菊苣根中黃酮的提取工藝大學(xué)本科畢業(yè)論文

長春工業(yè)大學(xué)PAGEPAGEII摘要菊苣為多年生草本植物，源于歐洲，現(xiàn)在廣泛分布亞洲、美洲。菊苣根中含有蛋白質(zhì)、糖類、脂肪、黃酮、纖維素等營養(yǎng)物質(zhì)，其中黃酮含量較高，黃酮是一類以苯色酮環(huán)為基礎(chǔ)的酚類化合物，具有保肝、降壓、利尿等功效。本實(shí)驗(yàn)主要用單因素的實(shí)驗(yàn)方法，用超聲波乙醇提取法和乙醇回流提取法提取黃酮，通過改變提取溫度、乙醇濃度、提取時(shí)間、料液比，獲得的提取液在紫外分光光度計(jì)下測其吸光度，通過其吸光度得到菊苣根中黃酮含量，通過兩種方法的比較得到，乙醇回流提取法得到的黃酮含量較高，最優(yōu)提取條件為：乙醇濃度70％，提取溫度80℃，提取時(shí)間2.5h，料液比為1：20。再用正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化乙醇回流提取法，得到對黃酮含量影響最大的是提取溫度和乙醇濃度，其次是提取時(shí)間、料液比，在最佳提取條件下得最高總黃酮含量為7.74mg/g。關(guān)鍵詞：菊苣根；黃酮；提?。徽籄bstractChicoryistheperennialherb,mainlyfromEurope,nowwidelydistributedinAsia,theAmerica.Chicoryrootcontainsprotein,carbohydrates,fats,flavonoids,celluloseandothernutrients,highflavonoidcontent,flavonoidsareaclassofphenoliccompounds,benzenechromoneringhashepatoprotective,antihypertensive,diureticandothereffects.Withthemethodofsinglefactorexperiments,thisexperimentappliedultrasonicethanolextractionandhotwaterrefluxextractionmethodflavonoids,bychangingtheextractiontemperature,ethanolconcentration,extractiontimeandliquidtosolidrationinchicoryrootextractobtainedunderUVspectrophotometermeasuredabsorbancebytheabsorbance,theresultsshowsthathotwaterrefluxextractionmethodobtainedahigherflavonoidcontent,andfinaloptimizedconditionsforextractingflavonoidswasestablished,extracted2.5hourson80℃,ethanolconcentration70%andsolidtoliquidration1:20.Thentheorthogonalexperimenttooptimizethehotwaterrefluxextractionmethod,andgettoinfluencetheflavonoidcontentistheextractiontemperatureandethanolconcentration,followedbytheextractiontime,solidtoliquidratio,theflavonoidcontentis7.74mg/gunderthisoptimumconditions.Keywords:chicoryroot；flavone；extract；orthogonality長春工業(yè)大學(xué)PAGE27目錄19404摘要 I10374Abstract II11900第一章前言 132604第二章文獻(xiàn)綜述 3324822.1菊苣的簡介 368032.1.1菊苣葉簡介 3262792.1.2菊苣根簡介 469472.2總黃酮的簡介 543412.2.1總黃酮的理化性質(zhì) 575152.2.2總黃酮的功效成分 5305932.2.3總黃酮的營養(yǎng)價(jià)值 6205382.3菊苣根中總黃酮的提取方法 784522.3.1超聲波乙醇提取法 7113852.3.2乙醇回流提取法 893582.3.3微波輔助提取法 8289632.3.4超臨界提取法 882742.3.5加速溶劑提取法 9311502.4菊苣根中總黃酮的測定方法 920042.4.1亞硝酸鈉－硝酸鋁－氫氧化鈉比色法 9250572.4.2紫外分光光度法 932462.4.3高效液相色譜法 10199972.5菊苣根總黃酮的研究目的與意義 10159332.5.1菊苣根總黃酮的研究目的 1088982.5.2菊苣根總黃酮的研究意義 108182第三章實(shí)驗(yàn)部分 1230033.1實(shí)驗(yàn)樣品 12131163.2實(shí)驗(yàn)儀器與試劑 12321253.2.1實(shí)驗(yàn)儀器 1263663.2.2實(shí)驗(yàn)試劑 12253453.3實(shí)驗(yàn)方法 13204033.3.1菊苣根中總黃酮提取工藝 1321723.3.2菊苣根中總黃酮提取機(jī)理 132383.3.3蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線 1443243.3.4菊苣根中總黃酮提取方法 1541173.3.5總黃酮的測定—分光光度法 1629819第四章結(jié)果與討論 1750664.1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 17145984.2菊苣根中總黃酮提取結(jié)果 18178644.2.1超聲波乙醇提取結(jié)果 18226104.2.2乙醇回流提取結(jié)果 20111904.3菊苣根中總黃酮提取方法總結(jié) 2212334第五章結(jié)論與展望 2419975.1結(jié)論 24284315.2展望 2422361致謝 2519190參考文獻(xiàn) 26第一章前言菊苣有歐洲菊苣之稱，為菊科植物。源產(chǎn)于歐洲，在國外廣泛用于生產(chǎn)飼料，也是制糖的原料。菊苣在20世紀(jì)80年代引入我國，并以一種良好的態(tài)勢迅速成為受歡迎的高等保健型蔬菜和新型優(yōu)良牧草。菊苣適宜在溫暖濕潤的氣候下生長，但也耐寒、耐熱，對土壤要求也不是很嚴(yán)格，在荒地、坡地、田地、草原均可生長，全國各地均適合種植。菊苣也可作為藥材，它的提取物具有改善高血糖、高血脂、高尿酸等作用[1]。菊苣由地上地下兩部分組成，地上部分葉片柔弱，嫩葉可以采摘食用，適口性好，營養(yǎng)價(jià)值高。地下部分為菊苣根，干燥菊苣根中菊粉含量非常高，菊粉中黃酮等含量很高，可作為低聚果糖、高果糖的生產(chǎn)原料。菊苣在許多國家廣泛用作飼料、蔬菜和制糖原料,該植物根提取物還具有明顯的保肝作用。菊苣根的水提取物還有降壓、利尿等藥理活性。菊苣根部經(jīng)烘烤磨碎之后可以加入咖啡中作為增香添加劑或者咖啡的替代品，根煮熟后涂上奶油可食用，葉可以做沙拉，菊苣的嫩葉可以采摘食用，但是軟化栽培的菊苣也可以生食，葉子可以蘸醬，或者做成涼拌菜，也可炒、煮食用，口感好。菊苣的根部重量是菊苣葉子的幾十倍，但是往往被人們浪費(fèi)，沒有更加有效的利用其價(jià)值。菊苣根中含有黃酮，黃酮的功效是多方面的，它是一種很強(qiáng)的抗氧劑，可有效清除體內(nèi)的氧自由基，如花青素、花色素可以抑制油脂性過氧化物的全階段溢出，這種阻止氧化的能力是維生素E的十倍以上，這種抗氧化作用可以阻止細(xì)胞的退化、衰老，也可阻止癌癥的發(fā)生。黃酮可以抑制炎性生物酶的滲出，可以增進(jìn)傷口愈合和止痛，櫟皮素由于具有強(qiáng)抗組織胺性，可以用于各類敏感癥。菊苣根中還含有蛋白質(zhì)，氨基酸是構(gòu)成蛋白質(zhì)的最基本物質(zhì)，據(jù)報(bào)道菊苣根中含有都中含有多種人類所必需的蛋白質(zhì)，氨基酸就有17種之多，而菊苣根中含有人類所需的8種必需氨基酸中的4種。所以我們可以把菊苣作為提取人類必需氨基酸的綠色原料。菊苣根中含有糖類，菊糖是自然界中天然存在的功能性食用多糖,具有抗消化特點(diǎn),有水溶性膳食纖維和生物活性的生理功能,可增加人體內(nèi)碳水化合物的供能時(shí)間而又不會(huì)顯著提高人體內(nèi)血糖水平。菊苣根中含有脂肪，菊苣根中的脂肪含量相對較低，只有2%左右，菊苣根中有人體所必需的亞麻酸和亞油酸及其他不飽和脂肪酸，但含量較少。菊苣根中還含有維生素，目前已有很多國家開發(fā)并食用菊苣根，將菊苣根作為膳食纖維食用[2]，因?yàn)榫哲母刑厥獾目辔丁Ｒ蚓哲母悬S酮含量較高，所以用超聲波乙醇提取法和熱水回流提取法提取菊苣根的黃酮，采用單因素實(shí)驗(yàn)和正交的實(shí)驗(yàn)方法，得出菊苣根中黃酮提取的最優(yōu)條件為：乙醇濃度70％，提取溫度80℃，提取時(shí)間2.5h，液料比為1：20。菊苣自從引入我國以來，以其營養(yǎng)價(jià)值高、營養(yǎng)豐富、食用口感好和烹制方便而深受人們歡迎。目前，在我國華北與山東省均已有大面積的人工種植，其藥用價(jià)值和營養(yǎng)價(jià)值正在被開發(fā)應(yīng)用中，近些年來菊苣在我國的種植面積呈逐年上升的趨勢發(fā)展。

第二章文獻(xiàn)綜述2.1菊苣的簡介菊苣為菊科多年生\o"醫(yī)學(xué)百科：草本"草本植物，根為肉質(zhì)、短粗、肥大，莖直立，有棱，\o"醫(yī)學(xué)百科：中空"中空，多分支，葉互生，為倒披針形，頭狀花序，花冠舌狀，花色青藍(lán)。高40-100cm。菊苣耐寒、耐旱，喜歡陽光，15℃～25℃下生長迅速，即使夏季溫度高，但是仍具有較強(qiáng)的生長能力。菊苣的耐寒性也較強(qiáng)，在-8℃～-10℃時(shí)仍能生長完好，在-15℃～-20℃下亦能生長。菊苣根系較發(fā)達(dá)，抗旱性較好，而且較耐鹽堿，pH為8.2的土地時(shí)生長良好。菊苣對圖2-1菊苣土壤的要求不嚴(yán)格，旱地、水澆地均可種植。菊苣在夏季播種或者秋季播種時(shí)，當(dāng)年基本不抽莖，而是第二年開始抽莖，并開花結(jié)實(shí)。生長為兩年以上的植株，根頸上不斷生長出新的萌芽，并逐漸取代老的植株。菊苣種子一般是在受粉后的20天左右即為發(fā)育成熟，11月底開始停止生長，春季播種生育期為150天左右。2.1.1菊苣葉簡介菊苣地上部分葉片叢生于短縮莖上，基本呈倒披針形，先端漸尖，葉緣呈齒狀，葉片呈葉綠色至深綠色，有些品種的葉脈帶有紫紅色暈斑，葉面有稀疏的絨毛。葉簇開展度很少成斜直立生長，或平展生長，都不形成葉球，利用其肉質(zhì)直根進(jìn)行栽培。葉片質(zhì)地較薄，兩面長稀疏的多細(xì)胞長節(jié)毛，但葉脈處及邊緣的毛較多。菊苣葉片柔嫩多汁，營養(yǎng)豐富，葉叢期粗蛋白質(zhì)含量22.87%，初花期粗蛋白質(zhì)含量14.73%平均17%。粗蛋白質(zhì)產(chǎn)量達(dá)250kg/畝。初花期含粗圖2-2菊苣葉脂肪2.1%，粗纖維30.6%[3]。菊苣氨基酸含量豐富，葉叢期9種必須氨基酸含量高于苜蓿草粉，菊苣根中含有豐富的β—胡蘿卜素、維生素C與維生素B，所以菊苣根可以用來做維生素的開發(fā)，如單體維生素、復(fù)合維生素或者添加于食品之中作為維生素的補(bǔ)充劑，相信菊苣根以其豐富的維生素儲(chǔ)存含量，便宜的市場價(jià)格，安全之質(zhì)量保證，將會(huì)得到更多的廠家所青睞，會(huì)成為炙手可熱消費(fèi)物品，適口性非常好。2.1.2菊苣根簡介菊苣根及菊苣干燥的根，秋季采挖，除去雜質(zhì)，曬干。菊苣根呈圓錐形，根肥大，有側(cè)根及多數(shù)須根，長為10-20cm，直徑為0.5-1.5cm。表面基本為棕黃色，有細(xì)膩而不規(guī)則的縱皺紋，質(zhì)較硬，不易折斷，斷面外側(cè)呈黃白色，中部為白色，有時(shí)有空心的情況，氣微，微苦。菊苣根頂端有時(shí)有2-3個(gè)叉，嚼之有韌性。圖2-3菊苣根有資料證明：人工栽培的菊苣根提取物具有保肝的作用，王良信動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：30只雄性大鼠分為4組，第1組為CCl4對照組,第2組為模型組,第3組為CCl4+黃酮類制劑組,第4組為菊苣根提取物+CCl4組。第3和4組在用CCl4誘導(dǎo)肝炎前7d給以相應(yīng)藥物,菊苣提取物以50mg/kg劑量灌胃,對照組給等量的水,黃酮類制劑劑量也是50mg/kg。試驗(yàn)15d后處死大鼠。根據(jù)鄰甲苯胺反應(yīng)計(jì)算大鼠血漿中葡萄糖水平、苯丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶活性。取大鼠肝臟中葉染色制作切片,進(jìn)行組織學(xué)研究。結(jié)果顯示,模型大鼠天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶活性比正常動(dòng)物提高69%,天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶/苯丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶之比增至0.79(對照組為0.55),表明肝臟功能受到破壞。給以提取物后,大鼠血漿中肝炎毒性產(chǎn)生的影響降低了18%,使用提取物和黃酮類制劑后,天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶活性分別比對照組降低了27%、47%。CCl4使大鼠血漿中葡萄糖水平降低了54%,表明器官對葡萄糖合成與儲(chǔ)藏能力受到破壞；而給以提取物后,葡萄糖水平趨于正常[4]。人工栽培的菊苣根水提物還具有降壓、利尿等作用。將菊苣干燥根粉碎,用水提取并制成注射液,分為0.79g/kg、1.74g/kg和3.84g/kg3個(gè)劑量組,取家兔放在固定架內(nèi),烏拉坦麻醉后(5mL/kg),注射肝素、葡萄糖鹽水使血壓平穩(wěn),插氣管插管和尿液導(dǎo)管,連接血壓換能器,家兔血壓穩(wěn)定后再注射栽培菊苣注射液,一次給藥量為0.5～1mL/kg,給藥前每次注射生理鹽水1～2mL/kg,觀察給藥前后家兔的血壓和尿液變化。結(jié)果:石油醚部分中分離得到三個(gè)化合物,分別為β-谷甾醇,豆甾醇及菜籽甾醇；乙酸乙酯部分分離得到2個(gè)化合物,均為有機(jī)酸類；CO2超臨界萃取物中確定二個(gè)化合物,即棕櫚酸和十五二烯醇；家兔的藥理實(shí)驗(yàn)表明：菊苣的水提物具有降血壓和利尿的作用,而且隨著給藥劑量的增加,降壓作用及利尿作用明顯增強(qiáng)[5]。2.2總黃酮的簡介黃酮是一類以苯色酮環(huán)為基礎(chǔ)的酚類化合物。在植物中是由苯丙氨酸產(chǎn)生的肉桂酰輔酶A，是經(jīng)碳鏈延長環(huán)化生成的查耳酮，再進(jìn)而衍生成的各種α苯基衍生物。黃酮類化合物是指兩個(gè)具有酚羥基的苯環(huán)（A-與B-環(huán)）通過中央三碳原子相互連結(jié)而形成的一系列化合物，其基本母核為2-苯基色原酮。黃酮類化合物結(jié)構(gòu)中常常連接有酚羥基、甲氧基、甲基、異戊烯基等官能團(tuán)。此外，它還常與糖結(jié)合生成苷。黃酮類化合物是在廿世紀(jì)八十年代末作為保健產(chǎn)品引起國際醫(yī)藥界的關(guān)注，臨床醫(yī)學(xué)研究人員發(fā)現(xiàn)其黃酮類化合物具有抗哮喘、防止長期抽煙引起的腦動(dòng)脈硬化與腦血栓的形成以及降血壓、血脂作用等。進(jìn)而表明黃酮具有多樣化的藥理作用。2.2.1總黃酮的理化性質(zhì)天然黃酮類化合物多以苷類形式存在，并且由于糖的種類、數(shù)量、聯(lián)接位置以及聯(lián)接方式的不同，可以組成各種各樣的黃酮苷類。組成黃酮苷類的糖類包括單糖、雙糖、三糖和酰化糖。黃酮苷固體為無定形的粉末，其余黃酮類化合物多為結(jié)晶性固體。黃酮類化合物不同的顏色為天然色素家族添加了更多色彩。這是由于其母核內(nèi)形成交叉共軛體系，并通過電子轉(zhuǎn)移、重排，使共軛鏈延長，因而顯現(xiàn)出顏色。黃酮苷一般易溶于水、乙醇、甲醇等極性強(qiáng)的溶劑中；但難溶于或不溶于苯、氯仿等有機(jī)溶劑中。糖鏈越長則水溶度越大。黃酮類化合物因分子中多具有酚羥基，故顯酸性。酸性強(qiáng)弱因酚羥基數(shù)目、位置而異。黃酮具有顯色反映：鹽酸-鎂粉（或鋅粉）反應(yīng)為鑒定黃酮類化合物最常用的顏色反應(yīng)，反應(yīng)機(jī)理現(xiàn)在認(rèn)為是因?yàn)樯闪岁柼茧x子緣故；四氫硼鈉（NaBH4）是對二氫黃酮類化合物專屬性較高的一種還原劑，產(chǎn)生紅～紫色。而與其它黃酮類化合物均不顯色。黃酮類化合分子中常含有下列結(jié)構(gòu)單元，故?？膳c鋁鹽、鉛鹽、鋯鹽、鎂鹽、鍶鹽、鐵鹽等試劑反應(yīng)，生成有色絡(luò)合物；與1%三氯化鋁或硝酸鋁溶液反應(yīng)，生成的絡(luò)合物多為黃色（λmax=415nm），并有熒光，可用于定性及定量分析。2.2.2總黃酮的功效成分黃酮廣泛存在自然界的某些植物和漿果中，總數(shù)大約有4千多種，其分子結(jié)構(gòu)不盡相同，如蕓香苷、橘皮苷、櫟素、綠茶多酚、花色糖苷、花色苷酸等都屬黃酮。不同分子結(jié)構(gòu)的黃酮可作用于身體不同的器官，如銀杏山楂--心血管系統(tǒng)，藍(lán)梅--眼睛，酸果--尿路系統(tǒng)，葡萄--淋巴、肝臟，接骨木果--免疫系統(tǒng)，平時(shí)我們可以通過多食葡萄、洋蔥、花椰萊、喝紅酒、多飲綠茶等方式來獲得黃酮，作為身體的一種補(bǔ)充。二十年前，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)具有活化石之稱的銀杏樹中含有相對較多的黃酮，現(xiàn)在主要從銀杏葉中提取黃酮。菊苣根中含有微量的黃酮，據(jù)相關(guān)報(bào)道主要有黃酮類（Flavones）、黃酮醇類（Flavonols）和花色素類（Anthocyans）等。黃酮類主要有5,7,4’—三輕黃酮（Apigenin）3，5，7，3’,4’,5’—六經(jīng)黃酮（Myrieetin）以及黃酮糖苷等。黃酮醇類有山奈酚（Kaempferol）、槲皮素（Quercetin）及它們與葡萄糖組成的單糖（QMG）和二糖苷（QDG）句至多糖苷（QPG）?；ㄉ仡愔饕怯苫ㄇ啵–yaniding），花葵素（Pelargonidin）與葡萄糖組成的葡糖苷[6]。黃酮的功效是多方面的，它是一種很強(qiáng)的抗氧劑，為研究菊苣根中總黃酮的抗氧化性質(zhì)，分別測定了菊苣根中總黃酮對·OH的清除作用、對·O2-的清除作用和對脂質(zhì)過氧化的抑制作用。結(jié)果表明：菊苣根中總黃酮對·OH的清除能力、對·O2-的清除能力和脂質(zhì)過氧化的抑制能力EC50分別為24.65μg／mL、57.01μg／mL和42.87μg／mL，菊苣根中總黃酮具有較強(qiáng)的抗氧化的作用[7]?？捎行宄w內(nèi)的氧自由基，如花青素、花色素可以抑制油脂性過氧化物的全階段溢出，這種阻止氧化的能力是維生素E的十倍以上，這種抗氧化作用可以阻止細(xì)胞的退化、衰老，也可阻止癌癥的發(fā)生。2.2.3總黃酮的營養(yǎng)價(jià)值黃酮可以改善血液循環(huán)，方法：測定的總黃酮灌胃給藥對家兔血黏度和血小板聚集的影響。結(jié)果：總黃酮灌胃30～120mg/kg可顯著降低家兔全血黏度、紅細(xì)胞壓積和紅細(xì)胞聚集指數(shù)；抑制腺苷二磷酸誘導(dǎo)的家免血小板聚集。結(jié)論：總黃酮具有改善家兔血液流變性、血小板聚集作用[8]?？梢越档湍懝檀?，向天果中的黃酮還含有一種PAF抗凝因子，這些作用大大降低了心腦血管疾病的發(fā)病率，也可改善心腦血管疾病的癥狀。被稱為花色苷酸的黃酮化合物在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中被證明可以降低26%的血糖和39%的三元脂肪酸丙酯，這種降低血糖的功效是很神奇的，但更重要的是它對穩(wěn)定膠原質(zhì)的作用，因此它對糖尿病引起的視網(wǎng)膜病及毛細(xì)血管脆化有很好的作用。黃酮可以抑制炎性生物酶的滲出，可以增進(jìn)傷口愈合和止痛，櫟素由于具有強(qiáng)抗組織胺性，可以用于各類敏感癥。它的抑制細(xì)胞免疫和體液免疫以及調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡等作用也日益受到重視[9]。一項(xiàng)由荷蘭專家主持的研究發(fā)現(xiàn)：由4807位參與者的實(shí)驗(yàn)表明，每天飲375毫升綠茶的人，其心臟病的發(fā)病概率是那些不喝茶的人的一半；致命性心臟病發(fā)病率只有三分之一。其中重要的原因就是綠茶中所含的黃酮。來自南太平洋島國的向天果，富含33種類黃酮，可以幫助人體改善血液循環(huán)，提高免疫力，是糖尿病、高血脂、高血壓患者的福音。蜂膠是蜂蜜從植物新生枝芽或樹皮上采集的樹膠，混以自身分泌加工而成的芳香膠狀體。4～5萬只蜜蜂，一年僅能采到40g～60g左右的蜂膠，被譽(yù)為“紫色黃金”。蜂膠皇是蜂膠中的極品，其總黃酮含量高達(dá)9300mg以上，且其余成份黃金配比，協(xié)同作用?？茖W(xué)家們給予蜂膠皇許多美稱：血管清道夫、血糖守護(hù)神、抗癌勇士、天然免疫增強(qiáng)劑。高純度大豆異黃酮對小鼠肝癌、乳腺癌有明顯的抑瘤作用[10]。黃酮對許多疾病具有防治作用,揭示黃酮類化合物的吸收和代謝有利于了解其功效機(jī)制。黃酮的吸收和代謝水平依不同細(xì)胞而異,但主要受到胞內(nèi)代謝的水平和它們從細(xì)胞中向外轉(zhuǎn)運(yùn)速度的影響[11]。黃酮類化合物中有藥用價(jià)值的化合物很多，如槐米中的蘆丁和陳皮中的陳皮苷，能降低血管的脆性，及改善血管的通透性、降低血脂和膽固醇，用于防治老年高血壓和腦溢血。由銀杏葉制成的舒血寧片含有黃酮和雙黃酮類，用于冠心病、心絞痛的治療[12]。黃酮具有降低血糖和血脂的作用[13]。全合成的乙氧黃酮又名心脈舒通或立可定有擴(kuò)張冠血管、2-苯基色原酮分子結(jié)構(gòu)增加冠脈流量的作用。許多黃酮類成分具有止咳、祛痰、平喘、抗菌、抗病毒的活性[14]。護(hù)肝，解肝毒、抗真菌、治療急、慢性肝炎，肝硬化。2.3菊苣根中總黃酮的提取方法2.3.1超聲波乙醇提取法超聲提取法是利用超聲波的空化作用、機(jī)械效應(yīng)和熱效應(yīng)等加速胞內(nèi)有效物質(zhì)的釋放、擴(kuò)散和溶解，顯著提高提取效率的提取方法。用超聲波提取酸棗仁總黃酮的最佳工藝條件。采用超聲提取50min對酸棗仁總黃酮的提取效果進(jìn)行分析,確定最佳提取方法。以乙醇濃度、料液比和提取時(shí)間為因子進(jìn)行單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn),確定超聲波提取酸棗仁總黃酮的最佳工藝。用超聲波提取確定為理想的提取方法。影響總黃酮得率的主次因素為料液比>乙醇濃度>超聲提取時(shí)間。超聲波提取酸棗仁總黃酮的最佳工藝條件為:70%乙醇,料液比1∶30,超聲提取50min提取2次,提取率達(dá)到98.73%。采用超聲波提取法的研究為酸棗仁總黃酮的工業(yè)化生產(chǎn)提供了參考依據(jù)[15]。2.3.2乙醇回流提取法應(yīng)用有機(jī)溶劑加熱提取，需采用回流加熱裝置，以免溶劑揮發(fā)損失。小量操作時(shí)，可在圓底燒瓶上連接回流冷凝器。優(yōu)選瓜馥木總黃酮提取工藝。采用傳統(tǒng)乙醇溶劑熱回流提取黃酮,利用紫外分光光度法測定黃酮含量。通過單因素實(shí)驗(yàn)考察溫度、乙醇濃度、料液比、提取時(shí)間和提取次數(shù)對黃酮提取率的影響規(guī)律,并通過正交實(shí)驗(yàn)確定各因素對黃酮提取率的影響。黃酮最佳提取工藝條件為溫度75℃,乙醇濃度60%,料液比1:25,提取時(shí)間4.0h,提取次數(shù)5次,平均黃酮提取率為6.805%[16]。2.3.3微波輔助提取法微波輔助(MAE)提取法是利用微波加熱與固態(tài)樣品接觸的溶劑,使所需的化合物從樣品中分配到溶劑里的一系列提取過程。提取在密閉或敞開的微波-透明容器中,提取溶劑和樣品混合在里面,同樣接受到微波能。溶液中的微波(電介質(zhì))可以加熱。首先進(jìn)行了單因素試驗(yàn),在此基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)了L9(34)四因素三水平正交試驗(yàn)。確定了微波輔助法提取黃酮的最佳工藝條件為:以95%乙醇為提取劑,微波功率500W,微波溫度65℃,提取時(shí)間8min,提取液料比10:1(ml·g-1),最佳條件下的提取率為0.738mg·g-1。結(jié)果表明,微波輔助萃取法有省時(shí)、節(jié)省溶劑、提取率高等優(yōu)點(diǎn),有較大的推廣價(jià)值[17]。2.3.4超臨界提取法超臨界流體用作植物物質(zhì),環(huán)境樣品,聚合物和食品提取的溶劑(6-8).大多數(shù)超臨界提取(SFE)采用超臨界二氧化碳,添加或不添加有機(jī)溶劑修飾劑。SFE具有分析選擇性,提取功率可通過調(diào)節(jié)超臨界流體密度和溫度及壓力進(jìn)行微調(diào)。超臨界流體的溶和功率可通過添加極性溶劑如丙酮或氯化亞甲烷來調(diào)節(jié)。本技術(shù)對基質(zhì)和分析物的依靠性很強(qiáng),必須針對每一種物質(zhì)和分析物進(jìn)行優(yōu)化，本技術(shù)相對較快,提取時(shí)間少于1h。很多SFE生產(chǎn)廠家提供了各種自動(dòng)和手動(dòng)的提取儀器.樣品裝進(jìn)高溫高壓管中,超臨界流體穿過樣品,并在含分析物的溶劑中減壓或聚集在吸收區(qū)以便于回收。通過單因素試驗(yàn)研究了溶劑比例、溫度、時(shí)間、壓力對超臨界CO2萃取毛白楊雄花序黃酮類化合物的影響，利用正交試驗(yàn)的方法得到最佳工藝條件：溫度60℃,液料比15∶1、壓力35MPa條件下,萃取90min,得率可達(dá)0.59%[18]。2.3.5加速溶劑提取法加速溶劑提取是在較高溫度(一般為50-200℃)和壓力1500-2000psi下進(jìn)行液-固提取的方法.任何溶劑或溶劑混合物均可使用,少于15mL體積的溶劑需要10g樣品.樣品裝進(jìn)管中,高溫加壓液體穿過樣品,然后冷卻,收集。目前,只有一種加速溶劑提取系統(tǒng)達(dá)到產(chǎn)業(yè)生產(chǎn)規(guī)模,這是一種自動(dòng)設(shè)備。相關(guān)技術(shù)應(yīng)用于聚合物,動(dòng)植物組織,食品和環(huán)境樣品.美國環(huán)境保護(hù)協(xié)會(huì)(EPA)固態(tài)廢棄物辦公室已批準(zhǔn)采用本技術(shù)提取部分揮發(fā)有機(jī)化合物,作為SW-846的第三代技術(shù).2.4菊苣根中總黃酮的測定方法2.4.1亞硝酸鈉－硝酸鋁－氫氧化鈉比色法原理是在待測物的水溶液中，加入亞硝酸鈉－硝酸鋁－氫氧化鈉試液，鋁離子與黃酮類化合物3，4，二羥基發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)顯色來進(jìn)行測定。例如蘆丁化合物B環(huán)上有鄰二酚羥基，與鋁離子絡(luò)合，在500nm處有最大吸收，如果供試品顯色后在同一地方有最大吸收，即可以蘆丁做對照品，用比色法進(jìn)行測定。采用氯化鋁法、硝酸鋁-亞硝酸鈉法分別測定大葉冬青葉中的總黃酮含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明兩種方法的測定結(jié)果相差很大,通過顯色機(jī)理的分析,確立了氯化鋁法為總黃酮含量測定的適宜方法,方法的回收率90.7%～99.5%,平均回收率為97.8%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差2.2%。通過正交試驗(yàn)研究了總黃酮提取工藝,結(jié)果表明其適宜工藝條件為液料比12:1(V/m)、乙醇濃度60%、提取時(shí)間2h、提取次數(shù)2次,此條件下總黃酮得率為0.68%[19]。2.4.2紫外分光光度法黃酮類化合物由于均具有α－苯基色原酮的基本結(jié)構(gòu)，羰基與二個(gè)芳香環(huán)形成兩個(gè)較強(qiáng)的共軛系統(tǒng)，對紫外光區(qū)相應(yīng)有兩個(gè)區(qū)域的特征吸收。吸收帶I在較長波長（330～380nm）；吸收帶II在較短波長（240～280nm）。經(jīng)分離純化的待測樣品中主要含有黃酮類成分，其紫外光譜中有兩個(gè)特征吸收帶，因此可以選用其中主要的黃酮成分作為對照品測定總黃酮含量。為建立一種檢測保健食品中總黃酮含量的快速分析方法,以活性成分蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品,在其紫外最大吸收峰415nm處測定其總黃酮的含量。方法的最低檢測濃度為0.1μg/mL,蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品在10～250μg/mL范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系。平均加樣回收率0.9762%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.85%，該方法簡便,重現(xiàn)性好,可作為檢測保健食品中總黃酮含量方法之一[20]。2.4.3高效液相色譜法如果待測物中，總黃酮的大多數(shù)成分明確、含量高、易得到可供含量測定用的對照品，則可用高效液相色譜法直接測定總黃酮的含量或者樣品經(jīng)過處理，測定指標(biāo)成分含量，再換算成總黃酮含量。對HPLC法測定大豆異黃酮的方法進(jìn)行了研究。結(jié)果表明,采用C18色譜柱,柱溫40℃,以甲醇-冰醋酸水溶液為流動(dòng)相,流速1.0mL/min,254nm紫外檢測器進(jìn)行檢測,其重復(fù)測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于5%,人員之間重復(fù)測定結(jié)果的平均值接近,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.28%～3.78%之間,回收率在95.15%～104.92%范圍內(nèi),相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于2%。所建立的HPLC法適用于大豆異黃酮的測定[21]。2.5菊苣根總黃酮的研究目的與意義2.5.1菊苣根總黃酮的研究目的為了更清楚的了解菊苣根中黃酮的提取，我們做了大量實(shí)驗(yàn)研究和查閱很多資料參考，首先從菊苣的植物學(xué)特征，了解菊苣的外表特征，了解菊苣葉、菊苣根的特征及其營養(yǎng)藥理作用等，充分利用菊苣根重量大，重點(diǎn)開發(fā)其藥理價(jià)值，以菊苣根中黃酮的提取及其提取方法等，提取出的黃酮的營養(yǎng)價(jià)值及其藥理特性等，使人民更好的利用其營養(yǎng)價(jià)值。2.5.2菊苣根總黃酮的研究意義目前菊苣根的應(yīng)用已逐步成型，首先菊苣是一種具有發(fā)展前途的飼草作物。其生長迅速,再生性好,產(chǎn)草量高,年產(chǎn)鮮草每公頃150t以上；富含各種營養(yǎng)物質(zhì),以抽芽前營養(yǎng)價(jià)值最高,維生素、胡蘿卜素、鈣含量豐富。吸收率高,豬、雞、鴨、鵝、兔、牛、魚等皆喜食,據(jù)報(bào)道:用菊苣飼喂奶牛,每頭奶牛每天采食菊苣45kg～50kg，10天后增產(chǎn)牛奶20%,奶質(zhì)優(yōu)良,口感醇香；飼喂豬,每2.54kg菊苣可替代1kg全價(jià)精料，用含有50%的菊苣飼料飼喂，肉料比為1∶3.93，豬毛色光亮，食欲旺盛，肉味甚佳。采用生物技術(shù)和利用酶制劑水解菊粉生產(chǎn)的低果聚糖，不經(jīng)后處理，直接噴霧干燥制成粉劑，作為功能飼料添加劑，具有增殖雙歧桿菌的作用，能夠增強(qiáng)畜禽抗病害能力。菊苣的肉質(zhì)根含有咖啡酸和奎寧酸所形成綠原酸和苦味質(zhì)，經(jīng)過焙炒可產(chǎn)生特殊的風(fēng)味，能給浸煮液以深的色澤,增加咖啡的溶解質(zhì)量，緩和咖啡的刺激作用,從而成為咖啡的添加物或代用品和制糖原料[22]，改善了咖啡的風(fēng)味和濃度,提了咖啡的品質(zhì)，同時(shí)還可減少木本咖啡的含量，降低成本。菊苣根中黃酮含量較高，具有清肝利膽、健胃消食、利尿消腫等功效[23]。菊苣由于營養(yǎng)豐富、口感鮮嫩,是一種極受歡迎的高檔保健型蔬菜[24]。每100g鮮菊苣芽球中含K元素195.5mg、Zn元素0.793mg、胡蘿卜素0.043mg、蛋白質(zhì)680mg,維生素A、C和Mg等多種微量元素。另外菊苣在栽培過程中不需施藥,是一種很好的優(yōu)質(zhì)高檔保健型蔬菜,如今已在許多省份栽培,產(chǎn)品已投入市場,獲得了較好效益。菊苣根中的黃酮具有通過益生元、益生菌調(diào)節(jié)腸胃蠕動(dòng)功能，菊粉可作為腸道內(nèi)有益菌雙歧桿菌的增殖因子，刺激與促進(jìn)雙歧桿菌增殖，據(jù)報(bào)道菊粉已被國外開發(fā)成功能性食品，用來提高機(jī)體免疫力。其對細(xì)菌和真菌均有一定的抑制作用[25]。研究表明,大鼠膳食中加入5%～20%菊粉和低聚果糖,具有提高腸道鈣吸收、調(diào)節(jié)鈣平衡和骨礦密度的作用。菊苣提取物具有顯著降低血清膽固醇,甘油三酯水平的藥理活性。Vanen等對12名年齡在14～16歲的青少年測定了菊粉和低聚果糖對鈣吸收的影響,結(jié)果表明：低聚果糖組鈣吸收的百分率顯著升高。通過多次老鼠試驗(yàn)已確認(rèn),菊苣低聚果糖可促進(jìn)鼠類對無機(jī)鹽的吸收,特別是對鈣和鎂的吸收。Coudray等以9名健康青年為研究對象,膳食中每天給予菊粉40g,實(shí)驗(yàn)28d,測定尿、糞中的鈣、鎂、鐵和鋅含量。結(jié)果顯示：菊粉可顯著增加鈣吸收和鈣平衡而不影響其它礦物質(zhì)的儲(chǔ)留。由于對菊苣低聚果糖消耗量的不同,可以使人對鈣的吸收率分別提高26%～58%[26]?？砷_發(fā)作為促進(jìn)礦物質(zhì)吸收元素的食品，還具有降血脂、降低蛋黃總脂和膽固醇的作用[27]。菊苣植株茂盛,葉片深綠,花紫藍(lán)色,花期長達(dá)4個(gè)多月,可以作為盆景花卉栽培,具有較高的觀賞價(jià)值;菊苣根系發(fā)達(dá),保水固土作用強(qiáng),是優(yōu)良綠化和水保植物；菊苣花還是優(yōu)良的蜜源；菊苣的根、莖、葉是生產(chǎn)食用菌的優(yōu)質(zhì)基料。菊苣根中黃酮對人體有很多保健功效，菊苣葉可以食用，也可以做飼料用，而菊苣根并沒有太大的工業(yè)應(yīng)用，鑒于其黃酮的提取，可以進(jìn)一步利用其根部提取物的營養(yǎng)價(jià)值。據(jù)報(bào)道北京奧運(yùn)期間歐洲運(yùn)動(dòng)員要求食用菊苣，可見菊苣在歐洲非常有市場，作為農(nóng)業(yè)大國，我國政府可以鼓勵(lì)農(nóng)民種植菊苣，把菊苣加工成成熟產(chǎn)品，出口國外，增加國民收入，菊苣的發(fā)展前景非常的客觀。

第三章實(shí)驗(yàn)部分3.1實(shí)驗(yàn)樣品菊苣根樣品產(chǎn)地為河北承德。3.2實(shí)驗(yàn)儀器與試劑3.2.1實(shí)驗(yàn)儀器（1）JA2003N型電子分析天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；（2）JJ-2型組織搗碎機(jī)（江蘇金壇江南有限公司）；（3）DHG-914385-Ⅲ電熱恒溫鼓風(fēng)干燥機(jī)（上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司）；（4）UV1102型紫外分光光度計(jì)（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；（5）FD-1C型冷凍干燥機(jī)（背景德天佑科技發(fā)展有限公司）；（6）TDZ5-WS型多管架自動(dòng)平衡離心機(jī)（湖南賽特湘儀離心機(jī)儀器有限公司）；（7）SHZ-ⅢA型循環(huán)水式真空泵（鞏義市英峪予華儀器廠）；（8）85-2型恒溫磁力攪拌器（鄭州長城科貿(mào)有限公司）；（9）B-220型恒溫水浴鍋（上海亞榮生化儀器廠）；（10）RE52-98旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；（11）JPT-20架盤天平（江蘇常熱衡器廠）；（12）索氏提取裝置；（13）凱氏燒瓶750ml；（14）電爐子（鄭州長城科貿(mào)有限公司）；（15）容量瓶（100mL、500mL、1000mL、2000mL）若干；（16）錐形瓶250mL若干；（17）100mL具塞刻度量筒；3.2.2實(shí)驗(yàn)試劑（1）濃鹽酸（分析純）北京化工廠（2）冰醋酸（分析純）北京化工廠（3）硫酸銅（分析純）北京化工廠（4）高錳酸鉀天津市化學(xué)試劑廠（5）蘆丁北京化工廠（6）碳酸鈉（分析純）北京化工廠（7）95%乙醇（分析純）北京化工廠（8）丙酮（分析純）北京化工廠（9)無水乙醇（分析純）北京化工廠（10）氫氧化鈉沈陽試劑二廠（11)硝酸鋁溶液（12)濃硫酸（分析純）（13)硝酸鈉溶液3.3實(shí)驗(yàn)方法3.3.1菊苣根中總黃酮提取工藝切片烘干（105℃）清洗切片烘干（105℃）清洗樣品（根部）預(yù)處理 稱重取樣品品裝瓶磨粉稱重取樣品品裝瓶磨粉提取黃酮（超聲波乙醇、乙醇回流提?。┙菁尤胍掖既芤禾崛↑S酮（超聲波乙醇、乙醇回流提?。┙菁尤胍掖既芤?00nm下測OD值抽慮（得濾液）500nm下測OD值抽慮（得濾液）圖3-1菊苣根中黃酮的提取工藝3.3.2菊苣根中總黃酮提取機(jī)理超聲波乙醇提取機(jī)理超聲提取的主要理論依據(jù)是超聲的空化效應(yīng)、熱效應(yīng)和機(jī)械作用。當(dāng)大能量的超聲波作用于介質(zhì)時(shí)，介質(zhì)被撕裂成許多小空穴，這些小空穴瞬時(shí)閉合，并產(chǎn)生高達(dá)幾千個(gè)大氣壓的瞬間壓力，即空化現(xiàn)象。超聲空化中微小氣泡的爆裂會(huì)產(chǎn)生極大的壓力，使植物細(xì)胞壁及整個(gè)生物體的破裂在瞬間完成，縮短了破碎時(shí)間，同時(shí)超聲波產(chǎn)生的振動(dòng)作用加強(qiáng)了胞內(nèi)物質(zhì)的釋放、擴(kuò)散和溶解，從而顯著提高提取效率。乙醇回流提取機(jī)理應(yīng)用有機(jī)溶劑加熱提取，需采用回流加熱裝置，以免溶劑揮發(fā)損失。小量操作時(shí)，可在圓底燒瓶上連接回流冷凝器。瓶內(nèi)裝藥材為容量的1／3－1／2，溶劑浸過藥材表面1－2cm。在水浴中加熱回流，一般保持沸騰約1小時(shí)。放冷過濾，再在藥渣中加溶劑，作第二、三次加熱回流分別約半小時(shí)，或至基本提盡有效成分為止。此法提取效率較冷浸法高，大量生產(chǎn)中多采用連續(xù)提取法。3.3.3蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線(1)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液配制準(zhǔn)確稱取經(jīng)105℃（干燥至恒重）的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品0.0150g，用無水甲醇溶液溶解并定容于100mL容量瓶中，將溶液搖勻，得濃度為1.5μg／mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用[28]。(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定分別取上述蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL，相當(dāng)于蘆丁含量分別為0μg、75μg、150μg、300μg、450μg、600μg，分別置于6個(gè)10.00mL刻度的比色管中，加入30％乙醇溶液至5mL處。分別加入5％亞硝酸鈉溶液0．3mL，混合均勻，放置5min；加入10％硝酸鋁溶液0．3mL混合均勻，放置6min后加入1mol/L氫氧化鈉溶液2mL混勻，用30％乙醇定容至刻度，l0min后于502nm波長處做比色測定，參比為空白試劑。得蘆丁濃度C與吸光度A的標(biāo)準(zhǔn)曲線及回歸方程。（3）樣品處理取樣品1g（精確至0.01g）于25mL具塞比色管中，加入15mL無水乙醇，渦旋混勻3min，超聲提取30min（超聲條件60℃，功率100W），抽濾，用無水乙醇淋洗比色管殘?jiān)俺闉V瓶，收集全部濾液于100mL蒸發(fā)皿中，于50℃水浴上揮發(fā)除去乙醇，用無水甲醇沖洗蒸發(fā)皿，收集溶液于50mL容量瓶中，定容。（4）測定取1mL待測液于25mL比色管中，按測定標(biāo)準(zhǔn)曲線的步驟測定，加入30%乙醇5mL，加5%亞硝酸鈉0.3mL，振蕩后放置5min，加入10%硝酸鋁溶液0.3mL，搖勻后放置6min，加入1.0mol/L氫氧化鈉溶液2mL，用30%乙醇定容至10mL，搖勻。同時(shí)另取同體積未加鋁鹽試劑的樣液（補(bǔ)加水0.3mL），作為樣品基體空白，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較確定總黃酮的含量。（5）結(jié)果計(jì)算樣品中總黃酮含量（以蘆丁計(jì)）按式計(jì)算X=（公式3-1）式中：X——樣品中總黃酮含量（以蘆丁計(jì)），單位為克每百克或克每百毫升（g/100g或g/100mL）；C——從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的被測液中總黃酮含量，單位為微克（μg）；C0——從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的被測液中樣品基本空白含量，單位為微克（μg）；V2——樣品定容體積，單位為毫升（mL）；V1——取待測液體積，單位為毫升（mL）；m——稱取樣品質(zhì)量，單位為克（g）。3.3.4菊苣根中總黃酮提取方法超聲波乙醇提取法（1）以溫度來考察，分別設(shè)置為20℃、30℃、40℃、50℃、60℃。準(zhǔn)確稱取樣品粉末15g置于干燥錐形瓶中，加入70%乙醇溶液150mL，浸泡2h，將錐形瓶放入超聲波清洗器中提取0.5h（功率100w），抽慮得濾液v1，把濾渣再加入相同溶度的乙醇溶液150mL，再次超聲波提取0.5h，抽慮的濾液v2，合并v1v2，定容于500mL容量瓶中。（2）以乙醇濃度來考察，分別設(shè)置為50%、60%、70%、80%、95%。準(zhǔn)確稱取樣品粉末15g置于干燥錐形瓶中，加入乙醇溶液150mL，浸泡2h，將錐形瓶放入超聲波清洗器中提取0.5h（溫度50℃，功率100w），抽慮得濾液v1，把濾渣再加入相同溶度的乙醇溶液150mL，再次超聲波提取0.5h，抽慮的濾液v2，合并v1v2，定容于500mL容量瓶中。（3）以提取時(shí)間來考察，分別設(shè)置為0.5h、1.0h、1.5h、2.0h。準(zhǔn)確稱取樣品粉末15g置于干燥錐形瓶中，加入70%乙醇溶液150mL，浸泡2h，將錐形瓶放入超聲波清洗器中提?。囟?0℃，功率100w），抽慮得濾液v1，把濾渣再加入相同溶度的乙醇溶液150mL，再次超聲波提取，抽慮的濾液v2，合并v1v2，定容于500mL容量瓶中。（4）以料液比來考察，分別設(shè)置為1：10、1：15、1：20、1：25、1：30。準(zhǔn)確稱取樣品粉末15g置于干燥錐形瓶中，加入70%乙醇溶液，浸泡2h，將錐形瓶放入超聲波清洗器中提取1.0h（溫度50℃，功率100w），抽慮得濾液v1，把濾渣再加入相同溶度的乙醇溶液，再次超聲波提取1.0h，抽慮的濾液v2，合并v1v2，定容于500mL容量瓶中。乙醇回流提取法（1）以乙醇濃度來考察，分別設(shè)置為無水乙醇、95%、80%、70%、60%。準(zhǔn)確稱取樣品15g，放于三角瓶中，加入濃度不同的乙醇溶液300mL，浸泡2h，放于恒溫水浴鍋中，在水浴溫度為80℃下回流提取2.5h。抽慮，得到濾液。將濾液用與提取試劑相同的乙醇溶液定容于500mL容量瓶中。（2）以提取時(shí)間來考察，分別設(shè)置為2h、2.5h、3h、3.5h。準(zhǔn)確稱取樣品15g，放于三角瓶中，浸泡2h，加入70%乙醇溶液300mL，放于恒溫水浴鍋中，在水浴溫度為80℃下回流提取。抽慮，得到濾液。將濾液用與提取試劑相同的乙醇溶液定容于500mL容量瓶中。（3）以提取溫度來考察，分別設(shè)置為75℃、80℃、85℃、90℃。準(zhǔn)確稱取樣品15g，放于三角瓶中，浸泡2h，加入70%乙醇溶液300mL，放于恒溫水浴鍋中，在水浴溫度下回流提取2.5h。抽慮，得到濾液。將濾液用與提取試劑相同的乙醇溶液定容于500mL容量瓶中。（4）以料液比來考察，分別設(shè)置為1：10、1：15、1：20、1：25、1：30。準(zhǔn)確稱取樣品15g，放于三角瓶中，浸泡2h，加入70%乙醇溶液，放于恒溫水浴鍋中，在水浴溫度為80℃下回流提取2.5h。抽慮，得到濾液。將濾液用與提取試劑相同的乙醇溶液定容于500mL容量瓶中。在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選取四個(gè)主要影響因素：乙醇濃度、液料比、提取時(shí)間、提取溫度，進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn)，因素水平見表3-2，以黃酮含量為指標(biāo)，確定最佳提取工藝。表3-1正交因素表水平因素A液料比（V/M）B提取時(shí)間（h）C乙醇濃度（%）D提取溫度（℃）1152.080752202.570803253.060853.3.5總黃酮的測定—分光光度法（1）準(zhǔn)確吸取提取液0.5mL于25.00mL比色管中。（2）用85%的乙醇稀釋到10.00mL處，加入5%Na2No3溶液0.8mL，混合均勻，放置10min；加入10%Al(NO3)3溶液0.8mL，混合均勻，放置10min；再加入4%NaoH溶液10.00mL，混合均勻，放置10min；加入85%乙醇溶液至刻度，混合均勻，放置10min后。（3）將其放置于500nm處，測其吸光度。第四章結(jié)果與討論4.1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制表4—1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品蘆丁質(zhì)量（g）蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液體積（mg）吸光度平均吸光度01號(hào)000000.0242號(hào)0.050.50.0210.0230.0210.0453號(hào)0.101.00.0430.0430.0410.0814號(hào)0.202.00.0800.0810.0820.1195號(hào)0.303.00.1230.1210.1200.159圖4-1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線圖4—1中，回歸方程為y=0.3889x+0.0026，其R2值為0.9996，證明標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸良好。表明蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的濃度在0～1.0mg/mL的范圍內(nèi)與吸光度值有良好的線性關(guān)系。4.2菊苣根中總黃酮提取結(jié)果4.2.1超聲波乙醇提取結(jié)果（1）以溫度來考察，得：表4—2（超聲波法）溫度對黃酮含量的影響溫度（℃）2030405060吸光度0.0210.0280.0340.0400.031黃酮含量(mg/g)3.184.365.386.394.87圖4—2（超聲波法）溫度對黃酮含量的影響在50℃時(shí)提取會(huì)使黃酮含量最高，黃酮在乙醇中的溶解度隨著溫度的升高而增大，溫度升高，浸提液黏度減少，擴(kuò)散系數(shù)增加，促進(jìn)浸提速度，但溫度過高會(huì)使黃酮氧化，使黃酮含量降低。（2）以乙醇濃度來考察，得：表4—3（超聲波法）乙醇濃度對黃酮含量的影響乙醇濃度50%60%70%80%95%吸光度0.0290.0320.0400.0350.028黃酮含(mg/g)4.535.046.395.554.36圖4—3（超聲波法）乙醇濃度對黃酮含量的影響70%乙醇濃度是黃酮含量最高，低于會(huì)使黃酮得不到充分的溶解，高于會(huì)把葉綠素的其它物質(zhì)浸提出來，這些物質(zhì)會(huì)對分光光度法測黃酮含量有影響。以提取時(shí)間來考察，得：表4—4（超聲波法）提取時(shí)間對黃酮含量的影響提取時(shí)間（h）0.51.01.52.0吸光度0.0310.0400.0330.029黃酮含量(mg/g)4.876.395.214.53圖4—4（超聲波法）提取時(shí)間對黃酮含量的影響當(dāng)提取時(shí)間為1.0h時(shí)黃酮含量最高，時(shí)間低于1.0h使黃酮得不到充分的溶解，當(dāng)超過1.0h，會(huì)使部分乙醇揮發(fā)而導(dǎo)致沸點(diǎn)逐漸增大，從而破壞黃酮的含量。以物料比來考察，得：表4—5（超聲波法）料液比對黃酮含量的影響料液比1：101：151：201：251：30吸光度0.0290.0400.0340.0300.026黃酮含(mg/g)4.536.395.385.314.54圖4—5（超聲波法）料液比對黃酮含量的影響料液比為1：15時(shí)得黃酮含量最高。低于會(huì)使樣品中黃酮得不到充分的溶解，使含量小，物料比的增大不會(huì)使黃酮含量增大，反而不利于乙醇的濃縮工藝。4.2.2乙醇回流提取結(jié)果（1）以乙醇濃度來考察，得：表4—6（熱回流法）乙醇濃度對黃酮含量的影響乙醇濃度無水乙醇95%80%70%60%吸光度0.0160.0200.0340.0480.032黃酮含(mg/g)2.333.015.387.745.03圖4—6（熱回流法）乙醇濃度對黃酮含量的影響70%的乙醇濃度使菊苣根中黃酮含量最高。低于70%會(huì)使黃酮得不到充分的溶解，高于會(huì)把葉綠素的其它物質(zhì)浸提出來，葉綠素等物質(zhì)會(huì)對紫外線吸收有干擾，影響黃酮含量。（2）以提取時(shí)間來考察，得：表4—7（熱回流法）提取時(shí)間對黃酮含量的影響提取時(shí)間(h）2.02.53.03.5吸光度0.0390.0480.0420.030黃酮含量(mg/g)6.227.746.735.31圖4—7（熱回流法）提取時(shí)間對黃酮含量的影響當(dāng)提取時(shí)間為2.5h時(shí)黃酮含量最高，時(shí)間低于2.5h使黃酮得不到充分的溶解，當(dāng)超過2.5h，會(huì)使部分乙醇揮發(fā)而導(dǎo)致沸點(diǎn)逐漸增大，從而破壞黃酮的含量。（3）以溫度來考察,得：表4—8（熱回流法）溫度對黃酮含量的影響溫度(℃)75808590吸光度0.0410.0480.0360.031黃酮含量(mg/g)6.567.745.724.87圖4—8（熱回流法）溫度對黃酮含量的影響80℃黃酮含量最高。黃酮在乙醇中的溶解度隨著溫度的升高而增大，溫度升高，浸提液黏度減少，擴(kuò)散系數(shù)增加，促進(jìn)浸提速度，但溫度過高會(huì)使黃酮氧化，黃酮含量降低。（4）以物料比來考察，得：表4—9（熱回流法）料液比對黃酮含量的影響料液比1：101：151：201：251：30吸光度0.0260.0340.0480.0400.032黃酮含量（mg/g)4.545.387.746.405.03圖4—9（熱回流法）料液比對黃酮含量的影響料液比為1：20時(shí)得黃酮含量最高。低于會(huì)使樣品中黃酮得不到充分的溶解，使含量小，物料比的增大不會(huì)使黃酮含量增大，反而不利于乙醇的濃縮工藝。4.3菊苣根中總黃酮提取方法總結(jié)通過對超聲波乙醇提取法和乙醇回流提取法的單因素方法的優(yōu)化比較得到：乙醇回流提取法得到的的黃酮含量較高，且其方法簡單，故對其進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如表4—11：表4—11正交試驗(yàn)結(jié)果表試驗(yàn)號(hào)因素黃酮含量(mg/g)ABCD液料比提取時(shí)間乙醇濃度提取溫度111115.72212226.73313335.38421237.07522316.90623127.24731326.73832136.56933216.90均值16.946.516.516.51均值27.076.736.906.90均值36.736.516.346.32R60.58較優(yōu)水平A2B2C2D2逐次因數(shù)D>C>B>A經(jīng)分析可知，對黃酮含量影響最大的是提取溫度和乙醇濃度，其次是提取時(shí)間、液料比。最佳的提取工藝為：乙醇濃度70％，提取溫度80℃，提取時(shí)間2.5h，料液比為1：20，提取次數(shù)3次。對選定的最佳工藝條件進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)，獲得的黃酮含量為7.74mg/g。第五章結(jié)論與展望5.1結(jié)論用單因素的實(shí)驗(yàn)方法，通過改變實(shí)提取溫度、提取時(shí)間、乙醇濃度、物料比實(shí)驗(yàn)因素，獲得的提取液在紫外分光光度下測其吸光度，即獲得菊苣根中黃酮的含量。通過超聲波乙醇提取法、乙醇回流提取法的比較，得到乙醇回流提取法較適合菊苣根中黃酮的提取，所以用乙醇回流提取的方法提取黃酮，得到提取黃酮的最優(yōu)條件為：提取溫度：80℃、乙醇濃度：70%、提取時(shí)間：2.5h、料液比：1：20，在最優(yōu)條件下得到黃酮含量最高為7.74mg/g。在用乙醇回流提取的單因素方法之后，做正交實(shí)驗(yàn)，得到菊苣根中黃酮的含量，得到結(jié)果：提取溫度對菊苣根中黃酮含量影響最大，次之是乙醇濃度、提取時(shí)間，料液比影響最小。5.2展望應(yīng)盡快引進(jìn)國外的先進(jìn)的菊苣加工技術(shù)，利用科研上的成功試驗(yàn)，將各種研究成果變成現(xiàn)實(shí)，提高人民的收入。由于菊苣是優(yōu)良的高產(chǎn)的綠色的作物，政府應(yīng)加大宣傳力度，鼓勵(lì)農(nóng)民種植菊苣，加工菊苣，使菊苣產(chǎn)品成為中國創(chuàng)造，而非