生物學(xué)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞

生物學(xué)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞第1頁(yè)/共44頁(yè)實(shí)驗(yàn)一

普通光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)和使用第2頁(yè)/共44頁(yè)【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹苛私馄胀ü鈱W(xué)顯微鏡的構(gòu)造及原理，熟練掌握其操作方法；了解人血與蛙血細(xì)胞的形態(tài)差異。第3頁(yè)/共44頁(yè)【實(shí)驗(yàn)原理】顯微鏡種類(lèi)：顯微鏡的組成系統(tǒng)：光學(xué)、機(jī)械、電子。普通光鏡的光學(xué)系統(tǒng)：物鏡、目鏡、聚光器、光闌等。普通光鏡的機(jī)械系統(tǒng)：鏡筒、鏡臂、物鏡轉(zhuǎn)換器、調(diào)焦螺旋（粗調(diào)和細(xì)調(diào)）、載物臺(tái)、鏡座等第4頁(yè)/共44頁(yè)【實(shí)驗(yàn)步驟】A：顯微鏡的使用取用顯微鏡時(shí)，右手握鏡臂，左手托鏡座，避免傾斜；接通電源，打開(kāi)光圈，上升聚光器；標(biāo)本片置于載物臺(tái)上，材料對(duì)準(zhǔn)通光孔；低倍下調(diào)焦；選擇合適區(qū)域推到中央，換高倍鏡調(diào)焦（細(xì)調(diào)）；觀察繪圖；結(jié)束時(shí)將顯微鏡復(fù)原到非工作狀態(tài)。第5頁(yè)/共44頁(yè)顯微鏡使用的注意點(diǎn)：禁止單手提拿顯微鏡和隨意拆卸零部件；低倍下調(diào)焦時(shí)先上升載物臺(tái)（或下降鏡筒），再緩慢下降載物臺(tái)或上升鏡筒，使物鏡鏡頭與玻片距離由小到大調(diào)焦。一般直接轉(zhuǎn)換成高倍鏡后細(xì)調(diào)焦距；觀察標(biāo)本時(shí)兩眼同時(shí)睜開(kāi)；調(diào)節(jié)合適的光圈和電流強(qiáng)度可使成像更清晰；如果使用100×油鏡，應(yīng)在標(biāo)本上滴一滴香柏油，使鏡頭底端與該介質(zhì)接觸。觀察完后及時(shí)用二甲苯擦拭油鏡頭。注意其它鏡頭不得接觸香柏油。第6頁(yè)/共44頁(yè)【實(shí)驗(yàn)步驟】B：操作練習(xí)：血細(xì)胞涂片的觀察材料：人血和蛙血涂片觀察內(nèi)容：血細(xì)胞的組成；兩種紅細(xì)胞的形態(tài)差異等。附：字母裝片，精液涂片。【作業(yè)】繪圖：人血和蛙血細(xì)胞形態(tài)第7頁(yè)/共44頁(yè)實(shí)驗(yàn)二動(dòng)物細(xì)胞的基本形態(tài)與顯微測(cè)量第8頁(yè)/共44頁(yè)【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹空莆展忡R下多種細(xì)胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)特征；掌握顯微測(cè)微尺的使用和測(cè)量細(xì)胞大小的方法。第9頁(yè)/共44頁(yè)【實(shí)驗(yàn)原理】動(dòng)物各種不同組織的細(xì)胞具有不同的形態(tài)大小等特征上皮組織：?jiǎn)螌颖馄缴掀螌恿⒎缴掀螌又鶢钌掀?fù)層扁平上皮……結(jié)締組織：骨軟骨血液……肌組織：骨骼肌心肌平滑肌神經(jīng)組織第10頁(yè)/共44頁(yè)單層柱狀上皮與復(fù)層扁平上皮第11頁(yè)/共44頁(yè)骨骼肌細(xì)胞與心肌細(xì)胞第12頁(yè)/共44頁(yè)平滑肌細(xì)胞

第13頁(yè)/共44頁(yè)神經(jīng)元肝細(xì)胞第14頁(yè)/共44頁(yè)【實(shí)驗(yàn)原理】顯微測(cè)微尺由目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺組成，臺(tái)尺的每小格已知0.01nm，在相應(yīng)放大倍數(shù)的物鏡下對(duì)目尺加以標(biāo)定后，即可通過(guò)目尺準(zhǔn)確測(cè)量細(xì)胞的大小。第15頁(yè)/共44頁(yè)【實(shí)驗(yàn)步驟】A.

分別觀察腸上皮細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、心肌細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞和肝細(xì)胞等切片，注意比較鑒別細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，核形態(tài)數(shù)量和位置等特征。B.蛙血細(xì)胞大小的測(cè)量1.蛙血涂片的制備2.目鏡測(cè)微尺的標(biāo)定3.細(xì)胞大小的測(cè)量第16頁(yè)/共44頁(yè)【作業(yè)】1.繪圖：各種細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)2.記錄5個(gè)以上的蛙血細(xì)胞的長(zhǎng)、短徑，得到平均細(xì)胞大小第17頁(yè)/共44頁(yè)實(shí)驗(yàn)三細(xì)胞器的顯示與觀察第18頁(yè)/共44頁(yè)【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹苛私夤忡R下細(xì)胞器的形態(tài)和分布掌握超活染色法制作光鏡標(biāo)本的基本方法第19頁(yè)/共44頁(yè)【實(shí)驗(yàn)原理】活體染色是能使活的細(xì)胞或組織著色且無(wú)毒害的一種染色方法?？捎糜谘芯可顮顟B(tài)下的細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理或病理變化。活體染料被特異性地固定和堆積在細(xì)胞內(nèi)某種細(xì)胞器上而顯色。活體染色分為體內(nèi)活染和體外活染（超活染色）。詹納斯綠B是毒性較小的堿性染料，可專(zhuān)一性地對(duì)線粒體進(jìn)行超活染色。其原理是由于線粒體內(nèi)細(xì)胞色素氧化酶系的作用，使JGB保持氧化狀態(tài)，呈亮綠色；而周?chē)募?xì)胞質(zhì)中染料被還原為無(wú)色的色基。第20頁(yè)/共44頁(yè)【實(shí)驗(yàn)步驟】人口腔上皮細(xì)胞線粒體的超活染色與觀察用牙簽刮取口腔頰部粘膜的上皮細(xì)胞，在潔凈的載玻片上與1dJGB染液混勻，染色15min以上。蓋上蓋玻片，光鏡下觀察線粒體的形態(tài)和分布。B.小鼠肝臟細(xì)胞線粒體的超活染色與觀察取小鼠肝臟邊緣較簿組織，置于含Ringer液平皿中擠壓洗滌2-3次，吸去Ringer液，加JGB染液染色30min，Ringer液洗滌1次后轉(zhuǎn)移至載玻片，將組織拉碎，去稍大的組織塊，蓋上蓋玻片，鏡檢。C.高爾基復(fù)合體標(biāo)本的觀察兔脊神經(jīng)節(jié)切片D.動(dòng)物細(xì)胞中心體標(biāo)本觀察第21頁(yè)/共44頁(yè)【作業(yè)】繪圖：人口腔上皮細(xì)胞（顯示線粒體）小鼠肝細(xì)胞（顯示線粒體）兔脊神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（顯示高爾基體）第22頁(yè)/共44頁(yè)實(shí)驗(yàn)四細(xì)胞膜的通透性第23頁(yè)/共44頁(yè)【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹空莆占?xì)胞膜的選擇通透性和細(xì)胞內(nèi)外水分子交換的原理。第24頁(yè)/共44頁(yè)【實(shí)驗(yàn)原理】細(xì)胞與周?chē)h(huán)境之間可進(jìn)行選擇性物質(zhì)交換。水分子通常以簡(jiǎn)單擴(kuò)散的方式通過(guò)細(xì)胞膜，如果細(xì)胞內(nèi)外存在滲透壓差時(shí)，水分子表現(xiàn)從滲透壓低的一側(cè)向高的一側(cè)擴(kuò)散。將紅細(xì)胞置于低滲溶液中，溶劑很快進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，發(fā)生溶血，釋放出血紅蛋白，重新封閉的紅細(xì)胞膜構(gòu)成血影。而在高滲溶液中，動(dòng)物細(xì)胞發(fā)生脫水皺縮。將紅細(xì)胞置于數(shù)種等滲溶液中，由于紅細(xì)胞膜對(duì)各種溶質(zhì)的通透性不同，有的不能通過(guò)，能通過(guò)的溶質(zhì)通過(guò)的速度也有差異。隨著溶質(zhì)的進(jìn)入，紅細(xì)胞內(nèi)滲透壓提高，帶動(dòng)水分的攝入，最終引起溶血。通過(guò)溶血時(shí)間的測(cè)定可估計(jì)紅細(xì)胞膜對(duì)各種溶質(zhì)通透性的大小。第25頁(yè)/共44頁(yè)第26頁(yè)/共44頁(yè)【實(shí)驗(yàn)步驟】1、制備10％兔紅細(xì)胞懸液：兔心臟抽血，加肝素抗凝，加等滲氯化鈉稀釋10×成不透明的懸液。2、在1支試管加5ml蒸餾水，再加0.5ml10％紅細(xì)胞懸液，觀察溶血現(xiàn)象的發(fā)生。3、10支試管分別加5ml不同的等滲溶液，再加0.5ml10％紅細(xì)胞懸液，觀察溶血現(xiàn)象是否發(fā)生，記錄溶血發(fā)生時(shí)間。4、顯微鏡下觀察紅細(xì)胞血影。第27頁(yè)/共44頁(yè)等滲溶液是否溶血溶血時(shí)間結(jié)果分析氯化鈉氯化銨醋酸銨硝酸鈉草酸銨硫酸鈉葡萄糖甘油乙醇丙酮【作業(yè)】第28頁(yè)/共44頁(yè)植物細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微鏡觀察實(shí)驗(yàn)五第29頁(yè)/共44頁(yè)【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹空莆湛捡R斯亮藍(lán)法檢測(cè)細(xì)胞骨架的方法第30頁(yè)/共44頁(yè)【實(shí)驗(yàn)原理】A.細(xì)胞化學(xué)染色與DNA和RNA的定位核酸分為DNA和RNA，呈酸性可與堿性染料反應(yīng)而顯色和定位。由于兩類(lèi)核酸分子聚合程度不同，對(duì)不同的堿性染料親和力不同，甲基綠-哌洛寧染料的兩種組分分別對(duì)DNA和RNA有高親和力，并分別將二者染成藍(lán)綠色和紅色。第31頁(yè)/共44頁(yè)【實(shí)驗(yàn)原理】B.細(xì)胞計(jì)數(shù)血細(xì)胞計(jì)數(shù)板包括2個(gè)計(jì)數(shù)室，每個(gè)計(jì)數(shù)室有9個(gè)大格，每大格的體積為0.1mm3，計(jì)數(shù)4大格內(nèi)（4個(gè)角）的細(xì)胞數(shù)，根據(jù)每大格的體積和細(xì)胞懸液的稀釋倍數(shù)即可算出細(xì)胞密度。第32頁(yè)/共44頁(yè)【實(shí)驗(yàn)步驟】A.DNA和RNA的定位制備蛙血涂片1張，晾干。固定：70％乙醇固定5min。染色：滴1d甲基綠-哌洛寧染液染色5-10min，水沖洗后在純丙酮中分化處理2-3s。觀察繪圖第33頁(yè)/共44頁(yè)【實(shí)驗(yàn)步驟】B.血細(xì)胞計(jì)數(shù)制備蛙血細(xì)胞懸液，稀釋400-600×熟悉血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，找到計(jì)數(shù)室和計(jì)數(shù)區(qū)域蓋玻片蓋在計(jì)數(shù)板槽上，吸取1d血細(xì)胞懸液滴在蓋玻片外側(cè)邊緣，使其滲入計(jì)數(shù)室10×物鏡下計(jì)數(shù)（四角的4大格）細(xì)胞密度換算：細(xì)胞數(shù)/ml=4大格細(xì)胞數(shù)/4×10000×稀釋倍數(shù)第34頁(yè)/共44頁(yè)【作業(yè)】繪圖：核酸的細(xì)胞內(nèi)定位細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果和密度換算第35頁(yè)/共44頁(yè)實(shí)驗(yàn)五細(xì)胞的有絲分裂和減數(shù)分裂第36頁(yè)/共44頁(yè)【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹空莆占?xì)胞有絲分裂的過(guò)程和各時(shí)期特征；熟悉植物細(xì)胞染色體壓片標(biāo)本的制作方法；了解生殖細(xì)胞減數(shù)分裂過(guò)程和特征。第37頁(yè)/共44頁(yè)【實(shí)驗(yàn)原理】體細(xì)胞有絲分裂第38頁(yè)/共44頁(yè)【實(shí)驗(yàn)步驟】A大蒜根尖有絲分裂壓片的制備和觀察1大蒜根尖用0.5%秋水仙素處理2－4h2洗去Col后，切下根尖置于小瓶中，加1:1無(wú)水乙醇和濃鹽酸固定、離析，10min3吸去固定液后，水洗2次×5min4材料置于載玻片上，切去根冠和伸長(zhǎng)區(qū)，保留分生區(qū)，加品紅染色30min545％醋酸分色后，蓋上蓋玻片，壓片6顯微鏡觀察：統(tǒng)計(jì)分裂指數(shù)，分辯各時(shí)相特征。B有絲分裂切片的觀察觀察馬蛔蟲(chóng)受精卵有絲分裂切片第39頁(yè)/共44頁(yè)洋蔥根尖細(xì)胞的有絲分裂（40×）第40頁(yè)/共44頁(yè)