食品微生物檢驗(yàn)室技術(shù)操作要求

食品微生物檢驗(yàn)室技術(shù)操作要求第1頁/共20頁（一）無菌操作要求：

食品微生物檢驗(yàn)室工作人員，必須有嚴(yán)格的無菌觀念，許多試驗(yàn)要求在無菌條件下進(jìn)行，主要原因：防止試驗(yàn)操作中人為污染樣品；保證工作人員安全，防止檢出的致病菌由于操作不當(dāng)造成個(gè)人污染。第2頁/共20頁接種時(shí)必須穿工作服、戴工作帽。進(jìn)行接種食品樣品時(shí)，必須穿專業(yè)工作服、帽及拖鞋，它們應(yīng)放在無菌室緩處間，工作前經(jīng)紫外線消毒后使用。應(yīng)在進(jìn)無菌室前用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球?qū)⑹植粮蓛?。進(jìn)行接種所用的吸管、平皿及培養(yǎng)基等必須經(jīng)消毒滅菌，打開包裝未使用完的器皿，不能放置后再使用，金屬用具應(yīng)高壓滅菌或用95%酒精點(diǎn)燃燒灼3次后使用。第3頁/共20頁從包裝中取出吸管時(shí)，吸管尖部不能觸及外露部位，使用吸管接種于試管或平皿時(shí)，吸管尖不能觸及試管或平皿邊。接種樣品、轉(zhuǎn)種細(xì)菌必須在酒精燈前操作，接種細(xì)菌或樣品時(shí)，吸管從包裝中取出后及打開試管塞都要通過火焰消毒。接種環(huán)或接種針在接種細(xì)菌前應(yīng)經(jīng)火焰燒灼全部金屬絲，必須時(shí)還要燒到環(huán)和針與桿的連接處。吸管吸取菌液或樣品時(shí)，應(yīng)用相應(yīng)的橡皮頭吸取，不得直接用口吸。第4頁/共20頁（二）無菌室使用要求無菌室通向外面的窗戶應(yīng)為雙層玻璃，并要密封，不得隨意打開，并設(shè)有與無菌間大小相應(yīng)的緩沖間及推拉門，另設(shè)有小窗，以備進(jìn)入無菌間后傳遞物品。無菌室內(nèi)應(yīng)保持清潔，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，拭擦工作臺(tái)面，不得存放與實(shí)驗(yàn)無關(guān)的物品。第5頁/共20頁無菌室使用前后應(yīng)將門關(guān)緊，打開紫外線，如采用室內(nèi)懸吊紫外燈消毒時(shí)，需30W紫外燈，距離在1.0m處，照射時(shí)間不少于30min，使用紫外燈，應(yīng)注意不得直接在紫外線下操作，以免引起損傷，燈管每隔兩周需用酒精棉球輕輕拭擦，除去上面灰塵和油垢，以減少紫外線穿透的影響。第6頁/共20頁處理和接種食品標(biāo)本時(shí)，進(jìn)入無菌室操作，不得隨意出入，如需要傳遞物品，可通過小窗傳遞。在無菌室內(nèi)如需要安裝空調(diào)時(shí)，則應(yīng)有過濾裝置。第7頁/共20頁(三)消毒滅菌要求

微生物檢測(cè)用的玻璃器皿、金屬用具及培養(yǎng)基、被污染和接種的培養(yǎng)物等，必須經(jīng)滅菌后方能使用。1﹑干熱和濕熱高壓蒸汽鍋滅菌(1)滅菌前準(zhǔn)備(2)裝放干熱滅菌器(3)設(shè)備檢查第8頁/共20頁(4)干熱滅菌法(5)手提式高壓鍋或立式壓力蒸汽滅菌器的使用步驟(6)臥式壓力鍋蒸汽滅菌器的使用步驟2﹑間歇滅菌方法(1)滅菌方法(2)血清凝固器使用方法(3)煮沸消毒(4)滅菌后處理第9頁/共20頁(4)干熱滅菌法

此法適應(yīng)于在干熱情況下，不損壞、不變質(zhì)、不蒸發(fā)的物品，較常用于玻璃器皿、金屬制品、陶瓷制品等的滅菌。①器械、器皿應(yīng)清洗后再干烤，以防附著在表面的污物碳化。②滅菌時(shí)安放物品不能過擠，不要直接接觸底和箱壁，物品之間留有空隙。第10頁/共20頁③滅菌時(shí)將箱門關(guān)緊，接上電源，先將排氣孔打開約30min，排除滅菌器中的冷空氣，溫度升至160℃調(diào)節(jié)指示燈，維持1.5～2h。④滅菌完畢后或升溫過程中，須在60℃以下才能打開箱門。第11頁/共20頁

(5)手提式高壓鍋或立式壓力蒸汽滅菌器的使用步驟①手提式高壓鍋在主體內(nèi)加入3L清水，立式高壓鍋加水16L(重復(fù)使用時(shí)應(yīng)將水量補(bǔ)足，水變混濁需更換)。②手提式壓力鍋將頂蓋上的排氣管插入消毒桶內(nèi)壁的方管中(無軟管或軟管銹蝕破裂的滅菌器不得使用)。第12頁/共20頁③蓋好頂蓋擰緊，勿使漏氣；置滅菌器于火源上加熱，立式壓力鍋通上電源，并打開頂蓋上的排氣閥放出冷氣(水沸騰后排氣10～15min)。

④關(guān)閉排氣閥，使蒸汽壓上升到規(guī)定要求，并維持規(guī)定時(shí)間(按滅菌物品性質(zhì)與有關(guān)情況而定)。第13頁/共20頁⑤達(dá)到規(guī)定時(shí)間后，對(duì)需干燥的物品，立即打開排氣閥排出蒸汽，待壓力恢復(fù)到零時(shí)，自然冷卻至60℃后開蓋取物，如為液體物品，不要打開排氣閥，而應(yīng)立即將鍋去除熱源，待自然冷卻，壓力恢復(fù)至零，溫度降到60℃以下再開蓋取物，以防突然減壓，液體劇烈沸騰或容器爆破。第14頁/共20頁

(6)臥式壓力鍋蒸汽滅菌器的使用步驟①關(guān)緊鍋門，打開進(jìn)氣閥，將蒸汽引入夾層進(jìn)行預(yù)熱，夾層內(nèi)冷空氣經(jīng)阻氣器自動(dòng)排出。②夾層達(dá)到預(yù)定溫度后，打開鍋室進(jìn)氣閥，將蒸汽引入鍋室，鍋室內(nèi)冷空氣經(jīng)鍋室阻氣器自動(dòng)排出.第15頁/共20頁③待鍋室達(dá)到規(guī)定的壓力與溫度時(shí)，調(diào)節(jié)進(jìn)氣閥，保持103.4kPa、121℃15～30min滅菌。④自然或人工降溫至60℃再開門取物，不得使用快速排出蒸汽法，以防突然降壓，液體劇烈沸騰或容器爆破。第16頁/共20頁⑤使用自動(dòng)程序控制式壓力蒸汽滅菌器，在放好物品關(guān)緊門后，應(yīng)根據(jù)物品類別按動(dòng)相應(yīng)開關(guān)，以便按要求程序自動(dòng)進(jìn)行滅菌，滅菌時(shí)必須利用附設(shè)儀表記錄溫度與時(shí)間以備查，操作要求應(yīng)嚴(yán)格按照廠家說明書進(jìn)行。第17頁/共20頁2﹑間歇滅菌方法(1)滅菌方法是利用不加壓力的蒸汽滅菌，某些物質(zhì)經(jīng)高壓蒸汽滅菌容易破壞，可用此法滅菌。(2)血清凝固器使用方法培養(yǎng)基中含有血清或雞蛋特殊成分時(shí)，因高熱會(huì)破壞其營(yíng)養(yǎng)成分，故用低溫，可使用血清凝固，又可達(dá)到滅菌目的，在使用該法滅菌的血清等分裝時(shí)，需嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，試管、平皿也經(jīng)滅菌后使用。第18頁/共20頁(3)煮沸消毒(4)滅菌后處理滅菌后物品，按正常情況已屬無菌，從滅菌器中取出應(yīng)仔細(xì)檢查放置，以免再度污染。