埃博拉出血熱采樣及標(biāo)本運送

埃博拉出血熱采樣及標(biāo)本運送埃博拉出血熱采樣及標(biāo)本運送第1頁一、基礎(chǔ)情況潛伏期2-21天,普通為5-12天。傳輸路徑：接觸傳輸、氣溶膠傳輸。臨床表現(xiàn)：突然發(fā)病，各器官出血，肌肉疼痛，DIC（彌散性血管內(nèi)凝血）等90%死亡患者在發(fā)病后12天內(nèi)死亡(7-14天)。病死率高，可達50%-90%。尚無特效藥和疫苗。埃博拉出血熱是最嚴(yán)重出血熱埃博拉出血熱采樣及標(biāo)本運送第2頁一、基礎(chǔ)情況型別⑴扎伊爾型（Ebola-Za?re）：毒力強，人感染后病死率高。⑵蘇丹型（Ebola-Sudan）：⑶科特迪瓦（Ebola-C?ted’Ivoire）：對黑猩猩有致死性,對人毒力較弱。⑷雷斯頓型（Ebola-Reston）：在非人靈長類中有致死性,人感染不發(fā)病。抵抗力

埃博拉病毒在室溫下穩(wěn)定，60℃1小時大個別病毒被滅活,對紫外線、γ射線、甲醛、次氯酸、酚類等消毒劑和脂溶劑均敏感。埃博拉出血熱采樣及標(biāo)本運送第3頁二、臨床表現(xiàn)及診療1、流行病學(xué)：來自疫區(qū)，或3周內(nèi)有疫區(qū)旅行史，或與患者、感染動物接觸。2、臨床表現(xiàn)：急性起病，發(fā)燒伴極度乏力、牙齦出血、鼻出血、黏膜出血、瘀點和紫斑、血便等及其它癥狀（頭痛、肌痛、咽痛、惡心、嘔吐)。3、試驗室檢測：

（1）病毒抗原陽性（2）血清特異性IgM抗體陽性（3）恢復(fù)期血清IgG比急性期有4倍升高（4）核酸陽性（5）分離到埃博拉病毒疑似病例：1+2確診病例：疑似病例+3中任一檢測陽性埃博拉出血熱采樣及標(biāo)本運送第4頁三、標(biāo)本采集-生物安全防護1、全部樣本采集或處理應(yīng)恪守《醫(yī)院感染管理規(guī)范》和《病原微生物試驗室生物安全管理條例》等相關(guān)生物安全要求，在標(biāo)準(zhǔn)預(yù)防基礎(chǔ)上采取飛沫和接觸隔離預(yù)防辦法。2、樣本采集時，應(yīng)嚴(yán)格按照BSL-3級試驗室要求做好個人防護。應(yīng)穿戴醫(yī)用防護服、可遮蓋口鼻醫(yī)用防護口罩(N95)、雙層乳膠手套、護目鏡、頭部面部保護罩、專用橡膠靴等。埃博拉出血熱采樣及標(biāo)本運送第5頁三、標(biāo)本采集-生物安全防護3、采血場所應(yīng)在相對獨立場所，應(yīng)符合負(fù)壓要求。假如不具備上述條件，可用相鄰房間提供足夠安全空間，備有除了病人常規(guī)護理材料外應(yīng)具備手套、防護服和防護面具等，同時要裝備有洗手設(shè)施和裝有消毒液桶。4、采樣人員應(yīng)由經(jīng)過生物安全防護培訓(xùn)人員執(zhí)行，采血時應(yīng)2人在場。埃博拉出血熱采樣及標(biāo)本運送第6頁四、標(biāo)本采集與保留1、標(biāo)本采集時間首次送檢：當(dāng)前檢測方法中主要是核酸檢測，埃博拉出血熱患者發(fā)病后3天內(nèi)血標(biāo)本，病毒核酸陽性可能性很小，所以提議采集發(fā)病72小時后血標(biāo)本送檢。再次送檢：假如留觀/疑似病例發(fā)病72小時后血標(biāo)本試驗室檢測陰性，但臨床表現(xiàn)比較經(jīng)典患者，可在首次檢測24-48小時后再次采集血標(biāo)本送檢。解除隔離治療送檢：確診病例解除隔離治療前采集血標(biāo)本進行復(fù)檢。埃博拉出血熱采樣及標(biāo)本運送第7頁四、標(biāo)本采集與保留

2、標(biāo)本采集方法⑴.用分離膠無菌真空促凝管采集靜脈血，每管3mL，標(biāo)識后4℃保留。并填寫標(biāo)本采集記錄表（附表1）⑵.

標(biāo)本采集數(shù)量留觀病例、疑似病例采集4管，其中2管送省疾控中心進行埃博拉病毒檢測，2管保留于本單位，待排除埃博拉病毒感染后用于其它病原體篩查；

確診病例采集恢復(fù)期血標(biāo)本，送國家疾控中心病毒病所進行檢測。埃博拉出血熱采樣及標(biāo)本運送第8頁埃博拉出血熱采樣及標(biāo)本運送第9頁四、標(biāo)本采集與保留3、標(biāo)本保留方法

⑴.

未分離血清全血標(biāo)本應(yīng)4℃保留，并盡快分離血清；⑵.血清標(biāo)本長久保留應(yīng)置于-70℃以下；⑶.標(biāo)本保留不超出1周可置-20℃。

4、標(biāo)本信息搜集（填寫埃博拉出血熱流行病學(xué)個案調(diào)查表）病例普通信息：姓名、性別、年紀(jì)、國籍來自疫區(qū)國名、入境時間，發(fā)病日期，發(fā)病前21天疫區(qū)居住史，旅行史、類似病例接觸史等。主要臨床癥狀：發(fā)燒、嚴(yán)重乏力、頭痛、肌痛、嘔吐、腹瀉、出血表現(xiàn)等標(biāo)本詳細信息：采樣時間、種類、標(biāo)本量等。送樣信息：負(fù)責(zé)送檢聯(lián)絡(luò)人姓名、聯(lián)絡(luò)電話、送檢時間等埃博拉出血熱采樣及標(biāo)本運送第10頁標(biāo)本容器第一層2mL,可離心有墊圈第二層15mL,封口膜封口易標(biāo)識埃博拉出血熱采樣及標(biāo)本運送第11頁埃博拉出血熱采樣及標(biāo)本運送第12頁五、標(biāo)本包裝與運輸1、包裝方式：A類包裝（UN2814要求）按照三重包裝系統(tǒng)包裝：第一層包裝（可密封樣本袋、50mL離心管）；第二層安全殼容器（防水、防漏）；第三層外層運輸包裝。樣本袋放入防水防漏第二層安全殼容器中，為降低破碎或泄漏風(fēng)險，用吸水紙等填充物固定標(biāo)本袋。安全殼容器和外包裝放冰袋。埃博拉出血熱采樣及標(biāo)本運送第13頁埃博拉出血熱采樣及標(biāo)本運送第14頁五、標(biāo)本包裝與運輸2、運輸方式：全血采取冷藏運輸，血清可采取冷凍運輸不要打開采集管或分裝樣本。專員專車。埃博拉出血熱采樣及標(biāo)本運送第15頁六、試驗室檢測凡包括埃博拉病毒分離、培養(yǎng)和動物試驗，需在生物安全4級（BSL-4/ABSL-4）試驗室內(nèi)進行。包括未經(jīng)培養(yǎng)有感染性材料試驗活動，需在BSL-3試驗室內(nèi)進行。血清學(xué)檢測應(yīng)在BSL-3試驗室內(nèi)，且標(biāo)本需先60℃1小時滅活后，再進行后續(xù)試驗操作。核酸檢測時,需在BSL-3試驗室內(nèi)加入核酸提取裂解液,完成病毒RNA提取，并對裝有病毒RNA樣品管外表面進行徹底消毒后，可在BSL-3試驗室以外進行擴增檢測。埃博拉出血熱采樣及標(biāo)本運送第16頁六、試驗室檢測1、病原學(xué)檢測：⑴核酸檢測：主要檢測方法。發(fā)病后3天內(nèi)，血標(biāo)本中埃博拉病毒核酸檢出率低，檢測陰性不能排除埃博拉病毒感染。發(fā)病后3～10天血標(biāo)本病毒核酸檢出率高，檢測陰性可排除埃博拉病毒感染。⑵病毒抗原檢測：用酶聯(lián)免疫法檢測埃博拉病毒核蛋白抗原。病毒抗原檢測陽性可確診。發(fā)病后3天內(nèi)，血標(biāo)本中埃博拉病毒抗原檢出率低，檢測陰性不能排除埃博拉病毒感染，發(fā)病后3～10天血標(biāo)本病毒抗原檢出率高。埃博拉出血熱采樣及標(biāo)本運送第17頁六、試驗室檢測2.血清學(xué)檢測：⑴血清特異性IgM抗體：采取捕捉法ELISA方法檢測。IgM抗體陽性可確診。⑵血清特異性IgG抗體：當(dāng)前采取間接法ELISA檢測IgG抗體。單份血清埃博拉病毒IgG抗體陽性提醒曾感染埃博拉病毒，雙份血清埃博拉病毒IgG抗體陽轉(zhuǎn)或恢復(fù)期滴度較急性期4倍或者以上增高者可確診。埃博拉出血熱采樣及標(biāo)本運送第18頁七、樣本保留和銷毀試驗室檢測埃博拉病毒陽性血標(biāo)本，應(yīng)依據(jù)相關(guān)生物安全要求保留在-70℃以下，實施“雙人雙鎖”管理和取樣“審批”制度。試驗室檢測埃博拉病毒陰性血標(biāo)本，應(yīng)所采集疑似患者或親密接觸者完全排除埃博拉病毒感染后，轉(zhuǎn)入其它血清庫保留或銷毀。全部血清銷毀時，均應(yīng)在冰箱內(nèi)取出后，在生物安全柜內(nèi)，待其自然融化后，置于含有效消毒劑（0.5%有效氯）內(nèi)浸泡，然后高壓滅活。全部銷毀樣本均應(yīng)在對應(yīng)數(shù)據(jù)庫清單內(nèi)標(biāo)明，銷毀時間和操作人，陰性樣本銷毀統(tǒng)計