普通生物化學(xué)第6章

第6章酶(Enzyme)張厚鋒菏澤學(xué)院藥物科學(xué)與技術(shù)系第一節(jié)、酶是生物催化劑

1857年法國(guó)科學(xué)家巴斯德證明酒精發(fā)酵是酵母細(xì)胞活動(dòng)的結(jié)果，當(dāng)時(shí)稱為活體酵素.一、酶的發(fā)現(xiàn)1926年美國(guó)生物化學(xué)家JamesBSumner（J.B.薩姆納）提取了脲酶（刀豆）。1930~1936年Northrop（諾思羅普

）分離出胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶的結(jié)晶。

J.H.Northrop1949年Sumner和Northrop共同獲得諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。1982年,美國(guó)科學(xué)家切赫（T.R.Cech,1947—）研究原生動(dòng)物四膜蟲的rRNA前體能在完全沒(méi)有蛋白質(zhì)的情況下進(jìn)行自我加工，發(fā)現(xiàn)RNA有催化活性

1983年美國(guó)科學(xué)奧特曼（S.Altman,1939—）研究細(xì)菌RNaseP(20%的蛋白質(zhì)和80%的RNA組成)，tRNA前體－成熟tRNA。Cech和Altman也因此獲得了1989年的諾貝爾獎(jiǎng)。1995年，JackW.Szostak(杰克?紹斯塔克)研究室Cuenoud等人首先報(bào)道了具有DNA連接酶活性DNA片段，稱為脫氧核酶(deoxyribozyme)。抗體酶（abzyme）：1986年美國(guó)Schultz和Lerner兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室同時(shí)Science上發(fā)表論文，報(bào)道那到了具有催化活性的抗體抗體：與抗原特異結(jié)合的免疫球蛋白抗體酶：指具有催化功能的抗體分子。二、酶的概念絕大多數(shù)酶是蛋白質(zhì)(蛋白質(zhì)類酶P）少數(shù)酶是核酸RNA(核酸類酶ribozyme核酶R）1.什么是酶(enzyme)？3.酶的化學(xué)本質(zhì)是什么？酶是活細(xì)胞產(chǎn)生的一類具有生物催化作用的有機(jī)物。2.酶有那些功能？①催化各種生物化學(xué)反應(yīng)。②調(diào)節(jié)和控制代謝的速度、方向和途徑?？梢?jiàn)：一些蛋白質(zhì)有催化活性某些RNA有催化活性有些DNA也有催化活性一些抗體也有催化活性螢光素酶螢光素+ATP氧螢光素+AMP+光三、酶與醫(yī)藥磺胺類藥物通過(guò)抑制二氫葉酸合成酶活性發(fā)揮抑菌作用。白化病是缺乏酪氨酸酶患高度白化病的女孩①用量少，效率高。②只能催化本來(lái)能夠進(jìn)行的化學(xué)反應(yīng)加速進(jìn)行。③加速反應(yīng)到達(dá)平衡點(diǎn)，不改變化學(xué)平衡點(diǎn)。④降低反應(yīng)的活化能。四、酶和一般催化劑的共性同一反應(yīng)比一般催化劑速度大107—1013倍.脲酶催化尿素水解是H+的7x1012倍。過(guò)氧化氫酶和鐵離子都能催化以下反應(yīng):H2O2+H2O2→2H2O+02

過(guò)氧化氫酶比鐵離子的催化效率高1011倍.五、酶催化作用的特點(diǎn)：少量肝臟3%的過(guò)氧化氫溶液少量鐵粉1.高效（催化效率高）酶催化作用有高度專一性，一種酶只能作用于某一類或某種特定的物質(zhì)進(jìn)行一定的化學(xué)反應(yīng)生成的產(chǎn)物，成為酶的專一性。

底物—酶所作用的物質(zhì)稱為該酶的底物。（1）絕對(duì)專一性（2）相對(duì)專一性（3）立體異構(gòu)專一性2.專一脲酶

NH2C=O+H2OCO2+2NH3NH2NH2C=ONHCH3

①絕對(duì)專一性(absolutespecifictit）酶只作用于一種底物產(chǎn)生一定的反應(yīng)，稱為絕對(duì)專一性。例如：脲酶只水解尿素，而不能水解甲基尿素②相對(duì)專一性(relativespecific一種酶可作用于一類化合物或一種化學(xué)鍵，這種不太嚴(yán)格的專一性稱為相對(duì)專一性。鍵(Bond)專一性

只對(duì)作用的鍵有選擇性。如酯酶催化酯的水解，對(duì)于酯鍵兩端的基團(tuán)沒(méi)有嚴(yán)格的要求?；鶊F(tuán)專一性一些酶，除要求作用于一定的化學(xué)鍵，對(duì)鍵兩端的基團(tuán)還有一定要求，往往是對(duì)其中一個(gè)基團(tuán)要求嚴(yán)格，對(duì)另一個(gè)基團(tuán)則要求不嚴(yán)格(胰蛋白酶——賴氨酸、精氨酸羧基端肽鍵）酶對(duì)底物的立體構(gòu)型的特異要求，稱為立體異構(gòu)專一性(stereospecificity)。如：α-淀粉酶只能催化淀粉中α-1,4-糖苷鍵的水解，不能催化水解纖維素中的β-1,4-糖苷鍵；L-乳酸脫氫酶的底物只能是L-型乳酸，而不能是D-型乳酸。L-氨基酸氧化酶只能催化L-型氨基酸氧化，而不能催化是D-型氨基酸氧化。立體異構(gòu)專一性(stereospecificity)HOOCCHHOOCCH+H2O延胡索酸酶HOOCCHHCCOOH+H2OCH2COOHCHCOOHOHL-Mal延胡索酸（反丁烯二酸）蘋果酸延胡索酸（順丁烯二酸）酶的活性受調(diào)節(jié)和控制酶濃度的調(diào)節(jié)：通過(guò)激素調(diào)節(jié)酶活性：反饋抑制調(diào)節(jié)酶活性：抑制劑和激活劑對(duì)酶活性的調(diào)節(jié)：別構(gòu)調(diào)控、酶原激活、酶的可逆共價(jià)修飾和同工酶。3.嬌氣（酶易失活）酶是蛋白質(zhì)，酶促反應(yīng)要求一定的pH、溫度等溫和的條件。酶對(duì)環(huán)境條件極為敏感，強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、有機(jī)溶劑、重金屬鹽、高溫、紫外線、劇烈震蕩等任何使蛋白質(zhì)變性的理化因素都可能使酶變性而失去其催化活性。4.受調(diào)控：酶的特性專一高效嬌氣調(diào)控氧化-還原酶催化氧化-還原反應(yīng)。主要包括脫氫酶(dehydrogenase)和氧化酶(Oxidase)。如，乳酸(Lactate)脫氫酶催化乳酸的脫氫反應(yīng)。1.氧化-還原酶類Oxidoreductases(一)酶的分類六、酶的分類與命名轉(zhuǎn)移酶催化基團(tuán)轉(zhuǎn)移反應(yīng)，即將一個(gè)底物分子的基團(tuán)或原子轉(zhuǎn)移到另一個(gè)底物的分子上。

例如，谷丙轉(zhuǎn)氨酶催化的氨基轉(zhuǎn)移反應(yīng)。

2.轉(zhuǎn)移酶類Transferases水解酶催化底物的加水分解反應(yīng)。主要包括淀粉酶、蛋白酶、核酸酶及脂酶等。例如，脂肪酶(Lipase)催化的脂的水解反應(yīng)：

3.水解酶類hydrolases

裂合酶催化從底物分子中移去一個(gè)基團(tuán)或原子形成雙鍵的反應(yīng)及其逆反應(yīng)。主要包括醛縮酶、水化酶及脫氨酶等。例如，延胡索酸水合酶催化的反應(yīng)。4.裂合酶類Lyases

異構(gòu)酶催化各種同分異構(gòu)體的相互轉(zhuǎn)化，即底物分子內(nèi)基團(tuán)或原子的重排過(guò)程。

例如，6-磷酸葡萄糖異構(gòu)酶催化的反應(yīng)。

5.異構(gòu)酶類Isomerases6-磷酸葡萄糖

6-磷酸果糖F-6-P

合成酶，又稱為連接酶，這類反應(yīng)必須與ATP分解反應(yīng)相互偶聯(lián)。A+B+ATP+H-O-H===AB+ADP+Pi例如，丙酮酸羧化酶催化的反應(yīng)。丙酮酸+CO2+ATP草酰乙酸6.合成酶LigasesorSynthetases總結(jié)1.氧化還原酶（1）AH2＋B＝A＋BH22.轉(zhuǎn)移酶（2）AB＋C＝A＋BC3.水解酶（3）AB＋H2O＝AOH＋BH4.裂合酶（4）AB＝A＋B5.異構(gòu)酶（5）A＝B6.連接酶或合成酶（6）：催化C-C、C-O、C-N以及C-S鍵的形成A＋B＋ATP＝AB＋ADP＋Pi或A＋B＋ATP＝AB＋AMP＋PPi在每一大類中，又可根據(jù)不同的原則分為幾個(gè)亞類，每個(gè)亞類再分幾個(gè)亞亞類，每個(gè)亞類的各種酶按照順序編號(hào)。如乳酸脫氫酶EC1.1.1.27）

第一大類第一亞類被氧化的基團(tuán)為CHOH第一亞亞類，氫受體是NAD表示LDH在亞亞類中的排號(hào)六大類編號(hào)依次為1.2.3.4.5.6亞類編號(hào)依次為1.2.3.4.5.6亞－亞類編號(hào)依次為1.2.3.4.5.6酶的編號(hào)（蛋白類酶）(二)酶的命名：通常采用習(xí)慣命名法。1、底物＋酶：如淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等；2、反應(yīng)的性質(zhì)＋酶：如脫氫酶、脫羧酶、水解酶等；3、來(lái)源＋底物＋作用條件＋酶等：如細(xì)菌淀粉酶、堿性磷酸酯酶、胃蛋白酶等。底物名稱＋反應(yīng)類型即：底物名稱之間用“：”隔開。若底物有構(gòu)型，也需標(biāo)出。4.1961年國(guó)際酶學(xué)委員會(huì)（EnzymeCommission，EC）提出系統(tǒng)命名法。第二節(jié)、酶的化學(xué)本質(zhì)和結(jié)構(gòu)一、酶的分子組成輔基2.結(jié)合酶(conjugatedenzyme)：，其組成由蛋白質(zhì)部分(酶蛋白apoenzyme)和非蛋白的物質(zhì)構(gòu)成。非蛋白的物質(zhì)稱酶的輔助因子(cofactors)，兩者結(jié)合成的復(fù)合物稱全酶(holoenzyme)?！锶?結(jié)合蛋白質(zhì))=酶蛋白(蛋白質(zhì)部分)+輔助因子(非蛋白質(zhì)部分)

1.單純酶(simpleenzyme)：構(gòu)成成分僅有蛋白質(zhì)的一類酶。它的催化活性僅僅決定于它的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。如消化道蛋白酶、淀粉酶、酯酶、核糖核酸酶等。決定反應(yīng)的特異性及其催化機(jī)制

決定反應(yīng)的性質(zhì)和反應(yīng)類型

蛋白質(zhì)部分：酶蛋白(apoenzyme)輔助因子(cofactor)

金屬離子小分子有機(jī)化合物全酶(holoenzyme)或非金屬元素3.酶的輔助因子（金屬離子、少數(shù)非金屬元素、小分子有機(jī)化合物）(1)金屬離子（某些非金屬元素）

K+、Na+、Mg2+、Cu2+、(或Cu+)、Zn2+和Fe2+(或Fe3+)、Cl-、Se等金屬酶(metalloenzyme)金屬離子與酶結(jié)合緊密，提取過(guò)程中不易丟失。

金屬激活酶(metal-activatedenzyme)金屬離子為酶的活性所必需，但與酶的結(jié)合不甚緊密。金屬離子在酶中的作用：1）穩(wěn)定酶的構(gòu)象；2）參與催化反應(yīng)，傳遞電子；3）在酶與底物間起橋梁作用；4）帶正電荷、中和陰離子，降低反應(yīng)中的靜電斥力等。金屬酶金屬離子金屬激活酶金屬離子過(guò)氧化氫酶Fe2+丙酮酸激酶K+，Mg2+過(guò)氧化物酶Fe2+丙酮酸羧化酶Mn2+，Zn2+谷胱苷肽過(guò)氧化物酶Se蛋白激酶Mg2+,Mn2+己糖激酶Mg2+精氨酸酶Mn2+固氮酶Mo2+磷脂酶CCa2+核糖核苷酸還原酶Mn2+細(xì)胞色素氧化酶Cu2+羧基肽酶Zn2+脲酶Ni2+碳酸酐酶Zn2+檸檬酸合酶K+金屬酶和金屬激活酶

(2)小分子有機(jī)化合物

在反應(yīng)中起運(yùn)載體的作用，傳遞電子、質(zhì)子或其它基團(tuán)。下列化學(xué)名稱與B族維生素及其輔酶形式相匹配1.維生素B12.維生素B23.維生素B34.維生素B55.維生素B66.維生素B77.維生素B118.維生素B12Ⅰ.FMNⅡ.FADⅢ.NAD+Ⅳ.NADP+Ⅴ.CoAⅥ.PLPⅦ.PMPⅧ.FH2,FH4ⅨTPPA.泛酸B.煙酸C.葉酸D.硫胺素E.核黃素F.吡哆素G.生物素(3)輔酶和輔基

?輔酶(coenzyme)與酶蛋白結(jié)合疏松，可以用透析或超濾方法除去；?輔基(prostheticgroup)與酶蛋白結(jié)合緊密，不易用透析或超濾方法除去（FMN、FAD、生物素）注意①全酶中酶蛋白只有與輔助因子結(jié)合才能發(fā)揮催化作用。一種酶蛋白只能和一個(gè)特定的輔因子結(jié)合；而同一種輔因子可以與多種不同的酶蛋白結(jié)合而顯示出多種不同的催化作用。②酶蛋白決定反應(yīng)專一性，輔因子決定反應(yīng)類型。③多數(shù)輔酶或輔基的前體物質(zhì)是維生素。④近1/3的酶需金屬離子作為輔助成分。一種酶蛋白只能與一種輔助因子結(jié)合一種輔助因子可與多種酶蛋白結(jié)合思考：乳酸脫氫酶以NAD┼為輔酶，肌肉中含有豐富的乳酸脫氫酶，試分析下屬體系中反應(yīng)能否進(jìn)行？（1）乳酸＋肌肉勻漿。（2）乳酸＋煮沸的肌肉勻漿。（3）乳酸＋透析后的肌肉勻漿。單體酶(monomericenzyme)：僅有一條具有三級(jí)結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)構(gòu)成的酶。二、單體酶、寡聚酶、多酶復(fù)合體寡聚酶(oligomericenzyme)：由多個(gè)相同或不同亞基以非共價(jià)鍵連接組成的酶。多酶體系(multienzymesystem)：由多個(gè)功能相關(guān)的酶彼此嵌合形成的復(fù)合體（也稱多酶復(fù)合體）。酶結(jié)合酶（全酶）單純酶酶蛋白輔助因子擔(dān)當(dāng)成分金屬離子小分子有機(jī)物（Vit)結(jié)合緊密程度輔基輔酶金屬酶金屬激活酶單體酶寡聚酶多酶體系酶的不同形式多酶體系寡聚酶（一）必需基團(tuán)(essentialgroup)與酶活性有關(guān)的基團(tuán)稱為酶的必需基團(tuán)。常見(jiàn)的必需基團(tuán)

Ser-OHHis-咪唑基Cys-SHAsp、Glu-COOH

三、酶的結(jié)構(gòu)與功能HNH3+組氨酸的咪唑基絲氨酸的羥基半胱氨酸的巰基谷氨酸的γ-羧基或稱活性部位(activesite)，——酶分子中必需基團(tuán)集中存在的區(qū)域，能與底物特異結(jié)合并將底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物。（二）酶的活性中心(activecenter)活性中心的基團(tuán)在一級(jí)結(jié)構(gòu)上可能相距較遠(yuǎn)，在空間結(jié)構(gòu)上相距較近?；钚灾行膬?nèi)的必需基團(tuán)結(jié)合基團(tuán)(bindinggroup)與底物相結(jié)合催化基團(tuán)(catalyticgroup)催化底物轉(zhuǎn)變成產(chǎn)物位于活性中心以外，維持酶活性中心應(yīng)有的空間構(gòu)象所必需。活性中心外的必需基團(tuán)必需基團(tuán)酶的活性中心(activecenter)溶菌酶的活性中心*谷氨酸35和天冬氨酸52是催化基團(tuán)；*色氨酸62和63、天冬氨酸101和色氨酸108是結(jié)合基團(tuán)；*A-F為底物肽多糖鏈的6個(gè)糖基（細(xì)菌細(xì)胞壁的成分），位于酶的活性中心形成的裂隙中。例①在酶分子的總體中只占小部分。催化部位一般只由2~3個(gè)氨基酸殘基組成，結(jié)合部位的殘基數(shù)因酶而異。②有的和底物的形狀并不是正好互補(bǔ)？具有柔性或可運(yùn)動(dòng)性。③常位于亞基之間的裂隙或是表面的凹陷部位。④底物通過(guò)次級(jí)鍵結(jié)合到酶上.3.酶活性中心的特點(diǎn)：酶的活性中心一般只有一個(gè)，有的會(huì)有數(shù)個(gè)嗎？1.酶原——沒(méi)有活性的酶的前體。2.酶原激活——使無(wú)活性的酶原轉(zhuǎn)變成活性酶的過(guò)程，稱為酶原激活。3.酶原激活的過(guò)程——是通過(guò)去掉分子中的部分肽段，引起酶分子空間結(jié)構(gòu)的變化，從而形成或暴露出活性中心，轉(zhuǎn)變成為具有活性的酶．（三）酶原及酶原激活酶原激活的機(jī)理酶原在特定條件下分子構(gòu)象發(fā)生改變一個(gè)或幾個(gè)特定的肽鍵斷裂，水解掉一個(gè)或幾個(gè)短肽。形成或暴露酶的活性中心胰蛋白酶的激活

纈天天天天賴異纈甘組SS絲SS腸激酶（激活作用）纈天天天天賴異甘組SS絲纈SS活性中心胰蛋白酶原胰蛋白酶提問(wèn)：為什么不直接以酶形式存在呢？答案：保護(hù)正常組織不受傷害。舉例1：

例2:胃蛋白酶原的激活酶原激活的生理意義1.保護(hù)組織器官本身免受水解破壞。2.保證酶在特定部位和環(huán)境發(fā)揮催化作用。3.酶原可視為酶的儲(chǔ)存形式。第三節(jié)、酶作用的機(jī)制⑴初態(tài)（獲得自由能）→活化態(tài)（打破或形成一些化學(xué)鍵）→終態(tài)。⑵活化分子——處于活化態(tài)的分子稱為活化分子。⑶活化能——在一定溫度下1mol底物全部進(jìn)入活化態(tài)所需的自由能。單位：卡/摩爾。一、酶作用在于降低反應(yīng)活化能：

酶能顯著地降低活化能，故能表現(xiàn)為高度的催化效率過(guò)氧化氫酶和鐵離子都能催化:H2O2+H2O2→2H2O+02

過(guò)氧化氫酶比鐵離子的催化效率高1011倍.無(wú)催化劑時(shí)，1mol需活化能75KJ

鐵做催化劑時(shí)，1mol需活化能50KJ

過(guò)氧化氫酶做催化劑時(shí)，1mol需活化能8KJ活化分子越多反應(yīng)速度越快，據(jù)計(jì)算25C°時(shí)活化能每降低1.184KJ/mol，反應(yīng)速度可增加5.4倍。舉例：酶催化某一反應(yīng)時(shí)，首先在酶的活性中心與底物結(jié)合生成酶－底物復(fù)合物，此復(fù)合物再進(jìn)行分解而釋放出酶，同時(shí)生成一種或數(shù)種產(chǎn)物。二、中間復(fù)合物學(xué)說(shuō)ES+P+SEE中間產(chǎn)物學(xué)說(shuō)酶催化的中間產(chǎn)物理論E+SP+EES能量水平反應(yīng)過(guò)程GE1E2酶（E）與底物（S）結(jié)合生成不穩(wěn)定的中間物（ES），再分解成產(chǎn)物（P）并釋放出酶，使反應(yīng)沿一個(gè)低活化能的途徑進(jìn)行，降低反應(yīng)所需活化能，所以能加快反應(yīng)速度。E+SESE+P1.鄰近效應(yīng)和定向效應(yīng)

酶在反應(yīng)中將底物結(jié)合到酶的活性中性，使它們相互接近并形成有利于反應(yīng)的正確定向關(guān)系。三、酶催化效率的化學(xué)機(jī)制2.鄰近效應(yīng)與定向效應(yīng)對(duì)反應(yīng)速度的影響①使底物濃度在活性中心附近很高。

②酶使分子間反應(yīng)轉(zhuǎn)變成分子內(nèi)反應(yīng)。④鄰近效應(yīng)和定向效應(yīng)對(duì)底物起固定作用。酶AB鄰近定向效應(yīng)2.底物形變和誘導(dǎo)契合酶與底物相互接近時(shí)，其結(jié)構(gòu)相互誘導(dǎo)、相互變形，進(jìn)而相互結(jié)合。酶的構(gòu)象變化有利于與底物結(jié)合，底物在酶的誘導(dǎo)下發(fā)生形變，處于不穩(wěn)定的狀態(tài)（過(guò)渡態(tài)），易受催化基團(tuán)的攻擊。3.共價(jià)催化

His的咪唑基，Cys的巰基，Asp的羧基，Ser的羥基等。親核催化是指：酶活性中心的親核催化基團(tuán)提供一對(duì)電子，與底物分子中缺少電子具有部分正電荷的碳原子形成共價(jià)鍵，從而形成不穩(wěn)定的共價(jià)中間產(chǎn)物。

親核基團(tuán)——能夠提供電子對(duì)的原子或基團(tuán)。酶通過(guò)與底物形成反應(yīng)活性很高的共價(jià)過(guò)渡產(chǎn)物，使反應(yīng)活化能降低，從而提高反應(yīng)速度的過(guò)程.（親核基團(tuán)、親電子基團(tuán)）酶分子中可作為親核基團(tuán)親電子催化：是指酶活性中心上的親電子催化基團(tuán)，如—NH4+基Fe2+等，從底物分子的原子上奪取一對(duì)電子，形成共價(jià)鍵，從而產(chǎn)生不穩(wěn)定的共價(jià)中間物。親電子基團(tuán)——能接受電子對(duì)的原子。它是電子對(duì)的受體。因此，親電子催化與親核催化恰好相反。

4.酸－堿催化通過(guò)活性中心質(zhì)子酸提供部分質(zhì)子,或是通過(guò)質(zhì)子堿接受部分質(zhì)子的作用，達(dá)到降低反應(yīng)活化能的過(guò)程。有些催化基團(tuán)可以向底物分子提供質(zhì)子稱為酸催化（組氨酸的咪唑基）；有些催化基團(tuán)是質(zhì)子受體（堿催化基團(tuán)），可以從底物分子上接受質(zhì)子，稱為堿催化。His是酶的酸堿催化作用中最活潑的一個(gè)催化功能團(tuán)。5.活性部位疏水空穴的影響

（表面效應(yīng)）在疏水環(huán)境中進(jìn)行酶反應(yīng)有很大的優(yōu)越性，此現(xiàn)象稱為表面效應(yīng)（surfaceeffect）。

酶的活性中心多位于其分子內(nèi)部的疏水“口袋”中，酶反應(yīng)在酶分子內(nèi)部的疏水環(huán)境中進(jìn)行。疏水環(huán)境可使底物分子脫溶劑化（desolvation）。排除水分子的干擾，防止酶和底物分子之間形成水化膜。

-+表面效應(yīng)：防止在底物與酶之間形成水化膜，有利于酶與底物的接觸第四節(jié)、酶促反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)什么是酶促反應(yīng)速度？研究各種因素對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響，并加以定量的闡述。什么是酶促反應(yīng)速度動(dòng)力學(xué)？酶促反應(yīng)速度在規(guī)定的反應(yīng)條件下，單位時(shí)間內(nèi)底物的消耗量和產(chǎn)物的生成量來(lái)表示?！芯恳环N因素的影響時(shí)，其余各因素均恒定。一、底物濃度對(duì)酶反應(yīng)速率的影響二、酶濃度對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響三、pH對(duì)酶反應(yīng)的影響四、溫度對(duì)酶反應(yīng)速度的影響五、抑制劑對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響六、激活劑對(duì)酶反應(yīng)速度的影響影響酶促反應(yīng)速度的因素有那些？一、底物濃度對(duì)反應(yīng)速度影響1.單底物、單產(chǎn)物的反應(yīng)。2.底物濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于酶濃度。3.在酶濃度，pH，溫度等條件不變的情況下研究底物濃度和反應(yīng)速率的關(guān)系。得到一矩形雙曲線。（飽和現(xiàn)象、非線性）研究前提混合級(jí)反應(yīng)一級(jí)反應(yīng)零級(jí)反應(yīng)【S】一級(jí)反應(yīng)：反應(yīng)速率只與反應(yīng)物濃度的一次方成正比。

二級(jí)反應(yīng)：反應(yīng)速率與反應(yīng)物濃度的二次方成正比。零級(jí)反應(yīng)：反應(yīng)速率與反應(yīng)物濃度無(wú)關(guān)而受它種因素影響而改變的反應(yīng)。[S]VVmax當(dāng)?shù)孜餄舛容^低時(shí)反應(yīng)速度與底物濃度成正比；反應(yīng)為一級(jí)反應(yīng)。EEEEEEEEEEESSEEEEESESESESESES[S]VVmax隨著底物濃度的增高反應(yīng)速度不再成正比例加速；反應(yīng)為混合級(jí)反應(yīng)。EESESESESESESESESESSSSSSS[S]VVmax當(dāng)?shù)孜餄舛雀哌_(dá)一定程度反應(yīng)速度不再增加，達(dá)最大速度；反應(yīng)為零級(jí)反應(yīng)※1913年Michaelis和Menten提出反應(yīng)速度與底物濃度關(guān)系的數(shù)學(xué)方程式，即米－曼氏方程式，簡(jiǎn)稱米氏方程式(Michaelisequation)。[S]：底物濃度V：不同[S]時(shí)的反應(yīng)速度Vmax：最大反應(yīng)速度(maximumvelocity)

Ｋm：米氏常數(shù)(Michaelisconstant)

ＶVmax[S]

Km+[S]＝──（一）米－曼氏方程式米－曼氏方程式推導(dǎo)基于兩個(gè)假設(shè)：

在反應(yīng)初期階段E＋P－ES可忽略[S]>>[E]，則[S]－[ES]約等于[S]反應(yīng)處于動(dòng)態(tài)平衡時(shí)，ES的生成速度與分解速度相等在反應(yīng)的初始階段P很小，P+E形成ES的速度很小，故可以忽落不計(jì)。（二）推導(dǎo)過(guò)程E+S

k1k2k3ESE+PES生成的速度V1=K1[E][S]ES分解的速度V2＝K2[ES]+K3[ES]當(dāng)反應(yīng)體系達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡時(shí)，V1=V2即：K1[E][S]=K2[ES]+K3[ES]K2+K3＝Km

（米氏常數(shù)）K1令：則(1)變?yōu)?([Et]－[ES])[S]＝Km[ES](1)＝

[E].[S]K2+K3[ES]K1整理得：[Et]=[E]+[ES][ES]＝───[Et][S]Km+[S](2)整理得:當(dāng)?shù)孜餄舛群芨?，將酶的活性中心全部飽和時(shí)，即[Et]＝[ES]，反應(yīng)達(dá)最大速度Vmax＝K3[ES]＝K3[Et]

將(5)代入(4)得米氏方程式：Vmax[S]Km+[S]V＝────酶促反應(yīng)速度V=K3[ES]代入上式得[Et][S]Km+[S]

＝────K3V整理得K3[Et][S]Km+[S]

V＝────當(dāng)反應(yīng)速度為最大反應(yīng)速度一半時(shí)1.Km值的推導(dǎo)Km＝[S]∴Km值等于酶促反應(yīng)速度為最大反應(yīng)速度一半時(shí)的底物濃度，單位是mol/L。2＝Km+[S]

Vmax

Vmax[S]VmaxV[S]KmVmax/2(三)米氏常數(shù)Km2.Km的意義（1）Km是酶的特征常數(shù)之一。只與酶的性質(zhì)、底物種類及反應(yīng)條件有關(guān)，與酶的濃度無(wú)關(guān)。①不同的酶，Km不同；②同一種酶與不同的底物作用時(shí)，Km不同；③同一種酶與相同的底物作用時(shí)，作用條件不同（pH、溫度及有無(wú)抑制劑等），Km不同；（2）Km可近似表示酶對(duì)底物的親和力

Km越大，親和力越小。

Km越小，親和力越大。問(wèn)題1：推斷限速步聚：當(dāng)一系列不同的酶催化一個(gè)代謝過(guò)程的連鎖反應(yīng)時(shí)，各種酶的Km值分別如下，A、B、C的濃度均為10-4mol/L，哪一步限速步驟？ABE1CDE2E3Km1=10-2mol/LKm2=10-3mol/LKm3=10-4mol/L可以推出限速步驟是？1問(wèn)題3：推斷代謝趨勢(shì)：丙酮酸：可被乳酸脫氫酶、丙酮酸脫氫酶和丙酮酸脫羧酶催化，Km分別為:1.7×10-5、1.3×10-3和1.0×10-3mol/L，當(dāng)丙酮酸濃度較低時(shí)，走哪條途徑？問(wèn)題2：可根據(jù)米氏方程計(jì)算一定速率下的底物濃度如某一反應(yīng)要求的反應(yīng)速率達(dá)到最大反應(yīng)速度的90%，則[S]=？Km如：當(dāng)[S]=3Km時(shí)，可求反應(yīng)速率相當(dāng)于Vmax的百分?jǐn)?shù)為？%。在一個(gè)米氏酶催化單底物反應(yīng)中，當(dāng)[S]遠(yuǎn)小于Km時(shí)該反應(yīng)的特點(diǎn)之一是()A.反應(yīng)速度最大B.反應(yīng)速度與底物濃度成正比C.反應(yīng)速度達(dá)到最大反應(yīng)速度一半D.反應(yīng)速度與底物濃度成反比ＶVmax[S]

Km+[S]＝──（四）Ｋm值與Ｖmax值的測(cè)定1.雙倒數(shù)作圖法(doublereciprocalplot)，又稱為林-貝氏(Lineweaver-Burk)作圖法

Vmax[S]Km+[S]V=（林－貝氏方程）+1/V=KmVmax1/Vmax1/[S]兩邊同取倒數(shù)

（林－貝氏方程）+1/V=KmVmax1/Vmax1/[S]ykx+b縱軸上的截距為1/Vmax橫軸上的截距為-1/Km米氏方程只適用于較為簡(jiǎn)單的酶作用過(guò)程，對(duì)于比較復(fù)雜的酶促反應(yīng)過(guò)程，如多酶體系、多底物、多產(chǎn)物、多中間物等，不能全面地概括和說(shuō)明，必須借助于復(fù)雜的計(jì)算過(guò)程。注意：1.最適PH——酶能表現(xiàn)最大活力時(shí)的PH值。2.pH對(duì)酶活力的影響①影響酶蛋白構(gòu)象，過(guò)酸或過(guò)堿會(huì)使酶變性。②影響酶和底物分子解離狀態(tài)，尤其是酶活性中心的基團(tuán)或維持其構(gòu)象的基團(tuán)的解離狀態(tài)，從而影響ES的形成。二、pH對(duì)反應(yīng)速度的影響OptimumpH（最適pH）常為中性，胃蛋白酶為1.8,肝精氨酸酶為9.8．三、溫度對(duì)反應(yīng)速度的影響酶活性0.51.02.01.50102030405060溫度oC溫度對(duì)淀粉酶活性的影響

溫度對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響有兩個(gè)方面：①溫度影響反應(yīng)體系中的活化分子數(shù)：溫度增加，活化分子數(shù)量增多，反應(yīng)速度加快。②溫度影響酶的活性：過(guò)高的溫度使酶變性失活，反應(yīng)速度下降。溫血?jiǎng)游锩傅淖钸m溫度為35℃—40℃植物酶的最適溫度為40℃—50℃細(xì)菌TaqDNA聚合酶的最適溫度為70℃最適溫度不是酶的特征常數(shù)，一種酶的最適溫度不是一成不變的，它與酶的純度、底物種類、作用時(shí)間、pH、離子強(qiáng)度等因素有關(guān)。最適溫度酶促反應(yīng)速率達(dá)到最大值的溫度。酶的活性雖然隨溫度的下降而降低，但低溫一般不破壞酶。溫度回升后，酶又恢復(fù)活性。低溫、固體可保存菌種。酶的保存新掰下的玉米的甜味是由于玉米粒中的糖濃度高，可是掰下的玉米貯存幾天后就不那么甜了，為什么？討論：如果將新鮮玉米去掉外皮后浸入沸水幾分鐘，然后于冷水中冷卻，并且冷凍儲(chǔ)存在冰箱里，就可保持其原有甜味。這是什么道理？為什么蠶豆、黃豆必須煮熟后食用，否則容易引起不適？蠶豆、黃豆等某些植物種子含有胰蛋白酶抑制劑，煮熟后胰蛋白酶抑制劑被破壞，否則食用后抑制胰蛋白酶活性，影響消化，引起不適。四、酶濃度對(duì)反應(yīng)速度的影響當(dāng)[S]＞＞[E]，酶可被底物飽和的情況下，反應(yīng)速度與酶濃度成正比。關(guān)系式為：V=K3[E]0V[E]當(dāng)[S]>>[E]時(shí)，Vmax=k3[E]酶濃度對(duì)反應(yīng)速度的影響

1.激活劑：凡能提高酶活性的物質(zhì)，都稱為激活劑五、激活劑對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響2.種類：Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Cu2+、Zn2+、Fe2+；Clˉ、Brˉ、Iˉ、CNˉ、NO3-、PO4-小分子有機(jī)物：Cys、GSH、EDTA；④包括激活酶原的蛋白酶。抑制劑——凡能使酶的活性下降而不引起酶蛋白變性的物質(zhì)稱做酶的抑制劑。(inhibitor)。抑制劑——對(duì)酶有選擇性。變性劑——對(duì)酶無(wú)選擇性。

六、抑制劑對(duì)反應(yīng)速度的影響：什么是酶的抑制劑？抑制作用的類型？（多數(shù)共價(jià)鍵結(jié)合，不可以用物理方法如透析、超濾方法除去)（一）不可逆抑制作用(二)可逆抑制作用專一性不可逆抑制作用非專一性不可逆抑制作用非競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用(一)不可逆性抑制作用(irreversibleinhibition)專一性非專一性。不可逆性抑制作用——抑制劑與酶的必需基團(tuán)以共價(jià)形式結(jié)合，引起酶的活力喪失。不能通過(guò)透析等方法除去抑制劑。1.專一性不可逆抑制抑制劑專一的作用于酶的活性中心或其必需基團(tuán)，進(jìn)行共價(jià)結(jié)合，從而抑制酶的活性。羥基酶:

以絲氨酸側(cè)鏈上的羥基(OH)為必需基團(tuán)的一類酶。有機(jī)磷殺蟲劑（敵敵畏、敵百蟲）等有機(jī)磷化合物能與絲氨酸殘基上的羥基結(jié)合。催化乙酰膽堿水解的膽堿脂酶是羥基酶。有機(jī)磷中毒時(shí)此酶活性受抑制，臨床上用解磷定來(lái)治療有機(jī)磷中毒。可奪取已經(jīng)和膽堿脂酶結(jié)合的磷?；姑笍?fù)活。例如：有機(jī)磷農(nóng)藥對(duì)羥基酶的抑制-Ser-OH-Ser-OPO-RO-ROPO-RO-ROX有機(jī)磷殺蟲劑能專一作用于膽堿酯酶活性中心的絲氨酸殘基實(shí)例：有機(jī)磷殺蟲劑2.非專一性不可逆抑制抑制劑與酶分子中一類或幾類基團(tuán)作用，無(wú)論是否是必需基團(tuán)，皆可共價(jià)結(jié)合，使酶受到抑制。例：某些重金屬(Pb2+、Cu2+、Hg2+)及對(duì)氯汞苯甲酸等對(duì)巰基酶的抑制作用。用二巰基丙醇(britishantilewisite,BAL)或二巰基丁二酸鈉等含巰基的化合物可使酶復(fù)活重金屬離子及砷（砒霜、路易士氣），可用二巰基丙醇（BAL）(巴爾）解毒。

可逆性抑制——抑制劑與酶以非共價(jià)方式結(jié)合，引起酶活性暫時(shí)性喪失。抑制劑可以通過(guò)透析等方法除去，并且能部分或全部恢復(fù)酶的活性。這類抑制劑大致可分為以下三類。競(jìng)爭(zhēng)性抑制非競(jìng)爭(zhēng)性抑制反競(jìng)爭(zhēng)性抑制(二)可逆性抑制(reversibleinhibition)定義抑制劑與底物的結(jié)構(gòu)相似，能與底物競(jìng)爭(zhēng)酶的活性中心，從而阻礙酶底物復(fù)合物的形成，使酶的活性降低。這種抑制作用稱為競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用。競(jìng)爭(zhēng)性抑制.swf１.競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用+IEIE+SE+PES反應(yīng)模式+++EESIESEIEPSICOOHHCCHHOOC例1、例2、磺胺類藥物例3.甲氨蝶呤是抗腫瘤常用藥物之一，抑制二氫葉酸還原成四氫葉酸，導(dǎo)致DNA無(wú)法復(fù)制，從而在源頭上阻止了癌細(xì)胞的分裂、增長(zhǎng)，達(dá)到治療癌癥的作用。

這樣的藥物的作用機(jī)理是什么？結(jié)構(gòu)相似

PABA二氫蝶呤谷氨酸FH2合成酶磺胺類藥物（-）FH2FH2還原酶MTX（-）FH4結(jié)構(gòu)相似結(jié)構(gòu)相似注意：（甲氨蝶呤）蛋白質(zhì)←核酸(2)反應(yīng)速度公式及作圖按米氏公式推導(dǎo)方法，也可演算出競(jìng)爭(zhēng)性抑制時(shí)，抑制劑、底物和反應(yīng)速度之間的動(dòng)力學(xué)關(guān)系及其雙倒數(shù)方程式為：

1V

KmVmax

1[S]

1Vmax=+（1+）[I]KiV=Vmax[S]Km（1+）[I]Ki+[S]特點(diǎn)：1.抑制劑I在化學(xué)結(jié)構(gòu)上與底物S個(gè)相似，能與底物S競(jìng)爭(zhēng)酶E分子活性中心的結(jié)合基團(tuán)。2.抑制劑與酶是以非共價(jià)鍵結(jié)合。3.抑制作用大小取決于抑制劑與底物的濃度比，加大底物濃度，可使抑制作用減弱。4.Vmax不變，Km值增高。（達(dá)到最大反應(yīng)速度一半的底物濃度增大）抑制劑I與酶E的活性中心以外的必需集團(tuán)結(jié)合，不影響酶與底物結(jié)合。抑制劑I、底物和酶E結(jié)合的位點(diǎn)不同，這種抑制稱為非競(jìng)爭(zhēng)性抑制。一旦形成ESI復(fù)合物，不能釋放形成產(chǎn)物P。非競(jìng)爭(zhēng)抑制作用.swf2.非競(jìng)爭(zhēng)性抑制（1）定義*反應(yīng)模式E+SESE+P+

S－S+

S－S+ESIEIEESEP+IEI+SEIS+I(2)反應(yīng)速度公式及作圖非競(jìng)爭(zhēng)性抑制非競(jìng)爭(zhēng)性抑制.flv抑制劑↑1/V1/[S]無(wú)抑制劑v=Vmax[S](1+[I]/Ki)(Km+[S])特點(diǎn)：1.抑制劑與酶活性中心以外基團(tuán)結(jié)合，底物與抑制劑之間無(wú)競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系。2.抑制程度取決于抑制劑的濃度。3.Km不變，Vmax變小。例如：某些金屬離子（Cu2+、Ag+、Hg2+）以及EDTA等，通常能與酶分子的調(diào)控部位中的-SH基團(tuán)作用，改變酶的空間構(gòu)象，引起非競(jìng)爭(zhēng)性抑制。抑制劑只能與酶和底物形成的中間產(chǎn)物（ES）結(jié)合，不與游離酶結(jié)合，從而抑制酶活性。3.反競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用E+SESE+P+IESIKi抑制劑↑1/V1/[S]無(wú)抑制劑?v=Vmax[S]Km+(1+[I]/Ki)[S]A、與米氏方程比較特點(diǎn)：1.抑制劑只與酶－底物復(fù)合物結(jié)合2.抑制程度取決于抑制劑的濃度及底物的濃度3.動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)：Vmax降低，表觀Km降低。變小三種可逆性抑制作用動(dòng)力學(xué)常數(shù)比較可使米氏酶Km增大的抑制劑是（）A.競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑B.非競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑C.反競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑D.不可逆抑制劑7.5酶活性測(cè)定和酶活力單位酶活力是指酶催化化學(xué)反應(yīng)的能力，其衡量的標(biāo)準(zhǔn)是酶促反應(yīng)速度。酶促反應(yīng)速度可在適宜的反應(yīng)條件下，用單位時(shí)間內(nèi)底物的消耗或產(chǎn)物的生成量來(lái)表示。1、酶活力與酶促反應(yīng)速度

研究酶促反應(yīng)速度，以酶促反應(yīng)的初速度為準(zhǔn)(底物消耗≤5%）。2、酶的活力單位（U）國(guó)際單位——IU單位（1961）在最適反應(yīng)條件下，每分鐘催化1umol底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物所需的酶量，稱一個(gè)國(guó)際單位（IU）。1IU=1umol/min新國(guó)際單位——Katal（Kat）單位（1972）在最適反應(yīng)條件下，每秒鐘催化1mol底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物所需的酶量，稱Kat單位1Kat=60×106IU酶反應(yīng)的最適條件★最適溫度（25℃或37℃）★最適pH★最適緩沖液離子強(qiáng)度★最適底物濃度底物濃度（1）通常很大，使酶飽和。（2）底物消耗≤5%酶的比活力是分析酶的含量與純度的重要指標(biāo)。3、酶的比活力Specificactivity每毫克酶蛋白所具有的酶活力單位數(shù)。單位定義U/mg蛋白質(zhì)其他定義：每毫升酶溶液或每毫克酶制劑所具有的酶活力。4.純化倍數(shù)和產(chǎn)率（回收率）純化倍數(shù)——每次（步驟）比活力除以第一次的比活力.純化倍數(shù)每一步比活力第一步比活力=產(chǎn)率（回收率）：每一次總活力占第一次總活力的百分比。產(chǎn)率每一步總活力第一步總活力=×100%某種酶的分離純化分4步進(jìn)行例步驟1234總活力（U）6432總蛋白質(zhì)（mg）201052比活力（U/mg）3/104/106/1010/10酶的提純過(guò)程中，總蛋白減少，總活力減少，比活力增高。第一步比活力每一步比活力酶的純化倍數(shù)=第一步總活力每一步總活力酶的回收率=第三步？2倍第四步？33.33%討論：一個(gè)純酶用水透析后，活性喪失，最可能的原因是什么？你用何辦法來(lái)驗(yàn)證你的判斷？7.6重要的酶COO-COO-C=O+NADH+H+H

COH+NAD+CH3CH3LDH5丙酮酸乳酸LDH1例如：乳酸脫氫酶(LDH)一、同工酶(isoenzme)催化相同的化學(xué)反應(yīng),酶蛋白的分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)乃至免疫學(xué)性質(zhì)不同的一組酶同工酶之間的相同點(diǎn)是？M型亞基H型亞基LDH1H4（心肌）LDH2H3MLDH3H2M2LDH4H1M3LDH5M4（骨骼?。?）乳酸脫氫酶同工酶組成（LDH存在于哺乳動(dòng)物中的有五種）4亞基數(shù)（2）LDH同工酶在組織中的存在與功能的關(guān)系LDH1和LDH2對(duì)乳酸親和力高，易使乳酸脫氫氧化生成丙酮酸，后者進(jìn)一步氧化可釋放出能量供心肌活動(dòng)的需要；LDH5與LDH4對(duì)丙酮酸的親和力高，而使它得氫還原成乳酸，這對(duì)保證肌肉在短暫缺氧時(shí)仍可獲得能量有關(guān)。組織器官LDH1LDH2LDH3LDH4LDH5

（占總LDH活性百分比）心35-7028-452-160-60-5肝0-82-103-336-2730-8骨骼肌1-104-188-389-3640-97正常血清2734.720.911.75.7心、肝和骨骼肌LDH同工酶譜同工酶譜的改變有助于對(duì)疾病的診斷；心肌梗死和肝病病人血清LDH同工酶譜的變化1酶活性心肌梗死酶譜正常酶譜肝病酶譜2345二、共價(jià)調(diào)節(jié)酶1.概念：酶蛋白肽鏈上某些基團(tuán)在另一種酶的催化下，發(fā)生可逆的共價(jià)修飾，從而引起酶活性的改變，這種調(diào)節(jié)稱可逆共價(jià)修飾。這類酶稱為修飾酶。2.修飾的方式：磷酸化與脫磷酸、乙?；c脫乙酰、甲基化與脫甲基、腺苷化與脫腺苷等。磷酸化與脫磷酸是主要方式：修飾位點(diǎn)：Ser、Thr和Tyr的-OH激酶及磷酸酶催化。酶的磷酸化和脫磷酸化①具有兩種形式，無(wú)活性與有活性形式。②共價(jià)鍵結(jié)合，效率高于變構(gòu)調(diào)節(jié)。③具有級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)（瀑布效應(yīng)）。④磷酸化消耗ATP。⑤是體內(nèi)經(jīng)濟(jì)、有效的快速調(diào)節(jié)方式。3.共價(jià)調(diào)節(jié)酶的特點(diǎn)：由磷酸化誘發(fā)的級(jí)聯(lián)反應(yīng)CascadenSnP1Enzyme質(zhì)膜1受體糖原G-1-P蛋白激酶（有)（無(wú)）腎上腺素（有）PPPP2ba糖原磷酸化酶ATPADPP（無(wú))（有)磷酸化酶激酶ATPADP1×1021×1041×106ATPcAMP腺苷酸環(huán)化酶（無(wú)）1×102腎上腺素激活肝糖原分解的級(jí)聯(lián)系統(tǒng)三、變構(gòu)酶1.變構(gòu)（別構(gòu)）調(diào)節(jié)——某些小分子物質(zhì)可與酶活性中心以外的某一部位可逆性非共價(jià)鍵結(jié)合，引起酶構(gòu)象的改變從而改變酶活性，這種調(diào)節(jié)方式稱為變構(gòu)調(diào)節(jié)。結(jié)合部位即調(diào)節(jié)部位2.變構(gòu)酶——受變構(gòu)調(diào)節(jié)的酶稱變構(gòu)酶，也叫別構(gòu)酶（均為寡聚酶,由多亞基組成）。3.變構(gòu)效應(yīng)劑——能引起變構(gòu)效應(yīng)的小分子物質(zhì)稱效應(yīng)劑。變構(gòu)激活劑（正效應(yīng)物）導(dǎo)致酶活性增強(qiáng)的物質(zhì)變構(gòu)抑制劑（負(fù)效應(yīng)物）導(dǎo)致酶活性降低的物質(zhì)效應(yīng)劑調(diào)節(jié)亞基催化亞基變構(gòu)酶米氏酶協(xié)同效應(yīng)：別構(gòu)效應(yīng)的一種特殊類型，是亞基之間的一種相互作用。指寡聚蛋白的某一個(gè)亞基與配基結(jié)合時(shí)可改變蛋白質(zhì)其他亞基的構(gòu)象，進(jìn)而改變蛋白質(zhì)生物活性,使之增加或減少的現(xiàn)象。第一個(gè)配體的結(jié)合引起第二個(gè)第三個(gè)配體更容易結(jié)合，叫做正協(xié)同第一個(gè)配體的結(jié)合引起第二個(gè)第三個(gè)配體更難結(jié)合，就是負(fù)協(xié)同。別構(gòu)蛋白質(zhì)：具有別構(gòu)效應(yīng)的蛋白質(zhì)稱為別構(gòu)蛋白質(zhì)。多數(shù)屬于寡聚蛋白質(zhì)。特別指出：4.變構(gòu)酶的主要特點(diǎn)：通常具有四級(jí)結(jié)構(gòu)。含有催化亞基和調(diào)節(jié)亞基（催化部位和調(diào)節(jié)部位）。變構(gòu)劑與酶非共價(jià)鍵結(jié)合。④別構(gòu)酶的動(dòng)力學(xué)曲線在正協(xié)同效應(yīng)時(shí)呈現(xiàn)“S”型（負(fù)協(xié)同效應(yīng)時(shí)呈現(xiàn)矩形雙曲線）。

1.在測(cè)定酶活力時(shí)，用下列哪種方法處理酶和底物才合理?（）A．其中一種用緩沖液配制即可B．分別用緩沖液配制，再預(yù)保溫兩者，最后混合進(jìn)行反應(yīng)C．先混合，然后保溫進(jìn)行反應(yīng)