐過(guò)感染幸存下來(lái)，外觀正常，但是影響實(shí)驗(yàn)的效果。第5頁(yè)/共59頁(yè)潛伏感染實(shí)驗(yàn)刺激可能激發(fā)疾??；如：乳酸脫氫酶病毒（LDHV），潛伏感染時(shí)會(huì)引起乳酸脫氫酶升高，干擾動(dòng)物的免疫功能，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。第6頁(yè)/共59頁(yè)

隱性感染的主要危害是引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生物學(xué)特性的改變，獲得免疫或隱性感染的動(dòng)物，會(huì)給人假像。如:仙臺(tái)病毒，是大、小鼠中一種常見(jiàn)病的病原體，流行時(shí)感染陽(yáng)性為50%以上。多為隱性感染，在飼養(yǎng)環(huán)境發(fā)生變化時(shí)，常可急性爆發(fā)，造成在動(dòng)物群體中流行肺炎。特點(diǎn)：傳播快、流行廣，呈急性肺炎變化。主要是幼鼠和子鼠發(fā)病，成年鼠多隱性感染。臨床癥狀：類似感冒，患鼠打“呼?！?，被毛粗亂。第7頁(yè)/共59頁(yè)2.人畜共患病人獸共患病病原體病毒1、狂犬病病毒病2、流行性出血熱病毒病3、淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒病4、猴皰疹病毒病細(xì)菌5、沙門(mén)氏菌病6、志賀氏菌病7、結(jié)核分枝桿菌病寄生蟲(chóng)8、弓形蟲(chóng)病9、體外寄生蟲(chóng)病第8頁(yè)/共59頁(yè)是一種由病毒所致的經(jīng)鼠傳播的急性傳染病，目前國(guó)際上統(tǒng)稱為腎綜合征出血熱。

當(dāng)患者出現(xiàn)了“三痛”（頭痛，眼眶痛，腰痛），“三紅”（臉部，頸部，上胸部紅腫出血）癥狀時(shí)要當(dāng)心，這是出血熱的典型癥狀，應(yīng)盡早就醫(yī)。1）、流行性出血熱(EHFV)漢坦病毒（HV)第9頁(yè)/共59頁(yè)一種自然疫源性疾病，主要在野鼠中流行，隱性感染為主。在常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中主要感染大、小鼠、豚鼠、家兔。在實(shí)驗(yàn)室里，防止感染流行性出血熱的最主要措施是滅野鼠、防止野鼠進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。第10頁(yè)/共59頁(yè)

在靈長(zhǎng)類動(dòng)物中帶菌率較高，引起細(xì)菌性痢疾

急性、慢性和帶菌三種表現(xiàn)形式急性表現(xiàn)為高熱、嘔吐、排膿血便，劇烈腹痛，出現(xiàn)脫水和循環(huán)衰竭，如治療不及時(shí)極易造成動(dòng)物死亡。2）、志賀氏菌（Shigella）第11頁(yè)/共59頁(yè)中間宿主：貓等45種哺乳動(dòng)物、70種鳥(niǎo)類和5種冷血?jiǎng)游?。終末宿主：貓3）、弓形蟲(chóng)（Toxoplasmagondii）病第12頁(yè)/共59頁(yè)二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分級(jí)1.依據(jù)2.標(biāo)準(zhǔn)與等級(jí)第13頁(yè)/共59頁(yè)1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物分級(jí)的依據(jù)1）、動(dòng)物本身的凈化程度2）、動(dòng)物生活環(huán)境的凈化程度第14頁(yè)/共59頁(yè)二、國(guó)內(nèi)與國(guó)際實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分類及等級(jí)按對(duì)微生物學(xué)質(zhì)量的控制，可將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為四類：無(wú)菌動(dòng)物(germfreeanimal,GFA)和悉生動(dòng)物(gnotobioticanimal,GNA)無(wú)特定病原體動(dòng)物(specificpatho-genfreeanimal,SPFA)清潔動(dòng)物(cleananimal,CLA)普通動(dòng)物(conventionalanimal,CVA)第15頁(yè)/共59頁(yè)普通級(jí)動(dòng)物，飼養(yǎng)于開(kāi)放系統(tǒng)無(wú)特定病原體動(dòng)物，飼養(yǎng)于屏障系統(tǒng)悉生動(dòng)物及無(wú)菌動(dòng)物，飼養(yǎng)于隔離系統(tǒng)國(guó)際：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為三個(gè)等級(jí)213第16頁(yè)/共59頁(yè)4321普通級(jí)動(dòng)物，飼養(yǎng)于開(kāi)放系統(tǒng)無(wú)特定病原體動(dòng)物，飼養(yǎng)于屏障系統(tǒng)系統(tǒng)悉生動(dòng)物及無(wú)菌動(dòng)物，飼養(yǎng)于隔離系統(tǒng)清潔級(jí)動(dòng)物，飼養(yǎng)于屏障系統(tǒng)國(guó)內(nèi)：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為四個(gè)等級(jí)第17頁(yè)/共59頁(yè)1、普通動(dòng)物CVA定義

種類及要求

飼養(yǎng)管理

應(yīng)用

第18頁(yè)/共59頁(yè)1）.CVA定義要求不攜帶所規(guī)定的人畜共患病病原和動(dòng)物烈性傳染病病原,以及人畜共患寄生蟲(chóng)

是微生物和寄生蟲(chóng)控制級(jí)別最低的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，不能檢出下列病原微生物：如沙門(mén)菌、皮膚病原真菌，結(jié)核分支桿菌、狂犬病病毒和兔出血癥病毒等;與CLA相比，排除的微生物較少，表面上健康無(wú)病，很可能有隱性感染的病原體存在；

第19頁(yè)/共59頁(yè)2）.種類及要求

常見(jiàn)的普通級(jí)動(dòng)物有豚鼠、地鼠、兔、犬和猴。2001年版實(shí)驗(yàn)動(dòng)物國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)取消了普通級(jí)小鼠和大鼠等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，不再設(shè)普通級(jí)小鼠和大鼠等級(jí)。按標(biāo)準(zhǔn)，普通級(jí)動(dòng)物應(yīng)排除的病毒、細(xì)菌、體外寄生蟲(chóng)的種類見(jiàn)附表。第20頁(yè)/共59頁(yè)3）.飼養(yǎng)管理普通級(jí)動(dòng)物飼養(yǎng)在普通環(huán)境中，對(duì)溫度、濕度、換氣次數(shù)、落下菌數(shù)、氨濃度、噪聲和照明等實(shí)行控制，飼養(yǎng)管理上采取一定的防護(hù)措施，預(yù)防人獸共患病和動(dòng)物烈性傳染病的發(fā)生。

第21頁(yè)/共59頁(yè)4）.應(yīng)用

普通級(jí)動(dòng)物作實(shí)驗(yàn)時(shí)，刺激因素可能誘發(fā)隱性或潛伏感染的動(dòng)物發(fā)生顯性感染，并出現(xiàn)組織器官的結(jié)構(gòu)、形態(tài)、生理生化、血液與免疫學(xué)改變，將不同程度的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，因此該等級(jí)動(dòng)物僅供教學(xué)和科研預(yù)實(shí)驗(yàn)使用。第22頁(yè)/共59頁(yè)

低：微生物分級(jí)中級(jí)別最低低：生活的環(huán)境要求低低：微生物控制標(biāo)準(zhǔn)低低：質(zhì)量較低低：在實(shí)驗(yàn)研究中敏感性低普通動(dòng)物特點(diǎn)（5個(gè)低）第23頁(yè)/共59頁(yè)2、清潔動(dòng)物CLA定義

種類及要求

飼養(yǎng)管理

應(yīng)用

第24頁(yè)/共59頁(yè)1）定義

除普通動(dòng)物應(yīng)排除的病原和寄生蟲(chóng)外，不攜帶對(duì)動(dòng)物危害大和對(duì)科研干擾大的病原和寄生蟲(chóng)。如小鼠肝炎病毒、仙臺(tái)病毒、多殺巴氏桿菌、泰澤氏菌等。特征：體內(nèi)可以有一些微生物存在，但不具有傳染性，不能有隱性感染，屬于健康動(dòng)物。應(yīng)用廣泛，培育容易，成本較低。用于一般教學(xué)和科學(xué)研究。第25頁(yè)/共59頁(yè)2）.來(lái)源、種類及要求

來(lái)源于SPFA或無(wú)菌剖腹產(chǎn)動(dòng)物，常見(jiàn)的CLA有小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠和兔。2001年版實(shí)驗(yàn)動(dòng)物國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)不設(shè)清潔級(jí)犬、猴標(biāo)準(zhǔn)，清潔動(dòng)物應(yīng)排除的病毒、細(xì)菌、體外寄生蟲(chóng)種類見(jiàn)表。第26頁(yè)/共59頁(yè)3）.飼養(yǎng)環(huán)境的要求

飼養(yǎng)在溫度、濕度相對(duì)恒定的半屏障環(huán)境中，該環(huán)境嚴(yán)格控制人員、物品和環(huán)境空氣的進(jìn)出；所使用的籠器具、器械、墊料等一切用具及飼料、飲用水都需經(jīng)過(guò)消毒滅菌處理；進(jìn)出動(dòng)物室的人員必須遵守屏障環(huán)境動(dòng)物室的操作規(guī)范，要淋浴、穿滅菌衣、戴滅菌手套和口罩等。第27頁(yè)/共59頁(yè)4）.應(yīng)用要求排除的微生物和寄生蟲(chóng)多于普通級(jí)動(dòng)物，在實(shí)驗(yàn)中受動(dòng)物疾病的干擾較少，其敏感性和重復(fù)性也較好，比SPF動(dòng)物容易達(dá)到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。目前，清潔動(dòng)物在我國(guó)已廣泛應(yīng)用于科學(xué)研究。短中期，對(duì)細(xì)菌要求不嚴(yán)格以及免疫系統(tǒng)無(wú)抑制作用的實(shí)驗(yàn)。第28頁(yè)/共59頁(yè)3、無(wú)特殊病原體動(dòng)物SPFA定義

種類及要求

飼養(yǎng)管理

應(yīng)用

第29頁(yè)/共59頁(yè)1）.定義

指在屏障系統(tǒng)或隔離系統(tǒng)飼育的，經(jīng)檢測(cè)體內(nèi)外無(wú)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的特定病原微生物和寄生蟲(chóng)存在，但可帶有非特定的微生物和寄生蟲(chóng)的動(dòng)物。如銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌等。第30頁(yè)/共59頁(yè)SPFA標(biāo)準(zhǔn)不同的國(guó)家有不同標(biāo)準(zhǔn)沒(méi)有某種病原體，不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的動(dòng)物；必須將所有常見(jiàn)的病原體，不管是否影響實(shí)驗(yàn)全部要求排除；要求排除對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物可能有危害的病原體，要求排除對(duì)實(shí)驗(yàn)有影響的特定病原體。第31頁(yè)/共59頁(yè)2）.來(lái)源、種類及要求

種群來(lái)源于無(wú)菌動(dòng)物或剖腹產(chǎn)凈化動(dòng)物，常見(jiàn)的SPF動(dòng)物有小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、兔、犬和猴。按標(biāo)準(zhǔn)，SPF動(dòng)物應(yīng)排除的病毒、細(xì)菌、體外寄生蟲(chóng)的種類見(jiàn)表。第32頁(yè)/共59頁(yè)3）.飼養(yǎng)環(huán)境的要求飼養(yǎng)于屏障環(huán)境中，該環(huán)境嚴(yán)格控制人員、物品和環(huán)境空氣的進(jìn)出。SPFA房層流架(生物凈化間)

濾過(guò)帽第33頁(yè)/共59頁(yè)屏障系統(tǒng)

SPF動(dòng)物和清潔級(jí)動(dòng)物的飼養(yǎng)管理獨(dú)立換氣籠具IVC(1)環(huán)境：屏障系統(tǒng)第34頁(yè)/共59頁(yè)(2)飲水、飼料、墊料要經(jīng)過(guò)高壓滅菌第35頁(yè)/共59頁(yè)(3)工作人員要嚴(yán)格按照規(guī)范無(wú)菌操作第36頁(yè)/共59頁(yè)（4）定期對(duì)動(dòng)物和環(huán)境檢測(cè)第37頁(yè)/共59頁(yè)4）.SPFA的應(yīng)用

研究工作：藥理學(xué)、毒理學(xué)、腫瘤免疫學(xué)、傳染病等廣泛應(yīng)用血清和疫苗制造：細(xì)菌、病毒性診斷血清，各種疫苗生產(chǎn)需要大量的SPFA的組織、臟器等。生物學(xué)鑒定：破傷風(fēng)抗病毒、百日咳菌苗、狂犬病疫苗要用SPF鼠；口蹄病疫苗、結(jié)核菌素要用SPF豚鼠；白喉抗毒素、熱原試驗(yàn)要用SPF家兔等第38頁(yè)/共59頁(yè)4、無(wú)菌動(dòng)物GFA定義

來(lái)源、種類及要求

特征應(yīng)用

第39頁(yè)/共59頁(yè)1）.GFA定義用現(xiàn)有的檢驗(yàn)技術(shù)在動(dòng)物體內(nèi)外的任何部位均檢不出任何活的微生物和寄生蟲(chóng)的動(dòng)物。1、殘存的細(xì)菌在適當(dāng)?shù)臈l件下又會(huì)在體內(nèi)增殖2、它們給動(dòng)物造成的影響卻是無(wú)法消除的（病變？抗體？）第40頁(yè)/共59頁(yè)

無(wú)菌動(dòng)物在自然界并不存在，必須人為的建成。

其理論基礎(chǔ)和實(shí)踐依據(jù)——胎盤(pán)屏障和屏障觀念

無(wú)菌動(dòng)物必須是生來(lái)就無(wú)菌的動(dòng)物。

用剖腹產(chǎn)技術(shù)和無(wú)菌技術(shù)獲得1895年有了這個(gè)設(shè)想開(kāi)始。第41頁(yè)/共59頁(yè)2）.來(lái)源、種類及要求其來(lái)源是普通動(dòng)物經(jīng)無(wú)菌剖腹產(chǎn)手術(shù)，幼仔在無(wú)菌隔離器中人工哺育或由其他無(wú)菌動(dòng)物代乳飼育而成。常見(jiàn)的無(wú)菌動(dòng)物有小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠和兔。按標(biāo)準(zhǔn)，無(wú)菌動(dòng)物應(yīng)排除的病毒、細(xì)菌、體外寄生蟲(chóng)的種類見(jiàn)表

第42頁(yè)/共59頁(yè)第43頁(yè)/共59頁(yè)育成動(dòng)物觀察

日常屏障維持(消毒液噴霧)

工作人員操作高溫高壓滅菌器

屏障通道-淋浴室

第44頁(yè)/共59頁(yè)

消化系統(tǒng)：腸道肌層薄。盲腸肥大。肝臟重量相對(duì)下降。營(yíng)養(yǎng)：體內(nèi)不能合成維生素B和K。代謝：代謝周期長(zhǎng)，無(wú)菌動(dòng)物血液中含氮量少，腸管對(duì)水的吸收率低。

壽命：長(zhǎng)。3）、特征第45頁(yè)/共59頁(yè)

免疫器官相對(duì)小血液中無(wú)抗體白細(xì)胞數(shù)目相對(duì)少，且恒定產(chǎn)生丙種球蛋白的能力很弱

無(wú)菌動(dòng)物在因?yàn)橛幸陨咸卣?，所以?duì)微生物感染敏感！第46頁(yè)/共59頁(yè)4）.無(wú)菌動(dòng)物的應(yīng)用微生物學(xué)研究免疫學(xué)研究放射醫(yī)學(xué)研究營(yíng)養(yǎng)、代謝研究老年病學(xué)研究心血管疾病研究毒理學(xué)研究腫瘤學(xué)研究宇航醫(yī)學(xué)研究寄生蟲(chóng)學(xué)研究口腔醫(yī)學(xué)研究第47頁(yè)/共59頁(yè)在免疫學(xué)研究中的應(yīng)用無(wú)菌動(dòng)物血中無(wú)特異性抗體，很適合于各種免疫現(xiàn)象的研究。第48頁(yè)/共59頁(yè)5.悉生動(dòng)物GNA一、基本概念

1、用現(xiàn)代的技術(shù)和手段從動(dòng)物體內(nèi)只能檢測(cè)到已知菌的動(dòng)物；

2、飼養(yǎng)在隔離系統(tǒng)；

3、生命力比無(wú)菌動(dòng)物強(qiáng)；

4、可以排除動(dòng)物體內(nèi)帶有的各種不明確的微生物對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾，更不會(huì)帶有傳染性疾患。！第49頁(yè)/共59頁(yè)2.悉生動(dòng)物特點(diǎn)：微生物特點(diǎn)體內(nèi)攜帶有已知微生物來(lái)源無(wú)菌動(dòng)物接種或投入微生物飼養(yǎng)管理

必須飼養(yǎng)在溫濕度恒定的百級(jí)空氣凈化的隔離系統(tǒng)中，實(shí)行嚴(yán)格的微生物控制。第50頁(yè)/共59頁(yè)其他

與無(wú)菌動(dòng)物比較

悉生動(dòng)物腸道內(nèi)存在細(xì)菌可以合成維生素，不會(huì)像無(wú)菌動(dòng)物一樣發(fā)生維生素缺乏癥。

抵抗力、生活力較強(qiáng)，易于飼養(yǎng)管理。第51頁(yè)/共59頁(yè)3）、悉生動(dòng)物的應(yīng)用從悉生動(dòng)物的來(lái)源我們知道，悉生動(dòng)物來(lái)源于無(wú)菌動(dòng)物，所以無(wú)菌動(dòng)物在應(yīng)用于微生物學(xué)研究和抗體制備等領(lǐng)域的時(shí)候已經(jīng)是屬于悉生動(dòng)物的范疇了。微生物學(xué)中的研究

(1)微生物間的拮抗作用

(2)微生物和宿主之間關(guān)系

(3)病毒學(xué)研究第52頁(yè)/共59頁(yè)

4）、悉生動(dòng)物的管理隔離系統(tǒng)所用一切經(jīng)過(guò)消毒滅菌處理。工作人員不能用手直接接觸動(dòng)物。定期檢測(cè)第53頁(yè)/共59頁(yè)不同等級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的比較

第54頁(yè)/共59頁(yè)二、對(duì)科研實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響的比較

GFSPFCLCV傳染病無(wú)無(wú)無(wú)未知寄生蟲(chóng)無(wú)無(wú)無(wú)未知試驗(yàn)結(jié)果明確明確明確有疑問(wèn)用動(dòng)物數(shù)少少較少多或大量統(tǒng)計(jì)價(jià)值很好可能好較好不準(zhǔn)確長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)好好可能好困難死亡率很少少