FABP-5基因沉默對宮頸癌SiHa細(xì)胞生物學(xué)特性的影響

www.CRTERwww.CRTER.org陳逢振，等.FABP-5基因沉默對宮頸癌SiHa細(xì)胞生物學(xué)特性的影響www.CRTERwww.CRTER.org陳逢振，等.FABP-5基因沉默對宮頸癌SiHa細(xì)胞生物學(xué)特性的影響PAGE2224P.O.Box10002PAGE2219P.O.Box1200,PAGE2218P.O.Box10002FABP-5基因沉默對宮頸癌SiHa細(xì)胞生物學(xué)特性的影響文章快速閱讀：沉默F(xiàn)ABP-5基因?qū)m頸癌SiHa細(xì)胞的影響沉默F(xiàn)ABP-5基因?qū)m頸癌SiHa細(xì)胞的影響設(shè)計(jì)并合成干擾siRNA設(shè)計(jì)并合成干擾siRNA序列sisiRNA干擾技術(shù)沉默F(xiàn)ABP-5基因細(xì)胞凋亡顯著增加細(xì)胞侵襲能力降低細(xì)胞增殖受到抑制轉(zhuǎn)染宮頸癌SiHa細(xì)胞細(xì)胞凋亡顯著增加細(xì)胞侵襲能力降低細(xì)胞增殖受到抑制轉(zhuǎn)染宮頸癌SiHa細(xì)胞文題釋義：基因沉寂：也可以被稱為基因沉默，是真核生物細(xì)胞基因表達(dá)調(diào)節(jié)的一種重要手段。以前，基因沉寂被理解為是真核生物染色體形成異染色質(zhì)的過程。最近的研究表明，基因沉寂與異染色質(zhì)存在差異，盡管被沉寂的基因區(qū)段也呈高濃縮狀態(tài)，但基因沉寂所形成的染色體構(gòu)象并不完全等同于異染色質(zhì)構(gòu)象。除此之外，兩者還存在著基因表達(dá)調(diào)控程度上的差異，一般認(rèn)為處于基因沉寂的染色質(zhì)區(qū)的基因表達(dá)被徹底關(guān)閉，而異染色質(zhì)狀態(tài)的基因可能依然進(jìn)行低水平的表達(dá)。摘要背景：研究發(fā)現(xiàn)腫瘤相關(guān)基因以及腫瘤基因通路的改變在腫瘤的形成與發(fā)展中起重要作用。目的：探討siRNA干擾技術(shù)沉默F(xiàn)ABP-5基因表達(dá)對人宮頸癌SiHa細(xì)胞生物學(xué)特性的影響。方法：以人宮頸癌SiHa細(xì)胞為研究對象，根據(jù)FABP-5mRNA編碼序列設(shè)計(jì)并合成干擾siRNA序列，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染SiHa細(xì)胞。用RT-PCR和Westernblot法分別從mRNA水平和蛋白水平檢測FABP-5基因的表達(dá)；流式細(xì)胞技術(shù)檢測各組細(xì)胞周期的變化；CCK-8法測定細(xì)胞體外增殖能力；細(xì)胞侵襲小室法檢測各組細(xì)胞的體外侵襲力；TUNEL染色檢測各組細(xì)胞的凋亡情況。結(jié)果與結(jié)論：與轉(zhuǎn)染空病毒陰性對照組和未轉(zhuǎn)染空白對照組比較，F(xiàn)ABP-5siRNA組FABP-5mRNA和蛋白表達(dá)明顯下降，細(xì)胞生長速度明顯減慢，細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期，S期細(xì)胞數(shù)減少，細(xì)胞侵襲力顯著下降，細(xì)胞凋亡率明顯升高。結(jié)果說明siRNA技術(shù)可以成功誘導(dǎo)FABP-5基因沉默，從而影響宮頸癌SiHa細(xì)胞的的生長、增殖和凋亡。關(guān)鍵詞：組織構(gòu)建；組織工程；宮頸癌；FABP-5；siRNA干擾；SiHa細(xì)胞；細(xì)胞周期；細(xì)胞增殖；細(xì)胞侵襲；細(xì)胞凋亡主題詞：RNA,小分子干擾；脂肪酸結(jié)合蛋白質(zhì)類；宮頸腫瘤；細(xì)胞增殖；細(xì)胞凋亡PAGE2221ISSN2095-4344CN21-1581/RCODEN:ZLKHAH4P.O.Box1200,Shenyang110004kf23385083@EffectsofFABP-5genesilencingonthebiologicalcharacteristicsofthecervicalcarcinomacelllineSiHaChenFeng-zhen,YinLi-rong(DepartmentofGynecology,SecondHospitalofTianjinMedicalUniversity,Tianjin120210,China)AbstractBACKGROUND:Cancerrelatedgenesandpathwaysplayacriticalroleinformationanddevelopmentofcancer.OBJECTIVE:Toinvestigatethesilencingepidermalfattyacidbindingprotein5(FABP-5)bysiRNAinterferenceonbiologicalcharacteristicsofthecervicalcarcinomacelllineSiHa.METHODS:DesignandsynthesisofsiRNAinterferencesequenceusedtotransientlytransfectSiHacellswasperformedaccordingtoFABP-5mRNAcodingsequence.mRNAandproteinexpressionsofFABP-5weredetectedbyRT-PCRandwesternblotassay,respectively.Meanwhile,cellcycle,proliferation,invasionandapoptosisweredetectedbyflowcytometry,cellcountingbit-8assay,Boydenchamberassay,andTUNELstaining,respectively.RESULTSANDCONCLUSION:FABP-5mRNAandproteinexpressions,cellgrowthspeed,cellnumberatSphase(cellcyclewasarrestedattheG0/G1phase)andcellinvasionweresignificantlydecreased,whilethecellapoptosiswassignificantlyincreasedinFABP-5siRNAgroupcomparedwiththenegativecontrolandblankcontrolgroups.OurfindingsindicatethatthespecificsilencingFABP-5geneexpressionbysiRNAinterferencecaninhibitSiHacervicalcellgrowthandproliferation,butacceleratecellapoptosis.Subjectheadings:RNA,SmallInterfering;FattyAcid-BindingProteins;UterineCervicalNeoplasms;CellProliferation;ApoptosisCitethisarticle:ChenFZ,YinLR.EffectsofFABP-5genesilencingonthebiologicalcharacteristicsofthecervicalcarcinomacelllineSiHa.ZhongguoZuzhiGongchengYanjiu.2021;20(15):2218-2224.ChenFeng-zhen,Master,ChenFeng-zhen,Master,Physician,DepartmentofGynecology,SecondHospitalofTianjinMedicalUniversity,Tianjin120210,ChinaCorrespondingauthor:YinLi-rong,Professor,Chiefphysician,DepartmentofGynecology,SecondHospitalofTianjinMedicalUniversity,Tianjin120210,China0引言Introduction目前關(guān)于宮頸癌的現(xiàn)有治療手段均不理想[1-3]，有必要尋求一種新的治療方法，以提高宮頸癌的治愈率，改善宮頸癌的預(yù)后。研究發(fā)現(xiàn)癌基因與抑癌基因會在腫瘤的發(fā)展過程中扮演重要角色，利用抑癌基因控制腫瘤的生長為防治腫瘤制定了新的策略，也是目前研究的熱點(diǎn)問題[4-6]。表皮型脂肪酸結(jié)合蛋白5(fattyacidbindingprotein-5，F(xiàn)ABP-5)基因存在于多種細(xì)胞中的脂肪酸結(jié)合蛋白，在多種腫瘤中FABP-5基因可呈高表達(dá)[7-9]。siRNA技術(shù)是近年來新發(fā)展的一項(xiàng)基因沉默技術(shù)，siRNA不僅具有更高的基因特異性，而且抑制基因的表實(shí)驗(yàn)通過siRNA技術(shù)沉默F(xiàn)ABP-5基因后導(dǎo)入人宮頸癌SiHa細(xì)胞中，探討其對人宮頸癌SiHa細(xì)胞生物學(xué)特性的影響。1材料和方法Materialsandmethods1.1設(shè)計(jì)細(xì)胞學(xué)體外觀察實(shí)驗(yàn)。1.2時(shí)間及地點(diǎn)實(shí)驗(yàn)于2021年1月至2021年7月在天津醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心完成。1.3材料人宮頸癌細(xì)胞系(SiHa)購自上海拜力生物科技；siRNA靶點(diǎn)設(shè)計(jì)、同時(shí)帶有綠色熒光蛋白(greenfluorescentprotein，GFP)和嘌呤霉素抗性篩選標(biāo)記的3種FABP-5基因沉默重組慢病毒顆粒LV-shRNA-FABP-5(1，2，3)及對照空載體慢病毒顆粒(LV-shRNA-NC)均由上海吉凱基因技術(shù)提供；TRIzol購自Invitrogen公司；DMEM、PBS、胎牛血清均購自Hyclone公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒購自美國Fermentas公司；熒光定量PCR試劑盒購自大連寶生物工程(大連)；Westernblot及IP細(xì)胞裂解液、苯甲基磺酰氟(phenylmethanesulfonylfluoride，PMSF)、20×TBS緩沖液、BCA蛋白濃度測試試劑盒(增強(qiáng)型)、SDS蛋白上樣緩沖液(5×)等均購于杭州碧云天生物科技公司；DNAMarker購自廣州東盛生物科技；PVDF膜購自美國Millipore公司；流式細(xì)胞儀購自德國Merck公司；碘化丙啶和RNase酶購自美國GIBCO公司；細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)采用CellInvasionAssayKit(ChemiconInternationalCat.No.ECM550)；FABP-5和GAPDH基因的引物由上海吉瑪制藥公司合成并通過測序驗(yàn)證；熒光顯微鏡購自奧林帕斯公司；凋亡試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)；兔抗人FABP-5單克隆抗體購自美國BeckmanCoulter公司；鼠抗人GAPDH單克隆抗體購自北京博奧森公司。1.4實(shí)驗(yàn)方法左氧氟沙星的DMEM培養(yǎng)基中，于37℃，體積分?jǐn)?shù)為5%CO2密閉式孵箱內(nèi)培養(yǎng)、傳代。隨機(jī)選取處于對數(shù)生長期的宮頸癌SiHa細(xì)胞分為3組：FABP-5-siRNA組加入Lv-siRNA-FABP-5，陰性對照組加入LV-siRNA-NC，空白對照組常規(guī)培養(yǎng)。轉(zhuǎn)染前12h應(yīng)用胰酶消化對數(shù)生長期的人宮頸癌細(xì)胞株SiHa細(xì)胞，所制得的細(xì)胞懸液接種于6孔板(細(xì)胞數(shù)約為5×104)，于37℃、體積分?jǐn)?shù)為5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)待細(xì)胞融合度達(dá)到20%-30%時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染，每孔均加以同等量聚凝胺(polybrene)及感染增強(qiáng)液，設(shè)定轉(zhuǎn)染的感染復(fù)數(shù)(multiplicityofinfection，MOI)為10，每組均設(shè)3個(gè)重復(fù)孔，LV-siRNA-FABP-5靶點(diǎn)序列5’-TGGGAAGGAAAGCACAATA-3’，陰性對照(NegativeControl后，以Trizol試劑盒提取宮頸癌SiHa細(xì)胞(4×105細(xì)胞)的總RNA，進(jìn)行定量，并按反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書步驟合成cDNA。PrimerPrimer5.0軟件設(shè)計(jì)引物，F(xiàn)ABP-5上游引物：5’-TGAAGGAGCTAGGAGTGGGAA-3’，下游引物：5’-TGCACCATCTGTAAAGTTGCAG-3’，擴(kuò)增片段212bp；內(nèi)參GAPDH上游引物:5’-TGACTTCAACAGCGACACCCA-3’，下游引物：5’-CACCCTGTTGCTGTAGCCAAA-3’，擴(kuò)增片段121bp。每組細(xì)胞1.4.3Westernblot檢測FABP-5蛋白表達(dá)細(xì)胞轉(zhuǎn)染48h后，人宮頸癌SiHa細(xì)胞棄去上清，加入1μLPMSF裂解液，搖勻置于冰上裂解30min，PBS沖洗細(xì)胞3次，提取總蛋白，應(yīng)用BCA法測定蛋白濃度。吸取50μg總蛋白，去離子水補(bǔ)至20μL，入等體積2×上樣緩沖液，99℃變性10min。5%濃縮膠40V衡壓1h，10%分離膠恒壓60V3.5h，濕轉(zhuǎn)14V恒壓14h，371.4.4流式細(xì)胞術(shù)檢測宮頸癌SiHa細(xì)胞周期分布將以上3組宮頸癌SiHa細(xì)胞培養(yǎng)在6孔板內(nèi)，按4×108L-1的細(xì)胞濃度接種細(xì)胞，培養(yǎng)至細(xì)胞匯合，經(jīng)胰酶消化后，用PBS洗滌3次，加入1mL預(yù)冷的體積分?jǐn)?shù)為70%乙醇，于4℃下固定過夜；再用PBS洗滌2次，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度為1.0×108L-1，接種于試管中，以細(xì)胞懸液∶碘化丙啶=1∶1加入適量碘化丙啶液，4℃室溫下避光孵育30min；加入緩沖液4001.4.5CCK-8法檢測宮頸癌SiHa細(xì)胞的增殖能力收集上述各組宮頸癌SiHa細(xì)胞，按4000個(gè)/孔的細(xì)胞密度將宮頸癌SiHa細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板上，加入含體積分?jǐn)?shù)為10%胎牛血清DMEM培養(yǎng)基200μL，每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔，另設(shè)空白孔作為對照。在37℃，體積分?jǐn)?shù)為5%CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，每孔加入CCK-820μL孵育4h，酶標(biāo)儀檢測490.7TUNEL染色檢測宮頸癌SiHa細(xì)胞的凋亡情況做SiHa細(xì)胞爬片，取對數(shù)生長期細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染脂質(zhì)體、表表2各組宮頸癌SiHa細(xì)胞不同時(shí)點(diǎn)細(xì)胞活力的比較(±s，A值)Table2ComparisonofviabilityofcervicalcarcinomacelllineSiHaatdifferenttimepoints表注：與空白對照組和陰性對照組比較，aP<0.05。組別24h48h72h96h120h空白對照組0.34±0.120.53±0.071.34±0.081.80±0.132.69±0.17陰性對照組0.33±0.090.59±0.061.43±0.111.89±0.152.78±0.15FABP-5-siRNA組0.24±0.060.34±0.090.62±0.090.90±0.101.30±0.19pSi-scrambled和pSi-sur72h后吸棄培養(yǎng)液，自然晾干；40g/L多聚甲醛溶液固定10min，新鮮配制體積分?jǐn)?shù)為3%H2O21.5主要觀察指標(biāo)①RT-PCR、Westernblot檢測FABP-5mRNA與蛋白表達(dá)。②流式細(xì)胞術(shù)檢測宮頸癌SiHa細(xì)胞周期變化。③CCK-8法檢測宮頸癌SiHa細(xì)胞的增殖能力。④Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)檢測宮頸癌SiHa細(xì)胞的侵襲能力。⑤TUNEL染色法檢測宮頸癌SiHa細(xì)胞的凋亡情況。1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS16.0軟件行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，所有數(shù)值以±s表示，兩組間比較用t檢驗(yàn)(Student’sttest)，多組間連續(xù)變量間比較應(yīng)用F檢驗(yàn)，雙側(cè)檢驗(yàn)水準(zhǔn)采用α=0.05，P<0.05為差異有顯著性意義。2結(jié)果Results2.1siRNA下調(diào)SiHa細(xì)胞FABP-5mRNA的表達(dá)水平RT-PCR結(jié)果顯示，F(xiàn)ABP-5-siRNA組FABP-5mRNA相對表達(dá)量(0.23±0.06)與陰性對照組(0.74±0.10)和空白對照組(0.68±0.12)相比明顯減少(P<0.05)，抑制率為(71.36±1.25)%；而陰性對照組與空白對照組間FABP-5mRNA表達(dá)差異無顯著性意義(圖1)。說明實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)合成的干擾序列能特異性抑制FABP-5基因的表達(dá)。2.2shRNA下調(diào)SiHa細(xì)胞FABP-5蛋白的表達(dá)水平Westernblot檢測結(jié)果表明，F(xiàn)ABP-5-shRNA組FABP-5蛋白相對表達(dá)量(0.43±0.05)與陰性對照組(1.73±0.15)和空白對照組(1.68±0.19)相比明顯減少(P<0.05)，經(jīng)軟件ImageJ分析條帶灰度值并計(jì)算抑制率為(72.68±0.86)%；而陰性對照組與空白對照組間FABP-5蛋白表達(dá)量無明顯變化(圖2)。說明實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)合成的干擾序列能特異性抑制FABP-5蛋白的表達(dá)。2.3流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞宮頸癌SiHa細(xì)胞周期變化與陰性對照組和空白對照組相比，F(xiàn)ABP-5-siRNA組G1期細(xì)胞相比例降低(P<0.05)，S期細(xì)胞比例升高(P<0.05)，G2/M期細(xì)胞比例升高(P<0.05)。陰性對照組和空白對照組各細(xì)胞周期比例，差異無顯著性意義(P>0.05)，見表1和圖3。表表1各組宮頸癌SiHa細(xì)胞的細(xì)胞周期分布(±s，%)Table1CellcycledistributioninthecervicalcarcinomacelllineSiHa表注：與空白對照組和陰性對照組比較，aP<0.05。組別G1期S期G2/M期空白對照組61.72±0.8530.45±0.677.42±0.46陰性對照組62.35±0.7928.06±0.587.38±0.63FABP-5-siRNA組31.64±0.6347.23±0.7618.73±0.672.4CCK-8法檢測宮頸癌SiHa細(xì)胞的增殖能力CCK-8法檢測結(jié)果表明，與陰性對照組和空白對照組相比，F(xiàn)ABP-5-siRNA組細(xì)胞490nm處的吸光度值在轉(zhuǎn)染后24，48，72，96，120h時(shí)均較低，差異有顯著性意義(P<0.05)，表明FABP-5-siRNA組細(xì)胞增殖明顯受到抑制，見表2，圖4。2.5Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)檢測宮頸癌SiHa細(xì)胞的體外侵襲力與陰性對照組(60.54±6.38)和空白對照組(58.33±6.43)穿過濾膜的細(xì)胞數(shù)量相比，F(xiàn)ABP-5-siRNA組細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)明顯減少(24.67±5.32)，差異均有顯著性意義(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)特異性干擾FABP-5基因表達(dá)能夠有效降低SiHa細(xì)胞的侵襲能力，見圖5。2.6TUNEL染色觀察宮頸癌SiHa細(xì)胞凋亡TUNEL染色結(jié)果顯示，與陰性對照組和空白對照組相比，F(xiàn)ABP-5-siRNA組的細(xì)胞核被染成棕黃色的凋亡細(xì)胞數(shù)明顯增多，其凋亡指數(shù)分別為(5.86±1.23)%，(6.26±1.75)%和(38.64±6.84)%，與陰性對照組和空白對照組相比較，差異均有顯著性意義(P<0.05)，見圖6。空白對照組空白對照組陰性對照組FABP-5-siRNA組FABP-5GAPDH空白對照組陰性對照組FABP-5-siRNA組212bp121bpFABP-5212bp121bpFABP-5GAPDH2120FABP-5蛋白表達(dá)水平FABP-5mRNA表達(dá)FABP-5蛋白表達(dá)水平FABP-5mRNA表達(dá)空白對照組陰性對照組FABP-5-s空白對照組陰性對照組FABP-5-siRNA組空白對照組陰性對照組FABP-5-siRNA組圖2圖2SiHa細(xì)胞FABP-5蛋白的表達(dá)水平Figure2FABP-5proteinexpressioninthecervicalcarcinomacelllineSiHa圖1SiHa細(xì)胞FABP-5mRNA的表達(dá)水平Figure1FABP-5mRNAexpressioninthecervicalcarcinomacelllineSiHa空白對照組空白對照組陰性對照組FABP-5-siRNA組空白對照組陰性對照組FABP-5-siRNA組6560555045403530252015656055504540353025201510503.53.02.52.01.51.00.50細(xì)胞比例(%)吸光度值細(xì)胞比例(%)吸光度值 24h48h72h96h120hG1期S期G2/M期24h48h72h96h120hG1期S期G2/M期圖4圖4各組宮頸癌SiHa細(xì)胞生長曲線Figure4GrowthcurveofthecervicalcarcinomacelllineSiHaineachgroup圖3各組宮頸癌SiHa細(xì)胞的細(xì)胞周期分布Figure3CellcycledistributioninthecervicalcarcinomacelllineSiHaineachgroup圖5各組宮頸癌SiHa細(xì)胞體外侵襲力(×200)圖5各組宮頸癌SiHa細(xì)胞體外侵襲力(×200)Figure5invitroinvasionofthecervicalcarcinomacelllineSiHaineachgroup(×圖注：與陰性對照組和空白對照組穿過濾膜的細(xì)胞數(shù)量相比，F(xiàn)ABP-5-siRNA組細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)明顯減少?？瞻讓φ战M空白對照組陰性對照組FABP-5-siRNA組圖圖6TUNEL染色觀察宮頸癌SiHa細(xì)胞的凋亡情況(×200)Figure6ApoptosisofinvasionofthecervicalcarcinomacelllineSiHa(TUNELstaining,×200)圖注：FABP-5-siRNA組凋亡細(xì)胞數(shù)明顯多于陰性對照組和空白對照組。d空白對照組空白對照組陰性對照組FABP-5-siRNA組PAGE2223ISSN2095-4344CN21-1581/RCODEN:ZLKHAH4P.O.Box1200,Shenyang110004kf23385083@3討論Discussion研究發(fā)現(xiàn)腫瘤相關(guān)基因以及腫瘤基因通路的改變在腫瘤的形成與發(fā)展中起著重要作用。目前關(guān)于宮頸癌的治療，研究最為熱點(diǎn)的是生物治療和基因治療[16-22]。RNA干擾是2021年Fire首先發(fā)現(xiàn)并命名的轉(zhuǎn)錄后水平的基因沉默機(jī)制。RNA干擾是指與靶基因序列同源的雙鏈RNA誘發(fā)的序列特異性基因轉(zhuǎn)錄后的高效特異性降解沉默的現(xiàn)象[23-26]。利用RNA干擾可導(dǎo)致靶基因mRNA降解和基因沉默，是存在于真核細(xì)胞內(nèi)的一種自我保護(hù)現(xiàn)象[27-31]。研究發(fā)現(xiàn)siRNA是雙鏈RNA發(fā)揮RNA干擾作用的中心環(huán)節(jié)和效應(yīng)分子[32-35]。根據(jù)這一生理機(jī)制，依照靶基因mRNA所設(shè)計(jì)的序列特異性siRNA，可使特異性基因表達(dá)起到封閉的作用[36-39]。實(shí)驗(yàn)借用RNA干擾技術(shù)的這一作用，誘導(dǎo)沉默F(xiàn)ABP-5基因，觀察FABP-5沉默后對腫瘤細(xì)胞的影響[40-41]。FABP-5是一類同源性極高的小分子胞內(nèi)蛋白，屬于脂結(jié)合蛋白超家族成員，由126-134個(gè)氨基酸組成，對脂肪酸有高度的親和力，在哺乳動物肝臟中可高表FABP與多種腫瘤的發(fā)生相關(guān)聯(lián)，其可進(jìn)入腫瘤細(xì)胞核內(nèi)發(fā)揮其可能的調(diào)控功能。實(shí)驗(yàn)將siRNA干擾沉默后的FABP-5基因?qū)肴藢m頸癌SiHa細(xì)胞中，以觀察其對宮頸癌SiHa細(xì)胞的抑制情況。實(shí)驗(yàn)探討了經(jīng)siRNA干擾技術(shù)沉默F(xiàn)ABP-5基因后對人宮頸癌SiHa細(xì)胞生物學(xué)特性的影響。通過RT-PCR和Westernblot檢測法觀察到FABP-5-siRNA組FABP-5mRNA和蛋白表達(dá)都明顯下降。流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示，F(xiàn)ABP-5-siRNA組細(xì)胞的生長速度明顯減慢，細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期，S期細(xì)胞數(shù)減少，細(xì)胞增殖、侵襲能力顯著下降，細(xì)胞凋亡率明顯升高，提示FABP-5基因可能直接或間接參與宮頸癌細(xì)胞周期的調(diào)控。綜上所述，抑制宮頸癌細(xì)胞的增殖、侵襲，并促進(jìn)其凋亡是治療宮頸癌的重要步驟。特異性沉默F(xiàn)ABP-5基因表達(dá)后顯著降低了宮頸癌SiHa細(xì)胞的侵襲能力及增殖能力，使宮頸癌SiHa細(xì)胞凋亡顯著增加。此結(jié)果可為體外人宮頸癌SiHa細(xì)胞導(dǎo)入靶向FABP-5基因的RNA干擾技術(shù)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。對于FABP-5基因影響宮頸癌SiHa細(xì)胞的具體機(jī)制尚未明確，還需要進(jìn)一步探討研究。致謝：感謝天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院婦科尹利榮老師的支持和幫助。作者貢獻(xiàn)：實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)為陳逢振、尹利榮，實(shí)驗(yàn)實(shí)施為陳逢振、尹利榮，實(shí)驗(yàn)評估為陳逢振，資料收集為陳逢振、尹利榮。利益沖突：所有作者共同認(rèn)可文章無相關(guān)利益沖突。倫理問題：沒有與相關(guān)倫理道德沖突的內(nèi)容。文章查重：文章出版前已經(jīng)過CNKI反剽竊文獻(xiàn)檢測系統(tǒng)進(jìn)行3次查重。文章外審：本刊實(shí)行雙盲外審制度，文章經(jīng)國內(nèi)小同行外審專家審核，符合本刊發(fā)稿宗旨。作者聲明：文章第一作者對研究和撰寫的論文中出現(xiàn)的不端行為承擔(dān)責(zé)任。論文中涉及的原始圖片、數(shù)據(jù)(包括計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)庫)記錄及樣本已按照有關(guān)規(guī)定保存、分享和銷毀，可接受核查。文章版權(quán)：文章出版前雜志已與全體作者授權(quán)人簽署了版權(quán)相關(guān)協(xié)議。4參考文獻(xiàn)References陸曉楣,李晶,劉暢浩,等.年輕宮頸癌患者的病理特點(diǎn)和預(yù)后分析[J]中國婦產(chǎn)科臨床雜志,2021,12(1):10-13.李海俠.影響子宮頸癌根治術(shù)后并發(fā)癥的因素分析[J].中國中醫(yī)藥咨訊,2021,13(3):353.朱素文.子宮頸病變篩查的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐,2021,24(7):774-775.ThunMJ,DeLanceyJO,CenterMM,etal.Theglobalburdenofcancer:prioritiesforprevention.Carcinogenesis.2021;31(1):100-110.吳寧,朱博慧,薛英姿,等.干細(xì)胞生長因子反義寡核苷酸對肝癌細(xì)胞中原癌基因蛋白質(zhì)c-kit及堿性成纖維細(xì)胞生長因子表達(dá)的影響[J].中華臨床醫(yī)師雜志:電子版,2021,5(12):3449-3454.ThumserAE,MooreJB,PlantNJ.Fattyacidbindingproteins:tissue-specificfunctionsinhealthanddisease.CurrOpinClinNutrMetabCare.2021;17(2):王歡,劉富萍.VEGF-C在宮頸癌中的研究現(xiàn)狀與