獸用抗菌藥物耐藥性風險評估

獸用抗菌藥物耐藥性風險評估第1頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五報告內容一、開展耐藥性風險評估的必要性二、耐藥性風險評估程序和方法三、國外耐藥性風險評估開展情況四、我國耐藥性風險評估開展情況及未來工作建議第2頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)發(fā)展離不開抗菌藥物!但廣泛使用抗菌藥物不僅帶來了獸藥殘留問題，也帶來了耐藥性問題，嚴重威脅食品安全及人類健康。抗菌藥物殘留耐藥菌耐藥基因毒性作用微生物影響?轉移擴散風險?一、開展耐藥性風險評估的必要性第3頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五耐藥菌和耐藥基因的生態(tài)網(wǎng)絡(WolfgangWitte，Science,vol279，1998)

食品動物住院病人社區(qū)居民肉產品糞便動物飼料種植作物糞便選擇壓力主要宿主污水地表水泥漿食品促生長預防治療用抗生素預防治療用抗生素

第4頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五阿伏帕星在1974被歐盟批準用于促生長劑后，導致豬、雞體內廣泛流行攜帶vanA基因的耐萬古霉素腸球菌，而且耐藥腸球菌可通過接觸感染養(yǎng)殖人員及屠宰加工人員，也可通過肉品污染傳遞給社區(qū)健康人群。丹麥和英國90年代爆發(fā)的耐氟喹諾酮類沙門氏菌DT104感染，調查表明耐藥菌分別來源于豬場和奶牛場。

Kassenborg等調查美國的氟喹諾酮類耐藥彎曲桿菌感染，發(fā)現(xiàn)感染者多食用過雞肉或火雞肉，且這些雞場都有使用恩諾沙星的經歷。臺灣2002年采用分子亞型方法調查人耐氟喹諾酮沙門氏菌感染，發(fā)現(xiàn)豬是感染源。進一步調查證明，豬用氟喹諾酮后，其體內病原菌產生了對氟喹諾酮的耐藥性。美國Donabedian等2003年從人和超市雞肉分離到PFGE圖譜完全一致的慶大霉素耐藥腸球菌，說明耐藥菌可通過食物鏈傳遞到人。第5頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五WHO、OIE等國際組織高度關注動物使用抗菌藥物對食品安全和人類健康的影響，多次召開專家討論會，制定了“關于控制食用動物抗生素耐藥性的全球導則”、“動物源耐藥菌對公共衛(wèi)生潛在影響的風險評估方法”等系列文件和指南，倡導對食品動物謹慎使用抗菌藥物，建議成員國開展動物源病原菌耐藥性監(jiān)測，開展風險評估。TheMedicalImpactofAntimicrobialUseinFoodAnimals.ReportofaWHOMeeting(Berlin,Germany,13-17October1997)UseofQuinolonesinFoodAnimalsandPotentialImpactonHumanHealth.ReportofaWHOMeeting(Geneva,Switzerland2-5June1998)WHOGlobalPrinciplesfortheContainmentofAntimicrobialResistanceinAnimalsIntendedforFood（Geneva,Switzerland

5-9June2000）Monitoringantimicrobialusageinfoodanimalsfortheprotectionofhumanhealth.ReportofaWHOconsultation(Oslo,Norway10-13September2001)JointFirstFAO/OIE/WHOExpertWorkshoponNon-humanAntimicrobialUsageandAntimicrobialResistance:Scientificassessment(Geneva,Switzerland1-5December2003)SecondJointFAO/OIE/WHOExpertWorkshoponNon-HumanAntimicrobialUsageandAntimicrobialResistance:Managementoptions(Oslo,Norway15–18March2004)第6頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五基于預防原則，歐盟自2006年1月1日起，全面禁止食品動物使用抗生素促生長劑。美國雖不主張食品動物全面禁用抗菌藥物添加劑，但也加強了食品動物使用抗菌藥物對食品安全和人類健康的風險評估。其對養(yǎng)禽業(yè)使用恩諾沙星引起人氟喹諾酮類耐藥彎曲桿菌感染的高風評價結果，促使FDA于2000年撤消了恩諾沙星的使用。歐盟、美國、澳大利亞、加拿大、日本等已建立了動物源病原菌耐藥性監(jiān)測國家系統(tǒng)，獲得了大量科學數(shù)據(jù)并進行風險評估。第7頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五2003-2005年國家食品污染監(jiān)測網(wǎng)數(shù)據(jù)顯示：我國動物性產品中沙門氏菌耐藥率已高達58%，多重耐藥達33%，耐10種以上藥物的菌株達5.6%。嚴重威脅人體健康。2005年雞源大腸桿菌對氟喹諾酮類藥物耐藥率已超過80%。第8頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五近年來人醫(yī)和獸醫(yī)耐藥性調查結果表明，我國已成為世界上耐藥性最嚴重的國家之一。嚴重的耐藥性局面是否與我國養(yǎng)殖業(yè)長期廣泛應用抗菌藥物尤其是亞治療劑量抗菌促生長劑有關？動物源耐藥菌/耐藥基因的廣泛流行是否給食品安全和人類健康帶來風險？這些問題，均需通過耐藥性的廣泛調查研究及風險評估來回答。但至今我國尚缺乏完善的動物源病原菌耐藥性監(jiān)測網(wǎng)，沒有充分、可靠的數(shù)據(jù)支撐耐藥性風險評估的開展。第9頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五抗菌藥物是我國規(guī)?；B(yǎng)殖不可或缺的物質。在缺乏充分風險評估的前題下，我們不可能采取歐盟全面禁用的做法。加強耐藥性基礎研究，完善監(jiān)測網(wǎng)絡調查動物源病原菌抗菌藥物耐藥性，建立規(guī)程開展獸用抗菌藥物風險評估，成為了目前亟待解決的問題。開展耐藥性風險評估，權衡風險和利益，科學管理和使用獸用抗菌藥物。不僅可促進畜牧業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展，而且可保障食品安全和人類健康。第10頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五二、耐藥性風險評估程序和方法風險分析是當前廣泛應用的食品安全和公共衛(wèi)生安全宏觀管理方法。風險分析RiskAnalysis風險評估RiskAssessment風險管理RiskManagement風險交流RiskCommunication釋放評估ReleaseAssessment暴露評估ExposureAssessment后果評估ConsequenceAssessment第11頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五獸用抗菌藥物耐藥性風險評估是利用風險分析技術和原理，對養(yǎng)殖業(yè)使用抗菌藥物產生耐藥性/耐藥基因通過食物鏈暴露于人產生負面影響和潛在不良作用的科學評價。就獸用抗菌藥物耐藥性風險評估問題，WHO、CAC和OIE多次召開專家討論會，并制定了風險分析框架性文件。JointFAO/OIE/WHOExpertWorkshoponNon-HumanAntimicrobialUsageandAntimicrobialResistance:Scientificassessment.Geneva,December1–5,2003

OIEInternationalStandardsonAntimicrobialResistance,2003.GuidelineonRiskAnalysisMethodologyforthePotentialImpactonPublicHealthofAntimicrobialResistantBacteriaofAnimalOrigin.第12頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五釋放評估描述動物應用抗菌藥物導致耐藥菌/耐藥基因出現(xiàn)的概率暴露評估描述人體通過特定途徑暴露于耐藥菌/耐藥基因的概率后果評估描述人體暴露于特定耐藥菌/耐藥基因后引起不良后果的概率綜合風險估計釋放、暴露和后果評估結果整合危害鑒定(特征描述)風險評價耐藥性風險評估程序第13頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五危害識別對動物應用特定抗菌藥物誘導的耐藥菌的識別。對動物應用特定抗菌藥物產生耐藥因子（耐藥基因及其載體）的識別。

危害識別必須考慮抗菌藥物的類型以及病原菌的亞型和血清型。第14頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五動物飼料肉直接接觸醫(yī)院人類屠宰加工廠加工食品動物羊奶牛豬家禽肉牛殘渣伴侶動物植被,作物,水果污水養(yǎng)殖污水及糞便排放動物飲用水人飲用水海洋/湖泊游泳水產河流/溪水企業(yè)/家用抗菌藥物其他家畜社區(qū)-城市-農村野生動物土壤烹飪制作消費儲存耐藥性流行病學釋放暴露后果第15頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五釋放評估——描述動物應用抗菌藥物導致耐藥菌/耐藥基因出現(xiàn)的概率暴露評估——描述人體通過特定途徑暴露于耐藥菌/耐藥基因的概率后果評估——描述人體暴露于特定耐藥菌/耐藥基因后引起不良后果的概率耐藥性給人類健康帶來危害的途徑及風險評估危害治療無效抗菌藥物治療耐藥菌感染抗菌藥物用于動物篩選出耐藥菌/耐藥基因耐藥菌/耐藥基因擴散屠宰加工過程耐藥菌污染零售食品中存在耐藥菌耐藥菌被人體攝入的概率第16頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五釋放評估應用抗菌藥物的動物種類、數(shù)量及其地理分布；應用抗菌藥物數(shù)量、給藥途徑和方法；抗菌藥物藥效學/藥動學；應用抗菌藥誘導的耐藥菌種類；耐藥性的產生機制及傳遞機制；和其他抗菌藥的交叉耐藥性和/或協(xié)同耐藥性；對動物、動物性產品以及排泄物中是否存在耐藥菌的監(jiān)控；描述動物應用某種抗菌藥物后向特定環(huán)境釋放耐藥性菌或耐藥因子的生物學途徑，并定性或定量評價全過程發(fā)生的概率?？赡苄枰馁Y料包括：第17頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五暴露評估描述人暴露于使用某獸用抗菌藥物誘導產生的特定耐藥菌或耐藥因子的生物學途徑，并用定性或定量方法對暴露發(fā)生的概率進行評估?？赡苄枰男畔ⅲ喝丝趯W及包括傳統(tǒng)和習俗在內的食物消費方式；被耐藥菌污染的動物及其產品的流通；被耐藥菌污染的動物飼料的流通；動物產品處理過程（包括屠宰，加工，儲存，運輸和銷售）中耐藥菌的存活能力及重新分布；被耐藥菌污染食品中微生物的生長；對動物排泄物處理及人類暴露于排泄物中耐藥菌或耐藥因子的機會；第18頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五耐藥菌在人體腸道菌群中存活的能力；耐藥菌在人與人之間的不自覺傳播；耐藥菌向其他共生菌轉移耐藥因子的能力；用于治療人類疾病的抗菌藥種類和數(shù)量；人類疾病治療時間的長短及給藥途徑、劑量；藥物(代謝)動力學因素（新陳代謝、生物利用率、能否作用于腸叢菌）。第19頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五后果評估描述特定人群暴露于特定耐藥菌或耐藥因子及其暴露后果之間關系的，并對其發(fā)生的可能性進行評估。評估可以是定性的，也可以是定量的。

耐藥菌/耐藥因子及其危害之間的量-效關系；人群易感性的變化；由于抗菌藥失效而導致的人體健康效應的變化和發(fā)生頻率；由于抗菌藥可信度的降低而導致了人類醫(yī)藥實踐的改變；由于對食品信任度的喪失以及相關聯(lián)的次要風險，人們的飲食方式發(fā)生的改變；與上述后果相關的各種消費；與人類經典抗菌藥治療發(fā)生的沖突；可預測的藥物未來狀況（與時間相關）；第20頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五風險估計患病人數(shù)及感染耐藥菌株的比例；感染疾病和嚴重性及病程；感染死亡數(shù)量（每年死亡總數(shù)；每年的可能死亡數(shù)；隨機人口的壽命或對耐藥菌暴露較多的特定人群的壽命）；靶微生物感染病理學的重要變化；在人體內觀察到的耐藥性水平；其他抗菌素治療的缺乏情況；對于不同風險效應的權重加的某些隨機的影響范圍（例如：疾病和就醫(yī)）；第21頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五三、國外耐藥性風險評估開展情況歐盟：Guidelineonpre-authorizationstudiestoassessthepotentialforresistanceresultingfromuseofantimicrobialveterinarymedicinalproductsEMEA/CVMP/244/01,EuropeanAgencyfortheEvaluationofMedicinalProducts日本：GuidelinefortheRiskAssessmentMethodologyfortheImpactonFoodSafetybytheAntimicrobialResistantOrganismsDerivedfromFoodAnimals.Japan,FoodSafetyCommission,September30th,2004

澳大利亞：Part10ofVeterinaryRequirementSeries:SubmissiontoWorkingPartyonAntibiotics,NationalRegistrationAuthorityforAgriculturalandVeterinaryChemicals.June2000美國：Guidanceforindustry#152EvaluatingtheSafetyofAntimicrobialNewAnimalDrugswithRegardtoTheirMicrobiologicalEffectsonBacteriaofHumanHealthConcern.U.S.DHHS,FDA,CVMOctober30,2003加拿大：GuidanceforIndustryPreparationofVeterinaryNewDrugSubmissions.VeterinaryDrugsDirectorateHealthCanada.March2007.已制定耐藥性風險評估規(guī)程或指南的國家第22頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五VDD2.1Guidance152CVMP644Part10FSCGuideline全球耐藥性風險評估OIE第23頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五已開展的針對特定病原菌耐藥性風險評估的抗菌藥物阿伏帕星（avoparcin）-腸球菌（Enterococcus

）

(歐盟，肯定性結果）氟喹諾酮類（fluoroquinolone）-彎曲菌（Campylobacter）（美國，肯定性結果）鏈陽菌素類（Streptogramin）-屎腸球菌（美國，否定性結果）大環(huán)內酯類（Macrolides）-彎曲菌和腸球菌（美國，否定性結果）第24頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五四、我國耐藥性風險評估開展情況及未來工作建議發(fā)達國家獸用抗菌藥物耐藥性風險評估方興未艾，國內這方面的研究剛剛起步。近幾年在國家自然科學基金、國家科技攻關計劃、國家科技支撐計劃資助下，中國農業(yè)大學、中國獸藥監(jiān)察所、華南農業(yè)大學、解放軍農牧大學、四川農業(yè)大學等多家單位在耐藥分子機制、耐藥菌/耐藥基因流行病學等方面開展了廣泛研究，為耐藥性風險評估工作的開展奠定了一定的基礎。第25頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五

不同年代動物源大腸桿菌耐藥性的調查

70年代（63株）80年代（28株）90年代（69株）2000年（36株）青霉素類氨芐西林（AMP）19.0%25.0%60.9%52.8%阿莫西林（AMO）19.0%25.0%58.0%55.6%頭孢菌素類頭孢氨芐（CX）0.0%0.0%0.0%-頭孢呋辛（CXM）0.0%0.0%0.0%-頭孢曲松（CRO）0.0%0.0%0.0%0.0%頭孢噻呋（EFT）0.0%0.0%2.9%13.9%四環(huán)素類四環(huán)素（TET）63.5%57.1%85.5%97.2%多西環(huán)素（DOX）61.9%57.1%66.7%-土霉素（OYX）63.5%57.1%88.4%-氨基糖苷類鏈霉素（STP）9.5%35.7%62.3%61.1%慶大霉素（GEM）0.0%21.4%36.2%19.4%卡那霉素（KAN）6.3%17.9%29.0%25.0%安普霉素（APR）0.0%0.0%0.0%-氯霉素類氯霉素（CHL）39.7%28.6%55.1%44.4%氟本尼考（FFN）0.0%0.0%1.4%2.8%氟喹諾酮類環(huán)丙沙星（CIP）0.0%0.0%7.2%44.4%諾氟沙星（NOR）0.0%0.0%7.2%41.7%氧氟沙星（OFL）0.0%0.0%10.1%44.4%磺胺類磺胺異惡唑（SMZ）57.1%50.0%81.2%77.8%甲氧芐啶（WD）11.1%14.3%75.4%-

不同年代大腸桿菌耐藥率的變化趨勢動物源病原菌耐藥流行病學研究第26頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五不同年代大腸桿菌多重耐藥的變化趨勢第27頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五年份耐藥譜菌株百分比%70年代TET15.9TETSMZ19.0TETSMZCHL11.1TETSMZCHLAMP9.5其它15.980年代TET10.7TETSMZ14.3TETSMZSTP7.1TETSMZCHLAMP7.1TETSMZCHLAMPGEN7.1其它28.590年代TET5.8TETSMZ10.1TETSMZSTP/CHL/AMP17.4AMPTETSMZSTP/CHL11.6AMPTETSMZSTPGEN/CHL23.8AMPTETSMZSTPCHLCIP5.8其它19.52000年TET5.6TETSMZ8.3TETSMZSTP/GEN11.1TETSMZSTPAMP16.7AMPTETSMZCIPSTP/CHL27.8AMPTETSMZSTPCHLGEN/CIP13.9AMPTETSMZSTPCHLGENCIP8.3其它5.6

不同年代大腸桿菌耐藥譜CIP(環(huán)丙沙星)；NOR(諾氟沙星)；LMF(羅美沙星)；AMP(氨芐西林)；AMO(阿莫西林)；NAL(萘啶酸)；CEF(頭孢噻吩)；TET(四環(huán)素)；CRO(頭孢曲松)；STP(鏈霉素)；KAN(卡那霉素)；AMK(阿米卡星)；GEN(慶大霉素)；EFX(恩諾沙星)；CHL(氯霉素)；FFN(氟苯尼考)；OFL(氧氟沙星)；SXT(復方新諾明)；SMZ(磺胺異甲基惡唑)；DAN(達氟沙星)；DOX(多西環(huán)素)；LOM(洛美沙星)；CFZ(頭孢唑林)；OXY(土霉素)；COL(多黏菌素)；SD(磺胺嘧啶)；SMD(磺胺對甲氧嘧啶)。第28頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五

我國部分地區(qū)分離動物源大腸桿菌的耐藥性監(jiān)測抗菌藥物北京（42株）河南（108株）抗菌藥物內蒙（58株）R%I%S%R%I%S%R%I%S%AMP11.97.181.075.02.822.2AMP77.593.4518.97AMO9.519.071.475.02.822.2AMO65.5210.3424.13AMK0.02.497.62.80.097.2AMK1.72098.28CHL7.10.090.549.18.342.6CHL22.411.7275.86CIP0.00.0100.023.15.671.3CIP22.413.4574.14CEF4.87.188.19.315.775.0CEF6.9093.1CRO0.016.783.34.63.791.7DAN22.41077.59EFX2.411.985.727.823.139.8DOX46.5512.0741.4FFN4.89.583.335.29.359.3FFN5.17—94.83GEN2.40.097.625.97.466.7GEN18.97081.03KAN4.814.381.030.68.361.1KAN17.24089.66LMF4.84.890.028.717.653.7LOM22.416.970.69NAL0.00.0100.059.320.420.4OXY55.178.6236.2NOR0.02.495.224.11.974.1NOR22.41077.59OFL0.00.0100.022.21.975.9OFL22.41077.59STP16.711.947.655.616.727.8STP48.28—51.27SMZ11.90.088.186.10.013.9CFZ56.913.7929.31SXT16.70.083.384.30.913.0COL1.72—98.28TET73.82.423.895.40.93.7SD100—0SMD100—0CIP(環(huán)丙沙星)；NOR(諾氟沙星)；LMF(羅美沙星)；AMP(氨芐西林)；AMO(阿莫西林)；NAL(萘啶酸)；CEF(頭孢噻吩)；TET(四環(huán)素)；CRO(頭孢曲松)；STP(鏈霉素)；KAN(卡那霉素)；AMK(阿米卡星)；GEN(慶大霉素)；EFX(恩諾沙星)；CHL(氯霉素)；FFN(氟苯尼考)；OFL(氧氟沙星)；SXT(復方新諾明)；SMZ(磺胺異甲基惡唑)；DAN(達氟沙星)；DOX(多西環(huán)素)；LOM(洛美沙星)；CFZ(頭孢唑林)；OXY(土霉素)；COL(多黏菌素)；SD(磺胺嘧啶)；SMD(磺胺對甲氧嘧啶)。我國部分地區(qū)離大腸桿菌體外藥敏試驗結果

第29頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五北京、河南地區(qū)大腸桿菌多重耐藥情況第30頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五內蒙呼和浩特地區(qū)乳源大腸桿菌多重耐藥情況第31頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五抗菌藥物SIR耐藥率％抗菌藥物SIR耐藥率％青霉素G1015399.35克林霉素8047045.45氨芐西林00154100桿菌肽152200阿莫西林52010266.23慶大霉素11483220.78苯唑西林1390159.74卡那霉素10334831.17頭孢唑啉13251711.04阿米卡星10744327.92頭孢噻呋1355149.09磺胺嘧啶2015298.70恩諾沙星11833321.43甲氧芐啶00154100環(huán)丙沙星10783925.32氯霉素1232742.60氧氟沙星11743321.43氟苯尼考1143285.19諾氟沙星10064831.17土霉素13002415.58紅霉素4314795.45多西環(huán)素143295.84替米考星8546542.21萬古霉素154000林可霉素6098555.19內蒙呼和浩特地區(qū)154株乳源金葡菌的藥敏試驗結果

金黃色葡萄球菌流行病學調查研究第32頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五內蒙古呼和浩特地區(qū)154株乳源金葡菌多藥耐藥情況

第33頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五

大腸桿菌耐藥性分子流行病學調查研究

北京地區(qū)牛源大腸桿菌流行的Ⅰ型整合子及攜帶的耐藥基因盒Ⅰ型整合子類型大小(bp)插入的耐藥基因盒編碼產物A1318dfrA1二氫葉酸還原酶orf功能未知B1740dfrA17二氫葉酸還原酶aadA5氨基糖-3'-腺苷酰基轉移酶C3225aadB氨基糖-2''-腺苷?；D移酶aadA1氨基糖腺苷?；D移酶cmlA氯霉素泵D3075aadB氨基糖-2''-腺苷?；D移酶orf功能未知cmlA氯霉素泵第34頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五北京地區(qū)牛源大腸桿菌Ⅰ型整合子的各種流行形式

細菌分離株intI1PCR產物的大小插入的基因盒形式C260＋3.2kb,1.3kbA+CC261＋3.0kb,1.3kbA+DC262＋1.8kb,1.3kbA+BC286＋3.0kb,1.3kbA+DC287＋3.0kb,1.3kbA+DC288＋1.8kbBC207＋3.0kb,1.3kbA+DC209＋3.0kb,1.3kbA+DC306＋1.3kbAC307＋1.8kb,1.3kbA+BC312＋1.3kbAC914＋3.0kb,1.3kbA+DC916＋3.0kb,1.3kbA+D

牛源大腸桿菌中以A類Ⅰ型整合子最流行，占檢出菌的92%，D類次之，占檢出菌的54%。多數(shù)菌株存在兩種Ⅰ型整合子共存同一宿主菌的情況，其中以A+D組合最多，占檢出菌的54%。第35頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五Ⅰ型整合子類型可變區(qū)大小（bps）基因盒A1088aadA21B1662dhfrIaadA1C1740dhfrA17aadA5D1991dhfrⅩⅡaadA2E2710sataadA2F4084blaP1aaadA2ereA該豬場大腸桿菌Ⅰ型整合子流行普遍，檢出率達54.7%。其中以Ⅰ型整合子D最流行，檢出率達42.8%。兩種Ⅰ型整合子共存同一宿主菌的情況，以A+C組合最多，檢出率達15.2%。華南地區(qū)某豬場大腸桿菌流行的各種Ⅰ型整合子及攜帶的耐藥基因盒

華南地區(qū)某豬場大腸桿菌Ⅰ型整合子的8種流行組合第36頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五1-4泳道：雞分離大腸桿菌；5-9泳道：飼養(yǎng)員分離大腸桿菌；10-20泳道：環(huán)境分離大腸桿菌；Marker：LambdaladderDNAstandard華南地區(qū)某雞場人源、雞源及環(huán)境源多重耐藥大腸桿菌的PFGE圖譜分析雞源株（2）、飼養(yǎng)員源株（7、8、9）和環(huán)境源株（20）屬于同一PFGE分型的不同亞型，存在親緣關系。表明養(yǎng)殖場動物、環(huán)境及飼養(yǎng)員之間存在多重耐藥大腸桿菌的垂直傳播。第37頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五調查雞源大腸桿菌耐藥性過程中從120株菌中篩選出17株喹諾酮類耐藥株，以qnr基因引物PCR擴增，獲得3株陽性菌。序列測定結果顯示3株菌的qnr基因同源性為100%，與GenBank注冊qnr基因序列（AY655485）同源性為95.3%。3株qnr陽性菌對16～19種抗菌藥物呈高水平多重耐藥。

我國雞源大腸桿菌喹諾酮耐藥株中qnr基因的發(fā)現(xiàn)qnr基因序列同源性比較

第38頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五

大腸桿菌對氟苯尼考耐藥機制的研究圖a

HPLC法測定氟苯尼考在野生敏感菌和耐藥菌內的聚集耐藥菌株C260(▲)、C262(■)和敏感菌株C305(◆)、ATCC25922(●)對氟苯尼考的積聚量圖b

HPLC法測定氟苯尼考在基因工程敏感菌和耐藥菌內的聚集基因工程菌株JM109(○)和JM109-R(●)對氟苯尼考的積聚量動物源病原菌耐藥機理的研究第39頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五

抗體對細菌內藥物蓄積量的影響第40頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五

雞毒支原體大環(huán)內酯類抗生素耐藥分子機理研究大腸桿菌GenBank登錄號為J01695；*隨機挑取的3株BG44T-EMr，2株的rrnA發(fā)生了A2058G突變，但rrnB未發(fā)生任何突變；1株的rrnA未發(fā)生任何突變，而rrnB發(fā)生了G2057A、A2059G突變。雞毒支原體紅霉素、替米考星、泰樂菌素誘導耐藥株23SrRNA基因V域部分核苷酸序列分析比較第41頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五雞毒支原體MIC(μg/ml)23SrRNAV區(qū)域突變位點EMTLTMLMrrnArrnBS60.0320.0160.0084----S6-EMr256-＞5121-24-8＞512A2058Ga(3)

b--S6-TMr≥51216-32256＞512--A2058G

(3);A2503T

(3)S6-TLr1-20.125-0.250.125-0.2564-128----BG44T0.0630.0080.0048----BG44T-EMr2562-648-128＞512A2058G(2)G2057A(1);A2059G(1)BG44T-TMr＞51216-32256-512＞512--A2058G

(3);A2503T

(3)BG44T-TLr1-20.125-0.250.125-0.2564-128----

雞毒支原體誘導耐藥株MIC及其23SrRNA基因V域堿基突變

a按大腸桿菌23SrRNA核苷酸序列編號；

b括號內數(shù)字為在該位置發(fā)生堿基替換突變的突變數(shù)。

第42頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五

檢測FloR1蛋白的間接競爭ELISA標準曲線

用間接競爭ELISA法建立檢測FloR1蛋白的標準曲線，標準曲線在6.25ng/ml~200ng/ml之間，呈良好的線性相關，OD值與濃度（LogC，母液為1mg/ml）之間的線性回歸方程為：y=-0.1744Ln(x)+1.1563，相關系數(shù)R2=0.9979。耐藥性檢測方法研究——大腸桿菌氟苯尼考耐藥臨床株間接競爭ELISA檢測方法的建立第43頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五臨床氟苯尼考耐藥大腸桿菌ELISA檢測及細菌體內FloR1蛋白含量的測定E.colistrainMIC(μg/mL)floRgeneELISAFloR1concentrationUntreatedAntibodytreated

OD*(ng/mL)JM10922－1.147±0.0091.053±0.058T/JM10922－1.119±0.0411.238±0.324CVM1841>12832＋0.330±0.058113.983±45.381JM109-R6432＋0.419±0.02768.424±11.620C8326012864＋0.287±0.048145.854±45.762C8326122－1.166±0.0130.946±0.075C832623216＋0.641±0.04619.196±5.804C83286328＋0.557±0.05231.133±10.713C8328722－1.100±0.0661.348±0.635C8330244－0.973±0.0282.866±0.496C8330522－1.147±0.0341.055±0.131C8391412832＋0.433±0.02063.388±7.718C839166432＋0.499±0.04043.416±11.088第44頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五圖aMICs和FloR1蛋白量的線性關系圖圖bMICs和OD值的線性關系圖第45頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五通過數(shù)據(jù)分析得出，無FloR1蛋白抑制時平均OD值減去3倍標準偏差(OD=0.8879)或對應的蛋白濃度(3.04ng/mL)可作為臨界點來篩選臨床細菌是否含有floR基因以及是否對氟苯尼考耐藥。該方法能在2-3小時內確定細菌是否耐藥，與常規(guī)的藥敏試驗相比，能快速簡便地對細菌耐藥性進行監(jiān)測。第46頁，共50頁，2023年，2月20日，星期五

發(fā)表的相關論文WuB,XiaC,DuX,CaoX,ShenJ.Influenceofanti-FloRantibodyonflorfenicolaccumulationinflorfenicol-resistantEscherichiacoliandenzyme-linkedimmunosorbentassayfordetectionofflorfenicol-resistantE.coliisolates.JClinMicrobiol.2006Feb;44(2):378-82.WangZ,ShenJ,SuoX,ZhaoS,CaoX.Experimentallyinducedmonensin-resistantEimeriatenellaandme