第七章體外抗原抗體反應概述演示文稿

第七章體外抗原抗體反應概述演示文稿現(xiàn)在是1頁\一共有43頁\編輯于星期四優(yōu)選第七章體外抗原抗體反應概述ppt現(xiàn)在是2頁\一共有43頁\編輯于星期四抗原抗體反應：是指抗原與相應抗體的特異性結(jié)合反應體內(nèi)殺菌、溶菌、調(diào)理、中和毒素免疫病理損傷—超敏反應、免疫性疾病等體外：凝集、沉淀、溶細胞、中和毒素、補體結(jié)合等現(xiàn)在是3頁\一共有43頁\編輯于星期四現(xiàn)在是4頁\一共有43頁\編輯于星期四第一節(jié)抗原抗體反應的原理現(xiàn)在是5頁\一共有43頁\編輯于星期四

抗原抗體結(jié)合反應是抗原決定簇和抗體分子超變區(qū)之間的相互作用，是一種分子表面的特異的可逆的弱結(jié)合力（只能在極短距離內(nèi)才能發(fā)生效應）?？乖贵w結(jié)合反應的條件：①抗原與抗體間的特定部位的空間結(jié)構(gòu)必須相互吻合，具有互補性（先決條件）;②抗原決定簇與抗體超變區(qū)必須緊密接觸，才能有足夠的結(jié)合力，使抗原抗體分子結(jié)合在一起?，F(xiàn)在是6頁\一共有43頁\編輯于星期四不形成牢固的共價鍵，通過非共價鍵結(jié)合這種弱的結(jié)合力涉及幾種分子間的作用力一、抗原抗體的結(jié)合力1、靜電引力2、范德華引力3、氫鍵4、疏水作用力現(xiàn)在是7頁\一共有43頁\編輯于星期四1、靜電引力概念：抗原和抗體分子帶有相反電荷的氨基和羧基基團之間相互的引力。又稱庫倫引力。靜電引力的大小與兩個相互作用基團間的距離的平方成反比。現(xiàn)在是8頁\一共有43頁\編輯于星期四

二、范德華引力概念：抗原和抗體相互接近時，各自所攜帶的原子與原子、分子與分子由于分子極化作用而出現(xiàn)的引力。

結(jié)合力的大小與兩個相互作用基團的極化程度的乘積成正比、與它們之間距離的7次方成反比。

作用力最小

作用大小取決于二者分子空間構(gòu)型的互補性現(xiàn)在是9頁\一共有43頁\編輯于星期四

概念：供氫體上的氫原子與受氫體原子間的引力。

三、氫鍵結(jié)合力

供氫體：－COOH、－NH2和－OH

受氫體：氧、氮

氫鍵結(jié)合力與供氫體和受氫體之間距離的6次方成反比。

最具特異性（必須供氫體和受氫體互補才能實現(xiàn)氫鍵的結(jié)合）現(xiàn)在是10頁\一共有43頁\編輯于星期四四、疏水作用力（疏水鍵）

概念：兩個疏水基團在水溶液中相互接觸時，由于對水分子排斥而趨向聚集的力。

抗原決定簇與抗體上的結(jié)合點靠近，互相間正、負極性消失，親水層立即失去。

結(jié)合力最強，約占總結(jié)合力的50％?，F(xiàn)在是11頁\一共有43頁\編輯于星期四靜電引力：異性相吸（electrostaticforces）范德華引力:作用最?。╲anderWaalsinteractions）氫鍵:最具特異性（hydrogenbond）疏水作用力:作用最大（hydrophobicinteractions）

抗原抗體結(jié)合力示意圖抗原抗體結(jié)合力現(xiàn)在是12頁\一共有43頁\編輯于星期四現(xiàn)在是13頁\一共有43頁\編輯于星期四

結(jié)合力的大小

親和力（affinity）表示

親合力（avidity）現(xiàn)在是14頁\一共有43頁\編輯于星期四二、抗原抗體的親和力和親合力

親和力（affinity）：是抗體分子上一個抗原結(jié)合點與相應的抗原決定簇之間的相適應而結(jié)合的強度，是抗原與抗體間固有的結(jié)合力?，F(xiàn)在是15頁\一共有43頁\編輯于星期四現(xiàn)在是16頁\一共有43頁\編輯于星期四親和常數(shù)（K）：K值越大?抗體的親和力越高?與抗原結(jié)合越牢固抗體與抗原結(jié)合是可逆的反應，在平衡時其現(xiàn)在是17頁\一共有43頁\編輯于星期四親合力（avidity）：是指一個抗體分子與整個抗原表位之間結(jié)合的強度，與抗體結(jié)合價直接相關(guān)。另外也與親和力強弱有關(guān)。與抗體的結(jié)合價直接相關(guān)。親合力高，與抗原結(jié)合牢固不易解離?，F(xiàn)在是18頁\一共有43頁\編輯于星期四現(xiàn)在是19頁\一共有43頁\編輯于星期四親水膠體疏水膠體轉(zhuǎn)化NaCl可見反應血清學反應條件下，抗原抗體均帶負電荷，使極化的水分子在其周圍形成水化層，成為親水膠體。

當抗原與抗體結(jié)合使表面電荷減少，水化層變薄，失去親水性能，抗原抗體復合物成為疏水膠體在電解質(zhì)作用下，中和膠體粒子表面的電荷，使各疏水膠體之間靠攏，形成可見的抗原抗體復合物三、親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體現(xiàn)在是20頁\一共有43頁\編輯于星期四

第二節(jié)抗原抗體反應的特點1.特異性2.比例性3.可逆性4.階段性現(xiàn)在是21頁\一共有43頁\編輯于星期四

一、特異性（specificity）1、概念：一種抗原分子通常只能與其刺激機體后產(chǎn)生的抗體結(jié)合，這種抗原與抗體結(jié)合反應的專一性稱為特異性。特異性示意圖

現(xiàn)在是22頁\一共有43頁\編輯于星期四2、決定因素：由抗原決定簇和抗體分子超變區(qū)之間空間結(jié)構(gòu)的互補性決定的。3、應用：由于抗原抗體反應具有高度特異性，故可用已知的抗原（抗體）來檢測相應未知的抗體（或抗原）。現(xiàn)在是23頁\一共有43頁\編輯于星期四概念：兩種不同的抗原分子具有部分相同或類似結(jié)構(gòu)的抗原表位，可與彼此相應的抗血清發(fā)生反應。4、交叉反應（crossreactions）抗原抗體交叉反應示意圖B現(xiàn)在是24頁\一共有43頁\編輯于星期四三、比例性（proportionality）1、比例性是指抗原與抗體發(fā)生可見反應遵循一定的量比關(guān)系。2、以絮狀沉淀實驗為例，受抗原抗體比例性的影響非常明顯。3、根據(jù)所形成的沉淀物及抗原抗體比例關(guān)系繪制反應曲線?，F(xiàn)在是25頁\一共有43頁\編輯于星期四現(xiàn)在是26頁\一共有43頁\編輯于星期四現(xiàn)在是27頁\一共有43頁\編輯于星期四網(wǎng)格學說（圖）抗體的兩個Fab段分別結(jié)合兩個Ag分子，相互交叉結(jié)合連接成巨大的網(wǎng)格狀立體聚合物，（可見）。二者比例合適：現(xiàn)在是28頁\一共有43頁\編輯于星期四Ab/Ag過剩過剩方的結(jié)合價得不到飽和，大多數(shù)游離存在，只形成小分子復合物（不可見）?，F(xiàn)在是29頁\一共有43頁\編輯于星期四最適比(optimalratio)：是指形成沉淀物最多，上清液清晰，幾乎無游離抗原或抗體的抗原抗體濃度比。等價帶(equivalencezone)：形成沉淀物最多的抗原與抗體分子比例合適的范圍。帶現(xiàn)象：在等價帶前后，由于抗體和抗原過量，形成的沉淀物少，上清液中可測出游離的抗體或抗原的現(xiàn)象。

前帶(prozone)抗體過量時稱為。

后代(postzone）抗原過量時稱為。5、一組概念帶現(xiàn)象包括現(xiàn)在是30頁\一共有43頁\編輯于星期四在抗原抗體反應中，抗體（或抗原）與一定量的對應物結(jié)合出現(xiàn)可見反應所需的最小量稱為效價（或滴度），一般以最高稀釋倍數(shù)表示，正好是稀釋度的倒數(shù)。現(xiàn)在是31頁\一共有43頁\編輯于星期四

三、可逆性（reversibility)1、概念：是指抗原與相應抗體結(jié)合成復合物后，在一定條件下可解離為游離抗原與抗體的特性稱為抗原抗體結(jié)合的可逆性。2、原因：抗原抗體的結(jié)合是分子表面的非共價鍵結(jié)合，因此形成的復合物不牢固。3、抗原抗體反應動態(tài)平衡式如下：現(xiàn)在是32頁\一共有43頁\編輯于星期四4、決定抗原抗體解離的因素（1）抗體與相應抗原的親合力。親合力低的抗體與抗原形成的復合物較易解離。（2）環(huán)境因素對復合物的影響。

PH過高或過低、增加離子強度均可破壞靜電引力，使抗原抗體結(jié)合力下降，促使其解離。注意：解離后的抗原或抗體仍然保持其原有生物活性現(xiàn)在是33頁\一共有43頁\編輯于星期四四、階段性特異性結(jié)合兩個階段可見反應階段數(shù)秒～數(shù)分鐘，肉眼不可見數(shù)分～數(shù)小時肉眼可見現(xiàn)在是34頁\一共有43頁\編輯于星期四第三節(jié)抗原抗體反應影響因素一、反應物自身因素1.抗原：理化特性、Ag決定簇數(shù)量和種類。例如，可溶性抗原與相應抗體反應出現(xiàn)沉淀，而顆粒性抗原與相應抗體反應則出現(xiàn)凝集;單價抗原與抗體結(jié)合不出現(xiàn)可見反應;粗糙型細菌在生理鹽水中易出現(xiàn)自凝；紅細胞與IgG類抗體結(jié)合不出現(xiàn)直接凝集等。

現(xiàn)在是35頁\一共有43頁\編輯于星期四抗體是血清學反應中的關(guān)鍵因素，對反應的影響表現(xiàn)在以下三個方面:(1)來源:來自不同動物的免疫血清，其反應性有差異。家兔等大多數(shù)動物的免疫血清具有較寬的等價帶，通常在抗原過量時才易出現(xiàn)可溶性免疫復合物;馬等大動物和人的免疫血清等價帶較窄，少量的抗原或抗體過剩，均可形成可溶性免疫復合物.2.抗體現(xiàn)在是36頁\一共有43頁\編輯于星期四(2)特異性與親和力:特異性和親和力是影響血清學反應的兩個關(guān)鍵因素，它們共同影響試驗結(jié)果的準確程度。免疫動物早期獲得的抗血清特異性較好，但親和力低;后期獲得的抗血清一般親和力較高，但長期免疫易使免疫血清中抗體的類型和反應性變得更為復雜。因此，用于診斷的試劑必須盡量選用特異性高、親和力強的抗體，才能保證和提高試驗結(jié)果的可靠性?，F(xiàn)在是37頁\一共有43頁\編輯于星期四（3）濃度:

抗體的濃度往往是與抗原相對而言。合適的濃度才出現(xiàn)明顯的反應現(xiàn)象。因此許多試驗應進行抗體預滴定，找出最適反應濃度。現(xiàn)在是38頁\一共有43頁\編輯于星期四電解質(zhì):生理鹽水或緩沖液酸堿度:pH6～pH8溫度:15℃～40℃，37℃最適二、環(huán)境因素現(xiàn)在是39頁\一共有43頁\編輯于星期四（一）電解質(zhì)

抗原抗體結(jié)合后由親水性變?yōu)槭杷?，此時易受電解質(zhì)影響，如有適當濃度電解質(zhì)存在，就會使抗原抗體失去一部分電荷而相互凝集或沉淀，出現(xiàn)可見反應;若無電解質(zhì)存在，則不出現(xiàn)可見反應?，F(xiàn)在是40頁\一共有43頁\編輯于星期四通常在血清學試驗中，以8.5g/LNaCl溶液作為抗原抗體的稀釋液及反應液，其中Na+和Cl-可分別中和膠體顆粒上的電荷，使膠體顆粒的電勢下降，形成可見的沉淀物或凝集物。但如果電解質(zhì)濃度過高，則會出現(xiàn)非特異性蛋白質(zhì)沉淀，即鹽析。補體參與的溶細胞反應，除需要等滲的NaCl溶液外，還需適雖的Mg2+和Ca2+離子參與。

現(xiàn)在是41頁\一共有43頁\編輯于星期四（二）酸堿度Ag、Ab多為蛋白質(zhì)，具兩性電離特性，有其故有的PI,pH過高或過低均可影響Ag、Ab反應。一般：pH6～8為宜，補體參與時pH7.2～7.4