修改題目釀酒酵母全蛋白的

內(nèi)容 關(guān)鍵詞… ……………………………11．緒論………………1釀酒酵母及其蛋白… 聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)… 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容… 菌體培養(yǎng)… 釀酒酵母全蛋白的分離—SDS電 膠內(nèi)酶解質(zhì)譜鑒定 結(jié)果分 酵母全蛋白的鑒定方 從質(zhì)譜數(shù)據(jù)鑒定多肽 結(jié) 參考文獻(xiàn) :釀酒酵母作為一種理想研究模型，其全蛋白提取方法多樣,本文采用：Asanidealresearchmodel,theextractionmethodsofSaccharomycescerevisiaearevarious.Thisarticleusesthecrushingglassbeadtoextracttheprotein,andapplygelelectrophoresistoseparateitandthentomakeamassspectrumidentification.Thedimensionalelectrophcresisisapowerfulandwidelyusedmethodfortheysisofcomplexproteinmixtureextractedformcells,tissues,orotherbiologicalsamples.Thismethodisbasedonthetwocharacteristicsofproteinunrelated-isoelectricpointandmolecularweightofproteinseparation.Itshighresolution,goodstability,isoneofthekeyofproteomicsysis.Proteomicsisthelargescalestudyofproteins,usuallybybiologicalmethod.:Saccharomycescerevisiae；gelelectrophoresis；Proteomics；的。釀酒酵母更是世界上第一個(gè)被測(cè)出組DNA均一的電荷密度、相同的荷質(zhì)比。據(jù)流體力學(xué)等方面的研究推測(cè),SDS一蛋白質(zhì)復(fù)合取決于三個(gè)方面,即帶電荷的多少、分子量的大小和分子的形狀。[4根據(jù)上面的分析,SDS總體來(lái)說(shuō)，雙向電泳操作按如下幾個(gè)步驟：樣品準(zhǔn)備（蛋白提取除雜、溶解→蛋白含量測(cè)定及樣品分裝→SDS2[5]26-20比來(lái)對(duì)該多肽進(jìn)行分析,以判斷該多肽源自哪一個(gè)蛋白。[}待檢樣品與含有在特定波[]此激活產(chǎn)生的能量作用于多肽,使之由固態(tài)樣品混合物變成氣態(tài)。由于多肽分子傾向于吸收單一光釀酒酵母菌，YPD12%，2%。酵母細(xì)胞接種于5mlYPD液體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，220r/min，30℃培養(yǎng)20h。取1mL菌液轉(zhuǎn)接100mLYPD，220r/min，3027h，OD600=1.260s將樣品煮沸10min，在冰上冷卻后，加入裂解液在冰中振蕩1h，6000r/min離心10min595nm處的吸光值來(lái)檢1ul.2ul.4ul6ul8ul10ui2ul的泳道膠的清晰度以及分離度最合2ul2ulsimplebullfer配成樣品。。蛋白組分析的樣本多為多種蛋白的混合物.而用于蛋白鑒定的質(zhì)譜檢測(cè)儀只能對(duì)多肽進(jìn)行檢測(cè)及鑒定.因此在進(jìn)行質(zhì)譜分析之前須將這些蛋白混合物分離為單一態(tài)電泳成為蛋白組分析的代名詞，而且它一直是分離高度復(fù)雜的蛋白混。100(寬)x120(高)x1.5(厚)毫微量進(jìn)樣器:10～10030050(4)1SDS%：0.8%Acr:4*Tris-Cl/3.75mL1.25mL20%5μL分離凝膠的濃度應(yīng)根據(jù)所測(cè)定的蛋白質(zhì)分子量的大小選擇,據(jù)文獻(xiàn)查閱已知分離膠方法按照上面的配比配成溶液后即將膠液沿膠室的玻壁緩緩地注入已準(zhǔn)33～5垂直靜止聚合30分鐘左右。按照上面的配比濃縮膠，然后立即將膠注入已聚合31厘米,聚合約需30分鐘。膠聚合好后,地取出樣品槽模板。樣品槽中加入電極緩沖液，供點(diǎn)樣用。2ul立即進(jìn)行電泳。初電壓控制在30～45伏特,當(dāng)指示Simplebuffer進(jìn)入分離120V,l～21～2[11]pH和染色同時(shí)進(jìn)行的方法,染色液中含有固定劑染色過程中同時(shí)進(jìn)行了固定。[12]膠取1入脫色液中脫色。勤換脫色液,1以提高質(zhì)譜檢測(cè)的準(zhǔn)確率。一般而言，6-20ACNACN,DTT（1.6mg+NH4HCO3溶液）145LC-MSTrypsin(1/50）3720%TFAZiptip。存在很大,本實(shí)驗(yàn)通過質(zhì)譜鑒定出來(lái)得到一些信號(hào)肽SGETEDTFIADLVVGLR,SSLADVLSILAMTYSENGK,HDIEIKPGARLPR于質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)的方法主要有三種肽質(zhì)量圖譜（PMF串聯(lián)質(zhì)譜（CID）和梯形肽片段法肽質(zhì)量圖（PMF肽質(zhì)量圖（PMF即用特異性的酶解或化學(xué)水解的方法將蛋白質(zhì)切成小的片段，然后用質(zhì)譜檢測(cè)各產(chǎn)物肽的相對(duì)分子。質(zhì)譜分析蛋白的方法用于質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)的方法主要有三種：肽質(zhì)量圖譜法（PMF）、串聯(lián)質(zhì)譜法（CID）和梯形肽片段法。肽質(zhì)量圖譜（PMF）肽質(zhì)量圖譜（PMF）即用特異性的酶解或化學(xué)水解的方法將蛋白質(zhì)切成小的片段，然后用質(zhì)譜檢測(cè)各產(chǎn)物肽的相對(duì)分子質(zhì)量，將所得的蛋白酶解肽段質(zhì)量數(shù)在相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索尋找相似肽譜從而繪肽圖由此可見分子質(zhì)量的精確度PMFPMF[3]（CID（CID是利用待序法梯形肽片段法與Edman法有相似之處，是用化學(xué)探針或酶解使蛋白或肽從N端或C1ladderCID并不是這樣。[15]CIDCID，Collision-induced-Dissociation，是通過CID。CIDbyCIDPSM。%0 和十二烷基磺酸鈉一聚丙烯酞胺根據(jù)蛋白質(zhì)在pH梯度場(chǎng)中的凈電荷和分子量大小Berrin,J.,etal.,High-LevelProductionof binantFungalEndo-β-1,4-xylanaseintheMethylotrophicYeastPichiapastoris.ProteinExpressionandPurification,2000.19(1): Damaso,M.,etal.,OptimizedExpressionofaThermostableXylanasefromThermomyceslanuginosusinPichiapastoris.AppliedandEnvironmentalMicrobiology,2003.69(10): J.SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量[J].[J].傅曉華,張學(xué)軍.蛋白質(zhì)凝膠電泳操作中應(yīng)注意的幾個(gè)問題[J].科技解建勛,蒲小平,李玉珍,李長(zhǎng)齡.蛋白質(zhì)組分析技術(shù)進(jìn)展[J].生物物理學(xué)Lysobactersp.SNNU513[D].王靖宇.釀酒酵母Sfi蛋白的功能研究[D].楊靜,李成云,王云月,朱有勇,李進(jìn)斌,何霞紅,劉林,業(yè)艷芬,周曉罡,唐萍.釀酒酵母分泌蛋白組的計(jì)算機(jī)分析[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),2005,03:516~522.王驪.釀酒酵母甘露糖蛋白是一