指紋圖譜實驗研究技術指南

中藥注射劑色譜指紋圖譜試驗爭論技術指南〔試行〕一、供試品收集代表性。〔一〕原料藥材：在藥材的化學成分與中醫(yī)臨床療效的之間的關聯(lián)尚未能說明保證。藥材的“批“不是工業(yè)生產(chǎn)的“批“，是指相互獨立的供試品，即不能將同一沒有統(tǒng)計學的意義，所以供試品數(shù)越多越好，10批是最低的要求。供試品應保證其真實性，應有完整采樣原始記錄，內(nèi)容包括:藥材名稱〔收集，或者來自GAP于生產(chǎn)原料的選購選擇和測試數(shù)據(jù)的可追溯。收集時間〔購置時間〕及收集人貨源狀況調(diào)查〔貨源是否充分和穩(wěn)定〕基原鑒定及鑒定人：產(chǎn)地或GAP野生品種〔如白花蛇舌草、蒲公英，應在指紋圖譜爭論中認真比較，如獲得的指紋圖譜相像度很高，也可應用，但須明確記錄。并在今后實施GAP時確定一個〕產(chǎn)區(qū)的選擇應縮小范圍，并結合資源選用藥典收載品種中的一種。指紋圖譜過程中消滅難以預料的困難。外形照片。供試品的留樣、貯藏和標簽：由于指紋圖譜爭論周期較長，供試品必需在枯燥3異議時的可追溯。供試品。表一〔推舉〕藥材名稱購置時間〕及收集人貨源狀況調(diào)查質(zhì)量評估標簽原始記錄保存處附：1，藥材外形照片

學名：鑒定人：數(shù)量：容器：貯藏地點及條件2，藥材的色譜圖〔試驗完畢后：〔二〕〔提取物譜爭論用的半成品應來自生產(chǎn)車間通過藥材混批調(diào)整及標準的生產(chǎn)工藝生產(chǎn)的實際樣品。關鍵技術及相應參數(shù)填寫于表二，并附試驗完畢后指紋圖譜。表二〔推舉〕半成品〔提取物〕名稱半成品〔提取物〕名稱日期關鍵技術〕混批后批號混批比例供試品留樣數(shù)量：容器：貯藏地點及條件附：混批前後的指紋圖譜。〔三〕成品〔注射劑：產(chǎn)品批號、生產(chǎn)單位、成品批號與半成品〔提取物〕批號的相關性均須有明確的記錄，以保證試驗數(shù)據(jù)的可追溯。成品的“比照用指紋圖譜“是建立在標準化提取物或10批供試樣品須有留樣。主要內(nèi)容填寫于表三，并附試驗完畢后的指紋圖譜。表三〔推舉：供試品批號供試品批號生產(chǎn)單位供試品留樣數(shù)量：容器：貯藏地點及條件指紋圖譜爭論用的原藥材、半成品及注射劑成品均應有10批以上的樣品供試驗，以保證指紋圖譜的可重復性。二、供試品溶液的制備〔一〕0.5~1Kg，分別稱量莖、葉、花、果的大致比記錄。假設藥材表觀質(zhì)量不均勻〔如大小不一、肥瘦不等、粗細不勻等，應留意分有無顯著差異，供生產(chǎn)參考。1：10，1g試品，應在混合均勻的10g選取的樣品中稱取。由于指紋圖譜需要供給量化的3的溶劑。度的供試品溶液〔g/mLmg/mL。48保證數(shù)據(jù)的可追溯主要操作過程及數(shù)據(jù)應具體記錄?！捕嘲氤善贰蔡崛∥铩彻┰嚻啡芤旱闹苽浞Q取不同批次的半成品〔提取物，參照“供試品溶液“的制備方法中相應的〔三〕成品〔注射劑〕供試品溶液制備〔凍干粉針〔如含有氯化鈉則液相色譜不行使用蒸發(fā)光散射檢測器；如糖分太多，色譜的質(zhì)量等。此外，單方注射劑藥材或復方注射劑中不同藥材成分類別假設2三、參照物〔一射劑中的主要活性成分或指標成分，主要用于考察指紋圖譜的穩(wěn)定程度和重現(xiàn)〔復起著識別和評價色譜指紋圖譜特征狀況需要，又有可能也可考慮選擇適當?shù)膬?nèi)標物插入色譜中。備用。四、試驗必需具有良好的專屬性、重現(xiàn)性和可行性。專屬性：建立的指紋圖譜必需能夠表達該品種的特征，即唯一性。〕在不同試驗室和不同操作者之間品之間的相像度不屬于此范圍。上的法定檢驗機構均可執(zhí)行該標準?！惨弧吃囼炇?1，試驗室具備擔當指紋圖譜的總體力量；2，試驗室設備通過檢驗證明符合指紋圖譜試驗爭論的需要；3，技術人員具備從事指紋圖譜試驗爭論的力量；4，對試驗室的技術力量評價應有定期的內(nèi)部的獨立檢查；5，試驗數(shù)據(jù)有可追溯，與其他試驗室有可比性；6，試驗室應有質(zhì)量保證體系，以確保各種措施實施的透亮和全都〕儀器：所用的儀器性能應能滿足指紋圖譜試驗的需要，并須經(jīng)校驗；相、柱長度、內(nèi)徑、填料粒度等；一般需用三根以上不同生產(chǎn)廠家的柱子進展是否能重合及整個色譜的外形是否有變異，如有變異致使指紋特征已難以識別，素后，可認作該色譜柱不能使用。儀器使用人、使用時間及周期應有記錄。〔圖像板〔如Silicagel60，Merck等。圖譜攝像時如用數(shù)碼攝像機，解像度應在20,00,000象素以上，熒光色譜須在薄層色譜專用的紫外光燈箱下加濾光片拍光源需定期校驗。照上述原則校驗和記錄。各種儀器均須依據(jù)儀器操作手冊以及SOP進展。〔三〕試驗方法和試驗條件：件的優(yōu)選。〔提取物譜在“量“方面的相像程度。件，并需要進展方法學驗證。試驗中應留意的事項：液相色譜的色譜柱需做比較試驗加以選擇，流淌相至少用三種不同組成生產(chǎn)廠家不同牌號的色譜柱因選用的硅膠原料、鍵合條件、封尾狀況等的差異，告儀器梯度滯后時間。測定梯度滯后時間，可用一零死體積連接器代替色譜柱，0.1%0－100%201.0ml/mm，記錄梯度圖形，測定梯度曲線中間點的時間，減去10測器最常見的是紫外-可見光檢測器，文獻報道的檢測波長常常是為含量測定某一特定成分，不肯定完全適合指紋圖譜的需要，為了獵取多層次的信息，常常需長得到的色譜圖，從中吸取更多的信息。對在紫外區(qū)無吸取的化合物，也可選擇其它類型的檢測器，如差示折光檢測器或蒸發(fā)光散射檢測器等。需留意觀看溫度和相對濕度對色譜行為的影響。雜質(zhì)的干擾對柱色譜，常常是“隱性“的；薄層色譜則由于樣品供試液中全部成分均可在薄層板上觀看，所以雜指紋圖譜宜在同板將“比照用提取物“與供試品平行比較，即每一薄層板必需有“隨行比照用提取物“或相應的參照物。顯色劑分通用顯色劑和專屬顯色劑，結合使用可在一個色譜條件下得到的指紋圖譜獵取成分類別或化學成分功能團的信息，如生物堿、黃酮類、三萜類、甾體類、香豆素類等，專用的顯色劑可以直觀地顯示各自的特征。要將相對保存時間作為固定的常數(shù)〔“保存指數(shù)“，也可依據(jù)實際需要和可能選程序。其它色譜技術可參照上述根本要求設計試驗。整體特征為前提，所以不應孤立地苛求其分別度必需到達含量測定的要求。室制備條件不行能與大生產(chǎn)工藝制備的產(chǎn)品完全全都，在其后的相關性比較顯，則提示有必要從生產(chǎn)工藝和試驗室模擬樣品兩方面檢查緣由。五、色譜指紋圖譜的建立和識別員應將原藥材、半成品〔提取物、成品的指紋圖譜分別直觀比較。一張指紋圖的圖譜比較，如有缺峰，則缺號，以保持峰的編號不變，便于清楚地考察相互之性，即半成品〔提取物〕指紋圖譜的特征應在原藥材的指紋圖譜中可以追溯，而〔提取物〕指紋圖譜與成品〔注射劑〕的指紋圖譜應有較高的相關性。中分含量很高〔如黃芩中的黃芩苷，在色譜圖中占確定優(yōu)勢，其它特征很弱，雖〔如用黃芩苷代替黃芩藥材，可試用不同的檢測波長或不同色譜方法，突出其它特較多時〔如人參、三七、黃芪并存，建立指紋圖譜的難度很大，除盡量改進試是必定的進展趨勢?！不虮由V的斑點〕其位置〔保存時間或比移值、大小或凹凸〔積分面積或峰高、各峰之間相對的圖譜的相像性從兩個方面考慮，一是色譜的整體“面貌“，即有指紋意義的峰的數(shù)目、峰的位置和挨次、各峰之間的大致比例〔薄層色譜還有斑點的顏色〕等是否“比照用指紋圖譜“之間及不同批次樣品指紋圖譜之間總積分值作量化比較。如總積分面積相差較大〔如20量的差異，這種差異功能不同于含量測定，它只需要數(shù)量的或許信息。相像性比較可以用“相像度““中藥指紋圖譜計算機關心相像度評價軟件“計算，除個別品種視具體狀況而定外，一般成品指紋圖譜相像度計算結果在0.9難以否認的供試品，可進一步承受模式識別方法〔如主成分分析〕檢查緣由六、色譜指紋圖譜的校驗和復核〔提取物〕不做復核試驗，只做文字內(nèi)容是否合理。0.9以上。所申報的上述資料應書寫但復核單位本身對注射劑成品的復核試驗仍須進展自身的方法學驗證。提取物同時試驗，并進展相像度檢查?！惨弧乘蜆映绦蛩鶑秃?，再由國家藥典會托付另一藥品檢驗所對其制劑進展二次復核?！捕吃囼瀼秃税囱兄茊挝簧陥筚Y料供給的指紋圖譜測定方法對成品進展測定，繪制圖比較輪廓掃描圖外，還須比較斑點顏色〔包括熒光顏色。評價軟件》計算，給出相像度結果。〔二〕質(zhì)量標準中指紋圖譜的標準書寫格式指紋圖譜書寫格式﹙暫行﹚1、液相色譜法譜的要求進展測定。色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗如以參照物做系統(tǒng)適用性試驗，則參照中國藥譜柱型號及有關參數(shù)和各項具體試驗條件。測定法周密吸取供試品溶液、參照物溶液各XXμL〔液〕分別注入液相色譜儀，測定。供試品指紋圖譜與質(zhì)量標準所附的比照指紋圖譜或與隨行比照用提取物指〔度小于××，不符合要求。指紋圖譜復核及檢驗報告書有關內(nèi)容的書寫格式〔〔比照〕比較，并經(jīng)計算機關心相像度評價軟件計算，相像